高中生物 專題五 課題2 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段課件 新人教版

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1、參與的組分在 DNA 復(fù)制中的作用解旋酶_DNA 母鏈_課題 2 2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增 DNA DNA 片段生物體內(nèi)的 DNA 復(fù)制細(xì)胞核1DNA 復(fù)制的場(chǎng)所是_。2參與 DNA 復(fù)制的組成成分與反應(yīng)條件打開(kāi) DNA 雙鏈提供 DNA 復(fù)制的模板參與的組分在 DNA 復(fù)制中的作用_合成子鏈的原料DNA 聚合酶_引物_續(xù)表4 種脫氧核苷酸催化合成 DNA 子鏈?zhǔn)?DNA 聚合酶能夠從引物的 3端開(kāi)始連接脫氧核苷酸PCR 擴(kuò)增技術(shù)1概念DNAPCR 技 術(shù) 是 _ 的 簡(jiǎn) 稱 ， 是 一 種 在_ 進(jìn)行的迅速擴(kuò)增 DNA 的技術(shù)。它能夠以極少量的_為模板在短時(shí)間內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份。2PCR 反應(yīng)過(guò)程

2、(1)變性。(2)復(fù)性。(3)延伸。3結(jié)果兩個(gè)引物DNA 聚合酶只能特異性地復(fù)制在_之間的DNA 序列，使這段固定長(zhǎng)度的序列呈指數(shù)擴(kuò)增。多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外DNA 含量測(cè)定1原理：利用 DNA 在_的紫外線波段的吸收峰曲線來(lái)測(cè)定相應(yīng)含量。260 nm2 計(jì)算公式 ：DNA 含 量 (g/mL) 50(260 nm 讀數(shù))(_)。稀釋倍數(shù)體內(nèi)復(fù)制PCR 擴(kuò)增解旋方式在解旋酶的作用下，細(xì)胞提供能量，部分解旋加熱至 90 左右，雙鏈全部解開(kāi)，不需要解旋酶引物一小段 RNARNA 或者單鏈 DNA合成子鏈在引物的基礎(chǔ)上，一條鏈連續(xù)合成，另一條不連續(xù)合成分別從兩條鏈的引物端開(kāi)始，連續(xù)合成，控制溫度條件在

3、72 特點(diǎn)邊解旋邊復(fù)制，半保留復(fù)制在體外迅速擴(kuò)增DNA 聚合酶不需要耐高溫聚合酶耐高溫的 TaqDNA 聚合酶循環(huán)次數(shù)受生物自身控制30 多次相同點(diǎn)兩者都需要模板、四種脫氧核苷酸，都需要酶和能量，需要一定緩沖溶液環(huán)境DNA 的體內(nèi)復(fù)制與 PCR 擴(kuò)增的區(qū)別與聯(lián)系PCR 技術(shù)的原理及過(guò)程1PCR 原理PCR 技術(shù)利用了 DNA 的熱變性原理：在 80100的范圍內(nèi)，DNA 的雙螺旋結(jié)構(gòu)解體，雙鏈分開(kāi)，當(dāng)溫度緩慢降低時(shí)，兩條彼此分離的 DNA 鏈又會(huì)重新結(jié)合成雙鏈。2PCR 的反應(yīng)過(guò)程(1)變性：當(dāng)溫度上升到 90 以上時(shí)，雙鏈 DNA 解旋為單鏈。(2)復(fù)性：溫度下降為 50 左右時(shí)，兩種引物通

4、過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈 DNA 結(jié)合。(3)延伸：當(dāng)溫度上升至 72 左右時(shí)，四種脫氧核苷酸在DNA 聚合酶的作用下，合成新的 DNA 鏈。3PCR 反應(yīng)的條件(1)穩(wěn)定的緩沖液環(huán)境。(2)DNA 模板。(3)分別與模板 DNA 兩條模板鏈相結(jié)合的引物。(4)A、T、C、G 四種脫氧核苷酸。(5)耐熱的 DNA 聚合酶，一般用 TaqDNA 聚合酶。(6)能嚴(yán)格控制溫度變化的溫控設(shè)施。PCR 擴(kuò)增技術(shù)與 DNA 體內(nèi)復(fù)制的區(qū)別【例 1 】下列屬于 PCR 擴(kuò)增區(qū)別于 DNA 體內(nèi)復(fù)制的是()需要解旋酶 需要引物 常溫常壓下進(jìn)行以四種脫氧核苷酸為原料需要耐高溫的 TaqDNA 聚合酶邊解旋邊復(fù)

5、制可以短時(shí)間得到大量拷貝需要模板ACBD【名師點(diǎn)撥】：體內(nèi)復(fù)制與 PCR 擴(kuò)增既有區(qū)別又有聯(lián)系，PCR 體外擴(kuò)增概念很明確，在體外，加熱解旋，因此需要耐高溫的 TaqDNA 聚合酶，它能以極少量的 DNA 為模板，在幾小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份的 DNA?！敬鸢浮浚篊【配對(duì)練習(xí) 1】真核生物細(xì)胞質(zhì)中也有 DNA，例如葉綠體、線粒體等，關(guān)于細(xì)胞質(zhì) DNA 復(fù)制不正確的是()A需要解旋酶B需要 DNA 聚合酶C兩條鏈同時(shí)復(fù)制只有一個(gè)起點(diǎn)D不是半保留復(fù)制解析：真核生物細(xì)胞質(zhì)中 DNA 復(fù)制需要解旋酶、DNA 聚合酶、兩條鏈同時(shí)復(fù)制只有一個(gè)起點(diǎn)，是半保留復(fù)制。答案：DPCR 擴(kuò)增的條件【例 2】PCR 擴(kuò)增

6、包括三個(gè)環(huán)節(jié)，變性、復(fù)性(退火)、延伸，這三步的溫度依次是()A94 、55 、72 B72 、55 、94 C55 、94 、72 D80 、60 、72 【名師點(diǎn)撥】：PCR 擴(kuò)增的原理就是利用 DNA 耐高溫的特性，使 DNA 在 94 左右雙鏈解螺旋，然后在低溫(3755 )的情況下，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補(bǔ)的單鏈 DNA模板結(jié)合，形成部分雙鏈；在 TaqDNA 聚合酶的最適溫度(72 )下，以引物 3端為合成的起點(diǎn)，以單核苷酸為原料，沿模板從子鏈的 53方向延伸，合成 DNA 新鏈。【答案】：A【配對(duì)練習(xí) 2】在下面哪個(gè)溫度范圍內(nèi)，DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)()A1020 B80100 C2030 D4060 解析：PCR 擴(kuò)增在 80100 溫度范圍內(nèi)，DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)。 答案： B