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1、專題重點專題難點DNA 的粗提取以及鑒定的原理及步驟PCR 技術的基本操作和應用蛋白質的提取和分離的基本過程用電泳法分離蛋白質的基本操作理解 DNA 粗提取各個步驟的原理和目的PCR 技術的原理體內 DNA 復制與 PCR 技術的區(qū)別電泳法分離蛋白質的基本原理專題 5 5DNA DNA 和蛋白質技術課題 1DNA 的粗提取與鑒定DNA 的提取原理溶解度耐受性DNA 與雜質的_不同，DNA 與雜質對酶、高溫、洗滌劑的_不同。DNA 粗提取的實驗設計(1)材料的選?。哼x用 DNA 含量相對_的生物組織，如雞血、菜花、洋蔥等。NaCl 溶液NaCl 溶液(2) 破碎細 胞( 以雞血 為例 ) ：雞血
2、 細胞，加蒸 餾水，用_攪拌，用_過濾，收集濾液。玻璃棒紗布(3)去除雜質：利用 DNA 在不同濃度的_中溶解度不同，通過控制_的濃度去除雜質。(4)DNA 的析出：將處理后溶液過濾，加入與濾液體積相等的、冷卻的_(體積分數(shù)為 95%)。酒精溶液較高DNA 的鑒定二苯胺試劑藍色DNA 溶 解 在 2 mol/L 的 NaCl 溶 液 中 ， 加 入 4 mL 的_，沸水中加熱 5 min，溶液變成_。DNA 提取材料和實驗用具的選擇1實驗材料的選擇原則是選用 DNA 含量高的生物組織。有些材料不宜選用，如哺乳動物成熟紅細胞(豬、牛、羊的血細胞)無細胞核，無法提取 DNA。實驗一般選用雞血或菜花
3、作為實驗材料。2雞血細胞破碎以后釋放出的 DNA，容易被玻璃容器吸附，由于細胞內 DNA 的含量本來就比較少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的 DNA 就會更少。因此，實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管，這樣可以減少提取過程中 DNA 的損失。實驗操作原理1.細胞破碎的原理動物細胞吸水漲破2.用不同濃度的 NaCl溶液提取 DNA 的原理DNA 在 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最小3.提純 DNA 的原理酒精可以溶解蛋白質等雜質，而 DNA不溶于酒精；6080 可以使蛋白質變性，而 DNA 在 80 以上才會變性；利用蛋白水解酶的專一性可以水解蛋白質4.鑒定的原理在沸水浴
4、條件下 DNA 遇二苯胺呈藍色DNA 的粗提取與鑒定實驗中涉及的原理方法步驟加入物質目的1.制備雞血細胞檸檬酸鈉溶液2.提取雞血細胞的細胞核物質20 mL 蒸餾水3.溶解細胞核內的 DNA2 mol 的 NaCl 溶液 40 mL4.析出含 DNA 的黏稠物蒸餾水5.濾取含 DNA 的黏稠物6.將 DNA 的黏稠物再溶解2 mol/L 的 NaCl 溶液 20 mL7.過濾含 DNA 的 NaCl 溶液實驗步驟分析方法步驟加入物質目的8.提取含有雜質較少的 DNA冷卻的 95%的酒精 50 mL9.DNA 的鑒定A：1)向試管中加入 0.015 mol/L 的NaCl 溶液 5 mL2)加入
5、DNA3)加入 4 mL 二苯胺試劑B：1)向試管中加入 0.015 mol/L 的NaCl 溶液 5 mL2)加入 4 mL 二苯胺試劑續(xù)表：目的()：防止血凝。加速血細胞破裂。溶解DNA。使 2 mol/L 的 NaCl 溶液稀釋至 0.14 mol/L，促使 DNA最大限度地析出。使含 DNA 的黏稠物被留在紗布上。使含 DNA 的黏稠物盡可能多地溶于溶液中。除去含 DNA 的濾液中的雜質。提取 DNA。鑒定 DNA 的存在。A：出現(xiàn)藍色；B：無變化。提取 DNA 的原材料【例 1】做 DNA 提取與鑒定實驗時，用雞血而不用豬血的原因是()A雞血的價格低B豬的紅細胞沒有細胞核，不易提取
6、DNAC雞血不凝固，豬血容易凝固D用雞血提取 DNA 更簡便【名師點撥】：DNA 提取實驗材料選取的原則是 DNA 含量高，便于提取。豬為哺乳動物，成熟的紅細胞沒有細胞核，不含 DNA?！敬鸢浮浚築【配對練習 1】能作為提取 DNA 的最佳材料的是()A雞的全血C鴿子的血細胞液B老鼠的紅細胞D菠菜綠葉解析：雞的全血，血漿太多，應該除去血漿；老鼠作為哺乳動物，紅細胞沒有細胞核，沒有 DNA ，不適合作材料；菠菜綠葉由于有色素，影響實驗觀察的效果；鴿子的血細胞液最為適合，能夠獲得較多的 DNA。答案：CDNA 提取的實驗操作【例 2】在 DNA 的提取過程中下列操作的生成物可以丟棄的是()第一，放
7、入 2 mol/L 的 NaCl 溶液中，攪拌后過濾，得到黏稠物和過濾液；第二，放入 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中，攪拌后過濾，得到黏稠物和過濾液；第三，放入冷卻的 95%酒精溶液中，攪拌后過濾，得到黏稠物和過濾液；ACBD【名師點撥】：不同濃度的 NaCl 溶液中 DNA 的溶解度不同，0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中 DNA 的溶解度最小，DNA 析出，過濾后，存在于黏稠物中。在 2 mol/L 的 NaCl 溶液中，DNA的溶解度大，過濾后，DNA 存在于濾液中。酒精可以溶解蛋白質等雜質，而 DNA 不溶于酒精，這正是 DNA 提取和進一步提純的原理?！敬鸢浮浚篋
8、【配對練習 2】在 DNA 的粗提取中，兩次有 DNA 的析出，其依據(jù)的原理是()DNA 在 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最小，DNA 析出酒精可以溶解蛋白質等雜質，而 DNA 不溶于酒精A兩次都是B兩次都是C第一次是，第二次是D第一次是，第二次是解析：在 DNA 的粗提取中，第一次 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最小，DNA 析出；第二次酒精可以溶解蛋白質等雜質，而 DNA 不溶于酒精而析出，兩次都有 DNA 的析出。答案：C影響 DNA 提取質量的因素【例 3】在 DNA 提取過程中，最好使用塑料試管和燒杯，目的是()A不易破碎B減少提取過程中 DNA 的損失C增加 DNA 的含量D容易洗刷【名師點撥】：DNA 容易被玻璃容器吸附，為減少提取過程中 DNA 的損失，最好用塑料試管和燒杯?！敬鸢浮浚築【配對練習 3】下列操作中，對 DNA 的提取量影響最小的是()A使雞血細胞在蒸餾水中充分破裂，放出 DNA 等核物質B攪拌時，要使用玻璃棒沿一個方向輕緩攪拌C在“析出 DNA 黏稠物”時，要緩緩加蒸餾水，直至溶液中黏稠物不再增加D在用酒精沉淀 DNA 時，要使用冷酒精，甚至再將混合液放入冰箱中冷卻解析：攪拌時，要使用玻璃棒沿一個方向輕緩攪拌，有利于混合均勻，加速 DNA 析出，但是對 DNA 的提取量幾乎沒有影響。答案：B
高中生物 專題五 課題1 DNA的粗提取與鑒定課件 新人教版
