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1、 提 取 DNA的 第 一 步 是 材 料 的 選 取 ， 其 目 的 是 一定 要 選 取 DNA含 量 較 高 的 生 物 材 料 ， 否 則 會(huì) 由 于 實(shí)驗(yàn) 過(guò) 程 中 或 多 或 少 的 損 失 而 造 成 檢 測(cè) 的 困 難 ； 第 二步 是 DNA的 釋 放 和 溶 解 ， 這 一 步 是 實(shí) 驗(yàn) 成 功 與 否 的關(guān) 鍵 ， 要 盡 可 能 使 細(xì) 胞 內(nèi) 的 DNA全 部 溶 解 ； 第 三 步是 DNA的 純 化 ， 即 根 據(jù) DNA的 溶 解 特 性 、 對(duì) 酶 及高 溫 的 耐 受 性 的 不 同 等 特 性 ， 最 大 限 度 地 將 DNA與雜 質(zhì) 分 開 ； 最
2、 后 一 步 是 對(duì) DNA進(jìn) 行 鑒 定 ， 這 是 對(duì) 整個(gè) 實(shí) 驗(yàn) 的 結(jié) 果 的 檢 測(cè) 。 1、 請(qǐng) 解 釋 提 取 DNA的 實(shí) 驗(yàn) 操 作 主 要 步 驟 的 目 的練 習(xí) 2、 你 認(rèn) 為 從 細(xì) 胞 中 提 取 某 種 特 定 的 蛋白 質(zhì) 與 提 取 DNA一 樣 容 易 嗎 ？答 ： 提 取 蛋 白 質(zhì) 比 提 取 DNA的 難 度 大 。 這 是 因 為 ，與 DNA相 比 ， 蛋 白 質(zhì) 對(duì) 溫 度 、 鹽 濃 度 、 pH 等 條 件要 敏 感 得 多 ， 很 容 易 失 活 ； 并 且 蛋 白 質(zhì) 的 空 間 結(jié) 構(gòu)多 種 多 樣 ， 理 化 性 質(zhì) 各 不 相
3、同 ， 使 得 蛋 白 質(zhì) 的 提 取沒 有 一 種 統(tǒng) 一 的 方 法 ， 只 能 根 據(jù) 特 定 蛋 白 質(zhì) 的 特 性摸 索 提 取 的 條 件 ， 設(shè) 計(jì) 特 定 的 方 法 。 2.實(shí) 驗(yàn) 中 NaCl的 物 質(zhì) 的 量 濃 度 為 2 mol L和0.14 mol L對(duì) DNA有 何 影 響 ?1.在 DNA的 粗 提 取 實(shí) 驗(yàn) 過(guò) 程 中 ， 兩 次 向 燒 杯中 加 入 蒸 餾 水 的 作 用 是 ( )。A.稀 釋 血 液 、 沖 洗 樣 品B.使 血 細(xì) 胞 破 裂 、 降 低 NaCl濃 度 使 DNA析 出C.使 血 細(xì) 胞 破 裂 、 增 大 DNA溶 解 量 D.
4、使 血 細(xì) 胞 破 裂 、 提 取 含 雜 質(zhì) 較 少 的 DNA答 ： B答 ： 前 者 是 溶 解 DNA， 后 者 是 使 DNA析 出 3.DNA遇 二 苯 胺 (沸 水 浴 )會(huì) 染 成 ( ) A.磚 紅 色 B.橘 黃 色 C.紫 色 D.藍(lán) 色4.提 取 雞 血 中 的 DNA時(shí) ， 為 什 么 要 除 去 血 液中 的 上 清 液 ?答 ： DNA的 提 取 ， 關(guān) 鍵 是 對(duì) 雜 質(zhì) 的 去 除 ， 由 于上 清 液 是 血 液 中 的 血 漿 部 分 ， 不 含 DNA， 所 以要 除 去 上 清 液 (含 有 蛋 白 質(zhì) )。答 ： D 為 什 么 反 復(fù) 地 溶 解
5、與 析 出 DNA， 能 夠 去 除 雜 質(zhì) ？ 1、 用 高 鹽 濃 度 的 溶 液 溶 解 DNA， 能 除去 在 高 鹽 中 不 能 溶 解 的 雜 質(zhì) ； 2、 用 低 鹽 濃 度 使 DNA析 出 ， 能 除 去 溶解 在 低 鹽 溶 液 中 的 雜 質(zhì) 。 因 此 ， 通 過(guò) 反 復(fù) 溶 解 與 析 出 DNA， 就 能夠 除 去 與 DNA溶 解 度 不 同 的 多 種 雜 質(zhì) 。 過(guò) 濾 用 蒸 餾 水 稀 釋 過(guò) 的 雞 血 細(xì) 胞 液 目 的 :獲 得 含 核 物 質(zhì) 的 濾 液 過(guò) 濾 含 粘 稠 物 的 0.14mol/LNaCl溶 液 目 的 :獲 取 紗 布 上 的
6、 粘 稠 物 過(guò) 濾 溶 解 有 DNA的 2mol/LNaCl溶 液 目 的 :得 到 含 DNA的 濾 液 本 實(shí) 驗(yàn) 中 有 三 次 過(guò) 濾 ,分 別 有 什 么 作 用 ? 第 一 次 攪 拌 加 蒸 餾 水 的 雞 血 細(xì) 胞 液 加 速 細(xì) 胞 的 破 裂 第 二 次 攪 拌 加 2mol/LNaCl溶 液 的 濾 液 使 DNA與 溶 液 混 合 均 勻 第 三 次 攪 拌 加 蒸 餾 水 至 0.14mol/LNaCl溶 液 稀 釋 NaCl溶 液 ,析 出 DNA 第 四 次 攪 拌 放 入 2mol/LNaCl溶 液 中 紗 布 上 的 粘 稠 物 使 DNA盡 可 能 多
7、 的 溶 于 溶 液 中 第 五 次 攪 拌 體 積 分 數(shù) 為 95%的 酒 精 提 取 含 雜 質(zhì) 較 少 的 DNA實(shí) 驗(yàn) 中 有 五 次 用 玻 璃 棒 攪 拌 ?分 別 有 什 么 作 用 ? 方 法 步 驟 加 入 物 質(zhì) 目 的 1.制 備 雞 血 細(xì) 胞 液 檸 檬 酸 鈉 溶 液 2.提 取 雞 血 細(xì) 胞 細(xì) 胞 核 物 質(zhì) 20 m1蒸 餾 水 幻 燈 片 18 3.溶 解 細(xì) 胞 核 內(nèi) 的 DNA 2 m1 L的 NaCI溶 液 40mL 幻 燈 片 18 4.析 出 含 DNA的 黏 稠 物 蒸 餾 水 5.濾 取 含 DNA的 黏 稠 物 6.將 DNA的 黏 稠
8、 物 再 溶 解 2 mol L的 NaCl溶 液 20 mL 7.過(guò) 濾 含 DNA的 NaCl溶 液 8.提 取 含 有 雜 質(zhì) 較 少 的 DNA 冷 卻 的 95 的 酒 精 50 mL 幻 燈 片 18 A:(1)向 試 管 中 加 入 0.015 mol L的 NaCl溶 液 5mL (2)加 入 DNA (3)4 mL二 苯 胺 試 劑 9.DNA的 鑒 定 B:(1)向 試 管 中 加 入 0.015mol L 的 NaCl溶 液 5mL (2)4 mL二 苯 胺 試 劑 加 入 檸 檬 酸 鈉 溶 液 的 目 的 是 防 止 血 凝 固 加 速 血 細(xì) 胞 破 裂 溶 解 DNA 使 2mol/L的 NaCl溶 液 稀 釋 至 0.14mol/L使 得 DNA最 大 限 度 地 釋 出 使 含 DNA的 黏 稠 物 被 留 在 紗 布 上 使 含 DNA的 黏 稠 物 盡 可 能 多 的 溶 解 于 溶 液 中 除 去 含 DNA的 濾 液 中 的 雜 質(zhì) 提 取 DNA A出 現(xiàn) 藍(lán) 色 B無(wú) 變 化
高中生物選修一 DNA的粗提取與鑒定課件.ppt
