高中生物 專題五 課題2 多聚酶鏈式反應(yīng)擴增dna片段課件 新人教版

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1、參與的組分在 DNA 復(fù)制中的作用解旋酶_DNA 母鏈_課題 2 2多聚酶鏈式反應(yīng)擴增 DNA DNA 片段生物體內(nèi)的 DNA 復(fù)制細胞核1DNA 復(fù)制的場所是_。2參與 DNA 復(fù)制的組成成分與反應(yīng)條件打開 DNA 雙鏈提供 DNA 復(fù)制的模板參與的組分在 DNA 復(fù)制中的作用_合成子鏈的原料DNA 聚合酶_引物_續(xù)表4 種脫氧核苷酸催化合成 DNA 子鏈使 DNA 聚合酶能夠從引物的 3端開始連接脫氧核苷酸PCR 擴增技術(shù)1概念DNAPCR 技 術(shù) 是 _ 的 簡 稱 ， 是 一 種 在_ 進行的迅速擴增 DNA 的技術(shù)。它能夠以極少量的_為模板在短時間內(nèi)復(fù)制出上百萬份。2PCR 反應(yīng)過程

2、(1)變性。(2)復(fù)性。(3)延伸。3結(jié)果兩個引物DNA 聚合酶只能特異性地復(fù)制在_之間的DNA 序列，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴增。多聚酶鏈式反應(yīng)體外DNA 含量測定1原理：利用 DNA 在_的紫外線波段的吸收峰曲線來測定相應(yīng)含量。260 nm2 計算公式 ：DNA 含 量 (g/mL) 50(260 nm 讀數(shù))(_)。稀釋倍數(shù)體內(nèi)復(fù)制PCR 擴增解旋方式在解旋酶的作用下，細胞提供能量，部分解旋加熱至 90 左右，雙鏈全部解開，不需要解旋酶引物一小段 RNARNA 或者單鏈 DNA合成子鏈在引物的基礎(chǔ)上，一條鏈連續(xù)合成，另一條不連續(xù)合成分別從兩條鏈的引物端開始，連續(xù)合成，控制溫度條件在

3、72 特點邊解旋邊復(fù)制，半保留復(fù)制在體外迅速擴增DNA 聚合酶不需要耐高溫聚合酶耐高溫的 TaqDNA 聚合酶循環(huán)次數(shù)受生物自身控制30 多次相同點兩者都需要模板、四種脫氧核苷酸，都需要酶和能量，需要一定緩沖溶液環(huán)境DNA 的體內(nèi)復(fù)制與 PCR 擴增的區(qū)別與聯(lián)系PCR 技術(shù)的原理及過程1PCR 原理PCR 技術(shù)利用了 DNA 的熱變性原理：在 80100的范圍內(nèi)，DNA 的雙螺旋結(jié)構(gòu)解體，雙鏈分開，當溫度緩慢降低時，兩條彼此分離的 DNA 鏈又會重新結(jié)合成雙鏈。2PCR 的反應(yīng)過程(1)變性：當溫度上升到 90 以上時，雙鏈 DNA 解旋為單鏈。(2)復(fù)性：溫度下降為 50 左右時，兩種引物通

4、過堿基互補配對與兩條單鏈 DNA 結(jié)合。(3)延伸：當溫度上升至 72 左右時，四種脫氧核苷酸在DNA 聚合酶的作用下，合成新的 DNA 鏈。3PCR 反應(yīng)的條件(1)穩(wěn)定的緩沖液環(huán)境。(2)DNA 模板。(3)分別與模板 DNA 兩條模板鏈相結(jié)合的引物。(4)A、T、C、G 四種脫氧核苷酸。(5)耐熱的 DNA 聚合酶，一般用 TaqDNA 聚合酶。(6)能嚴格控制溫度變化的溫控設(shè)施。PCR 擴增技術(shù)與 DNA 體內(nèi)復(fù)制的區(qū)別【例 1 】下列屬于 PCR 擴增區(qū)別于 DNA 體內(nèi)復(fù)制的是()需要解旋酶 需要引物 常溫常壓下進行以四種脫氧核苷酸為原料需要耐高溫的 TaqDNA 聚合酶邊解旋邊復(fù)

5、制可以短時間得到大量拷貝需要模板ACBD【名師點撥】：體內(nèi)復(fù)制與 PCR 擴增既有區(qū)別又有聯(lián)系，PCR 體外擴增概念很明確，在體外，加熱解旋，因此需要耐高溫的 TaqDNA 聚合酶，它能以極少量的 DNA 為模板，在幾小時內(nèi)復(fù)制出上百萬份的 DNA?！敬鸢浮浚篊【配對練習 1】真核生物細胞質(zhì)中也有 DNA，例如葉綠體、線粒體等，關(guān)于細胞質(zhì) DNA 復(fù)制不正確的是()A需要解旋酶B需要 DNA 聚合酶C兩條鏈同時復(fù)制只有一個起點D不是半保留復(fù)制解析：真核生物細胞質(zhì)中 DNA 復(fù)制需要解旋酶、DNA 聚合酶、兩條鏈同時復(fù)制只有一個起點，是半保留復(fù)制。答案：DPCR 擴增的條件【例 2】PCR 擴增

6、包括三個環(huán)節(jié)，變性、復(fù)性(退火)、延伸，這三步的溫度依次是()A94 、55 、72 B72 、55 、94 C55 、94 、72 D80 、60 、72 【名師點撥】：PCR 擴增的原理就是利用 DNA 耐高溫的特性，使 DNA 在 94 左右雙鏈解螺旋，然后在低溫(3755 )的情況下，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈 DNA模板結(jié)合，形成部分雙鏈；在 TaqDNA 聚合酶的最適溫度(72 )下，以引物 3端為合成的起點，以單核苷酸為原料，沿模板從子鏈的 53方向延伸，合成 DNA 新鏈?！敬鸢浮浚篈【配對練習 2】在下面哪個溫度范圍內(nèi)，DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)解開()A1020 B80100 C2030 D4060 解析：PCR 擴增在 80100 溫度范圍內(nèi)，DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)解開。 答案： B