重醫(yī) 臨床免疫學(xué)檢驗 重點整理

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1、填空 1. 免疫防御功能異?？蓪?dǎo)致（感染、免疫缺陷）疾病。 2. 抗原抗體反應(yīng)的特點有（ 特異性、比例性 、可逆性、階段性） 3. 抗原抗體反應(yīng)的溫度一般以（15?40°C）為宜，最適溫度為（37°C） 4. 影響抗原抗體反應(yīng)的環(huán)境因素主要有（電解質(zhì)、pH、溫度） 5?某些特殊的抗原抗體反應(yīng)對溫度有一些特殊的要求，如冷凝集素在（4°C）左右與紅細(xì)胞 結(jié)合最好，（20C）以上反而解離。 6. 抗原抗體的結(jié)合分子間的引力包括（靜電引力、 范德華引力、氫鍵引力和疏水作用力）， 其中作用最強的是（疏水作用力） 1. 間接凝集反應(yīng)的類型包括（正向間接凝集、反向間接凝集反應(yīng)、間接凝集抑制反應(yīng)

2、和協(xié)同 凝集反應(yīng)）四種類型。 2. 參與凝集反應(yīng)中的抗原稱為（凝集原），抗體稱為（凝集素），常用的直接凝集試驗有（玻片 法、試管法、玻片法） 3. 在間接凝集反應(yīng)中正向凝集反應(yīng)是用（抗原）致敏載體以檢測標(biāo)本中相應(yīng)的（抗體），而反向 間接凝集反應(yīng)是用（抗體）致敏載體以檢測標(biāo)本中相應(yīng)（抗原） 4. 間接抗球蛋白試驗可用已知抗原型紅細(xì)胞檢測血清中的（不完全抗體），可用于輸血前的（交 叉配血）試驗。 1．免疫沉淀反應(yīng)是（可溶性抗原）與（相應(yīng)抗體）的特異性結(jié)合 2．棋盤格法（抗原 ）和（抗體）同時稀釋，可一次完成（抗原）和（抗體）的滴定 3．單向瓊脂擴散是待測抗原從含有定量（抗體）的（凝膠）

3、內(nèi)自由向周圍擴散，抗原抗體 特異性結(jié)合，在兩者比例合適的部位，形成（沉淀環(huán)）。 4．Maneini 曲線適用于（大分子抗原）的測定，在一定范圍內(nèi)，沉淀環(huán)隨時間延長而擴大， 抗原濃度與（擴散環(huán)直徑的平方）呈線性關(guān)系，常用（普通）坐標(biāo)紙作圖。 5．Fahey 曲線適用于（小分子抗原）的測定，在一定范圍內(nèi)，沉淀環(huán)隨時間延長而擴大， 沉淀環(huán)直徑與（抗原濃度的對數(shù)）呈線性關(guān)系，常用（半對數(shù)）坐標(biāo)紙作圖。 6． 雙向瓊脂擴散試驗可對抗原或抗體的存在、含量和相對分子量進(jìn)行分析，沉淀線靠近抗 原孔指示（抗體含量較高）；靠近抗體孔則指示（抗原含量較高）；不出現(xiàn)沉淀線則表明（無 對應(yīng)的抗原和抗體）。 7．

4、免疫電泳是將（電泳）與（雙向免疫擴散）相結(jié)合的一種免疫化學(xué)分析技術(shù)。 8．火箭免疫電泳是（電泳）與（單向免疫擴散）相結(jié)合的免疫技術(shù)。 9．對流免疫電泳是（電泳）與（雙向免疫擴散）相結(jié)合的免疫技術(shù)。 10．對流免疫電泳中，抗體流向負(fù)極，是因為（電泳 ）速度?。姖B）速度大。 11．免疫濁度測定的基本原理是抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成（免疫復(fù)合物），使反應(yīng) 液出現(xiàn)（濁度），并可根據(jù)其推算出抗原或抗體的量。 12．根據(jù) Rayleigh 方程，散射比濁法中的散射光強度與入射光波長成（反）比，與粒子的 濃度和體積成（正）比。 13．速率散射比濁法是測定單位時間內(nèi)免疫復(fù)合物形成的（最快時間

5、段）的散射信號值，此 時的散射信號最強，速率散射信號值最大。 14．免疫膠乳濁度測定的原理與透射比濁法相似。載體為大小適中、均勻的膠乳顆粒其直徑 應(yīng)稍（小于）入射光波長目前多用（200） nm 的膠乳顆粒。 15．免疫濁度測定的基本原則之一是反應(yīng)體系中必須始終保持（抗體）過量。 16．凝膠內(nèi)沉淀試驗包括（單向擴散試驗、雙向擴散試驗）；抗原抗體最適比的基本測定方 法為（抗原稀釋法、抗體稀釋法）。 1．標(biāo)記免疫技術(shù)的示蹤物有（酶、放射性核素、熒光素、化學(xué)或生物發(fā)光劑、膠體金） 2?放射免疫技術(shù)可分為（放射免疫分析RIA、免疫放射分析IRMA）兩種基本類型。 3. 采用125-I制備標(biāo)記

6、物的基本原理是以放射性碘原子置換被標(biāo)記物分子中（酪胺酸或酪胺 殘基）或（組胺殘基）上的氫原子。 1．熒光免疫技術(shù)的主要類型包括（熒光抗體染色技術(shù)、熒光免疫測定技術(shù)）。 2．熒光物質(zhì)有（熒光素、其他熒光素物質(zhì)）。 3．熒光抗體染色技術(shù)可分為（熒光免疫顯微技術(shù)、流式熒光免疫技術(shù)）。 4. 鑭系稀土元素標(biāo)記物制備的螯合劑有（多羧基酸類螯合劑、B-二酮體類螯合劑、BCPDA、 菲洛林） 5. 熒光免疫測定根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游離的熒光標(biāo)記物而分為 （均 相、非均相）兩種類型。 6. 非均相熒光免疫測定法包括（時間分辨熒光免疫測定、熒光酶免疫測定）。 7. 均相熒光免疫測定

7、法包括（熒光偏振免疫測、底物標(biāo)記熒光免疫測定）。 8. 熒光素標(biāo)記抗體的方法有（攪拌標(biāo)記、透析標(biāo)記法）。 1. 膜載體酶免疫測定技術(shù)的類型主要有（斑點-ELISA免疫滲濾試驗、免疫層析試驗、免疫 印跡法） 2. 酶免疫組織化學(xué)技術(shù)常用的酶有（HRP、ALP、B-半乳糖苷酶（B-Gal））。 3. ELISA 檢測抗原的方法主要有（雙抗體夾心法、雙位點一步法、競爭法）；檢測抗體的方 法主要有（間接法、雙抗原夾心法、競爭法、捕獲法）。 4. ELISA中三種必要試劑是（固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體、酶的反應(yīng)底物）。 5. 制備酶結(jié)合物常用的方法有（戊二醛交聯(lián)法、過碘酸鹽氧化法）

8、。 6. 在稀釋液和洗滌液中加入（吐溫一 20），可以去除非特異性吸附。 7. 均相酶免疫測定技術(shù)的類型主要有（酶增強免疫測定技術(shù)、克隆酶供體免疫分析技術(shù)）。 8. 非標(biāo)記抗體酶免疫組織化學(xué)技術(shù)的類型主要有（酶橋法、PAP法、雙橋PAP法、APAAP 法）。 9. （SDS-PAGE、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運、酶免疫測定）三項技術(shù)結(jié)合而成形成免疫印跡法。 10. 常用于HRP標(biāo)記抗原/抗體的方法：（戊二醛交聯(lián)法、改良過碘酸鈉法）。 1. 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)根據(jù)發(fā)光方式不同分為（化學(xué)發(fā)光酶免疫分析、化學(xué)發(fā)光免疫分析、點 化學(xué)發(fā)光免疫分析）。 2. 根據(jù)形成激發(fā)態(tài)分子的激發(fā)能可將發(fā)光分為三種類型（光

9、照發(fā)光、生物發(fā)光、化學(xué)發(fā)光）， 發(fā)光劑分為（熒光素、生物發(fā)光劑、化學(xué)發(fā)光劑）三種。 3. HRP常用的發(fā)光底物為（魯米諾）；ALP常用的發(fā)光底物為（AMPPD、4-MUP）。 4. 發(fā)光酶免疫分析的技術(shù)要點包括（抗原抗體反應(yīng)、標(biāo)記物游離部分和結(jié)合部分分離、酶促 發(fā)光反應(yīng)及檢測）三個過程。 5?發(fā)光酶免疫分析常用的標(biāo)記酶有（ALP、HRP）,根據(jù)酶促反應(yīng)底物不同，發(fā)光酶免疫分 析可分為（熒光酶免疫分析、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析） 6?電化學(xué)發(fā)光免疫分析是（電化學(xué)、免疫測定）相結(jié)合的產(chǎn)物。它的標(biāo)記物的發(fā)光原理與 一般化學(xué)發(fā)光不同，是一種在電極表面由（電化學(xué)）引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，實際上包 括

10、了（電化學(xué)、化學(xué)發(fā)光）兩個過程。 7. ECLIA通過（電）啟動發(fā)光反應(yīng)，而CLIA是通過（化合物混合）啟動發(fā)光反應(yīng)。 1?不受位阻效應(yīng)影響，更易發(fā)揮生物素活性作用的是（BCNHS）。 2?用于標(biāo)記蛋白質(zhì)醛基的，適用范圍較BHZ寬的活化生物素是（BCHZ）。 3?在一定波長的光照射下，光敏基團可轉(zhuǎn)變?yōu)榉枷慊趸蕉苯优c腺嘌吟N7位氨基結(jié)合 的是（光生物素）。 4.生物素化蛋白質(zhì)衍生物有二類，一種是（生物素化的大分子生物活性物質(zhì)），另一種是（標(biāo) 記材料結(jié)合生物素后制成的標(biāo)記物）。 5?用于親和素標(biāo)記的物質(zhì)中，最常用的是（酶、異硫氰酸熒光素（FITC）、膠體金） 1. 用丙酮做固定

11、劑的抗原是（免疫球蛋白）；用1%聚甲醛做固定劑的抗原是（激素）；用10% 甲醛做固定劑的抗原是（類脂質(zhì)）；用 95%乙醇做固定劑的抗原是（蛋白質(zhì)）；用四氯化磺 做固定劑的抗原是（酶）。 2?免疫染色對特殊標(biāo)本的進(jìn)一步處理常用（冰凍切片、石蠟切片）法。 3?免疫組化染色后，陽性細(xì)胞的染色分布有三種類型，分別是（胞質(zhì)型、細(xì)胞核型、細(xì)胞膜 表面型）。 4. 酶免疫組化技術(shù)中最常用的酶有（辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶）。 5. 免疫電鏡標(biāo)本的制備主要有（非包埋法免疫染、包埋前免疫染色、包埋后免疫染色） 6?免疫組化中最常用的制片方法是（蛋白酶消化法、非特異吸附法）。 1．金免疫

12、技術(shù)主要有（金免疫組織化學(xué)染色技術(shù)）和（金免疫測定技術(shù)），前者包括（免疫金（銀） 光鏡染色技術(shù)、免疫金電鏡染色技術(shù)）；后者包括（斑點金免疫滲濾試驗、斑點金免疫層析 試驗）等。 2．免疫金是指（膠體金與抗原（抗體） ）的結(jié)合物，在免疫組織化學(xué)染色技術(shù)中，習(xí)慣上稱 之為（金探針） 3．斑點金免疫層析試驗方法學(xué)類型有（雙抗體夾心法、競爭法、間接法）。 4．滲濾裝置是斑點金免疫滲濾試驗試劑盒中主要組成部分之一，由（塑料小盒、吸水墊料 ） 和（點加了抗原或抗體的硝酸纖維素膜片）三部分組成。 5．斑點金免疫滲濾試驗試劑盒由（滲濾裝置、膠體金標(biāo)記物、洗滌液）組成。 6．用于電鏡的免疫金法可分為（包埋

13、前染色、包埋后染色）兩大類。 7．免疫金電鏡染色技術(shù)包括（標(biāo)本包埋、免疫組化染色）兩個主要步驟。 8. 為了消除待測血清標(biāo)本中（非特異性IgG）的干擾，斑點金間接免疫層析法測抗體常設(shè)計成 （反流免疫層析法 ） 1. PBMCs 包括（淋巴細(xì)胞）和（單核細(xì)胞 ）。 2. 在反相溶血空斑試驗中每一個空斑代表一個（分泌Ig的細(xì)胞）。 3. B細(xì)胞表面特異的標(biāo)志是（SmIg）o 4. 常用的測定淋巴細(xì)胞活力的方法是（臺盼藍(lán)染色法）。 5. 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化情況的判定方法有（形態(tài)學(xué)方法、3H—TdR摻入法、MTT比色法） 6. 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗應(yīng)用的同位素是（3-H ），細(xì)胞毒試驗應(yīng)用的同位

14、素是（51-Cr） 7. 分離外周血白細(xì)胞常用的方法是（自然沉降法）和（聚合物加速沉降法）。 8. 去除白細(xì)胞懸液中殘留紅細(xì)胞的常用方法有（無菌蒸餾水低滲裂解法、 0. 83％氯化銨處 理法）。 9．去除單個核細(xì)胞懸液中單核細(xì)胞的常用方法有（黏附去除法、羰基鐵粉吞噬去除法）。 10. 檢測T細(xì)胞數(shù)量的花環(huán)技術(shù)包括（E花環(huán)試驗、葡萄球菌花環(huán)法、抗體致敏紅細(xì)胞花環(huán) 法）；檢測B細(xì)胞數(shù)量的花環(huán)技術(shù)主要有（Ea花環(huán)試驗、Et花環(huán)試驗）。 11. 淋巴細(xì)胞的密度為 （1.077±0.001）。 12. 外周血經(jīng) Ficoll 分離液離心后從上到下分為（血清、 PBMCs 、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞）層

15、。 1. 活化的TH1細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子主要有（IL-2、IFN、IL-12），而TH2細(xì)胞主要產(chǎn)生 的細(xì)胞因子為（IL-4、IL-5、IL-10）。 2. 細(xì)胞因子常用的檢測法包括（生物學(xué)檢測法、免疫學(xué)檢測法、分子生物學(xué)檢測法）。 3. ELISA 測定法測定細(xì)胞因子常用（競爭法）。 1. 補體參與的反應(yīng)試驗類型包括（免疫溶血試驗、補體結(jié)合試驗、補體依賴的細(xì)胞毒驗 、 免疫黏附試驗）. 2. 參與補體結(jié)合試驗的試劑可分為（指示系統(tǒng)、反應(yīng)系統(tǒng)）兩個系統(tǒng)。 3.III型變態(tài)反應(yīng)疾病患者的血清中補體水平（降低）。 4. 補體的最佳保存溫度是（一 20以下），在（56°C ）下30mi

16、n即被滅活。 5. CH50 試驗中有（ 綿羊紅細(xì)胞、溶血素、人血清 ）參與反應(yīng)。 1. 免疫球蛋白根據(jù)重鏈的不同可分為（IgM、IgG、IgA、IgE、IgD ） 2. 免疫固定電泳的特點是（周期短、敏感性高、分辨清晰、結(jié)果易于分析） 3. Ig中k/入比率正常范圍是（1.2?2.4） 1. 腫瘤抗原可分為（ 腫瘤相關(guān)抗原、腫瘤特異性抗原）兩類。 2. 腫瘤標(biāo)志物檢測的臨床意義，歸納起來有（早期普查、腫瘤診斷、監(jiān)測病情）等 3. 腫瘤標(biāo)志物的檢測對臨床某些腫瘤有重要輔助診斷價值，如：AFP可輔助診斷（肝癌）， CEA 可輔助診斷（結(jié)腸癌 ）， PSA 可輔助診斷（前列腺癌）。

17、 4. 細(xì)胞免疫是抗腫瘤免疫的重要機制，參與抗腫瘤免疫的細(xì)胞主要有（T細(xì)胞、B細(xì)胞、 NK 細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞 ）等。 1. 宿主抗移植物反應(yīng)根據(jù)臨床出現(xiàn)癥狀情況一般分為（超急性排斥、急性排斥、慢性排斥） 三類。 2. （ HLA ）是不同個體間進(jìn)行器官或組織移植時發(fā)生排斥反應(yīng)的重要成分。 3. HLA三類分子中，（I、II類）分子是能發(fā)生移植排斥反應(yīng)的首要抗原尤其是（HLA-DR ） 位點。 4. HLA-A、B、C和HLA-DQ、DR抗原采用（補體依賴的微量細(xì)胞毒）試驗檢測。 簡答/問答 抗原抗體反應(yīng)的原理：1.Ag、Ab能特異性結(jié)合：（內(nèi)因）2.Ag、Ab結(jié)合的動力：（外因）靜

18、 電引力（又稱庫侖引力）范得華力（又稱電子云力）氫鍵、疏水作用力。 抗原抗體反應(yīng)的特點：2.特異性、交叉反應(yīng)（cross-reaction）2.最適比例3.可逆性 影響抗原抗體反應(yīng)的主要因素自身因素：Ag：與Ag的理化性質(zhì)、抗原表位的數(shù)目及種類 有關(guān)；Ab：與Ab的來源有關(guān)：是R型抗體或H型抗體；與Ab的特異性、親合性有關(guān)； 與 Ab 的濃度有關(guān)。外界環(huán)境條件：1 ．電解質(zhì) 2 ．PH 3 ．溫度 抗原抗體反應(yīng)分哪些種類？沉淀反應(yīng)； 凝集反應(yīng)；補體參與的溶血反應(yīng)、補體結(jié)合試驗、 中和試驗、三大標(biāo)記技術(shù) 什么是交叉反應(yīng)，有無特異性，為什么？在臨床上有何意義？交叉反應(yīng)cross-reacti

19、on）----抗 體對具有相同或相似抗原表位的抗原發(fā)生的反應(yīng)稱為交叉反應(yīng)。交叉反應(yīng)并沒有違背Ag、 Ab特異性結(jié)合的原則，其產(chǎn)生的先決條件是存在共同Ag表位。交叉反應(yīng)的意義：1.免疫 學(xué)診斷：（利用交叉反應(yīng)）eg外斐氏反應(yīng)等:利用變形桿菌0X19、0X2、OXk作Ag檢查血 清中Ab,診斷斑疹傷寒（立克次氏體感染所致）2.可造成免疫病理損害：eg鏈球菌感染后 易導(dǎo)致腎小球腎炎，其原因為鏈球菌與人體腎小球基底膜有共同的Ag表位所致。 雙擴、單擴、對流免疫電泳、免疫電泳實驗的原理，方法，用途。 凝膠擴散試驗原理：可 溶性抗原與相應(yīng)抗體在電解質(zhì)存在下，在瓊脂基質(zhì)中擴散，當(dāng)兩者相遇，比例恰當(dāng)時結(jié)合，

20、 出現(xiàn)肉眼可見的沉淀線。雙擴，方法：制備瓊脂板、打孔、加樣、擴散、用途： 1.已知 Ag 或Ab測未知Ab或Ag :雙孔型2?抗原性質(zhì)分析：三角孔型3?測Ag有效稀釋度：梅花孔 型。單擴：方法：已知抗體+瓊脂混合制板、打孔，在瓊脂板小孔中加梯度抗原，抗原向四 周擴散形成沉淀環(huán)，抗原濃度與沉淀環(huán)直徑呈線性關(guān)系繪制標(biāo)準(zhǔn)曲，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出并計 算待測標(biāo)本含量。用途：定量測定可測IgG、IgA、IgM、C3等含量。對流免疫電泳（counter -immunoelectrophoresis）原理：定向加速的免疫雙擴（雙擴+電場，使抗原、抗體相對泳動） 方法：抗原、抗體分別在瓊脂板上不同孔內(nèi)，抗原在負(fù)極

21、端，抗體在正極端，電泳。電壓： 4?6v/cm（瓊脂長度）電泳時間：45分鐘?1小時。用途用于HBsAg、AFP等檢測。免疫電泳 （immunoelectrophoresis）原理：區(qū)帶電泳+雙擴結(jié)合。方法:1.Ag電泳分出區(qū)帶（當(dāng)時看不 到）2.Ag、Ab免疫雙擴。用途：常用于分析復(fù)雜Ag的組分。（如人全血清組分的分析） 影響電泳的因素有哪些？ 1?與溶液的pH有關(guān)：常用pH8~9,蛋白質(zhì)帶負(fù)電2?與溶液離子強 度有關(guān)：愈高，泳動慢，一般0.02?0.2M3.與電場強度有關(guān)：愈高，愈快，一般4?6v/cm （瓊 脂長），約40v左右4.電滲作用的影響：電場中液體對于一固體的固定相對移動的現(xiàn)象

22、。電 滲方向與電泳方向相反。 Ab沉淀素（precipitin）。沉淀反應(yīng)稀釋ag,凝集反應(yīng)稀釋ab。Ag凝集原agglutinogen Ab 凝集素 agglutinin 玻片凝集試驗和試管凝集試驗的區(qū)別玻片法 用已知抗體檢測未知抗原。定性試驗。用途： AB0 血型鑒定、菌種鑒定。試管法用已知抗原測未知抗體的效價。屬半定量試驗。 反向間接凝集試驗、間接凝集抑制試驗的原理及實例：反向間接（血、膠乳）凝集試驗。 原理：將已知抗體吸附于載體上，檢測未知抗原。如：反向間接血凝檢測HBsAg、AFP等 間接凝集抑制試驗原理：待測樣本（可溶性Ag?） +已知Ab,反應(yīng)一段時間后，+已知致 敏Ag顆粒

23、（已成為顆粒性Ag），觀察是否有凝集現(xiàn)象。不凝集為陽性，凝集為陰性。如： 用膠乳凝集抑制試驗檢測小便中絨毛膜促性腺激素（HCG） 協(xié)同凝集試驗的原理原理:實質(zhì)為反向間接凝集反應(yīng)葡萄球菌A蛋白（Staphylococcus protein A, SPA）能非特異地與IgG的Fc段結(jié)合，當(dāng)與特異性抗原相遇時，IgG的Fab段與抗原結(jié)合， 出現(xiàn)金葡菌的凝集現(xiàn)象（屬特殊間接凝集試驗） 比較沉淀試驗和凝集試驗的異同抗原性質(zhì)：可溶性Ag、顆粒性Ago稀釋對象：抗原、抗體。 結(jié)果現(xiàn)象：沉淀現(xiàn)象、凝集現(xiàn)象。敏感性：低 、高。 免疫血清制備的主要程序。（一）動物的選擇： 1.常用動物：哺乳類較多：馬、羊、豬

24、、猴、 兔豚鼠等；禽類：雞。2.選擇原則：免疫的Ag與動物的種類要求越遠(yuǎn)越好（即免疫原性好）； 與免疫血清的量有關(guān)：所需量大，用馬、羊、猴等大動物；所需量小，用兔、豚鼠等小動物 動物的個體狀態(tài)：雄性、適齡、健康、無感染；其它：根據(jù)實驗的特殊要求。（二）抗原的 條件：具有良好的抗原決定簇（表位）：易被LC識別而產(chǎn)生Ab；具有可靠的純度；足夠大 的分子量及相對復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)；注射量：嚴(yán)格掌握。寧可小，一般用25卩g/kg動物；量大 可出現(xiàn)免疫抑制 佐劑概念、作用機理、福氏不完全完全佐劑的組成。佐劑（adjuvant）:同Ag 一起或預(yù)先注 入機體，能增強機體對該 Ag 的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類

25、型的物質(zhì)。福氏不完全佐劑 （FIA）：組成：羊毛脂+石臘油，二者比例為4： 1.福氏完全佐劑（FCA）：組成：羊毛脂 ＋石臘油＋卡介苗 分離提純免疫球蛋白有哪些方法，其原理是什么？1 鹽析法:在不同濃度的中性鹽中蛋白質(zhì) 會脫水，降低帶電電勢，親水性變?yōu)槭杷裕肿娱g相互凝聚而沉淀（鹽析作用）。不同蛋 白質(zhì)鹽析所需中性鹽的濃度不同，故可分離不同蛋白質(zhì)。 2離子交換層析法:原理利用不同的 蛋白質(zhì)在緩沖溶液中所帶電荷不同，與某一載體上的具有相反電荷的離子基團進(jìn)行吸附，然 后進(jìn)行解脫，達(dá)到純化蛋白質(zhì)目的。 3 凝膠過濾法:凝膠顆粒是網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，當(dāng)分子大小不同的 混合物通過凝膠柱時，分子大的先下來，分

26、子小的嵌入凝膠顆粒的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中后下來，從而 將分子大小不同的物質(zhì)分離開來，即為分子篩的作用。 4親和層析法:利用抗原抗體的結(jié)合具 有特異性、可逆性，將純化抗原先交聯(lián)到載體（瓊脂糖珠）上，制成親和層析柱，當(dāng) Ab（Ig） 通過時，與抗原特異性結(jié)合在柱上，Ab中雜質(zhì)流出。然后通過改變緩沖液pH、離子強度， 使 Ab 解脫下來。 免疫標(biāo)記技術(shù)的原理用可以微量檢測的標(biāo)記物（示蹤物質(zhì)）標(biāo)記抗原或抗體，作為試劑，與 相應(yīng)抗體或抗原結(jié)合反應(yīng)后，測定抗原抗體復(fù)合物中的標(biāo)記物，從而推斷所測抗體或抗原有 無及量的多少 免疫熒光技術(shù)中最常用的熒光素是什么？ 1 .異硫氰酸熒光黃 （ Fluorescein is

27、othiocyanate , FITC）可發(fā)出黃綠色熒光2.四乙基羅丹明（rhodamine, RB20）發(fā)出橘紅色熒光3.四甲基異硫氰 酸羅丹明（tetramethylrhodamine isothiocyanate,TRITC）發(fā)出橙紅色熒光 免疫熒光顯微染色的各種方法及優(yōu)缺點1.直接法:快、直接、干擾因素少;用于檢測抗原;每檢 測一種抗原要標(biāo)記一種熒光抗體,較麻煩。 2.間接法：優(yōu)點：制備一種熒光抗體（抗抗體）可 用于多種Ab檢測；靈敏度高。3.補體法：靈敏度高，制備一種熒光抗補體用于多種檢測； 干擾因素多，補體不穩(wěn)定，少用。 4.雙標(biāo)記法。免疫熒光顯微技術(shù)優(yōu)缺點優(yōu)點： 1.特異性、 敏

28、感性高2?快速3?可定位4?既可測Ag又可測Abo缺點：1?需要熒光顯微鏡2?有非特異熒光 干擾 3.定性測定、判斷結(jié)果不客觀4.片子難保存（熒光猝滅） ELISA的原理、方法（以間接法測抗體和雙抗夾心法為例）及影響因素。原理：將酶分子 與Ab或Ag連接成一酶結(jié)合物（酶標(biāo)記物），當(dāng)它與固相載體中相應(yīng)Ag或Ab相遇，形成 酶標(biāo)記的 AgAb 復(fù)合物，加入底物，酶催化底物，生成有色產(chǎn)物，根據(jù)顏色深淺可測出溶液 中Ag或Ab的量。雙抗體夾心法步驟：包被已知Ab-洗滌-加待測標(biāo)本（測Ag?）-洗滌- 加酶標(biāo)Ab-洗滌-加底物-加終止液-觀察結(jié)果。間接法：步驟：包被已知Ag+待測標(biāo)本（Ab?） -反應(yīng)

29、一段時間后，洗滌-加酶標(biāo)抗抗體（酶標(biāo)羊抗人IgG）-洗滌-加底物-加終止液，觀察結(jié) 果。ELISA試驗的影響因素（一）固相載體：酶標(biāo)板要求：吸附性能好、空白值低、透明 度高，板批間、孔間性能相近。（二）抗原、抗體Ag:需純化Ab：需效價高、親和力強、 純化（三）試驗條件1.包被：一般用pH 9.6 CB（carbonate buffer），0.05M,有利于蛋白質(zhì)吸 附。包被濃度：0.1?100g/ml，—般常用10 g/ml包被時間、溫度：4 °C過夜或37 °C1-3h包 被量：100ul封閉：用0.1?5%牛血清白蛋白緩沖液浸泡0.5小時2?抗原抗體反應(yīng)的條件。 （1）微堿性有利于抗原

30、抗體結(jié)合，故用pH 7.4 PBS（phosphate buffer saline）洗滌（2）去污劑 有利于AgAb形成，洗液中加0.05% Tween-20 （3） Ag、Ab反應(yīng)時間、溫度：一般37°C、 40?50分鐘3.洗滌用PH7.2-7.4PBS,規(guī)一化，每次浸泡1~2分鐘，拋干,共洗滌3~4次4.酶 促反應(yīng)條件溫度37C時間10-20分pH 5.5底物量一致5?排除干擾：多設(shè)對照。 ELISA 試驗應(yīng)設(shè)哪些對照，為什么? 陽性對照 同標(biāo)本一樣 顏色深；陰性對照 同標(biāo)本一 樣 顏色淺 or 無色；酶結(jié)合物對照 加酶步加入 無色；底物對照 加底物步加入 無色；空 白對照 只加終止液

31、 無色。 判斷ELISA試驗結(jié)果的方法。（一）肉眼判定與陽性、陰性對照顏色比較：1?若待檢孔顯 色淺于陰性對照則判定為陰性；2.若待檢孔顯色深于或等于陽性對照孔則判定為陽性；3.若 待檢孔顯色介于陰性對照孔和陽性對照孔之間則判定為弱陽性。（二）酶標(biāo)光度儀檢測A492 值（吸光率）：比色法1.與陽性、陰性對照測定值比較2.P/N比值：大于2.0為陽性，小于 2.0為陰性P: positive （待測吸光度值）N: negative 單克隆抗體概念由一個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的識別單一抗原表位的同源抗體。 雜交瘤技術(shù)制備單抗的原理及簡要步驟 能產(chǎn)生抗體的小鼠B（漿）細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞雜 交能生成分

32、泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。1.制備能產(chǎn)生單抗的雜交瘤細(xì)胞2.克隆化雜交瘤細(xì) 胞3.篩選雜交瘤細(xì)胞 4.擴大培養(yǎng)單克隆雜交瘤細(xì)胞5.收集單抗并鑒定6.純化單抗 HAT培養(yǎng)基的作用（次黃嘌吟、氨基蝶吟、胸腺嘧啶）：氨基蝶吟是抗代謝的藥物，能阻斷 內(nèi)源性合成DNA （合成DNA的主要途徑）。選出雜交瘤細(xì)胞。 人源單克隆抗體概念：單克隆抗體為人IgG。制備目的：用于人。 基因工程抗體、嵌合抗體概念，嵌合抗體優(yōu)點 基因工程抗體：在基因水平上對編碼抗體的 基因進(jìn)行切割、拼接或修飾，甚至人工合成，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)而產(chǎn)生的抗體（單克 隆抗體）。嵌合抗體：用DNA重組技術(shù)將鼠源單抗基因的可變區(qū)（V區(qū)

33、）基因與產(chǎn)生人Ig 的恒定區(qū)（C區(qū)）基因相連接，構(gòu)成嵌合基因，導(dǎo)入受體細(xì)胞（骨髓瘤細(xì)胞），表達(dá)出嵌合 抗體。a.免疫原性低，有利于用于人體b.在人體內(nèi)半衰期較鼠單抗長c.在人體內(nèi)生物學(xué)作用 （如CDC、ADCC）較鼠單抗強d.與人/人雜交瘤比，體外傳代更穩(wěn)定 人體免疫功能包括哪些組成部分一.非特異性免疫應(yīng)答 1.皮膚黏膜的機械阻擋作用及局部分 泌的抑菌、殺菌物質(zhì)2?吞噬細(xì)胞的吞噬作用3.NK（nature killer）細(xì)胞對病毒感染靶細(xì)胞的殺傷 作用4?血液、體液中的抗菌分子：補體、溶菌酶。二特異性免疫應(yīng)答細(xì)胞免疫：由T LC主 導(dǎo)完成，其效應(yīng)物質(zhì)是致敏TLc（CTL/Th1）體液免疫：由

34、BLC主導(dǎo)完成，其效應(yīng)物質(zhì)是Ab 實驗室中檢測人細(xì)胞免疫和體液免疫最常用哪些試驗，這些試驗的原理如何？正常值應(yīng)為 多少？ 一.T細(xì)胞的計數(shù)（T細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測）（一）特異性抗原的檢測T細(xì)胞表面有 一些特異的CD抗原，根據(jù)這些不同的CD抗原可鑒定不同的T細(xì)胞群體1.免疫熒光法：用 熒光素標(biāo)記的單抗作為試劑染色淋巴細(xì)胞，計算出染上熒光的淋巴細(xì)胞百分率2.免疫細(xì)胞化 學(xué)法。（二）T細(xì)胞特異性受體（E受體）的檢測E花環(huán)形成試驗（Erythrocyte Rosette forming test）原理：T淋巴細(xì)胞表面含有綿羊紅細(xì)胞（SRBC）受體（CD2），當(dāng)T淋巴細(xì)胞與綿羊紅細(xì) 胞相遇時，T細(xì)胞通過該

35、受體吸附綿羊紅細(xì)胞而形成花環(huán)。Et正常值60%?80%Ea正常值 20%?30%二.T細(xì)胞功能的檢測（一）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗1.原理淋巴細(xì)胞在某些物質(zhì)刺激下， 細(xì)胞增殖、分化（如細(xì)胞變大、胞漿增多、出現(xiàn)空泡）DNA合成增加（核染色質(zhì)疏松，核 仁出現(xiàn)），轉(zhuǎn)化成為淋巴母細(xì)胞。（1）形態(tài)學(xué)檢測法正常值60%?80%。（2）同位素?fù)饺敕? （3H-TdR摻入法）原理:T細(xì)胞受PHA刺激后，細(xì)胞進(jìn)入增殖周期發(fā)生有絲分裂合成DNA。 試驗中當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入S期時，在培養(yǎng)液中加入3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR），細(xì)胞攝入，合成 DNA,據(jù)摻入細(xì)胞內(nèi)的同位素量，可推測細(xì)胞增殖活躍程度，從而判斷淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的程度。

36、 （3） MTT 比色法（二）相關(guān)的細(xì)胞因子的檢測（三）淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性檢測1.形態(tài)學(xué)方 法2?同位素法：常用51Cr釋放試驗原理：用51Cr標(biāo)記靶細(xì)胞（一般為腫瘤細(xì)胞），將它與 待測淋巴細(xì)胞（效應(yīng)CTL細(xì)胞）一起培養(yǎng)，效應(yīng)細(xì)胞破壞靶細(xì)胞，51Cr釋放出來，測定 其51Cr數(shù)量，便可推知效應(yīng)細(xì)胞的殺傷能力。特異溶解百分率大于50%為陽性。二、細(xì)胞 免疫功能體內(nèi)檢測法（一）W型超敏反應(yīng)皮試原理：W型超敏反應(yīng)的本質(zhì)是細(xì)胞免疫，所 以W型超敏反應(yīng)如為陽性，可反映細(xì)胞免疫功能好。陽性（直徑＞0.5cm）：曾感染過結(jié)核菌， 細(xì)胞免疫功能好。陰性（直徑＜ 0.5cm） ：細(xì)胞免疫功能差或從未感染過結(jié)核菌

37、。強陽性（直 徑〉2.5cm）:表明現(xiàn)處于結(jié)核的活動期。三.B細(xì)胞數(shù)量的檢測（一）B細(xì)胞表面識別抗原受 體（BCR） （SmIg, Surface membrane Ig）的檢測。正常值：15%?25%。（二） B細(xì)胞表面抗原 的檢測。B細(xì)胞表面特有的CD抗原有：CD19、CD20，用抗CD20的單抗（免疫熒光法、 酶免疫組化法）檢測外周血淋巴細(xì)胞，陽性細(xì)胞為B淋巴細(xì)胞，約占總淋巴細(xì)胞的10%?15%。 四.B細(xì)胞功能的檢測（一）血清中Ig的測定人的體液免疫功能正常（B細(xì)胞功能正常）， 應(yīng)反映在血清中有正常量的免疫球蛋白（二）血型抗體效價的測定反映體內(nèi)IgM水平正常6 月嬰兒抗A >1 : 8

38、,或抗B > 1 : 4; 1歲后抗A>1:16，或抗B > 1 : 8如3歲以上抗A或 抗B效價仍< 1 ： 4,表示IgM缺乏，提示先天性體液免疫功能缺陷。（三）抗原刺激機體 后抗體應(yīng)答反應(yīng)（體內(nèi)試驗）將抗原注射到體內(nèi)，一段時間后檢測相應(yīng)抗體效價，如抗體效 價低，說明機體體液免疫功能差如用三聯(lián)傷寒菌苗0.25ml注射，每周1次，連續(xù)3次，抗 H應(yīng)為1 ： 160,若低，表示體液免疫應(yīng)答功能差。 補體的定義、組成及性質(zhì)complement:補體是存在于人和動物血清中的一組具有酶活性的 球蛋白，一般情況下處于未激活狀態(tài)。補體的特性：穩(wěn)定性差，各種理化因素都可使之失活： 如酸、堿、紫外線照射、

39、劇烈震蕩等。組成：1?補體的固有成分：C1-C9,其中C1又包括C1q、 C1r、C1s,共9種成分11種蛋白分子。其中C9的分子量最小、C3的含量最高；2?補體的調(diào) 節(jié)蛋白：如C4調(diào)節(jié)蛋白、C1抑制物、S蛋白等；3.補體受體；如C1qR、C3aR等； CH50 實驗的原理、正常值及意義 原理：組成和功能完整的補體系統(tǒng)能使致敏羊紅細(xì)胞發(fā) 生溶血；羊紅細(xì)胞的溶血程度與補體的活性成正比；CH50 （U/ml）=1/血清用量X稀釋倍 數(shù)?？傃a體活性參考范圍：50 —100U/m 1。補體檢測的臨床意義：1.補體量f :多見于急性炎 癥感染、組織損傷、癌腫；2?補體量；：見于補體消耗f：體內(nèi)有Ag、

40、Ab反應(yīng)，如SLE、 RA等；補體合成（：肝臟疾患；補體先天性缺之：具有遺傳性和家族史 補體結(jié)合實驗的原理、結(jié)果判斷及評價 原理：補體可與任何一組AgAb復(fù)合物結(jié)合；一旦 與某一復(fù)合物結(jié)合后，便不再與另一復(fù)合物結(jié)合。結(jié)果判斷：不溶血為陽性，即待測物中有 相應(yīng)的Ab或Ag；溶血為陰性，即待測物中無相應(yīng)的Ab或Ag。優(yōu)點：該試驗既可測Ag、 又可測Ab； Ag既可以是顆粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是塊狀物，因此檢測Ag 的范圍廣；可以用于病毒、立克次氏體、細(xì)菌等多種病原體的檢測（實際上是測Ag）;比較 敏感（0.05ug/m1）、特異；結(jié)果判斷明顯：通過有無溶血來觀察，無需特殊儀器檢測。

41、缺點: 參與反應(yīng)的物質(zhì)多，影響因素也多；（反應(yīng)體系中有Ag、Ab、C、羊紅細(xì)胞、溶血素）；在 正式試驗前需要找出幾種物質(zhì)間最恰當(dāng)?shù)谋壤?，比較復(fù)雜。 免疫復(fù)合物的含義及免疫復(fù)合物病的致病原因含義：immune complex,它主要指AgAb復(fù)合 物及AgAbC復(fù)合物兩種。中等大小的IC沉積在體內(nèi)，通過激活補體、激活血小板而致病。 免疫復(fù)合物檢測使用的標(biāo)準(zhǔn)品、出現(xiàn)的問題及WHO推薦的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)品是AHG—熱 聚合人IgG （不是IC）O IC檢測的有關(guān)技術(shù)問題：到目前為止，所有檢測IC的試驗，還沒 有另人滿意的標(biāo)準(zhǔn)化措施;在體外制備的IC還很不穩(wěn)定，因此用人工合成的復(fù)合物作為定量 標(biāo)準(zhǔn)不適宜

42、。WHO推薦的檢測方法：C1q結(jié)合試驗、膠固素試驗、類風(fēng)濕因子（RF）試驗、 Raji 細(xì)胞試驗 AID的基本特征及常見的AID有哪些？誘因可有可無。有一定的遺傳傾向。女性患者多見， 發(fā)病率隨年齡增長而增加。患者血清中可檢出高效價的自身抗體和（或）自身致敏T淋巴 細(xì)胞。一些自身抗體在自身免疫病中呈現(xiàn)交叉重疊現(xiàn)象:即在同一種自身免疫病患者體內(nèi)可 檢測到多種自身抗體，而不同的自身免疫病也可存在同一種自身抗體。IgG、IgA、IgM升 高，尤其 IgG 升高明顯。病損局部可發(fā)現(xiàn)有淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤及免疫 復(fù)合物沉積。免疫抑制劑治療可取得一定療效。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic l

43、upus erythematosus, SLE）III型；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis, RA）III型；自身免疫性溶血性貧血 （autoimmune hemolytic anemia, AIHA）II 型； 重癥肌無力（myasthenia gravis, MG）II 型。 ANA的定義及ANAs的組成 抗核抗體（antinuclear antibody, ANA）原指抗細(xì)胞核抗原成分 的自身抗體的總稱。廣義地指抗細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總和。ANA所針對的靶 抗原由細(xì)胞核擴展到整個細(xì)胞，包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架及細(xì)胞周期等。 抗核抗體 譜（anti

44、nuclear antibodies, ANAs）抗 DNA 抗體：抗 dsDNA、抗 ssDNA 抗體抗組蛋白抗體 （AHA）：抗Hl、H2A、H2B、H3、H4等抗ENA抗體：抗Sm、抗核糖核蛋白（RNP）、 抗SS-A、抗SS-B等抗非組蛋白抗體：抗Scl-70、抗Jo-1、抗Ku、抗增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、 抗PL-7、抗PL-12、抗著絲點抗體等抗核仁抗體：抗PM-Scl、抗NOR-90、抗U3nRNA抗 細(xì)胞其它成分抗體：抗高爾基體、抗中心體、抗線粒體、抗肌動蛋白、抗核層蛋白等 各種AID檢測時的代表性自身抗體有哪些？抗dsDNA抗體對SLE有較高特異性，70-90% 活動性S

45、LE患者該抗體陽性，是SLE的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。AHA在藥物性狼瘡患者中陽性率達(dá) 90-100%，而SLE病人陽性率僅有20-35%，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人為36%?？筍m抗體：抗 Sm抗體是SLE的特異性標(biāo)志，疾病特異度達(dá)99%，為提高SLE的診斷準(zhǔn)確率，可將抗Sm 抗體和抗 dsDNA 抗體同時檢測。抗 SS-A、 SS-B 抗體 ：抗 SS-A 和抗 SS-B 抗體并存是干 燥綜合癥的特異標(biāo)志。核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP），又稱u1RNP。抗u1RNP抗 體在混合性結(jié)締組織?。∕CTD）陽性率為95%以上，是MCTD的標(biāo)志抗體?？筍cl-70是進(jìn) 行性全身性硬化癥（P

46、SS）的標(biāo)志抗體，陽性率為50-64%?？笿o-1抗體對肌炎和間質(zhì)性肺 纖維化有高度特異性，抗體的效價與疾病的活動性相關(guān)。原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）時 AMA陽性率可達(dá)90%以上。AMA是PBC的血清學(xué)指標(biāo)。 在原發(fā)性免疫缺陷病中哪一種發(fā)生最多？ 原發(fā)性體液免疫缺陷?。ㄕ荚l(fā)性 ID 的 50~70%），如嬰兒性聯(lián)丙球蛋白缺乏癥。 懷疑體液免疫缺陷應(yīng)作哪些過篩試驗和確診試驗？ 1.過篩試驗（1）血清蛋白電泳 丙球 定量（2）血型抗體效價測定（反映 IgM 水平）正常（3）血清抗鏈球菌溶血素抗體的測定 （抗O）的測定一反應(yīng)IgG水平（4）骨髓檢查2.確診試驗（1）血清免疫球蛋白（G、M、

47、 A）測定（2）抗原刺激后抗體應(yīng)答反應(yīng)3） B細(xì)胞計數(shù)（4） T細(xì)胞亞群測定 懷疑細(xì)胞免疫缺陷應(yīng)作哪些過篩試驗和確診試驗？ 過篩試驗（1）淋巴細(xì)胞絕對值測定（2） 遲發(fā)型超敏反應(yīng)皮試（3）胸腺X線檢查。確診試驗（1）淋巴結(jié)活檢（2） T淋巴細(xì)胞計數(shù) （ 3） T 細(xì)胞功能試驗 I、W型超敏反應(yīng)皮試的原理1當(dāng)變應(yīng)原再次進(jìn)入致敏者皮膚，與吸附在肥大細(xì)胞或和嗜 堿性粒細(xì)胞上的特異IgE高變區(qū)結(jié)合，導(dǎo)致肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒，釋放生物活性 介質(zhì)：如組織胺、白三烯、激肽等。在20－30分鐘內(nèi)局部皮膚出現(xiàn)紅暈、紅斑、風(fēng)團以及 搔癢感，數(shù)小時后消失。出現(xiàn)此現(xiàn)象者判斷為皮試陽性，即對該變應(yīng)原過敏;未

48、出現(xiàn)紅暈、 紅斑、風(fēng)團者為陰性，即對該變應(yīng)原不過敏。 4用皮內(nèi)注射、皮膚斑貼等方法使變應(yīng)原進(jìn)入 已致敏機體，體內(nèi)致敏的 T 細(xì)胞 CD4+Th1 再次遇到相應(yīng)抗原后，釋放出大量細(xì)胞因子，如 IL-2、IFN-Y、TNF、IL-3、GM-CSF, （1）活化巨噬細(xì)胞及NK,增強吞噬細(xì)胞作用；（2） 吸引WBC到達(dá)Ag所在部位，促進(jìn)吞噬；（3）促進(jìn)T細(xì)胞增生和分泌細(xì)胞因子，加重局部 炎癥反應(yīng)，最后造成局部以單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤為主的炎癥反應(yīng)。 比較I、W型超敏反應(yīng)皮試（抗原、時間、結(jié)果、意義）抗原：體液免疫細(xì)胞免疫；時間： 15-25min 48-72h ；結(jié)果：風(fēng)團和紅暈反應(yīng)，紅腫、硬結(jié)等局

49、部炎癥反應(yīng)；意義：尋找變應(yīng)原 、預(yù)防藥物或疫苗過敏，尋找變應(yīng)原、評價機體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)、用于傳染病的診斷。 掌握HLA-I、II類分子的結(jié)構(gòu)、分布及意義。HLA-I類分子由一條a鏈和一條B鏈組成， a鏈的N端胞外區(qū)分為a1、a2、a3三個結(jié)構(gòu)區(qū)，其中a 1、a 2構(gòu)成抗原結(jié)合槽，與處 理后的抗原肽結(jié)合形成MHC-抗原肽復(fù)合體oHLA-I類分子分布在所有有核細(xì)胞膜上。功能： 識別和提呈內(nèi)源性抗原肽；對CTL的識別起限制性作用。HLA-II類分子由一條a鏈和一條 B鏈組成，兩條肽鏈的胞外區(qū)分別有a1、a2和B1、B2兩個功能區(qū)，由a 1與B 1共同形 成抗原結(jié)合槽。分布：抗原提呈細(xì)胞(如B細(xì)胞、

50、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞)及活化的T細(xì)胞等。 功能：識別和提呈外源性抗原肽；對Th的識別起限制性作用。 移植排斥反應(yīng)的類型及產(chǎn)生的原因和避免方法。原因：供、受體間HLA I類、II類抗原 的差異，差異越大排斥越強。 DR — 最重要。 1.超急性排斥反應(yīng)：預(yù)存抗體產(chǎn)生的原因： 多次輸血，血液透析，多次妊娠，再次移植。個別原因不明，可能與曾感染某些病毒細(xì)菌有 關(guān)，產(chǎn)生同種異型抗體。避免方法：移植前對受體血清與供體細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒試驗( CDC 試驗，complement dependent cytotoxicity),檢測受者血清中是否預(yù)存有抗供者細(xì)胞的抗體。 2.加速性排斥反應(yīng)產(chǎn)生機理：同超級性，

51、但抗體效價及親和性要低些。極少數(shù)也可能由致敏 淋巴細(xì)胞引起。避免方法：CDC試驗3?急性排斥反應(yīng)機理：供、受者HLAAg型別不完全 一致造成的。早期以細(xì)胞免疫為主、晚期體液免疫為主避免：盡可能選HLA Ag型別一致的 供體4?慢性排斥反應(yīng)機理：供、受者HLA Ag型別不完全一致造成的。早期以細(xì)胞免疫為主、 晚期體液免疫為主避免：盡可能選HLA Ag型別一致的供體 移植物抗宿主反應(yīng)的概念及產(chǎn)生原因。 移植物中免疫活性細(xì)胞攻擊宿主。(1)宿主免疫活 性細(xì)胞處于反應(yīng)無能狀態(tài)(2)移植物中含有大量的免疫活性細(xì)胞 移植前選擇供體應(yīng)做哪些檢測？(一交叉配合試驗1?測受體血清中有無抗供體細(xì)胞的抗體 (1)

52、微量細(xì)胞毒試驗(complement dependent cytotoxicity,CDC試驗)2.混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(二 HLA型別檢測1.血清學(xué)方法(Serologically defined antigen, SD抗原)(1)檢測位點：A、B、 C、DR、DQ (2)檢測細(xì)胞：檢測A、B、C位點一用總淋巴細(xì)胞檢測DR、DQ位點一用 B淋巴細(xì)胞血清學(xué)與細(xì)胞學(xué)鑒定HLA抗原的基因位點是哪些，檢測時應(yīng)采用什么細(xì)胞？ 細(xì)胞分型法(lymphocyte defined antigen, LD抗原)檢測位點：DP待測細(xì)胞：BLc方法：淋 巴細(xì)胞混合培養(yǎng)試驗(mixed lymphocyte cultu

53、re, MLC)分雙向與單向混合培養(yǎng)兩種方法 舉例解釋 CDC 試驗。 移植前選擇供體的檢測。微量細(xì)胞毒試驗( complement dependent cytotoxicity,方法：受體血清+供體Lc+補體 觀察細(xì)胞死亡情況，大于10%應(yīng)放棄此供體 移植后監(jiān)測排斥反應(yīng)應(yīng)做哪些檢測？ 1.3H-TdR四小時摻入法(2)外周血T細(xì)胞計數(shù)(3) 補體 C3 測定 免疫學(xué)檢測質(zhì)控的內(nèi)在品質(zhì)和外在因素各有哪些？如何進(jìn)行衡量？ 內(nèi)在品質(zhì)：精密度、準(zhǔn) 確度、敏感性、特異性等。外在因素：試劑、器材、參考品、操作人員等。精密度(precision)： 用某種方法對同一標(biāo)本反復(fù)測定，所得結(jié)果之間的差異大小，即彼此之間的符合程度。用標(biāo) 準(zhǔn)差(SD)和變異系數(shù)(CV)來衡量其大小。包括批內(nèi)精密度和批間精密度。準(zhǔn)確度 (accuracy)：測定值和真實值之間的符合程度。敏感性(sensitivity)：測定方法檢測極低濃 度物質(zhì)的能力；標(biāo)本的真實狀態(tài)為陽性，用該方法檢測能得到陽性結(jié)果。衡量方法：①將參 考品作系列稀釋，觀察該方法所能測定的最低含量；②檢測臨床已確診的病例。特異性 (specificity)：標(biāo)本真實狀態(tài)為陰性，用該方法測定能得到陰性結(jié)果；無交叉反應(yīng)。衡量方 法：①檢測正常人群或已知的無關(guān)病例；②已知的陽性標(biāo)本，加入免疫阻斷劑后是否得到陰 性結(jié)果。