腸道病毒核酸檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2018年）

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1、附件4 腸道病毒核酸檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對腸道病毒核酸檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。 本指導(dǎo)原則是針對腸道病毒核酸檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。 本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

2、 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當(dāng)前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。 一、范圍 （一）腸道病毒簡介 腸道病毒屬于小RNA病毒科腸道病毒屬，能引起人類致病的腸道病毒有多種，包括人腸道病毒A、B、C、D組，有100多個血清型。人類腸道病毒主要包括：脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇病毒A組（Coxsackievirus A，CA）、柯薩奇病毒B組（Coxsackievirus B，CB）、人腸道致細胞病變孤兒病毒（簡稱?？刹《荆‥chovirus ECHO）、新腸道病毒等。新腸道病毒為1969年后陸續(xù)分離到的，例如新型腸道病毒7

3、1型（EV71）等。近年來，鼻病毒（Rhinovirus）被劃入腸道病毒屬，鼻病毒包括A、B、C組，已經(jīng)先后分離得到140多個血清型。 腸道病毒為球形，直徑28～30nm，核衣殼二十面體立體對稱，無包膜。病毒衣殼由60個相同的殼粒組成，排列為12個五聚體，每個殼粒由VP1、VP2、VP3和VP4四種蛋白組成。 腸道病毒基因組為單股正鏈RNA，全長約為7.2～8.4kb，基因組分為三部分，兩端為保守的非編碼區(qū)，在腸道病毒中同源性非常顯著，其中5’端非編碼區(qū)常作為腸道病毒通用檢測試劑檢測的靶基因。中間為連續(xù)開放讀碼框，包含結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)和非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)，結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)依次編碼VP4、VP2、

4、VP3和VP1共４個衣殼蛋白。衣殼蛋白不僅含有抗原決定位點，而且還有決定病毒組織嗜性的受體識別位點，介導(dǎo)病毒與細胞的吸附和進入。非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)主要負責(zé)編碼與病毒基因組復(fù)制以及病毒顆粒包裝等有關(guān)的蛋白及酶，它們在RNA復(fù)制、細胞器修飾，細胞裂解及形態(tài)形成中發(fā)揮各自不同的功能。 （二）腸道病毒致病性 腸道病毒在腸道中增殖，但通常不引起腸道疾病。90%以上腸道病毒感染為隱性感染，或僅出現(xiàn)輕微的上呼吸道感染或流感樣癥狀。不同腸道病毒可以引起相同的臨床癥狀，同一種病毒可引起幾種不同的臨床疾病。 腸道病毒的傳染源為患者和無癥狀的病毒攜帶者。傳播途徑主要是糞-口途徑，也可通過呼吸道傳播，夏秋季是一年

5、之中的主要流行期。腸道病毒以上呼吸道、咽喉和腸道為侵入門戶，先在局部黏膜和咽、扁桃體等淋巴組織和腸道集合淋巴結(jié)中初步增殖，然后釋放入血，形成第一次病毒血癥。擴散至帶有受體的靶組織，再次增殖后，引起第二次病毒血癥和臨床癥狀。脊髓灰質(zhì)炎病毒識別的受體為免疫球蛋白超家族的細胞黏附分子，只有很少的組織表達這種受體，如脊髓前角質(zhì)細胞、被根神經(jīng)節(jié)細胞、運動神經(jīng)元、骨骼肌細胞和淋巴細胞等，柯薩奇病毒和埃可病毒識別的受體在組織和細胞中分布廣泛，包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心、肺、胰、黏膜、皮膚和其他系統(tǒng)等，因而引起的疾病譜復(fù)雜，大多數(shù)腸道病毒為殺細胞病毒、直接對靶細胞產(chǎn)生裂解性感染。各年齡段人群均可感染腸道病毒。 腸

6、道病毒所致的主要疾病有： 1.手足口?。河赡c道病毒感染而引起，以發(fā)熱，咽喉痛，全身不適，手、足、口腔等部位皮疹或皰疹為主要特征的常見傳染病，大多數(shù)手足口病患者癥狀輕微，并且具有自限性，但有相當(dāng)一部分患者有致死性心肺功能疾病和神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，個別重癥患者病情進展迅速，甚至可導(dǎo)致死亡。我國手足口病疫情尤為嚴峻，其已成為嚴重影響我國居民生命和健康的公共衛(wèi)生問題。 手足口病致病病原體傳染源為患者或隱性感染者，主要的傳播途徑為糞-口傳播，也可經(jīng)接觸患者的皰疹液傳播，接觸病人和攜帶者的糞便、唾液和皰疹液污染的日常生活用品均可傳播此病原體，近年來的報道顯示，該病原體也可垂直傳播，導(dǎo)致新生兒重癥感染。人對

7、腸道病毒普遍易感，不同年齡組均可感染發(fā)病，以5歲以下兒童為主，尤以3歲以下兒童發(fā)病率最高，該病流行無明顯的地區(qū)性，全年均可發(fā)生，一般5—7月為發(fā)病高峰。該病的潛伏期一般為2—10天，平均潛伏期為3—5天，感染者發(fā)病前的數(shù)天即可從其咽拭子樣本和糞便樣本中檢出病毒，病程為7天左右，咽部排毒可持續(xù)在發(fā)病后1—2周，而糞便排毒可持續(xù)至發(fā)病后3—5周。 引起手足口病的腸道病毒包括柯薩奇病毒A組的2、4、5、6、7、9、10、16型等，B組的1、2、3、4、5型等，腸道病毒71型及?？刹《镜?，其中以EV71和CA16型較為常見。 2.無菌性腦膜炎：腸道病毒感染引起的一種疾病，常表現(xiàn)為短暫發(fā)熱、頭痛等，

8、偶爾有肌肉酸痛，或伴有皮疹，重者出現(xiàn)頸項強直、嗜睡、昏迷、意識障礙、腦膜刺激征等癥狀。目前發(fā)現(xiàn)腸道病毒中有60多個血清型能引起無菌性腦膜炎，包括脊髓灰質(zhì)炎病毒所有型別、柯薩奇病毒A組中的大多數(shù)型別、柯薩奇病毒B組的1—6型、?？刹《敬蠖鄶?shù)型別和腸道病毒71型等。 3.脊髓灰質(zhì)炎：是由脊髓灰質(zhì)炎病毒感染而引起的疾病，其中85%由Ⅰ型脊髓灰質(zhì)炎病毒引起，在我國曾有由Ⅱ、Ⅲ型病毒感染而發(fā)病的病例。病毒侵犯脊髓前角運動神經(jīng)細胞，導(dǎo)致弛緩性肢體麻痹，多見于兒童，故亦稱小兒麻痹癥。 4.皰疹性咽峽炎：主要由柯薩奇病毒A組某些血清型引起，典型的癥狀是在軟腭、懸雍垂周圍出現(xiàn)水泡性潰瘍損傷。 5.流行性胸

9、痛：常由柯薩奇病毒B組引起，癥狀為突發(fā)性發(fā)熱和單側(cè)胸痛。 6.心肌炎和心包炎：主要由柯薩奇病毒B組引起。在嬰兒室可引起暴發(fā)性流行，死亡率高。散發(fā)流行于成人和兒童。 7.眼?。河煽滤_奇病毒A組24v型引起急性結(jié)膜炎和EV-D-70型引起的急性出血性結(jié)膜炎。 此外，腸道病毒感染可能還與病毒感染后疲勞綜合征、糖尿病相關(guān)。 （三）本指導(dǎo)原則適用范圍 1.本指導(dǎo)原則適用于利用熒光探針聚合酶鏈式反應(yīng)（Real-time PCR）或其他類分子生物學(xué)方法，以特定的腸道病毒基因序列為檢測目標，對來源于人體樣本中的腸道病毒核酸進行體外定性檢測，臨床用于輔助診斷手足口病等腸道病毒感染相關(guān)性疾病。涉及其他臨

10、床用途的腸道病毒核酸檢測試劑可參考本指導(dǎo)原則。手足口病致病病原體中未包含鼻病毒，因此，鼻病毒不在本指南的討論范圍內(nèi)。 2.臨床用于檢測手足口病致病病原體的檢測試劑，適用樣本類型應(yīng)為鼻咽拭子、咽拭子、糞便/肛拭子、皰疹液、腦脊液（僅限出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的病例）、血液等。 3.本指導(dǎo)原則適用于腸道病毒通用核酸檢測試劑、單一病毒種檢測試劑及單一病毒血清型檢測試劑。通用檢測試劑所檢病毒型別應(yīng)至少包括柯薩奇病毒A組的2、4、5、6、7、9、10、12、16型等，B組的1、2、3、4、5型等，腸道病毒71型及?？刹《镜?；針對柯薩奇病毒核酸檢測試劑所檢病毒型別應(yīng)至少包括上述A組與B組中的血清型；針對柯薩奇

11、A組或B組核酸檢測試劑所檢病毒型別應(yīng)至少包括上述該組所列血清型。針對?？刹《竞怂釞z測試劑所檢病毒型別應(yīng)至少涵蓋埃可病毒3、6、11、14、16、19、25、30等血清型。 二、注冊申報資料要求 （一）綜述資料 綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及其他等內(nèi)容，其中，與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥應(yīng)重點描述申報產(chǎn)品所檢測的腸道病毒型別與臨床適應(yīng)癥的相關(guān)性及相關(guān)腸道病毒在我國的流行特征；產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報產(chǎn)品所有可檢出的腸道病毒型別、尚未驗證的腸道病毒型別；同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準上市的情況，應(yīng)著重從所檢病毒型別、不同型別檢測的最低檢測限及

12、不同型別間的交叉反應(yīng)等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料的撰寫應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。 （二）主要原材料研究資料 此類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、DNA聚合酶、dNTP、逆轉(zhuǎn)錄酶、尿嘧啶DNA糖基化酶（如適用）、核酸分離/純化組分（如有）、試劑盒質(zhì)控品及企業(yè)參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備及質(zhì)量標準等的研究資料、質(zhì)控品的確認試驗資料；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)提供企業(yè)參考品的原材

13、料選擇、來源、質(zhì)量指標、參考品的制備及陰陽性的確認過程等。 1.引物和探針：包括申報產(chǎn)品檢測靶序列的引物和探針以及內(nèi)對照的引物和探針。應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應(yīng)情況。針對檢測靶序列的引物和探針，建議設(shè)計兩套或多套引物、探針以供篩選，針對所有預(yù)期適用的腸道病毒型別進行檢出準確性和特異性（如交叉反應(yīng)）的評價，可采用擴增靶序列與所有型別腸道病毒基因組比對研究的方法，最終確認最佳組合，并提交篩選的研究數(shù)據(jù)。引物、探針的質(zhì)量標準應(yīng)至少包括序列準確性、純度檢查、濃度檢查及功能性實驗等。 2.酶：需要的酶主要包括逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶，其質(zhì)量標準如下：

14、 2.1逆轉(zhuǎn)錄酶應(yīng)包括核酸逆轉(zhuǎn)錄活性、無核酸內(nèi)切酶活性等。 2.2 DNA聚合酶應(yīng)包括DNA聚合酶活性、無核酸內(nèi)切酶活性、熱啟動能力、熱穩(wěn)定性等。 2.3如申報產(chǎn)品中包含尿嘧啶DNA糖基化酶，應(yīng)對其酶活性及熱穩(wěn)定性等質(zhì)量控制標準進行規(guī)定。 3.dNTP：質(zhì)量標準應(yīng)至少包括純度檢查及功能性實驗等。 4.核酸分離/純化組分（如有）的原理介紹、主要組成、主要原材料的質(zhì)量控制標準及相關(guān)驗證資料。 5.試劑盒質(zhì)控品 試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒質(zhì)控品來實現(xiàn)，針對陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品申請人應(yīng)明確質(zhì)控品的來源、質(zhì)量標準、質(zhì)控品陰陽性的確認方法及相關(guān)驗證資料。申報產(chǎn)品的質(zhì)控體系應(yīng)考慮以下幾

15、個方面： 5.1陽性質(zhì)控品中應(yīng)含有天然的或人工合成的包含試劑盒所檢測靶序列的RNA，至少應(yīng)包含臨床較常見的血清型。質(zhì)控品應(yīng)參與樣本處理和檢測的全過程，如核酸的平行提取等步驟。企業(yè)應(yīng)對質(zhì)控品的檢測結(jié)果（如Ct值）做出明確的范圍要求。 5.2陰性質(zhì)控品應(yīng)不含試劑盒所檢測靶序列的RNA，質(zhì)控品應(yīng)參與樣本處理和檢測的全過程，如核酸的平行提取等步驟，以對可能存在的交叉污染產(chǎn)生的假陽性結(jié)果進行質(zhì)量控制。 5.3內(nèi)對照（內(nèi)標）可以對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進行質(zhì)量控制，申請人應(yīng)對內(nèi)對照（內(nèi)標）的引物、探針設(shè)計和模板濃度做精確驗證，既要保證內(nèi)標熒光通道呈明顯的陽性曲線又要盡量降低對靶基因檢測造成的抑制。

16、對內(nèi)對照的檢測結(jié)果（如Ct值）亦應(yīng)做出明確的范圍要求。 6.企業(yè)參考品：應(yīng)詳細說明有關(guān)企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽性確認等試驗。 企業(yè)參考品的核酸性質(zhì)應(yīng)與產(chǎn)品預(yù)期檢測的靶物質(zhì)一致。鑒于腸道病毒為RNA病毒，企業(yè)參考品可采用滅活病毒、含有腸道病毒基因組的裝甲病毒（或假病毒）、人工克隆或合成的腸道病毒基因組RNA。具體要求如下： 6.1陽性參考品和陰性參考品 陽性參考品應(yīng)包含本指南范圍中規(guī)定申報產(chǎn)品至少應(yīng)檢出的腸道病毒血清型，例如，腸道病毒通用型檢測試劑陽性參考品應(yīng)至少包含柯薩奇病毒A組的2、4、5、6、7、9、10、12、16型等，B組的1、2、3、4、5型等，腸道病毒71型及?？刹?/p>

17、毒等，其他單一病毒種及單一病毒血清型檢測試劑陽性參考品應(yīng)包含該類產(chǎn)品至少應(yīng)檢出的血清型。陰性參考品應(yīng)考慮檢測特異性的評價，應(yīng)納入不在試劑盒檢測范圍內(nèi)的其他腸道病毒血清型樣品（如有）和其他病原體樣品。 6.2檢測限參考品 申請人應(yīng)明確檢測限參考品中病毒核酸濃度的確定方法，明確檢測限參考品中病毒核酸濃度的確定依據(jù)，檢測限參考品中腸道病毒核酸濃度應(yīng)為申報產(chǎn)品檢測限濃度或略高于檢測限濃度，檢測限參考品應(yīng)包含申報產(chǎn)品至少應(yīng)檢出的腸道病毒血清型。 6.3精密度參考品 可不包含所有涉及的腸道病毒血清型，但應(yīng)選擇多個臨床較常見的型別，針對所選型別應(yīng)分別至少設(shè)置一個弱陽性水平。 若主要原材料為企業(yè)自己

18、生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定，并提交生產(chǎn)工藝驗證報告；如主要原材料購自其他供應(yīng)商，則需針對供應(yīng)商的選擇提供評價數(shù)據(jù)，并提供供應(yīng)商出具的質(zhì)量標準、出廠檢定報告以及申請人對該原材料進行的質(zhì)量檢驗資料。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料 1.介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，可以圖表方式表示，并說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 2.反應(yīng)原理介紹。 3.詳述樣本采集、樣本處理方式的選擇和設(shè)置，提供相關(guān)的研究資料。 4.確定最佳反應(yīng)體系的研究資料，包括樣本用量、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時間、循環(huán)數(shù)等。 5.不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交

19、驗證資料。 6.如申報產(chǎn)品包含核酸分離/純化試劑，應(yīng)提交對核酸分離/純化過程進行工藝優(yōu)化的研究資料。 （四）分析性能評估資料 申請人應(yīng)提交產(chǎn)品研制階段對試劑盒進行的所有性能評價的研究資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體研究目的、試驗方法、可接受標準、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細資料。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。 針對不同的樣本類型，申請人應(yīng)分別完成性能評估，包括陰陽性符合率、最低檢測限、精密度、分析特異性等。 分析性能評價的試驗方法可以參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評估的指導(dǎo)原則進行。對于此類產(chǎn)品，性

20、能評估中所用樣品（除非特別說明）可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。各項性能評價應(yīng)符合以下要求。 1.核酸分離/純化性能 在進行靶核酸檢測前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂岱蛛x/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的核酸外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸分離/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)結(jié)合檢測試劑的特性，對配合使用的核酸分離/純化試劑的提取效率、提取核酸純度等做充分的驗證，提供詳細的驗證資料。 2.申請人應(yīng)明確申報產(chǎn)品所能檢出所有腸道病毒血清型及不能檢出的血清型。建議申請人采用申報產(chǎn)品對目前已知所有腸道病毒血清型樣本進行檢測，以驗證申報產(chǎn)品所檢血清型范圍，用于驗證的樣本可

21、以為臨床收集樣本、病毒基因組或人工構(gòu)建假病毒。 3.陽性/陰性參考品符合率 陽性參考品的檢測旨在驗證試劑盒檢測范圍內(nèi)的各腸道病毒血清型均可以在適當(dāng)?shù)臐舛缺粰z測到，陽性參考品檢測結(jié)果應(yīng)為陽性。陰性參考品旨在評價試劑特異性，陰性參考品檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。 4.最低檢測限 申報產(chǎn)品最低檢測限的性能評估資料應(yīng)包含最低檢測限的確定及驗證過程。 4.1應(yīng)針對申報產(chǎn)品所能檢出的CA16、CA6、EV71等常見腸道病毒血清型分別進行確定，建議采用培養(yǎng)后病毒原液進行梯度稀釋，配制系列稀釋的樣品進行最低檢測限的評價，系列稀釋度應(yīng)能夠覆蓋大部分檢出概率區(qū)間（0～100%），可通過概率計算或其他適當(dāng)方法進行測

22、算選取適當(dāng)檢出率水平的濃度作為最低檢測限確定的標準，如95%（n≥20）的陽性檢出率水平。病毒原液濃度測定建議采用空斑試驗，濃度水平采用空斑形成單位（PFU）為計量單位。 4.2應(yīng)選擇申報產(chǎn)品最低檢測限或接近最低檢測限的病毒水平對申報產(chǎn)品最低檢測限進行驗證，驗證最低檢測限的樣本應(yīng)至少包含申報產(chǎn)品所能檢出的CA16、CA6、EV71等常見腸道病毒血清型，應(yīng)至少選擇多個病毒株進行驗證。企業(yè)應(yīng)能夠提供用于最低檢測限驗證的各個病毒株的來源、型別及濃度水平（PFU）確認試驗等信息。 4.3申請人應(yīng)明確申報產(chǎn)品最低可檢出的腸道病毒基因拷貝數(shù)水平，同時提供確定過程及相關(guān)實驗數(shù)據(jù)，本項研究應(yīng)針對不同血清型

23、分別確認，所用樣本血清型應(yīng)包括申報產(chǎn)品最低檢測限參考品設(shè)置的血清型。 4.4申報產(chǎn)品檢測企業(yè)最低檢測限參考品，檢測結(jié)果應(yīng)滿足相應(yīng)要求。 5.分析特異性 5.1交叉反應(yīng) 申請人應(yīng)針對可能出現(xiàn)在檢測樣本中的病原體進行交叉反應(yīng)驗證，用于交叉反應(yīng)驗證的樣品，除腸道病毒外，其他病原體應(yīng)盡量采用滅活病原體培養(yǎng)物或臨床樣本。建議在病毒和細菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進行交叉反應(yīng)的驗證，申請人應(yīng)詳細說明交叉反應(yīng)樣本來源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結(jié)果。病原體種類主要考慮以下幾方面：試劑盒檢測范圍以外的其他腸道病毒血清型、樣本中可能出現(xiàn)的其他病原體。建議對以下病原體進行交叉反應(yīng)驗證：諾如病毒、單純皰疹病毒1/

24、2型、腸道腺病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、輪狀病毒、甲型肝炎病毒、星狀病毒、EB病毒、風(fēng)疹病毒、麻疹病毒、甲型流感病毒、副流感病毒、乙型流感病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒、流行性腮腺炎病毒、戊肝病毒、B族鏈球菌、肺炎克雷伯菌、大腸桿菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、志賀菌、弧菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌、草綠色鏈球菌、奈瑟菌屬、黏液羅氏菌、變形桿菌等。 5.2干擾試驗 應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對可能存在的干擾情況進行驗證。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進行評價，并針對有代表性的腸道病毒血清型，至少在病毒臨界陽性水平進行干擾試驗驗證。干擾物質(zhì)

25、的選取應(yīng)至少包括：血紅蛋白、黃疸（僅限血液樣本）、脂血（僅限血液樣本）、白細胞、粘蛋白、常見病毒治療藥物、抗生素、微生態(tài)制劑、糞便中未消化的食物纖維等。 6.精密度 企業(yè)應(yīng)對申報產(chǎn)品精密度指標，如標準差或變異系數(shù)等的評價標準做出合理要求。因模擬樣本并不能體現(xiàn)臨床樣本可能帶來的所有變異因素，因此精密度評價中所用樣本應(yīng)至少包含精密度參考品及若干臨床樣本，且精密度評價試驗應(yīng)包含核酸分離/純化步驟。針對本類產(chǎn)品的精密度評價主要包括以下要求： 6.1對可能影響檢測精密度的主要變量進行驗證，除檢測試劑（包括核酸分離/純化組分）本身的影響外，還應(yīng)對分析儀、操作者、試驗地點、檢測批次等要素進行相關(guān)的驗證

26、。 6.2設(shè)定合理的精密度評價周期，例如：為期至少20天的檢測，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測，從而對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。 6.3用于精密度評價的臨床樣本均應(yīng)至少包含3個水平：陰性樣品、臨界陽性樣品、（中或強）陽性樣品，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?，臨床樣本精密度評價中的每一次檢測均應(yīng)從核酸提取開始。 （五）陽性判斷值確定資料 對于此類試劑，陽性判斷值即為能夠獲得理想的臨床靈敏度和臨床特異性的臨界值（Cutoff），對于熒光探針PCR方法即為Ct值的確定資料。建議采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進行相關(guān)研究。申請人可選取適當(dāng)

27、的臨床樣本進行試驗以確定陽性判斷值。 （六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。 考慮到病毒RNA極易被降解的特性，企業(yè)也應(yīng)對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括冷藏和冷凍兩種條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)，每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行全性能的分析驗證，

28、從而確認不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。 對于樣本提取后不能立即進行檢測的，應(yīng)明確核酸儲存條件、儲存時間等，同時應(yīng)提供相應(yīng)的核酸穩(wěn)定性研究資料。 試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。 （七）臨床試驗 臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求。 1.研究方法 對于已有同類產(chǎn)品上市的試劑的臨床研究，選擇境內(nèi)已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申

29、報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。另外，申請人還應(yīng)選擇不少于30例核酸檢測陽性的新鮮采集樣本進行考核試劑與腸道病毒感染檢測的“金標準”方法—病毒分離培養(yǎng)鑒定方法或其他證明腸道病毒感染的方法進行比較研究。如醫(yī)院無病毒培養(yǎng)條件，可由該醫(yī)院委托其他具有相應(yīng)條件的機構(gòu)進行。 對于無法選擇參比試劑的新型腸道病毒核酸檢測試劑，其臨床研究應(yīng)選擇病毒分離培養(yǎng)鑒定和/或病毒核酸序列測定方法作為參比方法。用于核酸序列測定的引物序列應(yīng)不同于考核試劑中用于檢測目的基因的引物序列。 臨床試驗中如涉及核酸序列測定方法，則建議對擴增子進行雙向測序。應(yīng)在臨床研究報告中

30、對選用的測序方法做詳細介紹，并提供以下關(guān)于測序試驗的詳細信息及資料： 1.1測序方法原理、測序儀型號、測序試劑及消耗品的相關(guān)信息。 1.2測序方法所用引物相關(guān)信息，如基因區(qū)段選擇、分子量、純度、功能性試驗等資料。 1.3對所選測序方法的分析性能進行合理驗證，尤其是最低檢測限的確認，建議將所選測序方法與擬申報產(chǎn)品的相關(guān)性能進行適當(dāng)比對分析。 1.4測序方法應(yīng)建立合理的陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品對臨床樣本的檢測結(jié)果進行質(zhì)量控制。 1.5提交有代表性的樣本測序圖譜及結(jié)果分析資料。 2.臨床試驗病例數(shù) 申報產(chǎn)品臨床試驗總病例數(shù)應(yīng)不低于500例。入組樣本的血清型應(yīng)滿足如下要求，腸道病毒通用型檢

31、測試劑陽性樣本應(yīng)至少包含柯薩奇病毒A組的2、4、5、6、10、12、16型等，B組的1、2、3、4、5型等，腸道病毒71型及?？刹《镜?，其他單一病毒種及單一病毒血清型檢測試劑陽性樣本應(yīng)包含該類產(chǎn)品至少應(yīng)檢出的血清型；上述血清型中常見血清型應(yīng)包括該型別中不同的基因型，常見血清型陽性病例數(shù)單獨統(tǒng)計應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求。單一病毒血清型檢測試劑，臨床試驗中其檢測的血清型應(yīng)包括該型別中不同的基因型，陽性病例數(shù)應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求。 另外，對于已被批準上市的腸道病毒核酸（通用型）檢測試劑，如果在其注冊證有效期內(nèi)出現(xiàn)了新型腸道病毒的暴發(fā)流行，如有需要，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)迅速針對新型腸道病毒開展臨床比對研究，可以采用病毒檢

32、測的“金標準”方法或當(dāng)時衛(wèi)生行政部門認可的針對該新型腸道病毒血清型的診斷標準作為參比方法進行臨床比對研究，分別對采集自新型腸道病毒感染（陽性病例不少于30例）、其他常見的腸道病毒及非腸道病毒感染但具有相應(yīng)癥狀的患者的新鮮樣本進行比對實驗研究，總例數(shù)不少于200例，如臨床試驗研究結(jié)果可以證明其對新型腸道病毒的檢測能力，申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品預(yù)期用途發(fā)生的改變，同時提出變更申請，并按相關(guān)法規(guī)要求提交分析性能評估和臨床試驗研究等資料。 3.臨床研究單位的選擇 應(yīng)選擇不少于3家（含3家）臨床試驗機構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗。臨床試驗機構(gòu)的選擇應(yīng)盡量考慮擬申報產(chǎn)品的特點和預(yù)期用途，綜合流

33、行病學(xué)背景，受試者的選擇具有一定的地域代表性。且臨床試驗機構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測的優(yōu)勢，實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉評價方案。 4.病例選擇及樣本類型 臨床試驗應(yīng)選擇具有相應(yīng)腸道病毒感染癥狀/體征或有密切接觸史的人群作為研究對象。申請人在建立病例納入標準時，應(yīng)考慮到試劑所適用的各年齡段人群的差異。臨床試驗入組病例應(yīng)與產(chǎn)品預(yù)期用途中適用人群一致。 臨床試驗中所涉及的樣本類型應(yīng)為實際臨床檢測中常用的樣本類型。如申報產(chǎn)品所適用的樣本類型同時包含鼻咽拭子、咽拭子、糞便/肛拭子、皰疹液、腦脊液或血液等多個樣本類型，應(yīng)針對不同樣本類型分別進行臨床試驗。 5.倫理學(xué)要求

34、 臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準則，必須獲得臨床試驗機構(gòu)倫理委員會的同意。研究者應(yīng)考慮臨床試驗用樣本的獲得和試驗結(jié)果對受試者的風(fēng)險性，應(yīng)提交倫理委員會的審查意見。 6.臨床試驗方案 臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。 試驗方案中應(yīng)確定嚴格的病例納入/排除標準，任何

35、已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑及所用機型應(yīng)一致，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，考核試劑的樣本類型不應(yīng)超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)選擇病毒分離培養(yǎng)鑒定或其他合理方法對額外的樣本類型進行驗證。 7.統(tǒng)計學(xué)分析 對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如檢測結(jié)果一致性分析、陰性/陽性符合率等。對于本類產(chǎn)品對比實驗的等效性研究，常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，對定性結(jié)果進行四格表卡方或kappa檢驗以驗證兩

36、種試劑定性結(jié)果的一致性，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標準。 在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用“金標準”方法或臨床上普遍認為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進行復(fù)核，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進行分析。 8.質(zhì)量控制 臨床試驗開始前，應(yīng)進行臨床試驗的預(yù)試驗，以熟悉并掌握相關(guān)試驗方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗誤差。整個試驗過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復(fù)性。 9.臨床試驗總結(jié)報告撰寫 根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗

37、技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。 9.1臨床試驗總體設(shè)計及方案描述 9.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。 9.1.2病例納入/排除標準、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標準、樣本編盲和揭盲的操作流程等。 9.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。 9.1.4統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。 9.2具體的臨床試驗情況 9.2

38、.1臨床試驗所用體外診斷試劑及儀器的名稱、批號、機型等信息。 9.2.2對各研究單位的病例數(shù)、年齡分布情況、不同血清型分布情況進行綜合，建議以列表或圖示方式列出各年齡組和各種血清型的樣本例數(shù)。 9.2.3質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、儀器校準、質(zhì)控品運行情況。 9.2.4具體試驗過程，樣本收集、樣本保存、樣本檢測、結(jié)果處理、結(jié)果不一致樣本的確認等。 9.3統(tǒng)計學(xué)分析 9.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。 9.3.2結(jié)果的一致性分析 計算陽性符合率、陰性符合率、總體符合率，采用

39、適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法，如四格表卡方檢驗或kappa檢驗以驗證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。 9.4討論和結(jié)論 對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。 （八）產(chǎn)品技術(shù)要求 申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關(guān)文獻，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。 腸道病毒核酸檢測試劑的產(chǎn)品性能指標應(yīng)主要包括：物理性狀、陰/陽性參考品符合率、精密度、最低檢測限等。陽性參考品主要考察對試劑盒適用范圍內(nèi)

40、不同血清型腸道病毒的檢測能力，陰性參考品則重點對申報試劑的分析特異性進行驗證。 如果申報試劑已有適用的國家標準品、參考品發(fā)布，則申請人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢測要求。 按照《辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。 （九）產(chǎn)品注冊檢驗報告 根據(jù)《辦法》的要求，首次申請注冊的第三類體外診斷試劑產(chǎn)品應(yīng)在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機構(gòu)進行連續(xù)3個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢驗。對于已經(jīng)有國家標準品、參考品的檢測項目，在注冊檢驗時應(yīng)采用相

41、應(yīng)的國家標準品、參考品進行注冊檢驗，對于目前尚無國家標準品的、參考品的項目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立自己的參考品體系并提供相應(yīng)的企業(yè)參考品。 （十）產(chǎn)品說明書 說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標本采集及處理、檢驗方法、檢驗結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，進口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習(xí)慣

42、。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨列明文獻的相關(guān)信息。 結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對腸道病毒核酸檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。 1.【預(yù)期用途】 1.1試劑盒用于定性檢測人鼻咽拭子、咽拭子、糞便/肛拭子、皰疹液、腦脊液或其他樣本的腸道病毒核酸，適用樣本類型應(yīng)結(jié)合實際的臨床研究完成情況進行確認。 1.2明確腸道病毒核酸試劑的臨床意義，主要用于對腸道病毒感染引起的手足口病等的輔助診斷，以便于臨床醫(yī)生結(jié)合病人

43、的其他檢查結(jié)果進行更加準確的疾病判斷和科學(xué)的患者管理，應(yīng)對腸道病毒感染引起的相應(yīng)臨床癥狀進行描述。 1.3簡單介紹待測目標的特征，如病毒種系淵源、生物學(xué)性狀、宿主特性、致病性、感染后臨床表現(xiàn)、待測靶基因特征等。 1.4待測人群特征介紹：具有腸道病毒感染癥狀的患者、相關(guān)的密切接觸者、地域要求或年齡限制（如有）等，待測人群應(yīng)與申報產(chǎn)品臨床試驗中入組人群一致。 1.5應(yīng)明確申報產(chǎn)品所能檢測病毒血清型及經(jīng)過臨床驗證的血清型。 1.6應(yīng)強調(diào)實驗操作人員應(yīng)接受過基因擴增或分子生物學(xué)方法檢測的專業(yè)培訓(xùn)，具備相關(guān)的實驗操作資格，實驗室應(yīng)具備合理的生物安全防備設(shè)施及防護程序。 2.【檢驗原理】 詳細

44、說明試劑盒技術(shù)原理，及核酸分離/純化方法、原理。說明檢測的靶基因座位、序列長度等；介紹引物及探針設(shè)計、不同樣品反應(yīng)體系（管）組合、對照品（質(zhì)控品）設(shè)置及熒光信號標記等。如添加了相關(guān)的防污染組分（如尿嘧啶DNA糖基化酶，即UDG/UNG等），也應(yīng)對其作用機理作適當(dāng)介紹。 3.【主要組成成分】 詳細說明試劑盒內(nèi)各組分的名稱、數(shù)量、成分、濃度等信息，如含有生物源性物質(zhì)，應(yīng)說明其生物學(xué)來源、活性及其他特性；說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。 試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，應(yīng)列出相關(guān)試劑的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、貨號以及醫(yī)療器械注冊證號/備案號（如有）等詳細信息。當(dāng)試劑盒中不包含用于核酸

45、分離/純化的試劑組分時，應(yīng)在此注明經(jīng)驗證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的如上信息。 4.【儲存條件及有效期】 試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)與相應(yīng)的穩(wěn)定性研究結(jié)論一致。 5.【適用儀器】 所有適用的儀器型號，提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。 6.【樣本要求】 明確適用的樣本類型。并詳細描述樣本采集及預(yù)處理要求、運輸要求、保存條件及期限等。特別是樣本采集所需設(shè)備及保存液，需特別明確供應(yīng)商、貨號及注冊證號/備案號（如有）。有關(guān)描述均應(yīng)建立在相關(guān)性能評價及穩(wěn)定性研究的基礎(chǔ)上。 樣本的取材及處理方式等若有通用的技術(shù)規(guī)范或指南，則應(yīng)遵循，

46、并在此處引用。 7.【檢驗方法】 詳細說明實驗操作的各個步驟，包括： 7.1試劑配制方法、注意事項。 7.2核酸分離/純化的條件、步驟及注意事項。對照品（質(zhì)控品）參與樣本核酸的平行提取的要求等。 7.3擴增反應(yīng)前準備：各組分加樣體積、順序、相關(guān)注意事項等。 7.4逆轉(zhuǎn)錄過程的溫度和時間設(shè)置、PCR各階段的溫度、時間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置及相關(guān)注意事項。 7.5儀器設(shè)置：特殊參數(shù)，待測基因、內(nèi)標的熒光通道選擇等。 7.6質(zhì)量控制：說明對照品（質(zhì)控品）的檢測要求。 8.【陽性判斷值】 簡要總結(jié)陽性判斷值研究方法及結(jié)論。 9.【檢驗結(jié)果的解釋】 結(jié)合對照品（質(zhì)控品）以及樣本管中靶基

47、因和內(nèi)標的檢測結(jié)果，對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進行詳述。檢驗結(jié)果的解釋應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。如有適用的臨床診療或篩查指南，則應(yīng)在此項下引用，相應(yīng)檢驗結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。 10.【檢驗方法的局限性】 應(yīng)至少包括如下描述： 10.1本試劑檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進行綜合分析，不得單獨作為患者管理的依據(jù)。 10.2針對腸道病毒通用型檢測試劑，未包含在申報產(chǎn)品檢測型別范圍內(nèi)的腸道病毒血清型。 10.3不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運及處理以及不當(dāng)?shù)膶嶒灢僮骱蛯嶒灜h(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。 10.4針對腸道病毒通用型核酸檢測試劑，應(yīng)明確

48、申報產(chǎn)品所檢病毒血清型中經(jīng)過臨床驗證的型別，明確其余型別未經(jīng)臨床驗證。 10.5申報產(chǎn)品應(yīng)明確不同病程不同階段樣本的陽性率不一致。 10.6取標本期間，接種減毒活疫苗的患者可能會導(dǎo)致檢測試劑檢測結(jié)果呈陽性。 11.【產(chǎn)品性能指標】 詳述以下性能指標： 11.1對相應(yīng)國家標準品、參考品（如有）檢測的符合情況。 11.2最低檢測限：依據(jù)分析性能評估資料，說明產(chǎn)品最低檢限，并簡單介紹最低檢測限的確定方法。 11.3企業(yè)內(nèi)部陽性/陰性參考品符合率，陽性/陰性參考品的組成、來源、濃度梯度設(shè)置以及評價標準等信息。 11.4精密度：建議詳細描述針對不同腸道病毒基因型，采用不同來源的樣本（如人

49、工模擬樣本和臨床樣本）在各個濃度水平進行的精密度評價結(jié)果，可采用列表形式描述。 11.5分析特異性：建議以列表方式說明驗證的其他腸道病毒血清型、相關(guān)病原體等的交叉反應(yīng)性及其驗證濃度水平。總結(jié)潛在干擾物質(zhì)的評價濃度水平及干擾情況。 11.6簡要描述臨床試驗的基本信息、試驗方法和結(jié)論。 12.【注意事項】 應(yīng)至少包括以下內(nèi)容： 12.1如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出生物安全性的警告。 12.2臨床實驗室應(yīng)嚴格按照《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增實驗室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號或現(xiàn)行有效版本）等有關(guān)分子生物學(xué)實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。 12.3強調(diào)產(chǎn)品性能僅針對聲稱的適用樣本類型及【樣本要求】項下說明的樣本采集和處理方法（包括樣本采集液等）進行了驗證，其他樣本類型或樣本采集、處理方法不能保證產(chǎn)品性能。 三、名詞解釋 1.PCR-熒光探針法 在PCR過程中利用熒光標記的特異性探針，對PCR產(chǎn)物進行標記跟蹤，釋放的熒光能量的變化直接反映出PCR擴增產(chǎn)物量的變化，并通過對熒光的采集和分析以達到對原始模板量進行分析的PCR。 四、起草單位 國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。 — END — — 27 ——