臨床常用免疫學(xué)檢驗(yàn)

臨床常用免疫學(xué)檢驗(yàn) 1. 免疫功能檢驗(yàn) 體液免疫 細(xì)胞免疫 2. 感染免疫學(xué)診斷試驗(yàn) 病毒性肝炎；AIDS;STD;其它傳染??；CRP 3. 自身免疫病的檢驗(yàn) 4. 腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn),檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué),檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)（laboratory medicine）是一門(mén)臨床學(xué)科，它運(yùn)用不斷發(fā)展的自然科學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)對(duì)患者血液、尿液和各種體液標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)，并以發(fā)展檢驗(yàn)技術(shù)、提高檢驗(yàn)質(zhì)量為重點(diǎn)，達(dá)到對(duì)患者疾病的診斷、病情觀察和預(yù)后判斷等目的。,（一）現(xiàn)代檢驗(yàn)診斷特點(diǎn) 主要有：自動(dòng)化和智能化。高質(zhì)量控制。微量化標(biāo)本、多參數(shù)分析。流水線(xiàn)檢測(cè)和床邊檢測(cè)并存?；驒z測(cè)前景可喜。,（二）現(xiàn)代檢驗(yàn)診斷面臨挑戰(zhàn) 雖然現(xiàn)代檢驗(yàn)診斷的技術(shù)正在長(zhǎng)足發(fā)展，但也面臨許多挑戰(zhàn)。表現(xiàn)在： 1如何選擇日益增多的檢驗(yàn)診斷項(xiàng)目？ 2如何選擇有多種方法的檢驗(yàn)診斷項(xiàng)目？ 3如何判斷檢驗(yàn)診斷新項(xiàng)目的應(yīng)用價(jià)值？ 4如何合理選擇檢驗(yàn)診斷項(xiàng)目，降低檢驗(yàn)診斷的費(fèi)用？,二、循證檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)新世紀(jì)檢驗(yàn)診斷高質(zhì)量發(fā)展的新天地,定義 循證醫(yī)學(xué)（evidence-based medicine，EBM）指：在對(duì)患者作出新的醫(yī)療決策的過(guò)程中，必須審慎、明確和明智地運(yùn)用當(dāng)前所能獲得的最佳證據(jù)。這里，“最佳證據(jù)”指不僅可以否定迄今已被視為臨床診斷或輔助診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，并且其本身也可被未來(lái)的更準(zhǔn)確、更有效新證據(jù)所取代。,目的 主要是：不斷弄清疾病的病因和發(fā)病危險(xiǎn)因素的證據(jù)，為臨床診斷和預(yù)防提供最為可靠的依據(jù)。提高疾病的早期診斷率，繼而提高疾病的治愈率。改善患者的預(yù)后，提高患者的生存質(zhì)量。提高臨床醫(yī)療管理和決策水平。精選臨床檢查和治療方案，降低醫(yī)、患雙方的醫(yī)療費(fèi)用，使患者得到最合理的臨床醫(yī)療服務(wù)。促進(jìn)臨床醫(yī)學(xué)教學(xué)水平，培養(yǎng)業(yè)務(wù)精湛、醫(yī)德高尚的臨床醫(yī)學(xué)人才。,現(xiàn)行傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)是以經(jīng)驗(yàn)醫(yī)學(xué)為主，而 EBM則要求選用最新的、經(jīng)過(guò)臨床研究機(jī)構(gòu)科學(xué)評(píng)價(jià)過(guò)的、更為準(zhǔn)確的新證據(jù)，而不采用尚未經(jīng)過(guò)嚴(yán)格評(píng)價(jià)的、目前仍處于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究階段的所謂“新證據(jù)”。,概念：循證檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)（evidence- based laboratory medicine，EBLM）就是按照循證醫(yī)學(xué)“以當(dāng)前最佳證據(jù)為基礎(chǔ)”的原則，用臨床流行病學(xué)的方法學(xué)規(guī)范檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的研究、設(shè)計(jì)和文獻(xiàn)評(píng)價(jià)，其任務(wù)是向臨床醫(yī)師提供反映患者真實(shí)情況的檢驗(yàn)證據(jù)。,循證醫(yī)學(xué)同樣也給檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)帶來(lái)了發(fā)展機(jī)遇。循證檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)要求檢驗(yàn)醫(yī)師不僅向臨床醫(yī)師解釋檢驗(yàn)項(xiàng)目的意義，而且要幫助他們選擇正確的檢驗(yàn)項(xiàng)目，合理地利用實(shí)驗(yàn)室資源。這是因?yàn)橛袝r(shí)候臨床醫(yī)師并不一定熟悉這些新的診斷指標(biāo)，相反，過(guò)多的檢查會(huì)提供一些不必要的信息和消耗不必要的費(fèi)用，從而干擾診斷、治療和醫(yī)療經(jīng)濟(jì)的合理分配。檢驗(yàn)醫(yī)師還必須使用綜合分析方法對(duì)診斷指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。,一些專(zhuān)家認(rèn)為，目前應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目，在臨床應(yīng)用前并未給予充分的評(píng)價(jià)。Jaeshke等認(rèn)為，判斷一項(xiàng)診斷試驗(yàn)是否有用的最終標(biāo)準(zhǔn)是：試驗(yàn)是否增加了有用的診斷信息。Burke認(rèn)為,如果一項(xiàng)試驗(yàn)主要用于篩檢，其敏感性一定要高，但易出現(xiàn)假陽(yáng)性。任何新的檢驗(yàn)只有在充分評(píng)價(jià)其可靠性、準(zhǔn)確性后才能用于臨床實(shí)踐。而現(xiàn)實(shí)是，由于制造商的熱情提供試劑、臨床醫(yī)師和檢驗(yàn)人員的欣然接受，許多新檢驗(yàn)項(xiàng)目在未被評(píng)價(jià)充分之前，就已被積極的推向了臨床應(yīng)用。,第一章 免疫功能檢驗(yàn) (Immunological Function Test) 免疫功能檢驗(yàn)分為細(xì)胞免疫功能檢驗(yàn)和體液免疫功能檢驗(yàn)，對(duì)于了解患者的免疫狀態(tài)，以及細(xì)胞的各種功能，為深入研究和認(rèn)識(shí)機(jī)體免疫系統(tǒng)的生理、病理改變，闡明某些疾病的發(fā)病機(jī)制和臨床診斷與治療將提供有利的信息。下面簡(jiǎn)單介紹臨床常用的一些免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目。,一. IgG、IgA、IgM測(cè)定 免疫球蛋白（Immunoglobulin ，Ig) 是一組具有抗體活性的蛋白。存在于 機(jī)體的血液、體液、外分泌液及某些細(xì)胞的膜上，分為 IgG、IgA、IgM、IgD、和IgE 五類(lèi)。其中 IgG、IgA、IgM 含量較多，一般應(yīng)用單向免疫擴(kuò)散法、免疫比濁法和速率散射比濁法測(cè)定。,參考值 依年齡、性別、地區(qū)等因素有差異。 IgG： 6.9416.18g/ L IgA： 0.68 3.78g/ L IgM： 0.60 2.63g/ L 臨床意義 1. Ig 含量減低：一種或多種Ig 水平減少，分原發(fā)性和繼發(fā)性。見(jiàn)于各種先天性或獲得性免疫缺陷病。繼發(fā)性常與免疫抑制劑應(yīng)用、射線(xiàn)、蛋白質(zhì)丟失、營(yíng)養(yǎng)不良等有關(guān)。也可見(jiàn)于細(xì)胞毒藥物治療后。,2. Ig含量增高： (1) 多克隆性增高，見(jiàn)于各種慢性感染、慢性肝病、某些自身免疫病，如 SLE、RA、SS等；也見(jiàn)于寄生蟲(chóng)疾病、結(jié)節(jié)病等。 (2) 單克隆性增高，又稱(chēng) “M”蛋白，主要見(jiàn)于免疫增殖性疾病，如多發(fā)性骨髓瘤、重鏈病、輕鏈病，巨球蛋白血癥等。,注意事項(xiàng) Ig水平與年齡、性別有一定的關(guān)系，Ig 含量因檢測(cè)方法不同而有差別，各地區(qū)參考值也不相同，在判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)綜合考慮。如有“M 蛋白”，可進(jìn)一步作血清或尿液免疫電泳，檢測(cè)輕鏈和重鏈。,二. 血清總IgE測(cè)定 IgE為血清中含量極少的一種免疫球蛋白，與過(guò)敏性疾病和寄生蟲(chóng)感染有關(guān)。目前檢測(cè)方法有多種，包括 ELISA、間接血凝試驗(yàn)（indirect hemoagglutination assay IHA ）、 RIA、電化學(xué)發(fā)光法（electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA，）、IFA 等。 參考值 0.1-150IU/ml,臨床意義 1. IgE增高：見(jiàn)于IgE型多發(fā)性骨髓瘤、特應(yīng)性哮喘、特應(yīng)性皮炎、過(guò)敏性鼻炎、寄生蟲(chóng)感染、熱帶嗜酸細(xì)胞增多癥、SLE、RA及某些霉菌病等。 2. IgE減低：一般無(wú)意義?？梢?jiàn)于原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥、惡性腫瘤及細(xì)胞毒藥物治療后。,注意事項(xiàng) 年齡、性別均可影響總IgE水平。一般男性高于女性；新生兒水平低，青春期水平最高，30歲以后逐漸下降。不同種族血清總IgE水平也有差別，混血人種比白人高34倍，黑人水平更高，黃種人水平也較高?？侷gE水平高不一定是過(guò)敏；過(guò)敏者總IgE也不一定高。因此，在評(píng)價(jià)總IgE結(jié)果時(shí)要考慮到以上因素。,三. 特異性IgE抗體（sIgE)的檢測(cè) 過(guò)敏患者的血清中存在著具有變應(yīng)原特異性的IgE 稱(chēng)之為特異性IgE,如對(duì)牛奶過(guò)敏者則有針對(duì)牛奶變應(yīng)原的IgE；對(duì)蒿草花粉過(guò)敏者，則有針對(duì)該花粉的IgE，該抗體只能與該變應(yīng)原特異性結(jié)合。,sIgE的測(cè)定在變態(tài)反應(yīng)體外診斷中占有重要地位。在呼吸疾病中，過(guò)敏性哮喘，過(guò)敏性鼻炎，職業(yè)性哮喘等患者血清中均能檢出 sIgE。sIgE檢測(cè)方法有許多種，目前臨床上常用的有ELISA，F(xiàn)EIA，免疫印跡等。隨著sIgE測(cè)定技術(shù)的完善，此項(xiàng)測(cè)定已日趨商品化，開(kāi)發(fā)了各種檢測(cè)系統(tǒng)，如CAP過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)，Master過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)，Px過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)等，這些測(cè)定系統(tǒng)包括了儀器、試劑、計(jì)算機(jī)軟件處理系統(tǒng)。國(guó)內(nèi)目前應(yīng)用最多的是CAP檢測(cè)系統(tǒng)。,1.CAP檢測(cè)系統(tǒng) 原理CAP，一個(gè)很小的塑料帽狀物，其內(nèi)置有多孔性、彈性和親水性的纖維素粒，此粒多孔，吸咐了更多的變應(yīng)原，加入血清，血清中的sIgE就會(huì)和變應(yīng)原結(jié)合，再加入酶標(biāo)抗人IgE，再加入熒光顯色系統(tǒng)，在熒光分光光度計(jì)上測(cè)定熒光強(qiáng)度，計(jì)算機(jī)提供相應(yīng)軟件，自動(dòng)計(jì)算出結(jié)果。報(bào)告sIgE含量。,適應(yīng)征 （1）臨床懷疑過(guò)敏性疾病，支氣管哮喘等； （2）不適宜作皮內(nèi)試驗(yàn)的患者； （3）脫敏治療的病人觀察療效。 （4）抗組胺等對(duì)癥治療藥物影響皮膚反應(yīng)者； （5）皮試可能發(fā)生危險(xiǎn)者；,（6）不能用于皮試的變應(yīng)原 ，如毒素，非水溶性或高度致敏性物質(zhì)； （7）食物過(guò)敏，皮試結(jié)果不可靠者。 （8）皮試結(jié)果可疑者。 方法 RAST FEIA 參考值CAP系統(tǒng)結(jié)果報(bào)告。一般報(bào)告sIgE含量。單位ku/L。正常人0.35ku/L，為陽(yáng)性。sIgE的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表。,表1. 特異性IgE的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn) _ RAST分級(jí) sIgE含量(ku/L) sIgE水平 臨床意義 O 100 特高（III） 特別嚴(yán)重之 過(guò)敏 _ 例如：報(bào)告格式：sIgE（d1）81.3ku/L（級(jí)） 其中 d1代表屋塵螨。每一過(guò)敏原均有代號(hào)，可查閱相關(guān)資料,臨床意義 sIgE測(cè)定是體外檢測(cè)變應(yīng)原的重要手段。其試驗(yàn)的靈敏度及特異性都很高、特別是對(duì)花粉、螨類(lèi)、寵物皮屑、牛奶、雞蛋、堅(jiān)果等變應(yīng)原的sIgE測(cè)定，靈敏度和特異性都在90以上，有的甚至接近100。根據(jù)sIgE含量可確定患者 變應(yīng)原 種類(lèi)，可評(píng)價(jià)患者過(guò)敏狀態(tài)，脫敏治療的療效，對(duì)哮喘的診斷和鑒別診斷有重要幫助。CAP吸咐變應(yīng)原有單價(jià)，有多價(jià)，如多價(jià)霉菌，多價(jià)食物（Fx5E，含6種食物過(guò)敏原），多價(jià)羽毛等，多價(jià)變應(yīng)原陽(yáng)性后，再進(jìn)一步確定單個(gè)變應(yīng)原成分。,注意事項(xiàng) （1） 有明顯的地域性，該法所使用的均系進(jìn)口產(chǎn)品生產(chǎn)國(guó)的與我國(guó)的不一定完全符合。我國(guó)常見(jiàn)的 變應(yīng)原 ，國(guó)外不一定有。因此，評(píng)價(jià)結(jié)果應(yīng)注意區(qū)別。,（2）某些小分子的變應(yīng)原 ，sIgE測(cè)定的靈敏度不高，如青霉素降解物，對(duì)這些變應(yīng)原 ，如測(cè)不出sIgE并不除外過(guò)敏的可能性。,（3）要結(jié)合臨床癥狀，體格檢查，常規(guī)化驗(yàn)，當(dāng)?shù)氐膶?shí)際條件，體內(nèi)試驗(yàn)以及體外試驗(yàn)的結(jié)果綜合考慮，才能得出比較正確的結(jié)論。,2.吸入物變應(yīng)原過(guò)篩試驗(yàn)（phadiotop）。 原理 呼吸道變態(tài)反應(yīng)病在臨床上很常見(jiàn)，有些病很難從臨床上區(qū)別是否過(guò)敏，如過(guò)敏性鼻炎和血管運(yùn)動(dòng)性鼻炎的臨床表現(xiàn)相似，外源性哮喘和內(nèi)源性哮喘也有共同之處；在臨床工作中首先要區(qū)別是否屬于過(guò)敏范疇。 血清總IgE測(cè)定作為過(guò)敏性疾病的過(guò)篩試驗(yàn)曾得到廣泛應(yīng)用，但其特異性、敏感性均不高，總IgE高并不一定是過(guò)敏，過(guò)敏者的總IgE水平也不一定高。過(guò)敏與否取決于sIgE的存在。,phadiotop是根據(jù)變應(yīng)原吸附原理，將空氣中90以上的最為常見(jiàn)的變應(yīng)原吸咐到CAP上?；颊哐逯兄灰嗅槍?duì)其中之一種變應(yīng)原的sIgE，即可呈陽(yáng)性反應(yīng)。據(jù)此可測(cè)知患者是否為吸入物變應(yīng)原過(guò)敏者。,與sIgE測(cè)定不同的是所用CAP為特制的，內(nèi)含多種吸入物變應(yīng)原。結(jié)果報(bào)告不是含量，而是比值，即待測(cè)血清吸光度與參考血清吸光度之比。 參考值 正常人為陰性，當(dāng)待測(cè)血清吸光度大于參考血清吸光度時(shí)報(bào)告為陽(yáng)性。根據(jù)比值，可將 phadiotop 陽(yáng)性者分為四個(gè)等級(jí)。弱陽(yáng)性1；陽(yáng)性2；強(qiáng)陽(yáng)性20；特強(qiáng)陽(yáng)性40。,臨床意義 陽(yáng)性結(jié)果可視為多種sIgE的總和，比值越大，表明體內(nèi)sIgE越多，這可能是某一種變應(yīng)原的sIgE很高，也可能是多種變應(yīng)原sIgE累加的結(jié)果。,注意事項(xiàng) phadiotop中未包括律草花粉及蠶絲，這兩種在我國(guó)都是很重要的變應(yīng)原，如患者只對(duì)律草花粉或蠶絲過(guò)敏，phadiotop則為陰性。但如果同時(shí)還合并有其它 變應(yīng)原過(guò)敏，phadiotop仍為陽(yáng)性。phadiotop陽(yáng)性只說(shuō)明患者對(duì)常見(jiàn)的空氣中的 變應(yīng)原過(guò)敏，但對(duì)何種變應(yīng)原過(guò)敏，仍需進(jìn)一步檢查。phadiotop作為過(guò)篩實(shí)驗(yàn)，可篩出非過(guò)敏的患者，以免進(jìn)行不必要的特異性變應(yīng)原檢查。由于phadiotop中包被的是國(guó)外的抗原，有時(shí)臨床診斷與phadiotop結(jié)果有不符的個(gè)別現(xiàn)象發(fā)生。,四. 血清補(bǔ)體測(cè)定 補(bǔ)體（Complement )是血清中的一組具有酶活性的蛋白。它由20多種蛋白組成。當(dāng)機(jī)體受到病原微生物侵襲時(shí)，在抗體的存在下，補(bǔ)體參與滅活 virus 或殺死 bacteria 的免疫反應(yīng)。在自身免疫病中，complement 也能參與破壞自身組織或細(xì)胞而造成免疫病理?yè)p傷。測(cè)定血清中補(bǔ)體活性或其單一補(bǔ)體成分含量，對(duì)于許多疾病的診斷和鑒別診斷、療效觀察以及發(fā)病機(jī)理的研究都有一定的臨床意義。,(一) 總補(bǔ)體活性測(cè)定（50% hemolytic unit of complement， CH50) Complement 可使溶血素 (抗體) 致敏的 SRBC 裂解而發(fā)生溶血，補(bǔ)體活性與溶血程度呈正相關(guān)。根據(jù)產(chǎn)生50%溶血所需要的最小補(bǔ)體量，可計(jì)算出血清總補(bǔ)體的活性。,參考值 75160 U/ml 臨床意義 .增高：常見(jiàn)于各種急性炎癥、組織損傷、心肌梗死和某些惡性腫瘤等。 .降低：見(jiàn)于各種免疫復(fù)合物性疾病，如SLE、急、慢性腎小球腎炎、自身免疫性溶血性貧血。也可見(jiàn)于病毒性肝炎、DIC、蛋白丟失性腸病、嚴(yán)重灼傷、急性粒細(xì)胞性白血病等。,注意事項(xiàng) 待測(cè)血清需新鮮、無(wú)溶血。測(cè)定方法有試管法、微量板法，近來(lái)又有生化儀器法等。不同方法具有不同的參考值。,(二) 補(bǔ)體C3測(cè)定（Complement 3 ，C3) C3為補(bǔ)體系統(tǒng)各組分中含量最高的組分，是激活補(bǔ)體傳統(tǒng)途徑與旁路途徑的關(guān)鍵成分。檢測(cè)方法主要有RID、免疫比濁、速率散射比濁等。 參考值 0.8-1.55g/L,臨床意義 1. C3增高：見(jiàn)于某些急性炎癥或傳染病早期以及某些惡性腫瘤等。 2. C3降低：見(jiàn)于SLE、RA、急性腎小球腎炎、肝臟疾病、冷球蛋白血癥等。狼瘡腎炎時(shí)血清中C3含量降低，當(dāng)病情好轉(zhuǎn)時(shí)，含量恢復(fù)正常。,(三), 補(bǔ)體C4測(cè)定（Complement 4 ，C4) C4是一種多功能的1-球蛋白，也是補(bǔ)體系統(tǒng)中的主要成分。在補(bǔ)體傳統(tǒng)活化途徑中發(fā)揮重要作用。裂解后的產(chǎn)物在補(bǔ)體的活化、促進(jìn)吞噬、防止免疫復(fù)合物沉著和中和毒素等方面發(fā)揮很大作用。檢測(cè)方法同C3測(cè)定。,參考值 0.160.47g/L 臨床意義 1. 升高：見(jiàn)于風(fēng)濕熱的急性期、結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周?chē)?、皮肌炎、心肌梗死、Reiter綜合征和各種類(lèi)型的關(guān)節(jié)炎。 2. 降低：見(jiàn)于自身免疫病，例如：SLE、RA、慢性活動(dòng)性肝炎、多發(fā)性硬化癥、IgA型腎病等。在SLE，C4含量下降明顯，并較C3下降為早。,五.循環(huán)免疫復(fù)合物（Circulating immunocomplex ， CIC,) CIC是體內(nèi)游離抗原與抗體相結(jié)合的產(chǎn)物。復(fù)合物可分大、中、小三類(lèi)。大的復(fù)合物(19s) 可被吞噬細(xì)胞吞噬去除；中等復(fù)合物(約等于19s )存在于局部病變部位，如腎基膜、皮膚基底膜、血管內(nèi)膜和關(guān)節(jié)滑膜等；只有小的復(fù)合物(19s)游離于血液、體液中，為一種可溶的CIC。CIC測(cè)定對(duì)免疫復(fù)合物病、自身免疫病以及肝病的診斷、療效觀察、預(yù)后判斷均有重要意義。,檢測(cè)方法有多種，如聚乙二醇沉淀法、C1q結(jié)合法等。 PEG可引起蛋白沉淀，蛋白分子愈大沉淀所需 PEG 濃度愈小。CIC分子量較大，且抗原-抗體結(jié)合后發(fā)生構(gòu)型改變，而被低濃度PEG從液相中析出，PEG還抑制CIC解離，促使CIC聚合成更大的凝聚物而被沉淀，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)450nm處測(cè)定吸光度。計(jì)算出濁度值，可知CIC的存在和含量。,參考值 PEG沉淀法： 10U/ml 臨床意義 1. CIC陽(yáng)性常見(jiàn)于自身免疫病如SLE、RA等，也可見(jiàn)于血清病、慢性活動(dòng)性肝炎、細(xì)菌感染、傳染病、惡性腫瘤等。 2. 動(dòng)態(tài)檢測(cè)CIC的變化，可監(jiān)測(cè)疾病的發(fā)展、判斷療效及預(yù)后。,注意事項(xiàng) 參考值依方法不同而有差別，此法快速簡(jiǎn)便，但特異性較差，只適于篩查。低密度脂蛋白可引起濁度增加，故應(yīng)空腹取血。高球蛋白血癥及標(biāo)本反復(fù)凍融易造成假陽(yáng)性。,六. T淋巴細(xì)胞亞群（T cell subpopulation )測(cè)定 T cell 因功能不同可將其分為若干亞群，如T輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞；T抑制/細(xì)胞毒性細(xì)胞等。也可根據(jù)T細(xì)胞表面分化抗原(CD)不同劃分為相應(yīng)的亞群，如CD3；CD4；CD8等。同一CD表型的細(xì)胞功能可能不同。如CD8細(xì)胞中既有T抑制細(xì)胞，也有細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞。T細(xì)胞各亞群的相互協(xié)調(diào)，穩(wěn)定地調(diào)節(jié)著機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)。,應(yīng)用抗CD抗原的單克隆抗體，如抗CD3、抗CD4、抗CD8等，對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，依據(jù)各單抗的陽(yáng)性率，判定各T cell 亞群，并算出CD4/CD8的比值。測(cè)定方法有 IFA、IEA、APAAP法、流式細(xì)胞儀法等。,參考值（IFA法）總T細(xì)胞（CD3+）53-88%；CD4+細(xì)胞32-60%；CD8+細(xì)胞20-40%。CD4+/CD8+1.5-2.0。 （流式細(xì)胞儀法） 總T細(xì)胞（CD3+）955-2860/l；CD4+細(xì)胞27-51%，550-1440l；CD8+細(xì)胞15-44%，320-1250l。CD4+/CD8+0.64-2.85。,臨床意義 T cell 亞群在許多臨床疾病中可發(fā)生異常改變，特別是免疫功能受損病人。測(cè)定T cell亞群變化對(duì)了解疾病的發(fā)病機(jī)制、指導(dǎo)臨床治療、控制疾病的發(fā)生發(fā)展均有重要意義。,1. 在自身免疫病中，如SLE、RA、自身免疫性溶血性貧血，以及乙型肝炎病人常表現(xiàn)為CD8細(xì)胞的數(shù)量及功能低下，有時(shí)也有CD4細(xì)胞增高，CD4+/CD8+比值升高。,2. 免疫缺陷病患者CD4+/CD8+比值減少，如AIDS病人，CD4+顯著減少，常出現(xiàn)CD4+/CD8+比值倒置。常作為HIV感染者的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。,3. 感染性疾病患者免疫抑制功能增強(qiáng)，表現(xiàn)為CD8+細(xì)胞的數(shù)量及功能都異常增高。病毒感染時(shí)，CD3+、CD4+細(xì)胞減少，CD8+細(xì)胞增多，CD4+/CD8+比值降低。,4. 腫瘤病人CD3+，CD4+細(xì)胞明顯減少，CD8+明顯增加，CD4+/CD8+比值明顯下降。據(jù)此，可了解機(jī)體的免疫狀態(tài)，指導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)劑及治療藥物的應(yīng)用。,5. 支氣管哮喘病人，在過(guò)敏原激發(fā)后，外周血CD4+ T 細(xì)胞迅速降低，支氣管肺泡灌洗液中CD3+、CD4+、CD8+ T 細(xì)胞則增高。過(guò)敏性鼻炎患者CD3+、CD4+、CD8+ T 細(xì)胞均比正常人低。,6. 血液系統(tǒng)疾病 T cell 亞群也有相應(yīng)變化，如再生障礙性貧血、粒細(xì)胞減少癥時(shí)CD4+細(xì)胞減少，CD8+細(xì)胞增多，CD3+/CD8+ 比值下降。,注意事項(xiàng) T cell 亞群檢測(cè)方法很多，參考值也不盡相同，在判斷結(jié)果時(shí)要全面考慮，結(jié)合臨床及其他檢查。此外，利用上法也可測(cè)定B細(xì)胞、NK細(xì)胞等。流式細(xì)胞儀法，B細(xì)胞絕對(duì)值為 90-560/l，百分?jǐn)?shù)為 5-18%，NK細(xì)胞絕對(duì)數(shù)為 150-1100/l，百分?jǐn)?shù)為 7-40%。華人較其他種族有較高的NK細(xì)胞值。,七. 細(xì)胞因子（Cytokine ，CK )及其受體（receptor )測(cè)定 CK是由多種細(xì)胞產(chǎn)生的免疫功能調(diào)節(jié)因子，其中主要包括：淋巴因子（Lymphokine ，LK)，單核因子（Monokine ，MK)以及其他由非淋巴細(xì)胞及非單核細(xì)胞產(chǎn)生的CK。白細(xì)胞介素（Interleukin ，IL)是體內(nèi)一大類(lèi)細(xì)胞因子。,CK在調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能方面發(fā)揮著重大作用。新的CK不斷被發(fā)現(xiàn)。各種CK需與各自的 receptor 特異結(jié)合才能起作用。CK受體存在于被作用的細(xì)胞膜上或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，目前所知不是太多。迄今所發(fā)現(xiàn)的CK近百種，其中多數(shù)仍處于研究和探索階段。,檢測(cè)CK及其 receptor 的產(chǎn)生和免疫細(xì)胞對(duì)其反應(yīng)能力，可以了解淋巴細(xì)胞及其他細(xì)胞的免疫功能。目前臨床上用于測(cè)定CK及其受體的方法有生物活性測(cè)定法、RIA法和ELISA等，并且已有試劑盒供應(yīng)。如IL2、IL4、IL6、IL8、TNF、干擾素、粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF)、促紅細(xì)胞生成素(EPO)等等。,近來(lái)，DNA分析法已經(jīng)用于CK的研究，應(yīng)用分子雜交法檢測(cè)CK的基因；應(yīng)用PCR技術(shù)測(cè)定CK的mRNA表達(dá)等。目前，利用PCR技術(shù)已建立了定量測(cè)定TGF、IL2、IL1、TNF等CK的方法。,（四）寄生蟲(chóng)病的檢測(cè) 1、豬囊蟲(chóng)抗體測(cè)定 Cysticercosis（囊蟲(chóng)?。┯址Q(chēng)Cysticercosis Celluosae（豬囊尾蚴?。?是人和豬共患的一種寄生蟲(chóng)病。又分為肌肉型、中樞神經(jīng)型等。主要檢測(cè)方法有ELISA、IHA（間接血凝試驗(yàn)）等。用以檢測(cè)病人體內(nèi)特異性IgG抗體。對(duì)臨床診斷及血清流行病學(xué)調(diào)查均有實(shí)用價(jià)值。,參考值一般陰性 ELISA： P/N 2.1 臨床意義 囊蟲(chóng)IgG抗體陽(yáng)性，多見(jiàn)于腦囊蟲(chóng)病?？勺?血清 和腦脊液囊蟲(chóng)抗體檢查。應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)和CT、核磁檢查結(jié)合作出判斷。,2、血吸蟲(chóng)抗體測(cè)定 日本血吸蟲(chóng)病早期宿主對(duì)血吸蟲(chóng)可發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。 血清 中產(chǎn)生IgM, IgG, IgE抗體。IgM, IgE抗體陽(yáng)性可作為日本血吸蟲(chóng)病的早期診斷指標(biāo)。IgG抗體陽(yáng)性表明病人處在恢復(fù)期?？贵w檢測(cè)有助于臨床診斷和流行病學(xué)研究，主要方法有ELISA、乳膠凝集試驗(yàn)、環(huán)卵沉淀試驗(yàn)等。 參考值陰性 ELISA：P/N 2.1 臨床意義 （1） 血清 中IgM抗體陽(yáng)性提示疾病處于早期。 （2） 血清 中IgG抗體陽(yáng)性表示疾病處于恢復(fù)期，P/N值的大小表示抗體效價(jià)的高低，部分患者感染后IgG抗體可持續(xù)數(shù)年。,注意事項(xiàng) 血吸蟲(chóng)抗體的將測(cè)可以達(dá)到診斷病人的目的，但不能區(qū)分血吸蟲(chóng)現(xiàn)癥病人和過(guò)去感染者，早期慢性和晚期血吸蟲(chóng)病患者，未治愈的血吸蟲(chóng)病人及新感染和既往感染的混合病人。此外用于考核療效尚不夠理想。目前，不少學(xué)者應(yīng)用單克隆抗體ELISA檢測(cè)循環(huán)抗原用于診斷和考核療效。但仍存在不少問(wèn)題，仍需改進(jìn)。,3、肝吸蟲(chóng)抗體測(cè)定 肝吸蟲(chóng)病又稱(chēng)華支睪吸蟲(chóng)病，是由華支睪吸蟲(chóng)寄生于人體肝膽管內(nèi)所引起的寄生蟲(chóng)病。主要依靠臨床流行病學(xué)、病原學(xué)檢查、免疫學(xué)檢查結(jié)合臨床表現(xiàn)作出診斷。因病原學(xué)檢查受到排卵量和排卵規(guī)律的影響，以及受所用方法敏感性的限制，很難查到蟲(chóng)卵。因此應(yīng)用免疫學(xué)診斷具有重要意義。宿主感染華支睪吸蟲(chóng)后，在抗原刺激下，誘發(fā)產(chǎn)生特異性抗體，主要是IgM, IgA, IgE和IgG。一般抗體檢出時(shí)間均明顯早于糞便中蟲(chóng)卵出現(xiàn)的時(shí)間。檢測(cè)肝吸蟲(chóng)抗體方法主要有皮內(nèi)試驗(yàn)、ELISA、IFA等。,參考值陰性 ELISA：P/N 2.1 臨床意義 目前所查多為IgG抗體，P/N 2.1為陽(yáng)性。數(shù)值越大，表明患者體內(nèi)抗體效價(jià)越高，表明患者為華支睪吸蟲(chóng)感染。如能測(cè)到IgM抗體，對(duì)于早期診斷有很大幫助。如有可能，可檢測(cè)循環(huán)抗原以考核療效和早期診斷。,4、肺吸蟲(chóng)抗體測(cè)定 肺吸蟲(chóng)病又稱(chēng)并殖吸蟲(chóng)病，是由并殖吸蟲(chóng)引起的自身免疫源性疾病。臨床表現(xiàn)多種多樣，可分肺型和肺外型。診斷主要結(jié)合流行病學(xué)。臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室檢查。其中免疫學(xué)檢查對(duì)臨床診斷有很重要意義。人感染肺吸蟲(chóng)后，可出現(xiàn)抗肺吸蟲(chóng)抗體，以IgG型為主。 血清 中IgE水平也可升高。IgM、IgE型抗體檢方法主要有ELISA、IFA、皮內(nèi)試驗(yàn)等。 參考值陰性 ELISA：P/N 2.1,臨床意義 抗體陽(yáng)性表明患者為肺吸蟲(chóng)感染者，結(jié)合其他檢查和臨床表現(xiàn)可作出診斷。在判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)該注意。其它寄生蟲(chóng)病，如血吸蟲(chóng)病、囊蟲(chóng)病與此有輕度的交叉反應(yīng)。此外還可應(yīng)用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)循環(huán)抗原用于診斷和流行病學(xué)調(diào)查。目前應(yīng)用尚不廣泛。,自身免疫病（AID)是指由于過(guò)度而持久的自身免疫反應(yīng)導(dǎo)致組織器官損傷并引起相應(yīng)器官病變或臨床癥狀的一類(lèi)疾病。風(fēng)濕病是一類(lèi)涉及到關(guān)節(jié)、軟骨、肌肉等結(jié)締組織的慢性疾病。,實(shí)驗(yàn)室檢查特別是免疫學(xué)檢查對(duì)AID和風(fēng)濕病的診斷是及其重要的。 有些檢查可作為診斷指標(biāo)之一； 有些檢查可作為病情進(jìn)展和預(yù)后判斷的監(jiān)測(cè)指標(biāo)； 有些檢查可作為藥物療效的考核指標(biāo)之一。,隨著免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及分子生物學(xué)的應(yīng)用，各種自身抗體的檢查越來(lái)越多地應(yīng)用于臨床。作為臨床醫(yī)生，應(yīng)該熟悉這些檢驗(yàn)的意義，并能結(jié)合臨床及其他檢查，客觀地運(yùn)用這些指標(biāo)，協(xié)助診斷，了解病情，指導(dǎo)治療。這里僅介紹臨床常用的一些自身抗體的檢測(cè)。,1.抗核抗體測(cè)定 （Antinuclear antibody ,ANA) ANA是抗細(xì)胞核多種成分的自身抗體，無(wú)種屬及器官特異性。ANA可分為抗DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗非組蛋白抗體、抗核仁抗體及其他細(xì)胞成分抗體。這些抗體共同組成ANA譜。,抗核抗體（ANA）的檢查最常用于篩查全身性風(fēng)濕病和自身免疫病。ANA的檢查可觀察到能與細(xì)胞核內(nèi)的核酸和蛋白抗原起反應(yīng)的自身抗體。細(xì)胞內(nèi)可能存在對(duì)多種抗原起反應(yīng)的抗體。只有某種抗體的效價(jià)很高時(shí)，IFA才能加以鑒別。,homogenous（均質(zhì)型） 又稱(chēng)彌散型，相應(yīng)的抗原是雙鏈DNA和組蛋白復(fù)合物。常見(jiàn)于SLE，特別是腎臟受累病人。也可見(jiàn)于其它結(jié)締組織病，如：風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，MCTD，干燥綜合征，硬皮病，慢性活動(dòng)性肝炎及原發(fā)性膽汁性肝硬變。 Peripheral(周邊型) 相應(yīng)的抗原為雙鏈DNA，多見(jiàn)于活動(dòng)性SLE病人。,Speckle(斑點(diǎn)型) 主要是針對(duì)ENA的抗體，包括Sm，RNP，SSA，SSB，Scl-70。一般認(rèn)為低效價(jià)的斑點(diǎn)型ANA不是結(jié)締組織病特有的，實(shí)際上不代表臨床異常。高效價(jià)的抗Sm抗體多與SLE有關(guān)。高效價(jià)的抗RNP自身抗體見(jiàn)于MCTD，但也見(jiàn)于SLE?？筍SA和抗SSB抗體，見(jiàn)于S.S，也可見(jiàn)于SLE。當(dāng)病人有抗SSA抗體時(shí)，通常以皮膚表現(xiàn)和光過(guò)敏為主。，也存在于ANA陰性狼瘡和新生兒狼瘡。Scl-70抗體與硬皮病有關(guān)。,Nucleoli(核仁型) 其靶抗原是與RNA分子相關(guān)的核蛋白。多見(jiàn)于硬皮病。 Centromere(著絲點(diǎn)型) 抗著絲點(diǎn)抗體（ACA），多見(jiàn)于全身性硬皮病的CREST綜合征。,常用檢測(cè)方法為IFA、ELISA、免疫印跡法、RIA、免疫斑點(diǎn)法、膠體金標(biāo)斑點(diǎn)免疫滲濾法等。其中IFA是應(yīng)用較廣的一種方法。一般采用鼠肝切片或Hep-2細(xì)胞為底物抗原片，當(dāng)加入病人血清時(shí)，病人血清中的ANA可與細(xì)胞中相應(yīng)抗原成分結(jié)合。再加入熒光標(biāo)記抗人IgG，在熒光顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞核內(nèi)亮綠色熒光。,參考值 1:10或陰性 臨床意義 NA陽(yáng)性見(jiàn)于多種疾病，常用于風(fēng)濕病及自身免疫病的診斷。SLE患者陽(yáng)性率在95以上，且效價(jià)常在1：80以上。在其他風(fēng)濕病如RA、系統(tǒng)性硬化癥、皮肌炎、干燥綜合征 (SS)、混合結(jié)締組織病(MCTD)等也可陽(yáng)性。其他如肝病，病毒感染等也可呈低效價(jià)陽(yáng)性。,注意事項(xiàng) 在大約1%的正常人的體內(nèi)可測(cè)到低效價(jià)的非特異性抗核抗體，80歲以上老人的檢出率可高達(dá)50%。高效價(jià)的ANA一般與活動(dòng)期SLE密切相關(guān)。采用Hep-2細(xì)胞檢測(cè)ANA，可見(jiàn)到不同的染色模型。 此外，口服避孕藥的婦女也可檢測(cè)到ANA。,二.可提取性核抗原（Extractable nuclear antigen ENA)抗體 ENA是細(xì)胞內(nèi)許多小分子的RNA和多肽組成的非組蛋白的酸性核蛋白顆粒。分布在細(xì)胞質(zhì)中的稱(chēng)為小細(xì)胞漿核糖核蛋白(scRNPs)；分布在細(xì)胞核內(nèi)的稱(chēng)為小細(xì)胞核核糖核蛋白(snRNPs)。目前已發(fā)現(xiàn)的有20余種，其中常用的抗ENA抗體有如下幾種。,（一）抗Sm抗體 Sm是病人Smith的縮寫(xiě)。Sm抗原屬于SnRNP，由5個(gè)RNA和多肽組成，抗原表位在29KD、28KD和13.5KD多肽上，抗Sm抗體是酸性糖蛋白，是SLE的標(biāo)記抗體。,(二) 抗nRNP(u1RNP)抗體 u1RNP是u1RNA和蛋白質(zhì)組成的，抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上，是MLTD的重要血清標(biāo)志。,（三）抗SSA抗體 SS為干燥綜合征的縮寫(xiě)。此抗體又稱(chēng)抗RO抗體。SSA抗原是RNA和蛋白質(zhì)復(fù)合物，抗原表位在52KD多肽上，主要見(jiàn)于原發(fā)性干燥綜合征患者及SLE。,（四）抗SSB抗體 SSB抗體常伴隨SSA抗體同時(shí)出現(xiàn)，又稱(chēng)抗La抗體，SSB抗原屬于SnRNP，是含有RNA和50KD蛋白質(zhì)的復(fù)合物?？乖砦辉?5KD、47KD和48KD多肽上。與SSA抗體并存對(duì)診斷SS有特異性。,（五）抗Scl-70抗體 Scl-70抗原表位在86KD、70KD的片段上，是DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的降解產(chǎn)物，抗Scl-70抗體幾乎僅見(jiàn)于硬皮病，陽(yáng)性率30%左右。,（六）抗Jo-1抗體 Jo-1抗體是組氨酰tRNA合成酶，抗原表位在55KD多肽，抗Jo-1抗體是多發(fā)性肌炎和皮肌炎的標(biāo)記抗體，陽(yáng)性率25-40%。,（七）抗核糖體抗體 核糖體在核仁合成，然后轉(zhuǎn)入胞漿，抗原表位在大亞基上的38KD、16KD和15KD多肽上?？购颂求w抗體陽(yáng)性主要見(jiàn)于SLE，陽(yáng)性率20-30%。,檢測(cè)以上抗體的方法主要有：對(duì)流免疫電泳法(CIE)、雙相免疫擴(kuò)散法，免疫印跡試驗(yàn)(IBT)，免疫斑點(diǎn)技術(shù)和ELISA法等。一般采用兔胸腺或牛胸腺提取物或細(xì)胞提取物作為抗原。近年來(lái)，應(yīng)用分子重組抗原制備的試劑盒已投入市場(chǎng)。,參考值陰性 臨床意義 1. 抗n RNP抗體：見(jiàn)于3540的SLE病人，在MCTD病人中陽(yáng)性率可達(dá)95100，也可見(jiàn)于其他風(fēng)濕性疾病。 2. 抗Sm抗體：主要見(jiàn)于SLE及重疊綜合征，急性期病人75為陽(yáng)性。一般SLE患者3040陽(yáng)性率。但Sm抗體陽(yáng)性者90以上為SLE，故稱(chēng)之為SLE的標(biāo)記抗體。,3. 抗SSA和抗SSB抗體：見(jiàn)于4045的SS病人?？筍SA抗體也可見(jiàn)于25的SLE病人及其他風(fēng)濕性疾??；抗SSA抗體與新生兒狼瘡和先天性傳導(dǎo)阻滯有關(guān)?？筍SA抗體也可見(jiàn)于病毒感染等非風(fēng)濕性疾病?？筍SB抗體對(duì)原發(fā)性干燥綜合征較特異，但陽(yáng)性率僅27左右。,4. 抗Scl-70抗體：一般僅見(jiàn)于系統(tǒng)性硬化癥病人，陽(yáng)性率2060。 5.抗Jol-1抗體見(jiàn)于30的多發(fā)性肌炎病人及10的皮肌炎病人?？笿ol-1抗體與多發(fā)性肌炎病人間質(zhì)性肺炎的發(fā)生率增加有關(guān)。 6.抗rRNP 抗體：主要見(jiàn)于SLE患者，陽(yáng)性率20%左右，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變有關(guān)，多在疾病活動(dòng)期出現(xiàn)。,注意事項(xiàng) 判斷試驗(yàn)結(jié)果時(shí)要結(jié)合臨床表現(xiàn)作出評(píng)價(jià)，也應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)方法來(lái)作出解釋。對(duì)流免疫電泳法和雙相擴(kuò)散法敏感性低，但特異性較高；免疫印跡法、斑點(diǎn)免疫法及ELISA方法敏感性提高，但特異性相對(duì)減少。,三.抗雙鏈DNA抗體（Antidouble-stranded DNA ， A-dsDNA，) A-dsDNA 對(duì)SLE有高度特異性，是針對(duì)細(xì)胞核脫氧核糖核酸的自身抗體。臨床上常用的檢測(cè)方法有：Farrs法：125IDNA與待檢標(biāo)本中的A-dsDNA形成免疫復(fù)合物，加飽和硫酸銨使復(fù)合物沉淀，以計(jì)數(shù)器分別測(cè)定上清中游離及沉淀物中已結(jié)合的125IDNA含量，可計(jì)算出 血清中AdsDNA的結(jié)合活性。,ELISA法：將小牛胸腺DNA包被在微孔板中，加入病人血清 ，如有A-dsDNA則結(jié)合到微孔板上，加入酶標(biāo)抗人IgG，加入底物顯色后經(jīng)酶標(biāo)儀比色可知血清中A-dsDNA抗體的量。,免疫熒光法：采用馬疫錐蟲(chóng)或短膜蟲(chóng)作為基質(zhì)，加入病人血清 。血清中的A-dsDNA與膜上的天然DNA結(jié)合，加入熒光標(biāo)記抗人IgG。馬疫錐蟲(chóng)和短膜蟲(chóng)的動(dòng)基體會(huì)發(fā)出綠色熒光。 金標(biāo)斑點(diǎn)法：雙鏈DNA包被于硝酸纖維膜上，加入病人血清 ，加入金標(biāo)記抗人IgG，如有A-dsDNA存在，會(huì)顯示紅色斑點(diǎn)。,參考值依方法不同參考值也有不同。 Farrs法： 0.20 免疫熒光法：1:10 ELISA法：依試劑盒而定，一般70u 金標(biāo)法：陰性,臨床意義 A-dsDNA 陽(yáng)性對(duì) SLE 有較高的特異性。大約60的活動(dòng)性 SLE 病人會(huì)出現(xiàn) A-dsDNA。其他風(fēng)濕性疾病也會(huì)出現(xiàn)，但陽(yáng)性率非常低，如RA、S.S。 注意事項(xiàng) 假陽(yáng)性結(jié)果非常少見(jiàn)，但陰性亦不能排除SLE的診斷。,四.抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA) 測(cè)定 ANCA是針對(duì)中性粒細(xì)胞胞漿多種成分的 自身抗體，主要有髓過(guò)氧化物酶(MPO)和蛋白酶3（ Proteinase 3 ，PR3)的抗體 。主要用于診斷Wegener 肉芽腫和系統(tǒng)性血管炎，特別是伴有腎病、呼吸疾病或其他類(lèi)型血管炎引起多器官損害的患者。檢測(cè)方法有IFA、ELISA、 IBT等。,參考值 陰性。 臨床意義 免疫熒光法檢查ANCA陽(yáng)性一般分為兩種熒光類(lèi)型，一種是胞漿型，稱(chēng)為cANCA，一種是核周型，稱(chēng)為pANCA。cANCA產(chǎn)生彌漫性細(xì)胞漿染色，是針對(duì)PR3的抗體 ，一般見(jiàn)于wegener肉芽腫病(WG)，特別是腎和肺受累的病人。pANCA產(chǎn)生核周染色，是針對(duì)MPO的抗體 ，主要見(jiàn)于系統(tǒng)性血管炎病人。,在WG病人中，cANCA陽(yáng)性率在活動(dòng)期可達(dá)80，且有較高的抗體效價(jià)。在緩解期抗體陽(yáng)性率低，且效價(jià)下降，或完全消失。,注意事項(xiàng) ANCA 陽(yáng)性也可見(jiàn)于 Good-Pastares 綜合征和SLE病人。WG的診斷不能單純依賴(lài)ANCA的結(jié)果，還要結(jié)合其他臨床表現(xiàn)，試驗(yàn)室檢查和組織病理學(xué)檢查才能確定。ANCA效價(jià)不能完全反應(yīng)疾病的活動(dòng)以及對(duì)治療的反應(yīng)。,pANCA 陽(yáng)性不是特異性的抗MPO抗體，也可以是抗粒細(xì)胞胞漿中其他酶的抗體，如彈性蛋白酶，組織蛋白酶G等。ANCA檢測(cè)應(yīng)注意排除其他自身抗體的交叉反應(yīng)，如ANA。因其可產(chǎn)生假陽(yáng)性應(yīng)注意鑒別，并進(jìn)行ANA檢測(cè)。,五.抗線(xiàn)粒體抗體（Antimitochondrial antibody,AMA) AMA是以細(xì)胞漿中的線(xiàn)粒體為抗原的一種自身抗體，無(wú)器官和種屬特異性。一般采用大鼠腎及胃作為抗原基質(zhì)，采用IFA檢測(cè)，陽(yáng)性可見(jiàn)大鼠腎和胃的細(xì)胞漿呈現(xiàn)細(xì)顆粒狀熒光。,采用免疫印跡法可將與線(xiàn)粒體抗原的反應(yīng)分為從M1到M9九種類(lèi)型，高效價(jià)的M2和M9型自身抗原與原發(fā)性膽汁性肝硬變相關(guān)。目前已有檢測(cè)M2的ELISA試劑盒供應(yīng)。,參考值 陰性 1：10 為陽(yáng)性 臨床意義 AMA是原發(fā)性膽汁性肝硬化的標(biāo)記 抗體，陽(yáng)性率達(dá)90%，并且50%患者 抗體效價(jià)達(dá)1：1280或更高。此外，也可見(jiàn)于慢性活動(dòng)性肝炎、隱匿性肝硬化。肝外阻塞性黃疸患者AMA常陰性，因此可作為鑒別診斷的一個(gè)指標(biāo)。正常人中陽(yáng)性率10%，且效價(jià)較低。,六.抗平滑肌抗體（Antismooth muscle antibody，ASMA ) ASMA是抗肝細(xì)胞膜上一種肌動(dòng)球蛋白的自身抗體。這種肌動(dòng)球蛋白與平滑肌有交叉抗原性，因此與平滑肌有反應(yīng)。一般采用IFA法，以大鼠胃作為抗原基質(zhì)，陽(yáng)性可見(jiàn)胃壁平滑肌呈現(xiàn)亮綠色熒光。,參考值 陰性，1：10為陽(yáng)性 臨床意義 主要見(jiàn)于明顯活動(dòng)期的自身免疫性肝炎患者，陽(yáng)性率在80%以上，效價(jià) 在1：80以上。急性病毒性肝炎早期ASMA也可陽(yáng)性，且早于 HBsAg出現(xiàn)。其他疾病如傳染性單核細(xì)胞增多癥、SS、RA、支原體肺炎、腫瘤和病毒感染者也有不同程度的陽(yáng)性率。正常人中僅有2%陽(yáng)性。,七. 抗甲狀腺球蛋白抗體（ATGA)和抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA) ATGA 是由甲狀腺炎引起的自身抗體 ，抗原是一種糖蛋白。ATGA有器官特異性而無(wú)種屬特異性。ATMA 的抗原是甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)的脂蛋白。常用檢測(cè)方法有：IFA、IHA、RIA、ELISA等。,參考值 IHA： 血清效價(jià) 1：32， 1：32為陽(yáng)性，ATGA 和ATMA ELISA：正常為陰性，P/N 2.1 為陽(yáng)性, ATGA 和 ATMA RIA：ATGA 30%；ATMA 15%,臨床意義 主要見(jiàn)于橋本甲狀腺炎、甲亢、甲低患者，也可見(jiàn)于甲狀腺瘤、惡性貧血、重癥肌無(wú)力、Edison 病和肝臟疾病等。SLE及其他自身免疫病也有一定的陽(yáng)性率。,正常人也可檢出這兩種抗體 ，并且隨著年齡的增長(zhǎng)，陽(yáng)性率增加，特別是40歲以上婦女，可達(dá)18%左右。 應(yīng)該注意到，有的患者ATGA陰性，但ATMA陽(yáng)性，因此兩種 抗體同時(shí)檢測(cè)可提高抗甲狀腺自身抗體的檢出水平。,八. HLAB27測(cè)定 HLAB27 抗原為人類(lèi)MHC I類(lèi) 抗原B位點(diǎn)的表達(dá)產(chǎn)物，可分為幾種亞型。HLA B27的檢測(cè)方法有多種，補(bǔ)體依賴(lài)性微量細(xì)胞毒法(CDMA)；流式細(xì)胞儀法；玫瑰花法；ELISA法；等電聚焦法等。近來(lái)應(yīng)用PCR法檢測(cè)HLAB27，敏感而特異，并且可進(jìn)行B27亞型的分析。,參考值 非洲美洲人：34%； 高家索人：68%； 亞洲人：1%。,臨床意義 強(qiáng)直性脊柱炎(AS)患者HLAB27陽(yáng)性率為9095%。大約42%的青年類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(JRA)存在HLAB27，Reiters 綜合征患者陽(yáng)性率大約79%。此外，腸病性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎也有一定的陽(yáng)性率。RA病人陽(yáng)性率不高。,注意事項(xiàng) 在評(píng)價(jià)HLAB27陽(yáng)性結(jié)果時(shí)應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合考慮，不能單純依靠此結(jié)果作出診斷。,其他自身抗體及檢測(cè),C反應(yīng)蛋白（C-Reactive Protein，CRP ） CRP是一種急性時(shí)相蛋白，由肝細(xì)胞合成，可與肺炎球菌細(xì)胞壁C多糖發(fā)生沉淀反應(yīng)，故稱(chēng)CRP。在各種炎癥的急性期或組織創(chuàng)傷時(shí)，血清CRP濃度急劇升高。CRP不僅可結(jié)合多種細(xì)菌（ bacteria ）,真菌(fungi)及原蟲(chóng)（protozoal)體內(nèi)的多糖物質(zhì)，而且在鈣離子存在下，還可以結(jié)合磷脂酰膽堿和核酸。結(jié)合后的復(fù)合體具有激活補(bǔ)體(complement)的作用。,常用檢測(cè)方法為 單相免疫擴(kuò)散（single immunodiffusion test）、 乳膠凝集實(shí)驗(yàn)（latex agglutination test )、 火箭電泳法（rocket immunoelectrophoresis )、 酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA)、 速率散射比濁法（rate nephelometry）等。,參考值 8mg/L 臨床意義 血清CRP 升高多見(jiàn)于：急性、慢性細(xì)菌感染；組織損傷壞死；急性心肌梗死；各種炎癥；外科手術(shù)；腫瘤浸潤(rùn)；急性風(fēng)濕熱和活動(dòng)性類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，以及其它關(guān)節(jié)炎性疾病。但病毒性感染一般CRP不升高，因此可作為病毒性感染和細(xì)菌性感染的鑒別指標(biāo)。,注意事項(xiàng) CRP測(cè)定方法不同，在判定結(jié)果時(shí)應(yīng)予考慮。此外，雌激素、口服避孕藥可使CRP增高，皮質(zhì)激素和抗炎藥可使CRP下降。,附：超敏C反應(yīng)蛋白 （High Sensitivity C Reactive Protein，HS-CRP） CRP是一種急性期血漿蛋白，在組織損傷、炎癥和感染時(shí)可快速增加。CRP是由肝細(xì)胞分泌的，它的合成受細(xì)胞因子（Cytokine）調(diào)節(jié)，特別是IL-6。,近年研究證實(shí) CRP 濃度與血管內(nèi)皮功能障礙相關(guān)聯(lián)。動(dòng)脈內(nèi)的炎癥引發(fā)刺激、損傷、愈合，周而復(fù)始，形成斑塊，其結(jié)果是動(dòng)脈狹窄或粥樣硬化。許多研究認(rèn)為 CRP 可預(yù)測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化病人的危險(xiǎn)性，其中一些人日后發(fā)生冠狀動(dòng)脈病、腦血管病或周?chē)鷦?dòng)脈病變。CRP是炎癥并發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的良好指標(biāo)，血漿中 CRP 濃度高說(shuō)明更易導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。測(cè)定方法為速率散射比濁法。,參考值 3mg/l 臨床意義 HS-CRP測(cè)試（檢測(cè)低限約為0.2mg/L），再加上血脂如膽固醇監(jiān)測(cè)，有助于預(yù)測(cè)冠心病的危險(xiǎn)性。一般將CRP 3mg/L以上，總膽固醇 6.06mmol/L認(rèn)為患心肌梗塞的危險(xiǎn)性會(huì)增加。未發(fā)生心血管或周?chē)芤馔獾娜丝墒褂眠@指標(biāo)來(lái)評(píng)估6-10年出現(xiàn)發(fā)作的危險(xiǎn)性。,類(lèi)風(fēng)濕因子（Rheumatoid Factor，RF） RF是一種自身抗體，可與變性的IgG發(fā)生反應(yīng)，與IgG 的Fc段結(jié)合。RF可分為IgG、IgM、IgA、IgD和IgE五型。凝集試驗(yàn)檢測(cè)的主要為IgM型RF。RF主要見(jiàn)于 類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis RA)，也可見(jiàn)于其他結(jié)締組織病及其他疾病。檢測(cè)方法有乳膠凝集試驗(yàn)、致敏羊紅細(xì)胞凝集法、 速率散射比濁法、ELISA法等。,參考值 乳膠法：陰性或80IU/ml。，一般方法所檢測(cè)的大部分是IgM-RF。,關(guān)于RF分型，臨床應(yīng)用尚不廣泛。多數(shù)作者認(rèn)為：IgMRF效價(jià)高低可在一定程度上反映RA的活動(dòng)性，但無(wú)明確的密切關(guān)系；IgG-RF與RA患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)外癥狀密切相關(guān)；IgA-RF見(jiàn)于RA、硬皮病、Felty綜合征和系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus， SLE)，也是RA臨床活動(dòng)性的一個(gè)指標(biāo)；IgE-RF 除RA患者外，也見(jiàn)于Felty綜合征和青年型RA。高水平 IgM-RF陽(yáng)性病人預(yù)后較差。,從早期RA患者的X線(xiàn)片分析，IgM-RF持續(xù)陽(yáng)性的病人更易發(fā)生骨侵蝕。IgA-RF在SS病人中陽(yáng)性率較高；IgE-RF在惡性關(guān)節(jié)炎病人中陽(yáng)性率較高。在RA病人，高效價(jià)RF存在并伴有嚴(yán)重的關(guān)節(jié)功能受限時(shí)，常提示預(yù)后不良。,注意事項(xiàng) 正常人也可有4左右的陽(yáng)性率。隨年齡增加，RF的檢出率會(huì)增加。RA病人RF也可陰性，不能單純依靠RF陽(yáng)性來(lái)診斷RA。RF還可見(jiàn)于其它多種疾病 ，其中最常見(jiàn)的是干燥綜合征（S.S）， 發(fā)生率在90以上，且含量一般較高。其它常見(jiàn)的RF陽(yáng)性的疾病有： SLE、系統(tǒng)性硬化癥、高球蛋白血癥、結(jié)節(jié)病、梅毒、麻風(fēng)、病毒感染、肝硬化等等。有些效價(jià)可在1：160以上，含量在80IU/ml以上，在解釋結(jié)果時(shí)應(yīng)予注意。,冷凝集試驗(yàn)（Cold agglutination test ) 冷凝集試驗(yàn)是用來(lái)檢測(cè)冷凝集素（cold agglutinin )的試驗(yàn)。肺炎支原體引起的原發(fā)性非典型肺炎患者血清中常會(huì)有冷凝集素。這是一種自身抗體，主要為IgM型，通常具有抗細(xì)胞I 抗原特異性，也有少數(shù)是抗P抗原的抗體。冷凝集素與患者紅細(xì)胞或“O”型人紅細(xì)胞在4條件下發(fā)生凝集反應(yīng)，在37則不能凝集紅細(xì)胞。,參考值 1：16 臨床意義 主要用于診斷支原體肺炎，一般效價(jià) 1：32或更高時(shí)，或雙份血清效價(jià)增長(zhǎng)4倍以上時(shí)有診斷意義。一般發(fā)病后一周效價(jià)升高，24周達(dá)高峰，6周以后逐漸下降或消失。 本試驗(yàn)無(wú)特異性，除肺炎支原體感染外，在冷凝集素病、慢性肝病、雷諾氏病、某些病毒感染以及少數(shù)惡性病患者也可檢測(cè)出冷凝集素。,注意事項(xiàng) 正常人也有低水平的冷凝集素。本試驗(yàn)敏感性不高，因此，懷疑肺炎支原體感染時(shí)可檢測(cè)抗肺炎支原體抗體，方法有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)；ELISA 等。,六. 冷球蛋白（Cryoglobulin CG，) 冷球蛋白是一種球蛋白，4時(shí)發(fā)生沉淀，30 易聚合，37又溶解。CG分為三類(lèi)： 1.I型(單克隆型)：大多為IgM或IgG 型，無(wú)抗補(bǔ)體作用。 2.II型(混合型)：兩種或兩種以上單克隆Ig混合，以IgM+IgG最常見(jiàn)，也可見(jiàn)IgA+ IgG；IgG+IgM+IgA等。有抗補(bǔ)體作用。 3. III型(多克隆型)： 沒(méi)有單克隆蛋白。 其檢測(cè)方法有血球壓積管法(定性)和分光光度計(jì)法(定量)。,參考值 定性法：陰性 定量法：80g/ml。 臨床意義 SLE 病人 血清 中可出現(xiàn)混合型CG。在血管炎、腎小球腎炎、淋巴細(xì)胞增生性疾病也可陽(yáng)性。在巨球蛋白血癥或多發(fā)性骨髓瘤病人伴雷諾氏現(xiàn)象時(shí)與I型冷球蛋白血癥有關(guān)。 II型冷球蛋白血癥與自身免疫病例如血管炎、腎小球腎炎、SLE、RA 和 SS 有關(guān)。在某些感染如肝炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、巨細(xì)胞病毒感染和弓形蟲(chóng)病也可出現(xiàn)。,注意事項(xiàng) 1. 標(biāo)本必須在37采集，并保持溫度直至進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 2. 一般不用于無(wú)冷球蛋白血癥臨床表現(xiàn)的人群過(guò)篩。 3. 冷凝集素可能引起某些自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀的錯(cuò)誤結(jié)果。,小結(jié): 總之，自身抗體的檢測(cè)對(duì)診斷自身免疫病有著重要的意義。人 血清 中存在著多種自身抗體，有器官特異性的，也有非器官特異性的。因此，在選擇自身抗體檢測(cè)時(shí)應(yīng)綜合考慮，合理選用。,胞漿抗體 Hep-2細(xì)胞具有許多胞漿抗原。如有特異性胞漿抗體存在，可出現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性胞漿熒光。包括抗線(xiàn)粒體抗體（AMA）、抗核糖體抗體、抗肌動(dòng)蛋白抗體即抗平滑肌抗體（ASMA）、抗高爾基體抗體、抗絲抗體（如Vimentin）。一般最有意義的是AMA和ASMA，可是熒光染色Hep2細(xì)胞卻不能鑒定這兩種抗體，可應(yīng)用鼠腎和鼠胃切片作進(jìn)一步分析。 、,系統(tǒng)性風(fēng)濕病活動(dòng)期的評(píng)價(jià) 自身抗體檢測(cè)以診斷全身性疾病比監(jiān)測(cè)該病活動(dòng)更有意義。但抗dsDNA抗體效價(jià)卻與活動(dòng)性有關(guān)。應(yīng)定期檢測(cè)抗dsDNA抗體的效價(jià)及C3、C4的含量。以及測(cè)定循環(huán)免疫復(fù)合物（CIC）的含量。ESR和CRP在炎癥反應(yīng)時(shí)常常升高。RA病情加重時(shí)，CRP明顯增高。SLE活動(dòng)期，CRP一般正常。,器官特異性自身免疫性疾病 組織抗體 許多自身抗體可采用IFA測(cè)定，用鼠腎和胃的切片能測(cè)出抗線(xiàn)粒體、平滑肌、肝腎微粒體和胃壁細(xì)胞的抗體。甲狀腺組織切片可測(cè)定抗甲狀腺自身抗體。,自身免疫性肝病 在肝臟病變中，ANA陽(yáng)性率可達(dá)40-80%?？咕€(xiàn)粒體抗體（AMA）與原發(fā)性膽汁性肝硬變有關(guān)。特別是高效價(jià)的M2和M9線(xiàn)粒體抗原。 約一半的自身免疫性肝炎的病人有較高效價(jià)的ASMA。此外，肝腎微粒體抗體（LKMAs），抗可溶性肝抗原（SLA）抗體，抗肝細(xì)胞膜抗體等也可用于自身免疫性肝病診斷和監(jiān)測(cè)。,其他 腎臟疾病常測(cè)定的抗體有抗dsDNA抗體，抗腎小球基底膜抗體等，還可測(cè)定CIC，以及作腎組織活檢進(jìn)行熒光染色。 韋格納肉芽腫病是一種發(fā)生于上下呼吸道的壞死性血管炎，也累及腎臟，病人常死于腎和肺衰竭。檢查抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCAs）是診斷指標(biāo)之一。也可通過(guò)ELISA測(cè)定抗髓過(guò)氧化物酶抗體，抗蛋白酶3抗體，有助于診斷和鑒別診斷。,胃腸道疾病中，惡性貧血與抗胃壁自身抗體有關(guān)，與抗內(nèi)因子抗體的相關(guān)性達(dá)75%?？挂葝u細(xì)胞抗體（ICAs），抗谷氨酸脫羧酶抗體（GADA）與I型糖尿病有一定關(guān)系。重癥肌無(wú)力病人可出現(xiàn)抗骨骼肌抗體。多發(fā)性肌炎和皮肌炎可有抗Pm1和抗Jo-1抗體?？剐募】贵w常見(jiàn)于心肌梗死、心臟手術(shù)或心肌損傷后。,