臨床常用免疫學檢驗

臨床常用免疫學檢驗 1. 免疫功能檢驗 體液免疫 細胞免疫 2. 感染免疫學診斷試驗 病毒性肝炎；AIDS;STD;其它傳染?。籆RP 3. 自身免疫病的檢驗 4. 腫瘤標志物檢驗,檢驗醫(yī)學與臨床醫(yī)學,檢驗醫(yī)學（laboratory medicine）是一門臨床學科，它運用不斷發(fā)展的自然科學和醫(yī)學科學技術對患者血液、尿液和各種體液標本進行檢驗，并以發(fā)展檢驗技術、提高檢驗質(zhì)量為重點，達到對患者疾病的診斷、病情觀察和預后判斷等目的。,（一）現(xiàn)代檢驗診斷特點 主要有：自動化和智能化。高質(zhì)量控制。微量化標本、多參數(shù)分析。流水線檢測和床邊檢測并存?；驒z測前景可喜。,（二）現(xiàn)代檢驗診斷面臨挑戰(zhàn) 雖然現(xiàn)代檢驗診斷的技術正在長足發(fā)展，但也面臨許多挑戰(zhàn)。表現(xiàn)在： 1如何選擇日益增多的檢驗診斷項目？ 2如何選擇有多種方法的檢驗診斷項目？ 3如何判斷檢驗診斷新項目的應用價值？ 4如何合理選擇檢驗診斷項目，降低檢驗診斷的費用？,二、循證檢驗醫(yī)學新世紀檢驗診斷高質(zhì)量發(fā)展的新天地,定義 循證醫(yī)學（evidence-based medicine，EBM）指：在對患者作出新的醫(yī)療決策的過程中，必須審慎、明確和明智地運用當前所能獲得的最佳證據(jù)。這里，“最佳證據(jù)”指不僅可以否定迄今已被視為臨床診斷或輔助診斷的“金標準”，并且其本身也可被未來的更準確、更有效新證據(jù)所取代。,目的 主要是：不斷弄清疾病的病因和發(fā)病危險因素的證據(jù)，為臨床診斷和預防提供最為可靠的依據(jù)。提高疾病的早期診斷率，繼而提高疾病的治愈率。改善患者的預后，提高患者的生存質(zhì)量。提高臨床醫(yī)療管理和決策水平。精選臨床檢查和治療方案，降低醫(yī)、患雙方的醫(yī)療費用，使患者得到最合理的臨床醫(yī)療服務。促進臨床醫(yī)學教學水平，培養(yǎng)業(yè)務精湛、醫(yī)德高尚的臨床醫(yī)學人才。,現(xiàn)行傳統(tǒng)醫(yī)學是以經(jīng)驗醫(yī)學為主，而 EBM則要求選用最新的、經(jīng)過臨床研究機構科學評價過的、更為準確的新證據(jù)，而不采用尚未經(jīng)過嚴格評價的、目前仍處于基礎醫(yī)學研究階段的所謂“新證據(jù)”。,概念：循證檢驗醫(yī)學（evidence- based laboratory medicine，EBLM）就是按照循證醫(yī)學“以當前最佳證據(jù)為基礎”的原則，用臨床流行病學的方法學規(guī)范檢驗醫(yī)學的研究、設計和文獻評價，其任務是向臨床醫(yī)師提供反映患者真實情況的檢驗證據(jù)。,循證醫(yī)學同樣也給檢驗醫(yī)學帶來了發(fā)展機遇。循證檢驗醫(yī)學要求檢驗醫(yī)師不僅向臨床醫(yī)師解釋檢驗項目的意義，而且要幫助他們選擇正確的檢驗項目，合理地利用實驗室資源。這是因為有時候臨床醫(yī)師并不一定熟悉這些新的診斷指標，相反，過多的檢查會提供一些不必要的信息和消耗不必要的費用，從而干擾診斷、治療和醫(yī)療經(jīng)濟的合理分配。檢驗醫(yī)師還必須使用綜合分析方法對診斷指標進行評價。,一些專家認為，目前應用的實驗室檢查項目，在臨床應用前并未給予充分的評價。Jaeshke等認為，判斷一項診斷試驗是否有用的最終標準是：試驗是否增加了有用的診斷信息。Burke認為,如果一項試驗主要用于篩檢，其敏感性一定要高，但易出現(xiàn)假陽性。任何新的檢驗只有在充分評價其可靠性、準確性后才能用于臨床實踐。而現(xiàn)實是，由于制造商的熱情提供試劑、臨床醫(yī)師和檢驗人員的欣然接受，許多新檢驗項目在未被評價充分之前，就已被積極的推向了臨床應用。,第一章 免疫功能檢驗 (Immunological Function Test) 免疫功能檢驗分為細胞免疫功能檢驗和體液免疫功能檢驗，對于了解患者的免疫狀態(tài)，以及細胞的各種功能，為深入研究和認識機體免疫系統(tǒng)的生理、病理改變，闡明某些疾病的發(fā)病機制和臨床診斷與治療將提供有利的信息。下面簡單介紹臨床常用的一些免疫檢驗項目。,一. IgG、IgA、IgM測定 免疫球蛋白（Immunoglobulin ，Ig) 是一組具有抗體活性的蛋白。存在于 機體的血液、體液、外分泌液及某些細胞的膜上，分為 IgG、IgA、IgM、IgD、和IgE 五類。其中 IgG、IgA、IgM 含量較多，一般應用單向免疫擴散法、免疫比濁法和速率散射比濁法測定。,參考值 依年齡、性別、地區(qū)等因素有差異。 IgG： 6.9416.18g/ L IgA： 0.68 3.78g/ L IgM： 0.60 2.63g/ L 臨床意義 1. Ig 含量減低：一種或多種Ig 水平減少，分原發(fā)性和繼發(fā)性。見于各種先天性或獲得性免疫缺陷病。繼發(fā)性常與免疫抑制劑應用、射線、蛋白質(zhì)丟失、營養(yǎng)不良等有關。也可見于細胞毒藥物治療后。,2. Ig含量增高： (1) 多克隆性增高，見于各種慢性感染、慢性肝病、某些自身免疫病，如 SLE、RA、SS等；也見于寄生蟲疾病、結節(jié)病等。 (2) 單克隆性增高，又稱 “M”蛋白，主要見于免疫增殖性疾病，如多發(fā)性骨髓瘤、重鏈病、輕鏈病，巨球蛋白血癥等。,注意事項 Ig水平與年齡、性別有一定的關系，Ig 含量因檢測方法不同而有差別，各地區(qū)參考值也不相同，在判斷結果時應綜合考慮。如有“M 蛋白”，可進一步作血清或尿液免疫電泳，檢測輕鏈和重鏈。,二. 血清總IgE測定 IgE為血清中含量極少的一種免疫球蛋白，與過敏性疾病和寄生蟲感染有關。目前檢測方法有多種，包括 ELISA、間接血凝試驗（indirect hemoagglutination assay IHA ）、 RIA、電化學發(fā)光法（electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA，）、IFA 等。 參考值 0.1-150IU/ml,臨床意義 1. IgE增高：見于IgE型多發(fā)性骨髓瘤、特應性哮喘、特應性皮炎、過敏性鼻炎、寄生蟲感染、熱帶嗜酸細胞增多癥、SLE、RA及某些霉菌病等。 2. IgE減低：一般無意義?？梢娪谠l(fā)性無丙種球蛋白血癥、惡性腫瘤及細胞毒藥物治療后。,注意事項 年齡、性別均可影響總IgE水平。一般男性高于女性；新生兒水平低，青春期水平最高，30歲以后逐漸下降。不同種族血清總IgE水平也有差別，混血人種比白人高34倍，黑人水平更高，黃種人水平也較高?？侷gE水平高不一定是過敏；過敏者總IgE也不一定高。因此，在評價總IgE結果時要考慮到以上因素。,三. 特異性IgE抗體（sIgE)的檢測 過敏患者的血清中存在著具有變應原特異性的IgE 稱之為特異性IgE,如對牛奶過敏者則有針對牛奶變應原的IgE；對蒿草花粉過敏者，則有針對該花粉的IgE，該抗體只能與該變應原特異性結合。,sIgE的測定在變態(tài)反應體外診斷中占有重要地位。在呼吸疾病中，過敏性哮喘，過敏性鼻炎，職業(yè)性哮喘等患者血清中均能檢出 sIgE。sIgE檢測方法有許多種，目前臨床上常用的有ELISA，F(xiàn)EIA，免疫印跡等。隨著sIgE測定技術的完善，此項測定已日趨商品化，開發(fā)了各種檢測系統(tǒng)，如CAP過敏原檢測系統(tǒng)，Master過敏原檢測系統(tǒng)，Px過敏原檢測系統(tǒng)等，這些測定系統(tǒng)包括了儀器、試劑、計算機軟件處理系統(tǒng)。國內(nèi)目前應用最多的是CAP檢測系統(tǒng)。,1.CAP檢測系統(tǒng) 原理CAP，一個很小的塑料帽狀物，其內(nèi)置有多孔性、彈性和親水性的纖維素粒，此粒多孔，吸咐了更多的變應原，加入血清，血清中的sIgE就會和變應原結合，再加入酶標抗人IgE，再加入熒光顯色系統(tǒng)，在熒光分光光度計上測定熒光強度，計算機提供相應軟件，自動計算出結果。報告sIgE含量。,適應征 （1）臨床懷疑過敏性疾病，支氣管哮喘等； （2）不適宜作皮內(nèi)試驗的患者； （3）脫敏治療的病人觀察療效。 （4）抗組胺等對癥治療藥物影響皮膚反應者； （5）皮試可能發(fā)生危險者；,（6）不能用于皮試的變應原 ，如毒素，非水溶性或高度致敏性物質(zhì)； （7）食物過敏，皮試結果不可靠者。 （8）皮試結果可疑者。 方法 RAST FEIA 參考值CAP系統(tǒng)結果報告。一般報告sIgE含量。單位ku/L。正常人0.35ku/L，為陽性。sIgE的分級標準見表。,表1. 特異性IgE的分級標準 _ RAST分級 sIgE含量(ku/L) sIgE水平 臨床意義 O 100 特高（III） 特別嚴重之 過敏 _ 例如：報告格式：sIgE（d1）81.3ku/L（級） 其中 d1代表屋塵螨。每一過敏原均有代號，可查閱相關資料,臨床意義 sIgE測定是體外檢測變應原的重要手段。其試驗的靈敏度及特異性都很高、特別是對花粉、螨類、寵物皮屑、牛奶、雞蛋、堅果等變應原的sIgE測定，靈敏度和特異性都在90以上，有的甚至接近100。根據(jù)sIgE含量可確定患者 變應原 種類，可評價患者過敏狀態(tài)，脫敏治療的療效，對哮喘的診斷和鑒別診斷有重要幫助。CAP吸咐變應原有單價，有多價，如多價霉菌，多價食物（Fx5E，含6種食物過敏原），多價羽毛等，多價變應原陽性后，再進一步確定單個變應原成分。,注意事項 （1） 有明顯的地域性，該法所使用的均系進口產(chǎn)品生產(chǎn)國的與我國的不一定完全符合。我國常見的 變應原 ，國外不一定有。因此，評價結果應注意區(qū)別。,（2）某些小分子的變應原 ，sIgE測定的靈敏度不高，如青霉素降解物，對這些變應原 ，如測不出sIgE并不除外過敏的可能性。,（3）要結合臨床癥狀，體格檢查，常規(guī)化驗，當?shù)氐膶嶋H條件，體內(nèi)試驗以及體外試驗的結果綜合考慮，才能得出比較正確的結論。,2.吸入物變應原過篩試驗（phadiotop）。 原理 呼吸道變態(tài)反應病在臨床上很常見，有些病很難從臨床上區(qū)別是否過敏，如過敏性鼻炎和血管運動性鼻炎的臨床表現(xiàn)相似，外源性哮喘和內(nèi)源性哮喘也有共同之處；在臨床工作中首先要區(qū)別是否屬于過敏范疇。 血清總IgE測定作為過敏性疾病的過篩試驗曾得到廣泛應用，但其特異性、敏感性均不高，總IgE高并不一定是過敏，過敏者的總IgE水平也不一定高。過敏與否取決于sIgE的存在。,phadiotop是根據(jù)變應原吸附原理，將空氣中90以上的最為常見的變應原吸咐到CAP上?；颊哐逯兄灰嗅槍ζ渲兄环N變應原的sIgE，即可呈陽性反應。據(jù)此可測知患者是否為吸入物變應原過敏者。,與sIgE測定不同的是所用CAP為特制的，內(nèi)含多種吸入物變應原。結果報告不是含量，而是比值，即待測血清吸光度與參考血清吸光度之比。 參考值 正常人為陰性，當待測血清吸光度大于參考血清吸光度時報告為陽性。根據(jù)比值，可將 phadiotop 陽性者分為四個等級。弱陽性1；陽性2；強陽性20；特強陽性40。,臨床意義 陽性結果可視為多種sIgE的總和，比值越大，表明體內(nèi)sIgE越多，這可能是某一種變應原的sIgE很高，也可能是多種變應原sIgE累加的結果。,注意事項 phadiotop中未包括律草花粉及蠶絲，這兩種在我國都是很重要的變應原，如患者只對律草花粉或蠶絲過敏，phadiotop則為陰性。但如果同時還合并有其它 變應原過敏，phadiotop仍為陽性。phadiotop陽性只說明患者對常見的空氣中的 變應原過敏，但對何種變應原過敏，仍需進一步檢查。phadiotop作為過篩實驗，可篩出非過敏的患者，以免進行不必要的特異性變應原檢查。由于phadiotop中包被的是國外的抗原，有時臨床診斷與phadiotop結果有不符的個別現(xiàn)象發(fā)生。,四. 血清補體測定 補體（Complement )是血清中的一組具有酶活性的蛋白。它由20多種蛋白組成。當機體受到病原微生物侵襲時，在抗體的存在下，補體參與滅活 virus 或殺死 bacteria 的免疫反應。在自身免疫病中，complement 也能參與破壞自身組織或細胞而造成免疫病理損傷。測定血清中補體活性或其單一補體成分含量，對于許多疾病的診斷和鑒別診斷、療效觀察以及發(fā)病機理的研究都有一定的臨床意義。,(一) 總補體活性測定（50% hemolytic unit of complement， CH50) Complement 可使溶血素 (抗體) 致敏的 SRBC 裂解而發(fā)生溶血，補體活性與溶血程度呈正相關。根據(jù)產(chǎn)生50%溶血所需要的最小補體量，可計算出血清總補體的活性。,參考值 75160 U/ml 臨床意義 .增高：常見于各種急性炎癥、組織損傷、心肌梗死和某些惡性腫瘤等。 .降低：見于各種免疫復合物性疾病，如SLE、急、慢性腎小球腎炎、自身免疫性溶血性貧血。也可見于病毒性肝炎、DIC、蛋白丟失性腸病、嚴重灼傷、急性粒細胞性白血病等。,注意事項 待測血清需新鮮、無溶血。測定方法有試管法、微量板法，近來又有生化儀器法等。不同方法具有不同的參考值。,(二) 補體C3測定（Complement 3 ，C3) C3為補體系統(tǒng)各組分中含量最高的組分，是激活補體傳統(tǒng)途徑與旁路途徑的關鍵成分。檢測方法主要有RID、免疫比濁、速率散射比濁等。 參考值 0.8-1.55g/L,臨床意義 1. C3增高：見于某些急性炎癥或傳染病早期以及某些惡性腫瘤等。 2. C3降低：見于SLE、RA、急性腎小球腎炎、肝臟疾病、冷球蛋白血癥等。狼瘡腎炎時血清中C3含量降低，當病情好轉(zhuǎn)時，含量恢復正常。,(三), 補體C4測定（Complement 4 ，C4) C4是一種多功能的1-球蛋白，也是補體系統(tǒng)中的主要成分。在補體傳統(tǒng)活化途徑中發(fā)揮重要作用。裂解后的產(chǎn)物在補體的活化、促進吞噬、防止免疫復合物沉著和中和毒素等方面發(fā)揮很大作用。檢測方法同C3測定。,參考值 0.160.47g/L 臨床意義 1. 升高：見于風濕熱的急性期、結節(jié)性動脈周圍炎、皮肌炎、心肌梗死、Reiter綜合征和各種類型的關節(jié)炎。 2. 降低：見于自身免疫病，例如：SLE、RA、慢性活動性肝炎、多發(fā)性硬化癥、IgA型腎病等。在SLE，C4含量下降明顯，并較C3下降為早。,五.循環(huán)免疫復合物（Circulating immunocomplex ， CIC,) CIC是體內(nèi)游離抗原與抗體相結合的產(chǎn)物。復合物可分大、中、小三類。大的復合物(19s) 可被吞噬細胞吞噬去除；中等復合物(約等于19s )存在于局部病變部位，如腎基膜、皮膚基底膜、血管內(nèi)膜和關節(jié)滑膜等；只有小的復合物(19s)游離于血液、體液中，為一種可溶的CIC。CIC測定對免疫復合物病、自身免疫病以及肝病的診斷、療效觀察、預后判斷均有重要意義。,檢測方法有多種，如聚乙二醇沉淀法、C1q結合法等。 PEG可引起蛋白沉淀，蛋白分子愈大沉淀所需 PEG 濃度愈小。CIC分子量較大，且抗原-抗體結合后發(fā)生構型改變，而被低濃度PEG從液相中析出，PEG還抑制CIC解離，促使CIC聚合成更大的凝聚物而被沉淀，用分光光度計在波長450nm處測定吸光度。計算出濁度值，可知CIC的存在和含量。,參考值 PEG沉淀法： 10U/ml 臨床意義 1. CIC陽性常見于自身免疫病如SLE、RA等，也可見于血清病、慢性活動性肝炎、細菌感染、傳染病、惡性腫瘤等。 2. 動態(tài)檢測CIC的變化，可監(jiān)測疾病的發(fā)展、判斷療效及預后。,注意事項 參考值依方法不同而有差別，此法快速簡便，但特異性較差，只適于篩查。低密度脂蛋白可引起濁度增加，故應空腹取血。高球蛋白血癥及標本反復凍融易造成假陽性。,六. T淋巴細胞亞群（T cell subpopulation )測定 T cell 因功能不同可將其分為若干亞群，如T輔助/誘導細胞；T抑制/細胞毒性細胞等。也可根據(jù)T細胞表面分化抗原(CD)不同劃分為相應的亞群，如CD3；CD4；CD8等。同一CD表型的細胞功能可能不同。如CD8細胞中既有T抑制細胞，也有細胞毒性T淋巴細胞。T細胞各亞群的相互協(xié)調(diào)，穩(wěn)定地調(diào)節(jié)著機體的免疫應答反應。,應用抗CD抗原的單克隆抗體，如抗CD3、抗CD4、抗CD8等，對外周血單個核細胞進行檢測，依據(jù)各單抗的陽性率，判定各T cell 亞群，并算出CD4/CD8的比值。測定方法有 IFA、IEA、APAAP法、流式細胞儀法等。,參考值（IFA法）總T細胞（CD3+）53-88%；CD4+細胞32-60%；CD8+細胞20-40%。CD4+/CD8+1.5-2.0。 （流式細胞儀法） 總T細胞（CD3+）955-2860/l；CD4+細胞27-51%，550-1440l；CD8+細胞15-44%，320-1250l。CD4+/CD8+0.64-2.85。,臨床意義 T cell 亞群在許多臨床疾病中可發(fā)生異常改變，特別是免疫功能受損病人。測定T cell亞群變化對了解疾病的發(fā)病機制、指導臨床治療、控制疾病的發(fā)生發(fā)展均有重要意義。,1. 在自身免疫病中，如SLE、RA、自身免疫性溶血性貧血，以及乙型肝炎病人常表現(xiàn)為CD8細胞的數(shù)量及功能低下，有時也有CD4細胞增高，CD4+/CD8+比值升高。,2. 免疫缺陷病患者CD4+/CD8+比值減少，如AIDS病人，CD4+顯著減少，常出現(xiàn)CD4+/CD8+比值倒置。常作為HIV感染者的監(jiān)測指標。,3. 感染性疾病患者免疫抑制功能增強，表現(xiàn)為CD8+細胞的數(shù)量及功能都異常增高。病毒感染時，CD3+、CD4+細胞減少，CD8+細胞增多，CD4+/CD8+比值降低。,4. 腫瘤病人CD3+，CD4+細胞明顯減少，CD8+明顯增加，CD4+/CD8+比值明顯下降。據(jù)此，可了解機體的免疫狀態(tài)，指導免疫調(diào)節(jié)劑及治療藥物的應用。,5. 支氣管哮喘病人，在過敏原激發(fā)后，外周血CD4+ T 細胞迅速降低，支氣管肺泡灌洗液中CD3+、CD4+、CD8+ T 細胞則增高。過敏性鼻炎患者CD3+、CD4+、CD8+ T 細胞均比正常人低。,6. 血液系統(tǒng)疾病 T cell 亞群也有相應變化，如再生障礙性貧血、粒細胞減少癥時CD4+細胞減少，CD8+細胞增多，CD3+/CD8+ 比值下降。,注意事項 T cell 亞群檢測方法很多，參考值也不盡相同，在判斷結果時要全面考慮，結合臨床及其他檢查。此外，利用上法也可測定B細胞、NK細胞等。流式細胞儀法，B細胞絕對值為 90-560/l，百分數(shù)為 5-18%，NK細胞絕對數(shù)為 150-1100/l，百分數(shù)為 7-40%。華人較其他種族有較高的NK細胞值。,七. 細胞因子（Cytokine ，CK )及其受體（receptor )測定 CK是由多種細胞產(chǎn)生的免疫功能調(diào)節(jié)因子，其中主要包括：淋巴因子（Lymphokine ，LK)，單核因子（Monokine ，MK)以及其他由非淋巴細胞及非單核細胞產(chǎn)生的CK。白細胞介素（Interleukin ，IL)是體內(nèi)一大類細胞因子。,CK在調(diào)節(jié)機體的免疫功能方面發(fā)揮著重大作用。新的CK不斷被發(fā)現(xiàn)。各種CK需與各自的 receptor 特異結合才能起作用。CK受體存在于被作用的細胞膜上或細胞質(zhì)內(nèi)，目前所知不是太多。迄今所發(fā)現(xiàn)的CK近百種，其中多數(shù)仍處于研究和探索階段。,檢測CK及其 receptor 的產(chǎn)生和免疫細胞對其反應能力，可以了解淋巴細胞及其他細胞的免疫功能。目前臨床上用于測定CK及其受體的方法有生物活性測定法、RIA法和ELISA等，并且已有試劑盒供應。如IL2、IL4、IL6、IL8、TNF、干擾素、粒細胞集落刺激因子(GCSF)、促紅細胞生成素(EPO)等等。,近來，DNA分析法已經(jīng)用于CK的研究，應用分子雜交法檢測CK的基因；應用PCR技術測定CK的mRNA表達等。目前，利用PCR技術已建立了定量測定TGF、IL2、IL1、TNF等CK的方法。,（四）寄生蟲病的檢測 1、豬囊蟲抗體測定 Cysticercosis（囊蟲病）又稱Cysticercosis Celluosae（豬囊尾蚴?。?是人和豬共患的一種寄生蟲病。又分為肌肉型、中樞神經(jīng)型等。主要檢測方法有ELISA、IHA（間接血凝試驗）等。用以檢測病人體內(nèi)特異性IgG抗體。對臨床診斷及血清流行病學調(diào)查均有實用價值。,參考值一般陰性 ELISA： P/N 2.1 臨床意義 囊蟲IgG抗體陽性，多見于腦囊蟲病?？勺?血清 和腦脊液囊蟲抗體檢查。應結合臨床表現(xiàn)和CT、核磁檢查結合作出判斷。,2、血吸蟲抗體測定 日本血吸蟲病早期宿主對血吸蟲可發(fā)生特異性免疫反應。 血清 中產(chǎn)生IgM, IgG, IgE抗體。IgM, IgE抗體陽性可作為日本血吸蟲病的早期診斷指標。IgG抗體陽性表明病人處在恢復期?？贵w檢測有助于臨床診斷和流行病學研究，主要方法有ELISA、乳膠凝集試驗、環(huán)卵沉淀試驗等。 參考值陰性 ELISA：P/N 2.1 臨床意義 （1） 血清 中IgM抗體陽性提示疾病處于早期。 （2） 血清 中IgG抗體陽性表示疾病處于恢復期，P/N值的大小表示抗體效價的高低，部分患者感染后IgG抗體可持續(xù)數(shù)年。,注意事項 血吸蟲抗體的將測可以達到診斷病人的目的，但不能區(qū)分血吸蟲現(xiàn)癥病人和過去感染者，早期慢性和晚期血吸蟲病患者，未治愈的血吸蟲病人及新感染和既往感染的混合病人。此外用于考核療效尚不夠理想。目前，不少學者應用單克隆抗體ELISA檢測循環(huán)抗原用于診斷和考核療效。但仍存在不少問題，仍需改進。,3、肝吸蟲抗體測定 肝吸蟲病又稱華支睪吸蟲病，是由華支睪吸蟲寄生于人體肝膽管內(nèi)所引起的寄生蟲病。主要依靠臨床流行病學、病原學檢查、免疫學檢查結合臨床表現(xiàn)作出診斷。因病原學檢查受到排卵量和排卵規(guī)律的影響，以及受所用方法敏感性的限制，很難查到蟲卵。因此應用免疫學診斷具有重要意義。宿主感染華支睪吸蟲后，在抗原刺激下，誘發(fā)產(chǎn)生特異性抗體，主要是IgM, IgA, IgE和IgG。一般抗體檢出時間均明顯早于糞便中蟲卵出現(xiàn)的時間。檢測肝吸蟲抗體方法主要有皮內(nèi)試驗、ELISA、IFA等。,參考值陰性 ELISA：P/N 2.1 臨床意義 目前所查多為IgG抗體，P/N 2.1為陽性。數(shù)值越大，表明患者體內(nèi)抗體效價越高，表明患者為華支睪吸蟲感染。如能測到IgM抗體，對于早期診斷有很大幫助。如有可能，可檢測循環(huán)抗原以考核療效和早期診斷。,4、肺吸蟲抗體測定 肺吸蟲病又稱并殖吸蟲病，是由并殖吸蟲引起的自身免疫源性疾病。臨床表現(xiàn)多種多樣，可分肺型和肺外型。診斷主要結合流行病學。臨床癥狀及實驗室檢查。其中免疫學檢查對臨床診斷有很重要意義。人感染肺吸蟲后，可出現(xiàn)抗肺吸蟲抗體，以IgG型為主。 血清 中IgE水平也可升高。IgM、IgE型抗體檢方法主要有ELISA、IFA、皮內(nèi)試驗等。 參考值陰性 ELISA：P/N 2.1,臨床意義 抗體陽性表明患者為肺吸蟲感染者，結合其他檢查和臨床表現(xiàn)可作出診斷。在判斷結果時應該注意。其它寄生蟲病，如血吸蟲病、囊蟲病與此有輕度的交叉反應。此外還可應用雙抗體夾心ELISA法檢測循環(huán)抗原用于診斷和流行病學調(diào)查。目前應用尚不廣泛。,自身免疫病（AID)是指由于過度而持久的自身免疫反應導致組織器官損傷并引起相應器官病變或臨床癥狀的一類疾病。風濕病是一類涉及到關節(jié)、軟骨、肌肉等結締組織的慢性疾病。,實驗室檢查特別是免疫學檢查對AID和風濕病的診斷是及其重要的。 有些檢查可作為診斷指標之一； 有些檢查可作為病情進展和預后判斷的監(jiān)測指標； 有些檢查可作為藥物療效的考核指標之一。,隨著免疫學技術的發(fā)展以及分子生物學的應用，各種自身抗體的檢查越來越多地應用于臨床。作為臨床醫(yī)生，應該熟悉這些檢驗的意義，并能結合臨床及其他檢查，客觀地運用這些指標，協(xié)助診斷，了解病情，指導治療。這里僅介紹臨床常用的一些自身抗體的檢測。,1.抗核抗體測定 （Antinuclear antibody ,ANA) ANA是抗細胞核多種成分的自身抗體，無種屬及器官特異性。ANA可分為抗DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗非組蛋白抗體、抗核仁抗體及其他細胞成分抗體。這些抗體共同組成ANA譜。,抗核抗體（ANA）的檢查最常用于篩查全身性風濕病和自身免疫病。ANA的檢查可觀察到能與細胞核內(nèi)的核酸和蛋白抗原起反應的自身抗體。細胞內(nèi)可能存在對多種抗原起反應的抗體。只有某種抗體的效價很高時，IFA才能加以鑒別。,homogenous（均質(zhì)型） 又稱彌散型，相應的抗原是雙鏈DNA和組蛋白復合物。常見于SLE，特別是腎臟受累病人。也可見于其它結締組織病，如：風濕性關節(jié)炎，MCTD，干燥綜合征，硬皮病，慢性活動性肝炎及原發(fā)性膽汁性肝硬變。 Peripheral(周邊型) 相應的抗原為雙鏈DNA，多見于活動性SLE病人。,Speckle(斑點型) 主要是針對ENA的抗體，包括Sm，RNP，SSA，SSB，Scl-70。一般認為低效價的斑點型ANA不是結締組織病特有的，實際上不代表臨床異常。高效價的抗Sm抗體多與SLE有關。高效價的抗RNP自身抗體見于MCTD，但也見于SLE?？筍SA和抗SSB抗體，見于S.S，也可見于SLE。當病人有抗SSA抗體時，通常以皮膚表現(xiàn)和光過敏為主。，也存在于ANA陰性狼瘡和新生兒狼瘡。Scl-70抗體與硬皮病有關。,Nucleoli(核仁型) 其靶抗原是與RNA分子相關的核蛋白。多見于硬皮病。 Centromere(著絲點型) 抗著絲點抗體（ACA），多見于全身性硬皮病的CREST綜合征。,常用檢測方法為IFA、ELISA、免疫印跡法、RIA、免疫斑點法、膠體金標斑點免疫滲濾法等。其中IFA是應用較廣的一種方法。一般采用鼠肝切片或Hep-2細胞為底物抗原片，當加入病人血清時，病人血清中的ANA可與細胞中相應抗原成分結合。再加入熒光標記抗人IgG，在熒光顯微鏡下可見細胞核內(nèi)亮綠色熒光。,參考值 1:10或陰性 臨床意義 NA陽性見于多種疾病，常用于風濕病及自身免疫病的診斷。SLE患者陽性率在95以上，且效價常在1：80以上。在其他風濕病如RA、系統(tǒng)性硬化癥、皮肌炎、干燥綜合征 (SS)、混合結締組織病(MCTD)等也可陽性。其他如肝病，病毒感染等也可呈低效價陽性。,注意事項 在大約1%的正常人的體內(nèi)可測到低效價的非特異性抗核抗體，80歲以上老人的檢出率可高達50%。高效價的ANA一般與活動期SLE密切相關。采用Hep-2細胞檢測ANA，可見到不同的染色模型。 此外，口服避孕藥的婦女也可檢測到ANA。,二.可提取性核抗原（Extractable nuclear antigen ENA)抗體 ENA是細胞內(nèi)許多小分子的RNA和多肽組成的非組蛋白的酸性核蛋白顆粒。分布在細胞質(zhì)中的稱為小細胞漿核糖核蛋白(scRNPs)；分布在細胞核內(nèi)的稱為小細胞核核糖核蛋白(snRNPs)。目前已發(fā)現(xiàn)的有20余種，其中常用的抗ENA抗體有如下幾種。,（一）抗Sm抗體 Sm是病人Smith的縮寫。Sm抗原屬于SnRNP，由5個RNA和多肽組成，抗原表位在29KD、28KD和13.5KD多肽上，抗Sm抗體是酸性糖蛋白，是SLE的標記抗體。,(二) 抗nRNP(u1RNP)抗體 u1RNP是u1RNA和蛋白質(zhì)組成的，抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上，是MLTD的重要血清標志。,（三）抗SSA抗體 SS為干燥綜合征的縮寫。此抗體又稱抗RO抗體。SSA抗原是RNA和蛋白質(zhì)復合物，抗原表位在52KD多肽上，主要見于原發(fā)性干燥綜合征患者及SLE。,（四）抗SSB抗體 SSB抗體常伴隨SSA抗體同時出現(xiàn)，又稱抗La抗體，SSB抗原屬于SnRNP，是含有RNA和50KD蛋白質(zhì)的復合物?？乖砦辉?5KD、47KD和48KD多肽上。與SSA抗體并存對診斷SS有特異性。,（五）抗Scl-70抗體 Scl-70抗原表位在86KD、70KD的片段上，是DNA拓撲異構酶I的降解產(chǎn)物，抗Scl-70抗體幾乎僅見于硬皮病，陽性率30%左右。,（六）抗Jo-1抗體 Jo-1抗體是組氨酰tRNA合成酶，抗原表位在55KD多肽，抗Jo-1抗體是多發(fā)性肌炎和皮肌炎的標記抗體，陽性率25-40%。,（七）抗核糖體抗體 核糖體在核仁合成，然后轉(zhuǎn)入胞漿，抗原表位在大亞基上的38KD、16KD和15KD多肽上。抗核糖體抗體陽性主要見于SLE，陽性率20-30%。,檢測以上抗體的方法主要有：對流免疫電泳法(CIE)、雙相免疫擴散法，免疫印跡試驗(IBT)，免疫斑點技術和ELISA法等。一般采用兔胸腺或牛胸腺提取物或細胞提取物作為抗原。近年來，應用分子重組抗原制備的試劑盒已投入市場。,參考值陰性 臨床意義 1. 抗n RNP抗體：見于3540的SLE病人，在MCTD病人中陽性率可達95100，也可見于其他風濕性疾病。 2. 抗Sm抗體：主要見于SLE及重疊綜合征，急性期病人75為陽性。一般SLE患者3040陽性率。但Sm抗體陽性者90以上為SLE，故稱之為SLE的標記抗體。,3. 抗SSA和抗SSB抗體：見于4045的SS病人。抗SSA抗體也可見于25的SLE病人及其他風濕性疾??；抗SSA抗體與新生兒狼瘡和先天性傳導阻滯有關。抗SSA抗體也可見于病毒感染等非風濕性疾病?？筍SB抗體對原發(fā)性干燥綜合征較特異，但陽性率僅27左右。,4. 抗Scl-70抗體：一般僅見于系統(tǒng)性硬化癥病人，陽性率2060。 5.抗Jol-1抗體見于30的多發(fā)性肌炎病人及10的皮肌炎病人。抗Jol-1抗體與多發(fā)性肌炎病人間質(zhì)性肺炎的發(fā)生率增加有關。 6.抗rRNP 抗體：主要見于SLE患者，陽性率20%左右，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變有關，多在疾病活動期出現(xiàn)。,注意事項 判斷試驗結果時要結合臨床表現(xiàn)作出評價，也應根據(jù)試驗方法來作出解釋。對流免疫電泳法和雙相擴散法敏感性低，但特異性較高；免疫印跡法、斑點免疫法及ELISA方法敏感性提高，但特異性相對減少。,三.抗雙鏈DNA抗體（Antidouble-stranded DNA ， A-dsDNA，) A-dsDNA 對SLE有高度特異性，是針對細胞核脫氧核糖核酸的自身抗體。臨床上常用的檢測方法有：Farrs法：125IDNA與待檢標本中的A-dsDNA形成免疫復合物，加飽和硫酸銨使復合物沉淀，以計數(shù)器分別測定上清中游離及沉淀物中已結合的125IDNA含量，可計算出 血清中AdsDNA的結合活性。,ELISA法：將小牛胸腺DNA包被在微孔板中，加入病人血清 ，如有A-dsDNA則結合到微孔板上，加入酶標抗人IgG，加入底物顯色后經(jīng)酶標儀比色可知血清中A-dsDNA抗體的量。,免疫熒光法：采用馬疫錐蟲或短膜蟲作為基質(zhì)，加入病人血清 。血清中的A-dsDNA與膜上的天然DNA結合，加入熒光標記抗人IgG。馬疫錐蟲和短膜蟲的動基體會發(fā)出綠色熒光。 金標斑點法：雙鏈DNA包被于硝酸纖維膜上，加入病人血清 ，加入金標記抗人IgG，如有A-dsDNA存在，會顯示紅色斑點。,參考值依方法不同參考值也有不同。 Farrs法： 0.20 免疫熒光法：1:10 ELISA法：依試劑盒而定，一般70u 金標法：陰性,臨床意義 A-dsDNA 陽性對 SLE 有較高的特異性。大約60的活動性 SLE 病人會出現(xiàn) A-dsDNA。其他風濕性疾病也會出現(xiàn)，但陽性率非常低，如RA、S.S。 注意事項 假陽性結果非常少見，但陰性亦不能排除SLE的診斷。,四.抗中性粒細胞胞漿抗體（ Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA) 測定 ANCA是針對中性粒細胞胞漿多種成分的 自身抗體，主要有髓過氧化物酶(MPO)和蛋白酶3（ Proteinase 3 ，PR3)的抗體 。主要用于診斷Wegener 肉芽腫和系統(tǒng)性血管炎，特別是伴有腎病、呼吸疾病或其他類型血管炎引起多器官損害的患者。檢測方法有IFA、ELISA、 IBT等。,參考值 陰性。 臨床意義 免疫熒光法檢查ANCA陽性一般分為兩種熒光類型，一種是胞漿型，稱為cANCA，一種是核周型，稱為pANCA。cANCA產(chǎn)生彌漫性細胞漿染色，是針對PR3的抗體 ，一般見于wegener肉芽腫病(WG)，特別是腎和肺受累的病人。pANCA產(chǎn)生核周染色，是針對MPO的抗體 ，主要見于系統(tǒng)性血管炎病人。,在WG病人中，cANCA陽性率在活動期可達80，且有較高的抗體效價。在緩解期抗體陽性率低，且效價下降，或完全消失。,注意事項 ANCA 陽性也可見于 Good-Pastares 綜合征和SLE病人。WG的診斷不能單純依賴ANCA的結果，還要結合其他臨床表現(xiàn)，試驗室檢查和組織病理學檢查才能確定。ANCA效價不能完全反應疾病的活動以及對治療的反應。,pANCA 陽性不是特異性的抗MPO抗體，也可以是抗粒細胞胞漿中其他酶的抗體，如彈性蛋白酶，組織蛋白酶G等。ANCA檢測應注意排除其他自身抗體的交叉反應，如ANA。因其可產(chǎn)生假陽性應注意鑒別，并進行ANA檢測。,五.抗線粒體抗體（Antimitochondrial antibody,AMA) AMA是以細胞漿中的線粒體為抗原的一種自身抗體，無器官和種屬特異性。一般采用大鼠腎及胃作為抗原基質(zhì)，采用IFA檢測，陽性可見大鼠腎和胃的細胞漿呈現(xiàn)細顆粒狀熒光。,采用免疫印跡法可將與線粒體抗原的反應分為從M1到M9九種類型，高效價的M2和M9型自身抗原與原發(fā)性膽汁性肝硬變相關。目前已有檢測M2的ELISA試劑盒供應。,參考值 陰性 1：10 為陽性 臨床意義 AMA是原發(fā)性膽汁性肝硬化的標記 抗體，陽性率達90%，并且50%患者 抗體效價達1：1280或更高。此外，也可見于慢性活動性肝炎、隱匿性肝硬化。肝外阻塞性黃疸患者AMA常陰性，因此可作為鑒別診斷的一個指標。正常人中陽性率10%，且效價較低。,六.抗平滑肌抗體（Antismooth muscle antibody，ASMA ) ASMA是抗肝細胞膜上一種肌動球蛋白的自身抗體。這種肌動球蛋白與平滑肌有交叉抗原性，因此與平滑肌有反應。一般采用IFA法，以大鼠胃作為抗原基質(zhì)，陽性可見胃壁平滑肌呈現(xiàn)亮綠色熒光。,參考值 陰性，1：10為陽性 臨床意義 主要見于明顯活動期的自身免疫性肝炎患者，陽性率在80%以上，效價 在1：80以上。急性病毒性肝炎早期ASMA也可陽性，且早于 HBsAg出現(xiàn)。其他疾病如傳染性單核細胞增多癥、SS、RA、支原體肺炎、腫瘤和病毒感染者也有不同程度的陽性率。正常人中僅有2%陽性。,七. 抗甲狀腺球蛋白抗體（ATGA)和抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA) ATGA 是由甲狀腺炎引起的自身抗體 ，抗原是一種糖蛋白。ATGA有器官特異性而無種屬特異性。ATMA 的抗原是甲狀腺濾泡上皮細胞胞漿內(nèi)的脂蛋白。常用檢測方法有：IFA、IHA、RIA、ELISA等。,參考值 IHA： 血清效價 1：32， 1：32為陽性，ATGA 和ATMA ELISA：正常為陰性，P/N 2.1 為陽性, ATGA 和 ATMA RIA：ATGA 30%；ATMA 15%,臨床意義 主要見于橋本甲狀腺炎、甲亢、甲低患者，也可見于甲狀腺瘤、惡性貧血、重癥肌無力、Edison 病和肝臟疾病等。SLE及其他自身免疫病也有一定的陽性率。,正常人也可檢出這兩種抗體 ，并且隨著年齡的增長，陽性率增加，特別是40歲以上婦女，可達18%左右。 應該注意到，有的患者ATGA陰性，但ATMA陽性，因此兩種 抗體同時檢測可提高抗甲狀腺自身抗體的檢出水平。,八. HLAB27測定 HLAB27 抗原為人類MHC I類 抗原B位點的表達產(chǎn)物，可分為幾種亞型。HLA B27的檢測方法有多種，補體依賴性微量細胞毒法(CDMA)；流式細胞儀法；玫瑰花法；ELISA法；等電聚焦法等。近來應用PCR法檢測HLAB27，敏感而特異，并且可進行B27亞型的分析。,參考值 非洲美洲人：34%； 高家索人：68%； 亞洲人：1%。,臨床意義 強直性脊柱炎(AS)患者HLAB27陽性率為9095%。大約42%的青年類風濕關節(jié)炎(JRA)存在HLAB27，Reiters 綜合征患者陽性率大約79%。此外，腸病性關節(jié)炎、銀屑病性關節(jié)炎也有一定的陽性率。RA病人陽性率不高。,注意事項 在評價HLAB27陽性結果時應結合臨床表現(xiàn)綜合考慮，不能單純依靠此結果作出診斷。,其他自身抗體及檢測,C反應蛋白（C-Reactive Protein，CRP ） CRP是一種急性時相蛋白，由肝細胞合成，可與肺炎球菌細胞壁C多糖發(fā)生沉淀反應，故稱CRP。在各種炎癥的急性期或組織創(chuàng)傷時，血清CRP濃度急劇升高。CRP不僅可結合多種細菌（ bacteria ）,真菌(fungi)及原蟲（protozoal)體內(nèi)的多糖物質(zhì)，而且在鈣離子存在下，還可以結合磷脂酰膽堿和核酸。結合后的復合體具有激活補體(complement)的作用。,常用檢測方法為 單相免疫擴散（single immunodiffusion test）、 乳膠凝集實驗（latex agglutination test )、 火箭電泳法（rocket immunoelectrophoresis )、 酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA)、 速率散射比濁法（rate nephelometry）等。,參考值 8mg/L 臨床意義 血清CRP 升高多見于：急性、慢性細菌感染；組織損傷壞死；急性心肌梗死；各種炎癥；外科手術；腫瘤浸潤；急性風濕熱和活動性類風濕關節(jié)炎，以及其它關節(jié)炎性疾病。但病毒性感染一般CRP不升高，因此可作為病毒性感染和細菌性感染的鑒別指標。,注意事項 CRP測定方法不同，在判定結果時應予考慮。此外，雌激素、口服避孕藥可使CRP增高，皮質(zhì)激素和抗炎藥可使CRP下降。,附：超敏C反應蛋白 （High Sensitivity C Reactive Protein，HS-CRP） CRP是一種急性期血漿蛋白，在組織損傷、炎癥和感染時可快速增加。CRP是由肝細胞分泌的，它的合成受細胞因子（Cytokine）調(diào)節(jié)，特別是IL-6。,近年研究證實 CRP 濃度與血管內(nèi)皮功能障礙相關聯(lián)。動脈內(nèi)的炎癥引發(fā)刺激、損傷、愈合，周而復始，形成斑塊，其結果是動脈狹窄或粥樣硬化。許多研究認為 CRP 可預測動脈粥樣硬化病人的危險性，其中一些人日后發(fā)生冠狀動脈病、腦血管病或周圍動脈病變。CRP是炎癥并發(fā)動脈粥樣硬化的良好指標，血漿中 CRP 濃度高說明更易導致動脈粥樣硬化。測定方法為速率散射比濁法。,參考值 3mg/l 臨床意義 HS-CRP測試（檢測低限約為0.2mg/L），再加上血脂如膽固醇監(jiān)測，有助于預測冠心病的危險性。一般將CRP 3mg/L以上，總膽固醇 6.06mmol/L認為患心肌梗塞的危險性會增加。未發(fā)生心血管或周圍血管意外的人可使用這指標來評估6-10年出現(xiàn)發(fā)作的危險性。,類風濕因子（Rheumatoid Factor，RF） RF是一種自身抗體，可與變性的IgG發(fā)生反應，與IgG 的Fc段結合。RF可分為IgG、IgM、IgA、IgD和IgE五型。凝集試驗檢測的主要為IgM型RF。RF主要見于 類風濕性關節(jié)炎（rheumatoid arthritis RA)，也可見于其他結締組織病及其他疾病。檢測方法有乳膠凝集試驗、致敏羊紅細胞凝集法、 速率散射比濁法、ELISA法等。,參考值 乳膠法：陰性或80IU/ml。，一般方法所檢測的大部分是IgM-RF。,關于RF分型，臨床應用尚不廣泛。多數(shù)作者認為：IgMRF效價高低可在一定程度上反映RA的活動性，但無明確的密切關系；IgG-RF與RA患者的滑膜炎、血管炎和關節(jié)外癥狀密切相關；IgA-RF見于RA、硬皮病、Felty綜合征和系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus， SLE)，也是RA臨床活動性的一個指標；IgE-RF 除RA患者外，也見于Felty綜合征和青年型RA。高水平 IgM-RF陽性病人預后較差。,從早期RA患者的X線片分析，IgM-RF持續(xù)陽性的病人更易發(fā)生骨侵蝕。IgA-RF在SS病人中陽性率較高；IgE-RF在惡性關節(jié)炎病人中陽性率較高。在RA病人，高效價RF存在并伴有嚴重的關節(jié)功能受限時，常提示預后不良。,注意事項 正常人也可有4左右的陽性率。隨年齡增加，RF的檢出率會增加。RA病人RF也可陰性，不能單純依靠RF陽性來診斷RA。RF還可見于其它多種疾病 ，其中最常見的是干燥綜合征（S.S）， 發(fā)生率在90以上，且含量一般較高。其它常見的RF陽性的疾病有： SLE、系統(tǒng)性硬化癥、高球蛋白血癥、結節(jié)病、梅毒、麻風、病毒感染、肝硬化等等。有些效價可在1：160以上，含量在80IU/ml以上，在解釋結果時應予注意。,冷凝集試驗（Cold agglutination test ) 冷凝集試驗是用來檢測冷凝集素（cold agglutinin )的試驗。肺炎支原體引起的原發(fā)性非典型肺炎患者血清中常會有冷凝集素。這是一種自身抗體，主要為IgM型，通常具有抗細胞I 抗原特異性，也有少數(shù)是抗P抗原的抗體。冷凝集素與患者紅細胞或“O”型人紅細胞在4條件下發(fā)生凝集反應，在37則不能凝集紅細胞。,參考值 1：16 臨床意義 主要用于診斷支原體肺炎，一般效價 1：32或更高時，或雙份血清效價增長4倍以上時有診斷意義。一般發(fā)病后一周效價升高，24周達高峰，6周以后逐漸下降或消失。 本試驗無特異性，除肺炎支原體感染外，在冷凝集素病、慢性肝病、雷諾氏病、某些病毒感染以及少數(shù)惡性病患者也可檢測出冷凝集素。,注意事項 正常人也有低水平的冷凝集素。本試驗敏感性不高，因此，懷疑肺炎支原體感染時可檢測抗肺炎支原體抗體，方法有補體結合試驗；ELISA 等。,六. 冷球蛋白（Cryoglobulin CG，) 冷球蛋白是一種球蛋白，4時發(fā)生沉淀，30 易聚合，37又溶解。CG分為三類： 1.I型(單克隆型)：大多為IgM或IgG 型，無抗補體作用。 2.II型(混合型)：兩種或兩種以上單克隆Ig混合，以IgM+IgG最常見，也可見IgA+ IgG；IgG+IgM+IgA等。有抗補體作用。 3. III型(多克隆型)： 沒有單克隆蛋白。 其檢測方法有血球壓積管法(定性)和分光光度計法(定量)。,參考值 定性法：陰性 定量法：80g/ml。 臨床意義 SLE 病人 血清 中可出現(xiàn)混合型CG。在血管炎、腎小球腎炎、淋巴細胞增生性疾病也可陽性。在巨球蛋白血癥或多發(fā)性骨髓瘤病人伴雷諾氏現(xiàn)象時與I型冷球蛋白血癥有關。 II型冷球蛋白血癥與自身免疫病例如血管炎、腎小球腎炎、SLE、RA 和 SS 有關。在某些感染如肝炎、傳染性單核細胞增多癥、巨細胞病毒感染和弓形蟲病也可出現(xiàn)。,注意事項 1. 標本必須在37采集，并保持溫度直至進行實驗。 2. 一般不用于無冷球蛋白血癥臨床表現(xiàn)的人群過篩。 3. 冷凝集素可能引起某些自動血球計數(shù)儀的錯誤結果。,小結: 總之，自身抗體的檢測對診斷自身免疫病有著重要的意義。人 血清 中存在著多種自身抗體，有器官特異性的，也有非器官特異性的。因此，在選擇自身抗體檢測時應綜合考慮，合理選用。,胞漿抗體 Hep-2細胞具有許多胞漿抗原。如有特異性胞漿抗體存在，可出現(xiàn)強陽性胞漿熒光。包括抗線粒體抗體（AMA）、抗核糖體抗體、抗肌動蛋白抗體即抗平滑肌抗體（ASMA）、抗高爾基體抗體、抗絲抗體（如Vimentin）。一般最有意義的是AMA和ASMA，可是熒光染色Hep2細胞卻不能鑒定這兩種抗體，可應用鼠腎和鼠胃切片作進一步分析。 、,系統(tǒng)性風濕病活動期的評價 自身抗體檢測以診斷全身性疾病比監(jiān)測該病活動更有意義。但抗dsDNA抗體效價卻與活動性有關。應定期檢測抗dsDNA抗體的效價及C3、C4的含量。以及測定循環(huán)免疫復合物（CIC）的含量。ESR和CRP在炎癥反應時常常升高。RA病情加重時，CRP明顯增高。SLE活動期，CRP一般正常。,器官特異性自身免疫性疾病 組織抗體 許多自身抗體可采用IFA測定，用鼠腎和胃的切片能測出抗線粒體、平滑肌、肝腎微粒體和胃壁細胞的抗體。甲狀腺組織切片可測定抗甲狀腺自身抗體。,自身免疫性肝病 在肝臟病變中，ANA陽性率可達40-80%。抗線粒體抗體（AMA）與原發(fā)性膽汁性肝硬變有關。特別是高效價的M2和M9線粒體抗原。 約一半的自身免疫性肝炎的病人有較高效價的ASMA。此外，肝腎微粒體抗體（LKMAs），抗可溶性肝抗原（SLA）抗體，抗肝細胞膜抗體等也可用于自身免疫性肝病診斷和監(jiān)測。,其他 腎臟疾病常測定的抗體有抗dsDNA抗體，抗腎小球基底膜抗體等，還可測定CIC，以及作腎組織活檢進行熒光染色。 韋格納肉芽腫病是一種發(fā)生于上下呼吸道的壞死性血管炎，也累及腎臟，病人常死于腎和肺衰竭。檢查抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCAs）是診斷指標之一。也可通過ELISA測定抗髓過氧化物酶抗體，抗蛋白酶3抗體，有助于診斷和鑒別診斷。,胃腸道疾病中，惡性貧血與抗胃壁自身抗體有關，與抗內(nèi)因子抗體的相關性達75%。抗胰島細胞抗體（ICAs），抗谷氨酸脫羧酶抗體（GADA）與I型糖尿病有一定關系。重癥肌無力病人可出現(xiàn)抗骨骼肌抗體。多發(fā)性肌炎和皮肌炎可有抗Pm1和抗Jo-1抗體。抗心肌抗體常見于心肌梗死、心臟手術或心肌損傷后。,