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1、
豬源益生菌對(duì)宿主腸道病毒的抗病毒作用研究
益生菌的應(yīng)用已持續(xù)數(shù)十年 , 雖然其益生作用機(jī)理尚不清楚 , 但在臨床上對(duì)
消化道疾病的顯著療效已經(jīng)得到充分的證實(shí) , 對(duì)機(jī)體免疫功能的保護(hù)和增強(qiáng)作用
愈加受到關(guān)注。一般認(rèn)為益生菌在臨床治療腸道感染性腹瀉的分子和細(xì)胞機(jī)制主
要涉及三個(gè)方面 :(1) 益生菌可產(chǎn)生抗菌物質(zhì)并競(jìng)爭(zhēng)性與病原性微生物黏附于腸
上皮細(xì)胞來(lái)阻止病原體在腸道的黏附和定植 ;(2) 益生菌可提高病毒感染時(shí)腸上
皮細(xì)胞的存活率和保護(hù)腸道的正常生理結(jié)構(gòu)并刺激保護(hù)性免疫反應(yīng)來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體
免疫 ;
2、(3) 益生菌可通過調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡來(lái)保護(hù)和抵御病原微生物的侵襲。
本研究主要從分子水平、 細(xì)胞水平以及動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)三個(gè)方面闡述豬腸道益
生乳酸菌對(duì)傳染性胃腸炎病毒 (TGEV)和豬流行性腹瀉病毒 (PEDV)的抑制作用和
免疫調(diào)節(jié)作用 , 獲得了以下結(jié)果 :(1) 分離篩選出在豬睪丸細(xì)胞 (ST 細(xì)胞 ) 上對(duì)
TGEV具有抑制作用的 3 株豬源腸道益生菌 Y091231、Y091221和 Y224031,經(jīng) 16S
rDNA鑒定分別為唾液乳桿菌 (Lactobacillus saliarius), 約氏乳桿菌
(La
3、ctobacillus johnsonii) 和糞腸球菌 (Enterococcus faecalis) 。 (2) 篩選菌
對(duì)感染 TGEV的 ST 細(xì)胞具有保護(hù)作用。
3 株益生菌及其代謝產(chǎn)物接入順序不同 , 對(duì)病毒的抑制率也不同 ,Y091231 菌
懸液在預(yù)先接入的情況下可以達(dá)到最大抑制率 (65%), 而 Y091221和 Y224031則在
與病毒共同接入時(shí)表現(xiàn)出較高的抑制率。 通過半定量 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果可知 ,3 株
益生菌及其代謝產(chǎn)物均可以降低 TGEV在 ST細(xì)胞內(nèi)的增殖 ,Y091231 菌懸液在各
4、處理組中具有穩(wěn)定的較高的病毒抑制力。
益生菌在體外抗 TGEV作用中 , 可以通過上調(diào) IL-8 和 IL-12 、下調(diào) IL-4 和 INF-
α這 4 種細(xì)胞因子在細(xì)胞培養(yǎng)上清中的表達(dá)量 , 從而刺激細(xì)胞免疫 , 起到抵御病
毒入侵的作用。 (3) 分離鑒定 PEDV-WN株, 構(gòu)建動(dòng)物模型。
從臨床病料中分離得到 PEDV,然后對(duì)毒株進(jìn)行 RT-PCR鑒定及 M、S 基因序列
分析 , 與 CV777株對(duì)比分析 ,PEDV-WN株的 M基因具有高度保守性 , 可以作為檢測(cè)
PEDV的靶基因 ;S 基因變異較
5、大 ,S 蛋白內(nèi)分的核心和表位 (CEO,499-638aa) 共有 9
個(gè)氨基酸位點(diǎn)發(fā)生了突變。將 PEDV-WN株回歸試驗(yàn)動(dòng)物 , 成功構(gòu)建了典型 PEDV
感染動(dòng)物模型。
(4) 唾液乳桿菌 (Lactobacillus saliarius) 對(duì) PEDV-WN株具有抑制作用 , 對(duì)
病毒感染的仔豬具有保護(hù)作用。 該菌株的預(yù)防性干預(yù)和治療性干預(yù)均能提高仔豬
存活率 , 提高仔豬生長(zhǎng)性能 , 減輕病毒對(duì)腸道組織的病理?yè)p傷 , 并能降低病毒在機(jī)
體內(nèi)的增殖。
益生菌可以調(diào)節(jié)機(jī)體 IL-4 、IL-8 、IL-12 、INF- α4 種細(xì)胞因子和 MHCⅡ的
表達(dá)量 , 從而刺激機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫 , 起到抗病毒的作用。 (5)PEDV 感染
嚴(yán)重破壞了正常的腸道菌群結(jié)構(gòu)和菌種豐度 , 唾液乳桿菌的干預(yù)可以保護(hù)腸道微
生態(tài)保持健康的平衡狀態(tài) , 并能迅速修復(fù)失調(diào)的腸道微生態(tài)。
通過對(duì)糞便菌群的 16S rDNA高通量測(cè)序的方法 , 對(duì) PEDV感染和益生菌干預(yù)
的不同試驗(yàn)組的腸道菌群的變化規(guī)律和差異性進(jìn)行了對(duì)比分析。
豬源益生菌對(duì)宿主腸道病毒的抗病毒作用研究
