（通用版）2020版高考生物一輪復(fù)習(xí) 課下達(dá)標(biāo)檢測（四十）基因工程（含解析）.doc

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課下達(dá)標(biāo)檢測 四十 基因工程 一 基礎(chǔ)題點(diǎn)練 1 2019 徐州模擬 已知限制性內(nèi)切酶 Xma 和 Sma 的識(shí)別序列分別為 C CCGGG 和 CCC GGG 有關(guān)這兩種酶及應(yīng)用的敘述 錯(cuò)誤的是 A 這兩種酶作用的底物都是雙鏈 DNA B DNA 中出現(xiàn)這兩種酶識(shí)別序列的幾率不同 C Xma 切割 DNA 形成的黏性末端是 GGCC D 使用這兩種酶時(shí)需注意控制反應(yīng)溫度 時(shí)間等 解析 選 B 限制酶作用的底物是雙鏈 DNA 分子 這兩種限制酶作用的核苷酸序列相 同 所以這兩種識(shí)別序列在 DNA 中出現(xiàn)的的幾率相同 根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 CCCGGG 的 互補(bǔ)鏈?zhǔn)?GGGCCC 并根據(jù) Xma 的切割位點(diǎn)可知 切割后的黏性末端是 CCGG 溫度能影 響酶的活性 所以使用酶時(shí)需要注意控制反應(yīng)溫度和時(shí)間等 2 如圖表示的是三種黏性末端 下列說法正確的是 A 圖中所示黏性末端是由同種限制酶切割形成 B 若圖甲中的 G 堿基處發(fā)生突變 限制酶可能無法識(shí)別該切割位點(diǎn) C 圖中所示黏性末端是限制酶斷開氫鍵形成 D 目前常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒 噬菌體和動(dòng)植物病毒等幾類原核生物 解析 選 B 產(chǎn)生甲黏性末端的限制酶的識(shí)別序列為 產(chǎn)生乙黏性末 GAATTC CTTAAG 端的限制酶的識(shí)別序列為 產(chǎn)生丙黏性末端的限制酶的識(shí)別序列為 CAATTG GTTAAC 可見甲 乙 丙黏性末端是由 3 種限制酶作用產(chǎn)生的 限制酶具有專一 CTTAAG GAATTC 性 能夠識(shí)別雙鏈 DNA 分子的某種特定核苷酸序列 如果甲中的 G 發(fā)生突變 限制酶可能 無法識(shí)別該切割位點(diǎn) 圖中所示黏性末端是限制酶斷開磷酸二酯鍵形成的 質(zhì)粒是環(huán)狀 DNA 分子 噬菌體和動(dòng)植物病毒都沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu) 它們都不屬于原核生物 3 下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的敘述 錯(cuò)誤的是 A 蛋白質(zhì)工程的基礎(chǔ)是基因工程 B 蛋白質(zhì)工程遵循的原理包括中心法則 C 蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作 定向改變分子的結(jié)構(gòu) D 蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生出自然界中不曾存在過的新型蛋白質(zhì)分子 解析 選 C 蛋白質(zhì)工程是通過基因修飾或基因合成對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造 或合成 新的蛋白質(zhì) 故蛋白質(zhì)工程的基礎(chǔ)是基因工程 蛋白質(zhì)工程遵循的原理包括中心法則 蛋 白質(zhì)工程是通過改造基因來實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)分子的改造的 蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生出自然界中不 曾存在過的新型蛋白質(zhì)分子 4 2019 南通模擬 下列關(guān)于 DNA 的粗提取與鑒定 實(shí)驗(yàn)的敘述 錯(cuò)誤的是 A 雞的紅細(xì)胞和菜花均可作為提取 DNA 的材料 處理方法有所不同 B 在切碎的菜花中加入一定量的洗滌劑和食鹽 充分研磨 過濾收集濾液 C 將 NaCl 溶液濃度調(diào)至 2 mol L 用單層濾紙過濾獲取析出物 D 利用某些蛋白質(zhì)在酒精中的溶解度大于 DNA 在酒精中的溶解度的原理 可以提純 DNA 解析 選 C 雞的紅細(xì)胞和菜花均可作為提取 DNA 的材料 處理方法有所不同 動(dòng)物 細(xì)胞只要加蒸餾水使細(xì)胞吸水破裂 植物細(xì)胞需要加洗滌劑和食鹽研磨 在切碎的菜花中 加入一定量的洗滌劑和食鹽 充分研磨 過濾收集濾液 將 NaCl 溶液濃度調(diào)至 2 mol L 用多層紗布過濾獲取濾液 利用某些蛋白質(zhì)在酒精中的溶解度大于 DNA 在酒精中的溶解度 的原理 可以提純 DNA 5 下列是利用肝臟細(xì)胞粗提取 DNA 實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)關(guān)鍵操作步驟 相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是 步驟 1 向 8 g 豬肝中加入 25 mL 0 1 mol L NaCl 0 05 mol L 檸檬酸鈉緩沖液 冰浴 研磨 離心 步驟 2 取沉淀 加入 40 mL 緩沖液 20 mL 異戊醇 振勻后 緩慢加固體 NaCl 使溶液濃 度達(dá)到 2 mol L 再離心 A 步驟 1 中 加入檸檬酸鈉緩沖液的目的是維持 pH 的穩(wěn)定 B 步驟 1 中 冰浴處理的主要原理是低溫下 DNA 水解酶容易變性 C 步驟 2 中 異戊醇的作用可能是使與 DNA 結(jié)合的蛋白質(zhì)因變性而沉淀 D 步驟 2 中 離心后應(yīng)取上清液 因?yàn)?DNA 在 2 mol L NaCl 溶液中溶解度比較大 解析 選 B 步驟 1 中 加入檸檬酸鈉緩沖液的目的是維持 pH 的穩(wěn)定 低溫不會(huì)使酶 變性失活 只能降低酶的活性 步驟 2 中 DNA 在 2 mol L NaCl 溶液中溶解度比較大 因 此異戊醇的作用可能是使與 DNA 結(jié)合的蛋白質(zhì)因變性而沉淀 步驟 2 中 離心后應(yīng)取上清 液 因?yàn)?DNA 在 2 mol L NaCl 溶液中溶解度比較大 6 限制酶 Mun 和限制酶 EcoR 的識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)分別如下 C AATTG 和 G AATTC 如圖表示某一目的基因片段與質(zhì)粒拼接形成重組質(zhì)粒的過程 相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是 A 用限制酶 EcoR 切割目的基因 同時(shí)用限制酶 Mun 切割質(zhì)粒 B 兩種限制酶切割后形成的黏性末端的堿基可以互補(bǔ)配對(duì) C 限制酶能使特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開 D 將重組質(zhì)粒同時(shí)用 2 種限制酶切割則會(huì)形成 2 種 DNA 片段 解析 選 D 由圖可知 目的基因兩側(cè)都是限制酶 EcoR 的切割位點(diǎn) 因此應(yīng)選用限 制酶 EcoR 切割含有目的基因的外源 DNA 分子 質(zhì)粒中含有限制酶 Mun 和限制酶 EcoR 的切割位點(diǎn) 但 EcoR 的切割位點(diǎn)位于標(biāo)記基因中 用其切割會(huì)破壞標(biāo)記基因 因此為保 證重組質(zhì)粒表達(dá)載體的準(zhǔn)確構(gòu)建 應(yīng)選用限制酶 Mun 切割質(zhì)粒 圖中兩種限制酶切割后 形成的黏性末端的堿基可以互補(bǔ)配對(duì) 限制酶的作用是使特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷 酸二酯鍵斷開 將重組質(zhì)粒同時(shí)用 2 種限制酶切割則會(huì)形成 3 種 DNA 片段 二 高考題型練 7 2019 成都模擬 如圖 1 所示為用 Pvu 限制酶切下的某目的基因及其上 DNA 片段 示意圖 圖 2 所示為三種質(zhì)粒示意圖 圖中 Ap 為氨芐青霉素抗性基因 Tc 為四環(huán)素抗性 基因 EcoR Pvu 等為限制酶及其切割的位點(diǎn) 復(fù)制原點(diǎn)是在基因組上復(fù)制起始的一段 序列 是指質(zhì)粒在受體細(xì)胞中復(fù)制時(shí)的起點(diǎn) 1 組成片段 D 的基本骨架與細(xì)胞膜的基本骨架相同的元素是 2 圖 2 中質(zhì)粒 A 質(zhì)粒 C 能否作為目的基因運(yùn)載體最理想的質(zhì)粒 填 能 或 否 請(qǐng)說明理由 3 重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的概率一般僅為 10 7 用質(zhì)粒 B 構(gòu)建重組質(zhì)粒 為了 篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌 在導(dǎo)入完成后 將所有大腸桿菌分別在含有四環(huán)素和 氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長狀況不可能的是 可能性最大的是 4 若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物 則需要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入至山羊 的 細(xì)胞 中 解析 1 脫氧核糖和磷酸交替連接構(gòu)成 DNA 片段 D 的基本骨架 脫氧核糖由 C H O 三種元素組成 組成磷酸的元素是 H P O 磷脂雙分子層構(gòu)成細(xì)胞膜的基本骨架 磷脂 分子是由 C H O N P 組成 可見組成片段 D 的基本骨架與細(xì)胞膜的基本骨架相同的元 素是 C H O P 2 分析圖 2 可知 質(zhì)粒 A 缺少標(biāo)記基因 質(zhì)粒 C 在用和目的基因相同 的限制酶切割時(shí) 復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割 進(jìn)而影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制 所以質(zhì)粒 A 質(zhì)粒 C 均不能作為目的基因運(yùn)載體最理想的質(zhì)粒 3 用質(zhì)粒 B 構(gòu)建重組質(zhì)粒 當(dāng)用和 目的基因相同的限制酶 Pvu 切割時(shí) Tc 四環(huán)素抗性基因 遭到破壞 而 Ap 氨芐青霉素 抗性基因 結(jié)構(gòu)完好 因此在重組質(zhì)粒導(dǎo)入完成后 將所有大腸桿菌分別在含有四環(huán)素和氨 芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長狀況不可能的是在含四環(huán)素的培 養(yǎng)基上能正常生長 在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能正常生長 因重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體 細(xì)胞的概率一般僅為 10 7 所以可能性最大的是在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培 養(yǎng)基上都不能正常生長 4 若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物 則需要將 重組質(zhì)粒導(dǎo)入山羊的受精卵中 答案 1 C H O P 2 否 質(zhì)粒 A 缺少標(biāo)記基因 質(zhì)粒 C 在用和目的基因相同的 限制酶切割時(shí) 復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割 會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制 3 在含四環(huán)素的 培養(yǎng)基上能正常生長 在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能正常生長 在含氨芐青霉素的培養(yǎng) 基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都不能正常生長 4 受精卵 8 水稻是一種重要的糧食作物 選育高抗性良種是有效防治病蟲危害 增加水稻單位 面積產(chǎn)量的關(guān)鍵措施 轉(zhuǎn)基因技術(shù)為得到抗病蟲水稻種子開辟了一條新路 下面是水稻某 抗性基因獲得的過程 據(jù)圖回答下面的問題 1 cDNA 文庫中的基因在基因組文庫中 填 都有 都沒有 或 有 一部分 2 B 過程需要的酶 填 存在 或 不存在 于正常真核生物體內(nèi) 圖示中 含目的基因的細(xì)胞群 填 是 或 不是 水稻的體細(xì)胞 3 如果不建基因文庫 但需要大量的目的基因 和 可分別利用圖中 和 為模板直接進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增 進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)所使用酶的顯著特點(diǎn)是 4 抗性基因?qū)胧荏w細(xì)胞后 僅一條染色體含抗性基因 該基因的傳遞 填 遵循 或 不遵循 孟德爾分離定律 試說明判斷依據(jù) 解析 1 cDNA 文庫是部分基因文庫 基因組文庫是全部基因文庫 所以 cDNA 文庫中 的基因在基因組文庫中都有 2 B 過程是由 mRNA 獲取 cDNA 的過程 需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化 逆轉(zhuǎn)錄酶在正常真核細(xì)胞中不存在 圖示中含目的基因的細(xì)胞群不是水稻的體細(xì)胞 3 如 果不建基因文庫 但需要大量的目的基因 和 可分別利用圖中 DNA 和 cDNA 為模板直接 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增 進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)所使用酶的顯著特點(diǎn)是耐高溫 4 抗性基因?qū)胧荏w細(xì)胞后 僅一條染色體含抗性基因 該基因的傳遞遵循孟德爾分離定律 因?yàn)閮H一條染色體含抗性 基因 另一條沒有其等位基因 相當(dāng)于雜合子 答案 1 都有 2 不存在 不是 3 DNA cDNA 耐高溫 4 遵循 僅一條染色體 含抗性基因 另一條沒有其等位基因 9 2019 太原模擬 為增加菊花的花色類型 研究者從其他植物的 cDNA 文庫中提取 出花色基因 C 圖 1 擬將其與質(zhì)粒 圖 2 重組 再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花細(xì)胞中 圖 3 表示 EcoR BamH 和 Sau3A 三種限制酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn) 請(qǐng)分析回答 1 利用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增目的基因 C 的原理是 2 圖 2 所示質(zhì)粒被 切割獲得的產(chǎn)物可與圖 1 所示基因 C 連接 理由 是 3 經(jīng) BamH 處理后構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入菊花細(xì)胞后 基因 C 不能表達(dá) 原因是質(zhì)粒 酶切部位的兩端無 導(dǎo)致基因 C 不能 4 在添加四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上 填 能 或 不能 篩選出含有插入基 因 C 的重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌單菌落 原因是 解析 1 利用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增目的基因 C 的原理是 DNA 雙鏈復(fù)制 2 據(jù)圖 3 可知 由 于 BamH 和 Sau3A 兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端 因此圖 2 所示質(zhì)粒被 BamH 和 Sau3A 切割獲得的產(chǎn)物可與圖 1 所示基因 C 連接 3 據(jù)圖可知 經(jīng) BamH 處理 后構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入菊花細(xì)胞后 基因 C 不能表達(dá) 原因是質(zhì)粒酶切部位的兩端無啟動(dòng) 子和終止子 導(dǎo)致基因 C 不能轉(zhuǎn)錄 4 由于含質(zhì)粒的農(nóng)桿菌和含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌均含有 抗四環(huán)素基因 在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上均能生長 所以在添加四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上 不 能篩選出含有插入基因 C 的重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌單菌落 答案 1 DNA 雙鏈復(fù)制 2 BamH 和 Sau3A 兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的 黏性末端 3 啟動(dòng)子和終止子 轉(zhuǎn)錄 4 不能 含質(zhì)粒的農(nóng)桿菌和含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌 均含有抗四環(huán)素基因 在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上均能生長 10 人胰島素基因的克隆操作過程如圖所示 其中 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄形 成的 DNA 稱為 cDNA 回答下列問題 1 提取分離組織細(xì)胞中的人胰島素 mRNA 時(shí) 最應(yīng)選擇 細(xì)胞 過程 需要 原料是 2 通過將所有的 cDNA 構(gòu)建基因表達(dá)載體 去感染細(xì)菌 可以建立包括目的基因在內(nèi) 的 若使用質(zhì)粒載體 其上存在 基因 有助于質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì) 胞中 此過程還可以使用 作為載體 A 動(dòng)物病毒 B 植物病毒 C 噬菌體 3 除了上述方法外 還可以使用 方法擴(kuò)增目的基因 不同的是 后者的 目的基因若為人胰島素原基因 需要導(dǎo)入 填 真核 或 原核 受體細(xì)胞中 解析 1 人體細(xì)胞中只有胰島 B 細(xì)胞可表達(dá)胰島素基因 提取人胰島素 mRNA 時(shí) 最 應(yīng)選擇胰島 B 細(xì)胞 過程 為合成 DNA 的過程 需要 四種 脫氧核糖核苷酸為原料 2 通過將所有的 cDNA 構(gòu)建基因表達(dá)載體 去感染細(xì)菌 可以建立包括目的基因在內(nèi)的基因 cDNA 文庫 若使用質(zhì)粒載體 其上應(yīng)存在控制質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)移的基因 有助于質(zhì)粒進(jìn)入受 體細(xì)胞中 噬菌體可侵染細(xì)菌 動(dòng)物病毒 植物病毒不能侵染細(xì)菌 此過程還可以使用噬 菌體作為載體 3 用 PCR 技術(shù)可擴(kuò)增目的基因 PCR 擴(kuò)增的人胰島素原基因含有內(nèi)含子序 列 原核細(xì)胞中缺少轉(zhuǎn)錄后切除內(nèi)含子對(duì)應(yīng)序列的機(jī)制 因此應(yīng)將人胰島素原基因 導(dǎo)入 真核受體細(xì)胞中 答案 1 胰島 B 四種 脫氧核糖核苷酸 2 基因文庫 控制質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)移的 C 3 PCR 真核 11 如圖表示生物實(shí)驗(yàn)中通過研磨提取有關(guān)物質(zhì)的操作過程 請(qǐng)回答下列問題 1 若圖示為 DNA 的粗提取與鑒定 的實(shí)驗(yàn)操作 圖中實(shí)驗(yàn)材料 A 可以是下面的 填字母 a 花菜 b 香蕉 c 豬肝 d 豬血 若選用植物組織 研磨前加入的 B 一般為 和洗滌劑 前者的作用是 實(shí)驗(yàn)中 將含有一定雜質(zhì)的 DNA 絲狀物分別放入 2 mL 如表所示的 3 種溶液中 經(jīng)攪 拌后過濾 獲得相應(yīng)的 3 種濾液 含 DNA 最少的是濾液 溶液種類 濾液 1 2 mol L 的 NaCl 溶液 D 2 0 14 mol L 的 NaCl 溶液 E 3 體積分?jǐn)?shù)為 95 的冷酒精溶液 F 2 若圖示為 葉綠體色素的提取和分離 的實(shí)驗(yàn)操作 研磨前加入的 B 應(yīng)包括 將研磨液進(jìn)行過濾時(shí) 需要在漏斗基部放上 解析 1 DNA 的粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)中 原則上只要含有 DNA 的生物材料都可以作為 實(shí)驗(yàn)材料 花菜 香蕉 豬肝都含有 DNA 都可以作為該實(shí)驗(yàn)的材料 而豬為哺乳動(dòng)物 其成熟的紅細(xì)胞中不含細(xì)胞核和細(xì)胞器 即不含 DNA 因此不能作為該實(shí)驗(yàn)的材料 若 選用植物組織 研磨前需加入食鹽和洗滌劑 其中食鹽能溶解 DNA 洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜 DNA 能溶解在 2 mol L 的 NaCl 溶液中 濾液 D 中含較多的 DNA 在 0 14 mol L 的 NaCl 溶液中大部分 DNA 析出 濾液 E 中 DNA 較少 DNA 不溶于體積分?jǐn)?shù)為 95 的冷酒精溶液 濾 液 F 中含 DNA 最少 2 葉綠體中色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)中 研磨前需加入無水乙醇 溶 解色素 二氧化硅 使研磨更充分 和碳酸鈣 防止色素被破壞 將研磨液進(jìn)行過濾時(shí) 需要在漏斗基部放上尼龍布 答案 1 abc 食鹽 溶解 DNA F 2 二氧化硅 碳酸鈣和無水乙醇 或丙酮 一層 尼龍布 12 L 肉堿具有參與脂肪氧化 抗疲勞 延遲患阿爾茨海默綜合征等功能 據(jù)報(bào)道大 腸桿菌能將巴豆甜菜堿轉(zhuǎn)化成 L 肉堿 但效率較低 科研人員通過基因工程將 BCD 基因 F 基因以及 T 基因?qū)氲酱竽c桿菌細(xì)胞內(nèi)以提高 L 肉堿的轉(zhuǎn)化率 實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果如圖所 示 分析并回答下列問題 1 實(shí)驗(yàn)過程中用 PCR 技術(shù)獲得目的基因 PCR 反應(yīng)體系需要加入的有機(jī)物有 DNA 模板 dNTP 耐高溫 DNA 聚合酶和 實(shí)驗(yàn)過程中不能將 BCD 基因 F 基因以及 T 基因直 接導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞內(nèi) 而是構(gòu)建重組質(zhì)粒后再導(dǎo)入大腸桿菌 原因是 并能遺傳給下一代 圖中兩個(gè)重組質(zhì) 粒目的基因的首端都含有啟動(dòng)子 T7 T7 是 識(shí)別和結(jié)合的部位 能驅(qū)動(dòng)基因 轉(zhuǎn)錄 2 將重組質(zhì)粒 1 和重組質(zhì)粒 2 導(dǎo)入大腸桿菌時(shí) 應(yīng)用 處理大腸桿菌 使細(xì)胞 處于 的感受態(tài) 3 為了篩選出同時(shí)含有 BCD 基因 F 基因以及 T 基因的大腸桿菌 實(shí)驗(yàn)的思路是 4 研究發(fā)現(xiàn)巴豆甜菜堿轉(zhuǎn)化成 L 肉堿是一個(gè)可逆反應(yīng)過程 得到的工程菌在含有巴 豆甜菜堿培養(yǎng)基中培養(yǎng) 2 小時(shí)后 L 肉堿的含量基本穩(wěn)定 此時(shí)可以 以提高產(chǎn)量 解析 1 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) PCR 是一種體外迅速擴(kuò)增 DNA 片段的技術(shù) 它可看作生 物體外的特殊 DNA 復(fù)制 PCR 的最大特點(diǎn)是能將微量的 DNA 大幅增加 PCR 反應(yīng)體系需要加 入的有機(jī)物有 DNA 模板 dNTP 耐高溫 DNA 聚合酶和 兩種 引物 由于目的基因無法直接 在受體細(xì)胞中表達(dá) 因此為了使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并能夠表達(dá) 實(shí)驗(yàn)過程中 不能將 BCD 基因 F 基因以及 T 基因直接導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞內(nèi) 而是構(gòu)建重組質(zhì)粒后再導(dǎo) 入大腸桿菌 使其能遺傳給下一代 圖中兩個(gè)重組質(zhì)粒目的基因的首端都含有啟動(dòng)子 T7 T7 是 RNA 聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位 能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄 2 使體外重組的 DNA 分子轉(zhuǎn) 移到受體細(xì)胞內(nèi) 主要是借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑 一般將受體大腸桿菌用 Ca2 處 理 使細(xì)胞處于易于吸收周圍環(huán)境中 DNA 分子的感受態(tài) 有利于含有目的基因的重組質(zhì)粒 容易進(jìn)入受體細(xì)胞 3 重組質(zhì)粒 1 上含有 BCD 基因 卡那霉素抗性基因 重組質(zhì)粒 2 上含 有 F 基因 T 基因及氯霉素抗性基因 因此在同時(shí)含有卡那霉素和氯霉素培養(yǎng)基上挑選單 克隆大腸桿菌 就是同時(shí)含有 BCD 基因 F 基因以及 T 基因的大腸桿菌 4 研究發(fā)現(xiàn)巴豆 甜菜堿轉(zhuǎn)化成 L 肉堿是一個(gè)可逆反應(yīng)過程 在可逆反應(yīng)中 減少生成物濃度 可使反應(yīng)向 正方向進(jìn)行 因此得到的工程菌在含有巴豆甜菜堿培養(yǎng)基中培養(yǎng) 2 小時(shí)后 L 肉堿的含量 基本穩(wěn)定 此時(shí)可以及時(shí)移除產(chǎn)物 更換培養(yǎng)液 使反應(yīng)向生成 L 肉堿的方向進(jìn)行 以提 高產(chǎn)量 答案 1 兩種 引物 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在 能夠表達(dá) 使目的基因在 受體細(xì)胞中完成轉(zhuǎn)化 RNA 聚合酶 2 Ca 2 CaCl2 易于吸收周圍環(huán)境中 DNA 分子 3 在 同時(shí)含有卡那霉素和氯霉素培養(yǎng)基上挑選單克隆大腸桿菌 4 及時(shí)移除產(chǎn)物 更換培養(yǎng)液 使反應(yīng)向生成 L 肉堿的方向進(jìn)行