北冬蟲夏草子實體色素的分離和提取.ppt

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北冬蟲夏草子實體色素的分離和提取 生工082楊林林導(dǎo)師 孫思清 北冬蟲夏草又稱蛹蟲草 與我國名貴中藥材冬蟲夏草為同屬異種 屬于真菌界子囊菌門麥角菌科蟲草屬 其藥理功能主要表現(xiàn)為對哮喘和支氣管炎具有很好的療效 而且具有增強(qiáng)腎功能等的作用 作為冬蟲夏草的替代品之一 北冬蟲夏草具有與冬蟲夏草相似的活性成分和醫(yī)療保健功效 大量研究表明 其主要活性成分蟲草素的含量 是野生冬蟲夏草的數(shù)十倍 腺苷含量也高出冬蟲夏草數(shù)倍 北冬蟲夏草子實體色素 采用固體發(fā)酵人工培養(yǎng)的北冬蟲夏草子實體具有金黃的色澤 是其重要的生理功效成分之一對其色素成分的研究僅見報道蛹蟲草中含有類胡蘿卜素 付鳴佳2005 張志軍等2007 但未進(jìn)行純化和結(jié)構(gòu)鑒定 對人工培養(yǎng)蛹蟲草中天然色素進(jìn)行研究將有可能從蟲草屬真菌中尋找到功能天然色素 為蟲草更多方面的開發(fā)利用提供理論依據(jù) 色素的提取 蟲草色素不溶于乙醚 乙酸乙酯等非極性溶劑 易溶于甲醇 乙醇 水等極性溶劑 稱取0 5g粉碎的北冬蟲夏草干粉 分別置于250mL具塞錐形瓶中 加入50mL不同極性的溶劑中 水 30 乙醇 50 乙醇 80 乙醇 甲醇 乙醚 乙酸乙酯 于室溫下超聲振蕩提取40min 觀察提取液顏色 在波長448nm處測定吸光度 根據(jù)結(jié)果選用80 乙醇作為提取劑 子實體蟲草素的檢測 高效液相色譜法 HPLC 毛細(xì)管區(qū)帶電泳 CZE 毛細(xì)管電泳技術(shù) CE 液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) LC ESI MS 本次實驗采用高效液相色譜法 通過對比提取溶劑 料液比 溫度 pH值及時間對提取蛹蟲草中色素的影響 以確定色素提取最佳工藝參數(shù) 確定對色素提取率影響較大的3個因素設(shè)計正交試驗 最終確定最佳條件 單因素實驗 提取溶劑篩選擇 分別稱取約1g蛹蟲草子實體干粉10份 分別置于50mL具塞容量瓶 平行兩份中分別加入蒸餾水和30 50 70 90 乙醇40mL 搖勻后密封于70 水浴加熱3h 冷卻后用蒸餾水定容至50mL 搖勻過0 45 m微濾膜后上機(jī) 測定蛹蟲草色素的含量 每個溶劑梯度兩個平行樣結(jié)果取均值 提取料液比篩選 分別稱取約1g蛹蟲草子實體干粉10份 分別按1 10 1 30 1 50 1 70料液比平行兩份加入相應(yīng)體積蒸餾水 搖勻后密封于70 水浴加熱提取3h 冷卻后用蒸餾水定容至50mL 搖勻過0 45 m微濾膜后上機(jī) 測定蛹蟲草色素的含量 提取溫度篩選分別稱取約1g蛹蟲草子實體干粉10份 分別置于50mL具塞容量瓶 分別加入40mL蒸餾水搖勻 密封后分別置于50 60 70 80 90 加熱提取3h 冷卻后用蒸餾水定容至50mL 搖勻過0 45 m微濾膜后上機(jī) 測定蛹蟲草色素的含量 浸提時間篩選 分別稱取約1g蛹蟲草子實體干粉10份 分別置于50mL具塞容量瓶 加入40mL蒸餾水搖勻 密封后置于70 水浴 平行兩份分別浸提1 2 3 4h 冷卻后用蒸餾水定容至50mL 搖勻過0 45 m微濾后上機(jī) 測定蛹蟲草色素的含量 提取pH值篩選 分別稱取約1g蛹蟲草子實體干粉10份 分別置50mL具塞容量瓶 加入40mL蒸餾水 平行兩份分別調(diào)pH值為3 5 7 9 11 搖勻后密封 于70 水浴加熱浸提3h 冷卻后用蒸餾水定容至50mL 搖勻后過0 45 m微濾上機(jī) 測定蛹蟲草中色素含量 響應(yīng)面試驗 通過對單因素試驗結(jié)果進(jìn)行分析確定影響較大的3個 分別表示為A B C 因素實驗 以確定其最佳提取條件 響應(yīng)面實驗涉及復(fù)雜公式不詳細(xì)介紹了