北冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體色素的分離和提取.ppt

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北冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體色素的分離和提取 生工082楊林林導(dǎo)師 孫思清 北冬蟲(chóng)夏草又稱(chēng)蛹蟲(chóng)草 與我國(guó)名貴中藥材冬蟲(chóng)夏草為同屬異種 屬于真菌界子囊菌門(mén)麥角菌科蟲(chóng)草屬 其藥理功能主要表現(xiàn)為對(duì)哮喘和支氣管炎具有很好的療效 而且具有增強(qiáng)腎功能等的作用 作為冬蟲(chóng)夏草的替代品之一 北冬蟲(chóng)夏草具有與冬蟲(chóng)夏草相似的活性成分和醫(yī)療保健功效 大量研究表明 其主要活性成分蟲(chóng)草素的含量 是野生冬蟲(chóng)夏草的數(shù)十倍 腺苷含量也高出冬蟲(chóng)夏草數(shù)倍 北冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體色素 采用固體發(fā)酵人工培養(yǎng)的北冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體具有金黃的色澤 是其重要的生理功效成分之一對(duì)其色素成分的研究?jī)H見(jiàn)報(bào)道蛹蟲(chóng)草中含有類(lèi)胡蘿卜素 付鳴佳2005 張志軍等2007 但未進(jìn)行純化和結(jié)構(gòu)鑒定 對(duì)人工培養(yǎng)蛹蟲(chóng)草中天然色素進(jìn)行研究將有可能從蟲(chóng)草屬真菌中尋找到功能天然色素 為蟲(chóng)草更多方面的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù) 色素的提取 蟲(chóng)草色素不溶于乙醚 乙酸乙酯等非極性溶劑 易溶于甲醇 乙醇 水等極性溶劑 稱(chēng)取0 5g粉碎的北冬蟲(chóng)夏草干粉 分別置于250mL具塞錐形瓶中 加入50mL不同極性的溶劑中 水 30 乙醇 50 乙醇 80 乙醇 甲醇 乙醚 乙酸乙酯 于室溫下超聲振蕩提取40min 觀察提取液顏色 在波長(zhǎng)448nm處測(cè)定吸光度 根據(jù)結(jié)果選用80 乙醇作為提取劑 子實(shí)體蟲(chóng)草素的檢測(cè) 高效液相色譜法 HPLC 毛細(xì)管區(qū)帶電泳 CZE 毛細(xì)管電泳技術(shù) CE 液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) LC ESI MS 本次實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法 通過(guò)對(duì)比提取溶劑 料液比 溫度 pH值及時(shí)間對(duì)提取蛹蟲(chóng)草中色素的影響 以確定色素提取最佳工藝參數(shù) 確定對(duì)色素提取率影響較大的3個(gè)因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn) 最終確定最佳條件 單因素實(shí)驗(yàn) 提取溶劑篩選擇 分別稱(chēng)取約1g蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干粉10份 分別置于50mL具塞容量瓶 平行兩份中分別加入蒸餾水和30 50 70 90 乙醇40mL 搖勻后密封于70 水浴加熱3h 冷卻后用蒸餾水定容至50mL 搖勻過(guò)0 45 m微濾膜后上機(jī) 測(cè)定蛹蟲(chóng)草色素的含量 每個(gè)溶劑梯度兩個(gè)平行樣結(jié)果取均值 提取料液比篩選 分別稱(chēng)取約1g蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干粉10份 分別按1 10 1 30 1 50 1 70料液比平行兩份加入相應(yīng)體積蒸餾水 搖勻后密封于70 水浴加熱提取3h 冷卻后用蒸餾水定容至50mL 搖勻過(guò)0 45 m微濾膜后上機(jī) 測(cè)定蛹蟲(chóng)草色素的含量 提取溫度篩選分別稱(chēng)取約1g蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干粉10份 分別置于50mL具塞容量瓶 分別加入40mL蒸餾水搖勻 密封后分別置于50 60 70 80 90 加熱提取3h 冷卻后用蒸餾水定容至50mL 搖勻過(guò)0 45 m微濾膜后上機(jī) 測(cè)定蛹蟲(chóng)草色素的含量 浸提時(shí)間篩選 分別稱(chēng)取約1g蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干粉10份 分別置于50mL具塞容量瓶 加入40mL蒸餾水搖勻 密封后置于70 水浴 平行兩份分別浸提1 2 3 4h 冷卻后用蒸餾水定容至50mL 搖勻過(guò)0 45 m微濾后上機(jī) 測(cè)定蛹蟲(chóng)草色素的含量 提取pH值篩選 分別稱(chēng)取約1g蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干粉10份 分別置50mL具塞容量瓶 加入40mL蒸餾水 平行兩份分別調(diào)pH值為3 5 7 9 11 搖勻后密封 于70 水浴加熱浸提3h 冷卻后用蒸餾水定容至50mL 搖勻后過(guò)0 45 m微濾上機(jī) 測(cè)定蛹蟲(chóng)草中色素含量 響應(yīng)面試驗(yàn) 通過(guò)對(duì)單因素試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析確定影響較大的3個(gè) 分別表示為A B C 因素實(shí)驗(yàn) 以確定其最佳提取條件 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)涉及復(fù)雜公式不詳細(xì)介紹了