實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸、丙酮酸

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1、全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）1河北北方學院醫(yī)學檢驗學院河北北方學院醫(yī)學檢驗學院侯麗娟侯麗娟實驗實驗 14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸、丙酮酸乳酸脫氫酶法測定血清乳酸、丙酮酸全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸、丙酮酸乳酸脫氫酶法測定血清乳酸、丙酮酸2實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?v掌握：掌握：乳酸脫氫酶法測定血清乳酸和丙酮酸的乳酸脫氫酶法測定血清乳酸和丙

2、酮酸的原理原理。v熟悉：熟悉：乳酸和丙酮酸測定的臨床意義及其測定乳酸和丙酮酸測定的臨床意義及其測定的注意事項的注意事項。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸、丙酮酸乳酸脫氫酶法測定血清乳酸、丙酮酸3一、乳酸脫氫酶法測定血清乳酸一、乳酸脫氫酶法測定血清乳酸 二、乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸二、乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版

3、）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸乳酸脫氫酶法測定血清乳酸4一、乳酸脫氫酶法測定血清乳酸一、乳酸脫氫酶法測定血清乳酸 實驗原理實驗原理 HNADHNADLLD(pH9.8)丙酮酸乳酸 反應(yīng)體系中加入肼可使丙酮酸不斷被轉(zhuǎn)換消反應(yīng)體系中加入肼可使丙酮酸不斷被轉(zhuǎn)換消除，促進反應(yīng)完成。于除，促進反應(yīng)完成。于340nm波長處測定反應(yīng)中波長處測定反應(yīng)中生成的生成的NADH，定量乳酸濃度。，定量乳酸濃度。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸乳酸脫氫酶法測定血清

4、乳酸5試劑與器材試劑與器材 1Tris-EDTA-肼緩沖液（肼緩沖液（pH9.8）2NAD溶液溶液 3LD溶液（溶液（1 500U/ml）4底物應(yīng)用液底物應(yīng)用液 Tris-EDTA-肼緩沖液肼緩沖液27ml、 NAD溶液溶液3ml、LD溶液溶液40l混勻?；靹颉?520mmol/L乳酸標準貯存液。乳酸標準貯存液。62mmol/L乳酸標準應(yīng)用液乳酸標準應(yīng)用液 。70.1mol/L鹽酸。鹽酸。8分光光度計或自動生化分析儀。分光光度計或自動生化分析儀。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗

5、14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸乳酸脫氫酶法測定血清乳酸6操作步驟操作步驟 加入物（加入物（mlml）空白管空白管標準管標準管測定管測定管蒸餾水蒸餾水0.010.01乳酸標準應(yīng)用液乳酸標準應(yīng)用液0.010.01血清（或血漿）血清（或血漿）0.010.01底物應(yīng)用液底物應(yīng)用液0.50.50.50.50.50.5 立即混勻，立即混勻，37水浴準確保溫水浴準確保溫5min后立即后立即加入加入0.1mol/L鹽酸鹽酸3ml終止反應(yīng)。于終止反應(yīng)。于340nm波長波長處，以空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。處，以空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨

6、床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸乳酸脫氫酶法測定血清乳酸7計算計算 2mmol/L標準管吸光度測定管吸光度）血清乳酸含量（參考范圍參考范圍 血清乳酸：血清乳酸：2.0mmol/L。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸乳酸脫氫酶法測定血清乳酸8臨床意義臨床意義 高乳酸血癥常見于：高乳酸血癥常見于：1組織嚴重缺氧。組織嚴重缺氧。2慢性肝病、肝硬化、肝功能衰竭。慢性肝病、肝硬化、肝功能

7、衰竭。3糖尿病和尿毒癥患者。糖尿病和尿毒癥患者。 激烈運動時可出現(xiàn)生理性乳酸增高，恢激烈運動時可出現(xiàn)生理性乳酸增高，恢復時迅速降低。復時迅速降低。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸乳酸脫氫酶法測定血清乳酸9注意事項注意事項1 1受試者應(yīng)保持空腹及安靜狀態(tài)至少受試者應(yīng)保持空腹及安靜狀態(tài)至少2h2h，避免，避免手臂活動。抽血時如用止血帶，應(yīng)在穿刺后除去手臂活動。抽血時如用止血帶，應(yīng)在穿刺后除去止血帶至少止血帶至少2min2min后再抽血。標本放冰室保存待

8、測。后再抽血。標本放冰室保存待測。2 2如不做標準管，可根據(jù)如不做標準管，可根據(jù)NADHNADH的摩爾吸光度值的摩爾吸光度值計算乳酸濃度，但反應(yīng)條件必須標準化。計算乳酸濃度，但反應(yīng)條件必須標準化。3 3如使用自動生化分析儀，各實驗室可根據(jù)分如使用自動生化分析儀，各實驗室可根據(jù)分析儀的性能、型號設(shè)定參數(shù)。析儀的性能、型號設(shè)定參數(shù)。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸乳酸脫氫酶法測定血清乳酸10評價評價 返回本實驗?zāi)夸浄祷乇緦嶒災(zāi)夸?本法特異性高、操作簡便

9、，嚴格按本法特異性高、操作簡便，嚴格按取樣程序采血，正偏差小，是乳酸測定的取樣程序采血，正偏差小，是乳酸測定的首選方法。首選方法。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸11實驗原理實驗原理 二、乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸二、乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸 通過測定通過測定340nm波長處波長處NADH的下降速率，的下降速率，定量丙酮酸含量。定量丙酮酸含量。NADLHNADHpH7.4LD乳酸丙酮酸）（全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)

10、劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸12試劑與器材試劑與器材 10.1mol/L Na2HPO4溶液溶液20.1mol/L KH2PO4溶液溶液 30.1mol/L磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液（pH7.4） 4NADH溶液溶液5LD溶液溶液 (550U/ml)6工作試劑工作試劑 NADH溶液溶液400l、LD溶液溶液40l混勻，混勻， 用用0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液（pH7.4）稀釋至）稀釋至10 ml。725mmol/L丙酮酸標準貯存液丙

11、酮酸標準貯存液80.5mmol/L丙酮酸標準應(yīng)用液丙酮酸標準應(yīng)用液9自動生化分析儀自動生化分析儀全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸13操作步驟操作步驟 根據(jù)實驗室自動生化分析儀的型號、性能設(shè)定根據(jù)實驗室自動生化分析儀的型號、性能設(shè)定參數(shù)。下列參數(shù)可供參考：參數(shù)。下列參數(shù)可供參考： 溫度：溫度：37；波長：；波長：340nm；延遲時間：；延遲時間：30s；監(jiān)測時間：監(jiān)測時間：120s；樣品體積：；樣品體積：25l；工作試劑體

12、積：；工作試劑體積：275l。 分別測定樣品管和標準管吸光度的下降速率分別測定樣品管和標準管吸光度的下降速率。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸14計算計算 5 . 0min / Amin / Ammol/Lsu）血清丙酮酸含量（參考范圍參考范圍 血清丙酮酸：血清丙酮酸：0.1 mmol/L 全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）

13、（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸15臨床意義臨床意義 血液丙酮酸的測定與血乳酸測定的臨床意義相血液丙酮酸的測定與血乳酸測定的臨床意義相近，糖尿病、充血性心力衰竭、嚴重肝病、嚴重感近，糖尿病、充血性心力衰竭、嚴重肝病、嚴重感染等可使血丙酮酸的含量增加，并伴有高乳酸血癥染等可使血丙酮酸的含量增加，并伴有高乳酸血癥; 可用于維生素可用于維生素B1缺乏癥的診斷，維生素缺乏癥的診斷，維生素B1缺乏時，缺乏時，體內(nèi)丙酮酸的氧化發(fā)生障礙，血丙酮酸的含量增加。體內(nèi)丙酮酸的氧化發(fā)生障礙，血丙酮酸的含量增加。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專

14、業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸16注意事項注意事項1采血與處理同乳酸測定。采血與處理同乳酸測定。2丙酮酸會發(fā)生聚合，其聚合體的酶丙酮酸會發(fā)生聚合，其聚合體的酶促反應(yīng)速率與非聚合體不同，故丙酮酸促反應(yīng)速率與非聚合體不同，故丙酮酸標準應(yīng)用液必須每日新鮮配制。標準應(yīng)用液必須每日新鮮配制。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸乳酸脫氫酶法測定血清

15、丙酮酸17評價評價 本法操作簡便、快速，有較為精密和準確本法操作簡便、快速，有較為精密和準確的分析性能、抗干擾能力強，能適應(yīng)絕大多數(shù)的分析性能、抗干擾能力強，能適應(yīng)絕大多數(shù)自動生化分析儀，易于實現(xiàn)自動化，是自動生化分析儀，易于實現(xiàn)自動化，是目前臨目前臨床測定丙酮酸的首選方法。床測定丙酮酸的首選方法。返回本實驗?zāi)夸浄祷乇緦嶒災(zāi)夸浫珖叩柔t(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）實驗實驗14 乳酸脫氫酶法測定血清乳酸、丙酮酸乳酸脫氫酶法測定血清乳酸、丙酮酸18思考題思考題 1血乳酸測定的標本在采集與處理過程中應(yīng)血乳酸測定的標本在采集與處理過程中應(yīng)注意哪些問題？注意哪些問題？2簡述乳酸脫氫酶法測定血清乳酸的原理和簡述乳酸脫氫酶法測定血清乳酸的原理和測定的臨床意義。測定的臨床意義。3簡述乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸的原理簡述乳酸脫氫酶法測定血清丙酮酸的原理和注意事項。和注意事項。4試述血丙酮酸測定的臨床意義。試述血丙酮酸測定的臨床意義。全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學檢驗專業(yè)規(guī)劃教材臨床生物化學檢驗臨床生物化學檢驗實驗指導實驗指導 （第二版）（第二版）19返回總目錄返回總目錄