幾種水產(chǎn)動物血涂片的制作及形態(tài)課件

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1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,幾種水產(chǎn)動物血涂片的制作及形態(tài)比較觀察,幾種水產(chǎn)動物血涂片的制作及形態(tài)比較觀察,1,一、實驗?zāi)康?了解血涂片的制作方法，,同時認(rèn)識鯽魚和美國牛蛙的血細(xì)胞。,一、實驗?zāi)康?了解血涂片的制作方法，,2,二、實驗內(nèi)容,鯽魚和美國牛蛙血涂片的制作,二、實驗內(nèi)容鯽魚和美國牛蛙血涂片的制作,3,幾種水產(chǎn)動物血涂片的制作及形態(tài)課件,4,幾種水產(chǎn)動物血涂片的制作及形態(tài)課件,5,三、實驗材料,1.鯽魚，美國牛蛙,2.Giemsa染料粉劑、瑞氏染料粉劑、甘油、甲醇,3.磷酸二氫鉀（無水）、磷酸氫二鈉（無水）,4.載玻片、蓋玻片

2、、注射器、玻璃棒、pH試紙、燒杯、容量瓶,三、實驗材料1.鯽魚，美國牛蛙,6,Giemsa氏染料原液配制,Giemsa染料粉劑 0.75g,甘油 50ml,甲醇 50ml,將粉劑放于甘油內(nèi)攪勻，放入60度溫箱24h，經(jīng)常搖勻。取出待冷再加甲醇混勻，配成原液，密封棕色瓶保存。使用時，以原液5ml加M/15磷酸鹽緩沖液（pH6.4-6.8）50ml稀釋成工作液。,Giemsa氏染料原液配制Giemsa染料粉劑,7,磷酸緩沖液的配置,分別稱取磷酸二氫鉀（無水）6.64g，磷酸氫二鈉（無水）2.56g，加少量水溶解，加水至1000ml。用精密pH試紙確定其pH。,磷酸緩沖液的配置 分別稱取磷酸二氫鉀（

3、無水）6.64g，磷,8,載玻片的準(zhǔn)備,新載玻片常帶有游離堿質(zhì)，須用濃度為 lmol/L 的HCl浸泡24h，再用清水徹底沖洗，干燥后備用。舊載玻片要用含洗滌劑的清水中煮沸20min，洗掉血膜，再用清水反復(fù)沖洗，最后用0.95mol/L乙醇浸泡1h，干燥備用。使用載玻片時，不要用手觸及玻片表面，保持玻片清潔、干燥、中性、無油膩。,載玻片的準(zhǔn)備 新載玻片常帶有游離堿質(zhì)，須用濃度,9,四、實驗步驟,1.血涂片的制作,2.染色,3.觀察,四、實驗步驟1.血涂片的制作,10,血涂片制作方法,取血液標(biāo)本一滴置載玻片的一端，以邊緣平滑的推片一端，從血滴前沿方向接觸血液，使血液沿推片散開，推片與載玻片保持

4、3045 度夾角，平穩(wěn)地向前推動，血液即在載玻片上形成薄層血膜,血涂片制作方法 取血液標(biāo)本一滴置載玻片的一端，以邊緣平滑的推,11,幾種水產(chǎn)動物血涂片的制作及形態(tài)課件,12,涂片的厚薄與血滴大小、推片與載玻片之間的角度、推片時的速度及血細(xì)胞比容有關(guān)。血滴大、角度大、速度快則血膜越厚；反之則血膜越薄。,一張良好的血涂片，要求厚薄適宜，頭體尾明顯，細(xì)胞分布均勻，血膜邊緣整齊并留有的空隙。,涂片的厚薄與血滴大小、推片與載玻片之間的角度、推片時的速度及,13,血涂片的染色,血涂片染色包括兩個過程：,固定和染色,。固定是將細(xì)胞蛋白質(zhì)和多糖等成分迅速交聯(lián)凝固，以保持細(xì)胞原有形態(tài)結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化。,常用的染色

5、方法有瑞士染色法(Wright)、姬姆薩染色法(Giemsa)等。,血涂片的染色 血涂片染色包括兩個過程：固定和染色。固定是,14,瑞氏染液,0.1g瑞氏染料粉劑放入潔凈干燥的研缽中，滴加60ml甲醇至全溶，密封于棕色小口瓶內(nèi)，放置半個月-1個月。,瑞氏染液0.1g瑞氏染料粉劑放入潔凈干燥的研缽中，滴加60m,15,步 驟,血涂片經(jīng)甲醇固定2min,滴加工作液染色15-30min，室溫。,蒸餾水漂洗,緩沖液分色，至血膜顯示淡紅色。,標(biāo)本干燥后，封片活不封片,觀察,步 驟血涂片經(jīng)甲醇固定2min,16,結(jié)果,紅細(xì)胞被染成橘紅色，白細(xì)胞核紫色，嗜酸性顆粒鮮紅色，嗜堿性顆粒藍紫色，中性顆粒紫或紫紅色

6、，淋巴及單核細(xì)胞胞漿藍灰色。,結(jié)果 紅細(xì)胞被染成橘紅色，白細(xì)胞核紫色，嗜酸,17,壓片法,分別取鯽魚和美國牛蛙的肝臟、腎臟、脾臟組織，然后壓片在載玻片上，晾干，然后染色。,壓片法,18,染色注意事項,1載玻片必須非常潔凈，中性，無油脂。不清潔或非中性的載玻片會造成細(xì)胞特別是紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，導(dǎo)致假性的異常形態(tài)紅細(xì)胞出現(xiàn)。非中性的載玻片還會影響染色環(huán)境的pH值，帶油脂的載玻片會使細(xì)胞分布不均勻。,染色注意事項1載玻片必須非常潔凈，中性，無油脂。不清潔或非,19,2.染色過深、過淺的處理。染色過深、過淺與血涂片中細(xì)胞數(shù)量、血膜厚度、染色時間、染液濃度、pH值密切相關(guān)。對于重要的標(biāo)本可采用先試染的

7、方法，根據(jù)試染效果調(diào)節(jié)第二次染色方式。糾正染色過深可縮短染色時間或稀釋染液。糾正染色過淺可延長染色時間。如果標(biāo)本片有限出現(xiàn)了染色過深、過淺的情況，可用如下辦法挽救：染色過深可加少量緩沖液覆蓋血膜部分褪色，在顯微鏡下觀察褪色情況及時終止。染色過淺可重加染色液和緩沖液復(fù)染，也要在顯微鏡下觀察及時終止。,2.染色過深、過淺的處理。染色過深、過淺與血涂片中細(xì)胞數(shù)量、,20,血液的組成,血液,血漿,血C,紅C,白C,血小板,水（90%）,其它,血液的組成血液 血漿紅C水（90%）,21,圓形細(xì)胞,人血涂片(Giemsa染色),(紅色箭頭示白細(xì)胞，蘭色箭頭示紅細(xì)胞),圓形細(xì)胞人血涂片(Giemsa染色),

8、22,白C,(leukocytes,white blood cell,WBC),WBC,有粒C,無粒C,中性粒C,嗜酸性粒C,嗜堿性粒C,淋巴C,單核C,分類依據(jù)：,根據(jù)C質(zhì)內(nèi)有無特殊顆粒和顆粒的嗜色性。,白C(leukocytes,white blood c,23,中性粒C,數(shù)量：50-70%，是,數(shù)量最多,的白C。,結(jié)構(gòu)：,分葉狀（2-5個核）,。,核左移：1-2葉核增多-細(xì)菌感染。,核右移：4-5葉核增多-衰老。,中性粒C數(shù)量：50-70%，是數(shù)量最多的白C。,24,中性粒C,Neutrophilic granulocyte,中性粒C,25,(2)嗜酸性粒C,(,Eosinophils,

9、),數(shù)量：0.5-3%.,C核：,“八”字形核.,C質(zhì)：粗大,嗜酸性顆粒,-溶酶體.,EM：顆粒中有,長方形晶體,.,(2)嗜酸性粒C(Eosinophils)數(shù)量：0.5-3%,26,嗜酸性粒C(,LM,),Eosinophilic granulocyte,嗜酸性粒C(LM),27,(3)嗜堿性粒C,數(shù)量：最少,，0-1%.,C核：不規(guī)則,多呈,“S”形,.,C質(zhì)：藍紫色顆粒,大小不等,分布不均.,(3)嗜堿性粒C數(shù)量：最少，0-1%.,28,嗜堿性粒CLM,Basophilic granulocyte,嗜堿性粒CLM,29,(4)淋巴C,(,Lymphocytes),數(shù)量：25-30%.,

10、C核：大，,圓形,常有淺凹,染色質(zhì)濃密呈粗塊狀.,C質(zhì)：少,嗜堿性.,(4)淋巴C(Lymphocytes)數(shù)量：25-30%.,30,淋巴C,（LM）,Lymphocyte,淋巴C（LM）,31,(5)單核C,(,Monocytes),數(shù)量：3-8%.,大小：血液中,最大的C,.,C核：,腎形,馬蹄形,著色較淺.,C質(zhì)：豐富,弱嗜堿性,灰蘭色.,(5)單核C(Monocytes),32,單核C,Monocyte,單核C Monocyte,33,血小板,Blood platelet,血小板,34,結(jié) 果,紅細(xì)胞橘紅色，白細(xì)胞核紫色，嗜酸性粒細(xì)胞鮮紅色，嗜堿性粒細(xì)胞藍紫色，中性顆粒紫或紫紅色，淋

11、巴細(xì)胞及單核細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)藍灰色，血小板紫色。,結(jié) 果紅細(xì)胞橘紅色，白細(xì)胞核紫色，嗜酸性粒細(xì)胞鮮紅色，嗜堿性,35,蛙血液涂片,蛙血液涂片,36,細(xì)胞形態(tài)和顯微測量,實驗內(nèi)容,細(xì)胞的顯微測量需要以,目鏡測微尺,來進行，但其分度值隨著放大倍數(shù)的變化而變化，長度也不一樣，因此需要事先進行標(biāo)定。而,鏡臺測微尺,的長度是已知的，目鏡測微尺的標(biāo)定是通過鏡臺測微尺來進行的。,細(xì)胞的顯微測量,細(xì)胞形態(tài)和顯微測量實驗內(nèi)容 細(xì)胞的顯微測量需要以目鏡測,37,0.01mm,0,1,2,3,4,0,1,2,3,4,5,6,7,8,目鏡測微尺,(長度隨放大倍數(shù)發(fā)生改變),鏡臺測微尺,(每一大刻度值為0.1mm，小刻度值為

12、0.01mm),目鏡測微尺與鏡臺測微尺,0.01mm01234012345678目鏡測微尺鏡臺測微尺,38,放鏡臺測微尺于載物臺,調(diào)節(jié)使鏡臺測微尺與目鏡測微尺平行,取下鏡臺測微尺,*裝入目鏡測微尺,記錄二者在重合線之間的刻度,計算標(biāo)定值,目鏡測微尺的標(biāo)定,放鏡臺測微尺于載物臺調(diào)節(jié)使鏡臺測微尺與目鏡測微尺平行取下鏡臺,39,如在低倍鏡下重合線之間目鏡測微尺的長度為,50,格,鏡臺測微尺的長度為,68,格,則：,50,:,68,=,1,:,x,x=1.36格，即目鏡測微尺的1小格相當(dāng)于鏡臺測微尺的1.36格，而鏡臺測微尺每1小格的長度為10um，則目鏡測微尺每1小格的長度為13.6um。,標(biāo)定時應(yīng)注意的問題,標(biāo)定時必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程，以免損壞測微尺；,重合線的判斷應(yīng)在二者刻度線完全重合；,比例式的計算；,標(biāo)定值只能在同一放大倍數(shù)下進行測量。,如在低倍鏡下重合線之間目鏡測微尺的長度為50格標(biāo)定時應(yīng)注意的,40,如何進行蛙細(xì)胞的顯微測量？,目鏡測微尺,短軸,長軸,轉(zhuǎn)動目鏡鏡筒,如何進行蛙細(xì)胞的顯微測量？目鏡測微尺短軸長軸轉(zhuǎn)動目鏡鏡筒,41,細(xì)胞膜,細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞核,蛙紅細(xì)胞示意圖,細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核蛙紅細(xì)胞示意圖,42,五、實驗作業(yè),一張好的血涂片的要求是什么?,繪制鯽魚和牛蛙的血細(xì)胞。,五、實驗作業(yè)一張好的血涂片的要求是什么?,43,