2014屆高三生物二輪鉆石卷：高考專(zhuān)題演練15《基因工程和細(xì)胞工程》

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1、高考專(zhuān)題演練（十五）基因工程和細(xì)胞工程 時(shí)間：45分鐘分值：100分 一、選擇題（每題5分，共50分） 1. （2013?江蘇單科）小鼠雜交瘤細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體用于人體試驗(yàn)時(shí)易引起過(guò)敏反應(yīng)，為了克服這個(gè)缺陷，可選擇性擴(kuò)增抗體的可變區(qū)基因（目的基因）后再重組表達(dá)。下列相關(guān)敘述正確的是（雙選）（） A. 設(shè)計(jì)擴(kuò)增目的基因的引物時(shí)不必考慮表達(dá)載體的序列 B. 用PCR方法擴(kuò)增目的基因時(shí)不必知道基因的全部序列 C. PCR體系中一定要添加從受體細(xì)胞中提取的DNA聚合酶 D. —定要根據(jù)目的基因編碼產(chǎn)物的特性選擇合適的受體細(xì)胞 解析本題主要考查PCR技術(shù)的有關(guān)知識(shí)。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目

2、的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列設(shè)計(jì)引物，但不需知道目的基因的全部序列，需要考慮載體的序列；因PCR反應(yīng)在高溫條件下進(jìn)行，故反應(yīng)體系中需加入耐高溫的DNA聚合酶；因某些目的基因編碼的產(chǎn)物需經(jīng)特殊的加工修飾過(guò)程，故一定要根據(jù)目的基因編碼產(chǎn)物的特性選擇合適的受體細(xì)胞。 答案BD 2. （2013?廣東理綜）從某海洋動(dòng)物中獲得一基因，其表達(dá)產(chǎn)物為一種抗菌性和溶血性均較強(qiáng)的多肽P1。目前在P1的基礎(chǔ)上研發(fā)抗菌性強(qiáng)但溶血性弱的多肽藥物，首先要做的是（） A. 合成編碼目的肽的DNA片段 B. 構(gòu)建含目的肽DNA片段的表達(dá)載體 C. 依據(jù)P1氨基酸序列設(shè)計(jì)多條模擬

3、肽 D. 篩選出具有優(yōu)良活性的模擬肽作為目的肽 解析由題中信息“在Pl的基礎(chǔ)上研發(fā)抗菌性強(qiáng)但溶血性弱的多肽藥物”可推知本題考查蛋白質(zhì)工程的相關(guān)知識(shí)。根據(jù)蛋白質(zhì)工程的基本途徑：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)一設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)一推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列一找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因），可推知答案為C。 答案C 3. （2013?江蘇單科）某種極具觀賞價(jià)值的蘭科珍稀花卉很難獲得成熟種子。為盡快推廣種植，可應(yīng)用多種技術(shù)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)苗，下列技術(shù)中不能選用的是（） A. 利用莖段扦插誘導(dǎo)生根技術(shù)快速育苗 B. 采用花粉粒組織培養(yǎng)獲得單倍體苗 C. 采集幼芽嫁接到合適的其他種類(lèi)植物體上 D. 采

4、用幼葉、莖尖等部位的組織進(jìn)行組織培養(yǎng) 解析本題考查對(duì)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)苗的多種技術(shù)手段的分析。為了使優(yōu)質(zhì)苗的生物性狀不發(fā)生性狀分離，可采用莖段扦插誘導(dǎo)生根技術(shù)快速育苗，也可采用將幼芽嫁接到合適的其他種類(lèi)植物體上的方法或用莖尖或幼葉等部位的組織進(jìn)行植物組織培養(yǎng)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)苗；花粉粒是減數(shù)分裂的產(chǎn)物，利用花粉粒離體培養(yǎng)得到的是單倍體苗，其高度不育，且會(huì)發(fā)生性狀分離，因此B項(xiàng)方案不能選用。 答案B 4. （2013?重慶理綜）某興趣小組擬用組織培養(yǎng)繁殖一種名貴花卉，其技術(shù)路線為“取材一消毒一愈傷組織培養(yǎng)一出芽一生根一移栽”。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（） A. 消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少

5、消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害 B. 在愈傷組織培養(yǎng)中加入細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑，可獲得染色體加倍的細(xì)胞 C. 出芽是細(xì)胞再分化的結(jié)果，受基因選擇性表達(dá)的調(diào)控 D. 生根時(shí)，培養(yǎng)基通常應(yīng)含a—萘乙酸等生長(zhǎng)素類(lèi)調(diào)節(jié)劑 解析本題主要考查植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)。在愈傷組織中，因植物細(xì)胞含有細(xì)胞壁，阻礙了細(xì)胞融合，所以此時(shí)加入細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑，不能獲得染色體加倍的細(xì)胞；消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害；愈傷組織出芽是細(xì)胞分化的結(jié)果，而細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)；生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素，生根時(shí)，培養(yǎng)基通常含有a-萘乙酸等生長(zhǎng)素類(lèi)調(diào)節(jié)劑。故B項(xiàng)

6、錯(cuò)誤。 答案B 5.（2013?浙江理綜）實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚細(xì)胞培養(yǎng)（非克隆培養(yǎng)）的基本過(guò)程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（） 實(shí)驗(yàn)小鼠一―一皮膚組織一―一皮膚細(xì)胞一丙一培養(yǎng)細(xì)胞1—丁一 培養(yǎng)細(xì)胞2 A. 甲過(guò)程需要對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行消毒 B. 乙過(guò)程對(duì)皮膚組織可用胰蛋白酶消化 C. 丙過(guò)程得到的細(xì)胞大多具有異倍體核型 D. 丁過(guò)程得到的細(xì)胞具有異質(zhì)性 解析本題主要考查了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)。取小鼠皮膚組織進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)需對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行消毒；通過(guò)胰蛋白酶消化皮膚組織可獲得皮膚細(xì)胞；丙過(guò)程為最初的傳代培養(yǎng)，得到的細(xì)胞大多具有正常二倍體核型；來(lái)源于多個(gè)細(xì)胞的非克隆培養(yǎng)所得到的細(xì)胞系具有異質(zhì)性，該

7、實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚細(xì)胞屬于非克隆培養(yǎng)，丁過(guò)程得到的細(xì)胞具有異質(zhì)性。 答案C 6.(2013?重慶理綜)如圖是單克隆抗體制備流程的簡(jiǎn)明示意圖。下列有關(guān)敘述，正確的是() A． B． C． D． 抗原 ①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞 ② 中使用胰蛋白酶有利于雜交瘤細(xì)胞的形成 ③ 同時(shí)具有脾臟細(xì)胞和鼠骨髓瘤細(xì)胞的特性小鼠腹腔體外克 ④ 是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群 解析本題主要考查單克隆抗體制備的相關(guān)知識(shí)。①是從已免疫的絆鼠體脾臟中獲得的漿細(xì)胞；②中使用聚乙二醇或滅活的病毒等，有利于雜交瘤細(xì) 胞的形成；③同時(shí)具有漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的特性；④是經(jīng)篩選

8、培養(yǎng)獲得的 能分泌特異性抗體的細(xì)胞群。故D項(xiàng)正確。 答案D 7.芥酸會(huì)降低菜籽的品質(zhì)。油菜有兩對(duì)獨(dú)立遺傳的等位基因(H和h,G和g)控制菜籽的芥酸含量，下圖是獲得低芥酸油菜新品種(HHGG)的技術(shù)路線。已知油菜單個(gè)花藥由花藥壁(2n)及大量花粉(n)等組分組成，這些組分的細(xì)胞都具有全能性。 中芥酸(HH燙) fF/HhGe)—? 據(jù)圖分析，下列敘述錯(cuò)誤的是() A. ①、②兩過(guò)程均需要植物激素來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞脫分化 B. 與④過(guò)程相比，③過(guò)程可能會(huì)產(chǎn)生二倍體再生植株 C. 圖中三種途徑中，利用花粉培養(yǎng)篩選低芥酸植株(HHGG)的效率最高 D. 耳減數(shù)分裂時(shí)，H基因所在染色體會(huì)與G

9、基因所在染色體發(fā)生聯(lián)會(huì)解析①②兩過(guò)程是脫分化過(guò)程，培養(yǎng)基中需要加入生長(zhǎng)素類(lèi)和細(xì)胞分 裂素類(lèi)激素來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞脫分化，故A項(xiàng)正確；③過(guò)程是利用植物花藥離體培養(yǎng)獲得植株的過(guò)程，其中花藥壁細(xì)胞屬于正常的二倍體體細(xì)胞，由其獲得的植株為二倍體正常植株，④過(guò)程是利用花粉粒離體培養(yǎng)獲得的，花粉細(xì)胞只有一個(gè)染色體組，由其獲得的植株為單倍體植株，故B項(xiàng)正確；圖中的三種途徑中，利用花粉培養(yǎng)獲得的只有四種品種，比例為1：1：1：1，易篩選出所需品種，故C項(xiàng)正確；H、h和G、g分別是兩對(duì)獨(dú)立遺傳的等位基因，故兩者是位于非同源染色體上的，在減數(shù)分裂時(shí)，H和G基因所在的染色體不會(huì)發(fā)生聯(lián)會(huì)，故D項(xiàng)錯(cuò)誤。 答案D8．天然的玫

10、瑰沒(méi)有藍(lán)色花，這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B，而開(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B。現(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰。下列操作正確的是() A. 提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA，再擴(kuò)增基因B B. 利用限制性核酸內(nèi)切酶從開(kāi)藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因B C. 利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞 D. 將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞 解析可以利用mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成目的基因后再進(jìn)一步擴(kuò)增，A項(xiàng)正確；因?yàn)殚_(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛基因B的序列是已知的，所以該目的基因宜采用化學(xué)方法合成或用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，而不是從開(kāi)藍(lán)色花矮牽

11、牛的基因文庫(kù)中獲取，B項(xiàng)錯(cuò)誤；目的基因必須與運(yùn)載體結(jié)合后才能導(dǎo)入受體細(xì)胞,且需要DNA連接酶縫合，C、D項(xiàng)錯(cuò)誤。 答案A 9. 下列是應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞工程獲取單克隆抗X抗體的具體操作步驟，其中 對(duì)單克隆抗體制備的相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是() ①?gòu)幕脊撬枇龅男∈篌w內(nèi)獲取骨髓瘤細(xì)胞②將X抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗X抗體的B淋巴細(xì)胞③將雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)④篩選出能產(chǎn)生抗X抗體的雜交瘤細(xì)胞⑤利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞⑥從小鼠腹水中提取抗體⑦利用促細(xì)胞融合因子促使細(xì)胞融合 A. 實(shí)驗(yàn)順序應(yīng)該是①②⑦⑤④③⑥ B. ③過(guò)程產(chǎn)生多個(gè)雜交瘤細(xì)胞的過(guò)程稱(chēng)為克隆 C. ⑦過(guò)程獲得的細(xì)胞均可無(wú)限

12、增殖 D. 利用細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體的過(guò)程中通常要經(jīng)過(guò)兩次篩選 解析利用促細(xì)胞融合因子促使細(xì)胞融合，可獲得多種融合細(xì)胞。其中B淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合的細(xì)胞不能無(wú)限增殖。 答案C 10. (2013?杭州模擬)下圖示植物組織培養(yǎng)過(guò)程。據(jù)圖分析下列敘述正確 的是() A. B.②試管的培養(yǎng)基中含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，不含有有機(jī)物 C?③試管中的細(xì)胞能進(jìn)行減數(shù)分裂 D?調(diào)節(jié)④培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的比例可誘導(dǎo)產(chǎn)生不同的植物器官解析⑤植株根尖細(xì)胞的全能性與①植株根尖細(xì)胞相同；②試管的培養(yǎng)基中含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和有機(jī)物等；③試管中的細(xì)胞進(jìn)行的分裂方式為有絲分裂；調(diào)節(jié)

13、④培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的比例，可誘導(dǎo)產(chǎn)生根或芽。 答案D 二、非選擇題(共50分) 11.(10分)(2013?安徽馬鞍山第一次質(zhì)檢)絞股藍(lán)細(xì)胞中含有抗煙草花葉病毒(TMV)基因，可以合成一種抗TMV蛋白，葉片對(duì)TMV具有抗感染性。煙草是重要的經(jīng)濟(jì)作物，由于TMV的感染會(huì)導(dǎo)致大幅度減產(chǎn)。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗TMV的煙草，主要流程如下圖所示。 (1)科學(xué)家首先從絞股 O 目的基因。圖中①過(guò)程表示 攵抗TMV基因轉(zhuǎn)錄的RNA,然后合NA (2) 由圖分析，在過(guò)程③構(gòu)建的重組Ti質(zhì)粒上應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是 植物必需的各種營(yíng)養(yǎng)成分外，還 (3)在過(guò)程⑤培養(yǎng)

14、基中 基因，重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入煙草體細(xì)胞的方法是. 必須添加 —，，以侶訂乂葉＞山刀匕廿匕jL彳再生植株 ⑷過(guò)程⑥可采抗工J的方法，檢測(cè)植株是否合成了抗的蛋白。 在個(gè)體水平的鑒定過(guò)程中，可通過(guò)的方法來(lái)確定植株是否具有抗 性。 解析(1)由圖可知，①表示逆轉(zhuǎn)錄(或反轉(zhuǎn)錄)。(2)由圖示⑤培養(yǎng)基中含有卡那霉素可知，Ti質(zhì)粒的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因，將基因表達(dá)載體(重組Ti質(zhì)粒)導(dǎo)入植物細(xì)胞中常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。(3)將受體細(xì)胞培養(yǎng)成再生植株需要進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基中除含有卡那霉素及植物必需的各種營(yíng)養(yǎng)成分外，還必須添加植物激素。(4)通過(guò)抗原—抗體雜交的方法，檢測(cè)植株是否合

15、成了抗TMV蛋白，在個(gè)體水平上，通過(guò)接種煙草花葉病毒的方法可以確定植株是否具有抗性。 答案(1)逆轉(zhuǎn)錄 (2) 卡那霉素抗性農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 (3) 植物激素 (4) 抗原—抗體雜交接種煙草花葉病毒 12.(12分)(2013?天津理綜)花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定劑量的紫外線處理黑芥原生質(zhì)體可使其染色體片段化，并喪失再生能力。再利用此原生質(zhì)體作為部分遺傳物質(zhì)的供體與完整的花椰菜原生質(zhì)體融合，以獲得抗黑腐病雜種植株。流程如下圖。據(jù)圖回答下列問(wèn)題： (1) 過(guò)程① (2) 過(guò)程② 這一特征可作為 光照培養(yǎng)的 所^酶是 后，在顯微鏡下觀

16、察融合的「?…思甜的種為的標(biāo)志。 葉肉細(xì). 合的活細(xì)胞中有供體的m存在，質(zhì) (3) 原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇以保持一定的滲透壓, 其作用是.。原生質(zhì)體經(jīng)過(guò)再生，進(jìn)而分裂和脫分化 形成愈傷組織。 (4) 若分析再生植株的染色體變異類(lèi)型，應(yīng)剪取再生植株和________植株 的根尖，通過(guò)、、染色和制片等過(guò)程制成裝片，然后在顯 微鏡下觀察比較染色體的形態(tài)和數(shù)目。 (5) 采用特異性引物對(duì)花椰菜和黑芥基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到兩 親本的差異性條帶，可用于雜種植株的鑒定。下圖是用該引物對(duì)雙親及再生植株1?4進(jìn)行PCR擴(kuò)增的結(jié)果。據(jù)圖判斷，再生植株1?4中一定

17、是雜種植株的有。 花椰菜1 .接種實(shí)驗(yàn)，可篩選出具有高抗性的雜種植株。 (6) 對(duì)雜種植株進(jìn)行 解析本題考查植物細(xì)胞工程、染色體變異的實(shí)驗(yàn)鑒定以及高抗性的雜種植株的篩選等相關(guān)知識(shí)。(1)去除細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體需要用纖維素酶和果膠酶處理。⑵葉肉細(xì)胞含有葉綠體，因此通過(guò)PEG導(dǎo)融合種細(xì)胞應(yīng)含有葉綠體，以此作為初步篩選雜種細(xì)胞的標(biāo)志。(3)原生質(zhì)體失去了細(xì)胞壁的保護(hù)作用，因此原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇，使原生質(zhì)體處于等滲溶液中，以維持原生質(zhì)體正常形態(tài)。原生質(zhì)體經(jīng)過(guò)細(xì)胞壁再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成愈傷組織。(4)要判斷染色體變異的類(lèi)型，應(yīng)剪取再生植 株、花椰菜和黑芥植株的根尖，

18、通過(guò)解離、漂洗、染色、制片等過(guò)程制成裝 片，然后進(jìn)行顯微觀察比較染色體的形態(tài)和數(shù)目。(5)根據(jù)兩親本的差異性條帶，可知再生植株1、2和4既有花椰菜的條帶，又有黑芥的條帶，因此再生植株1、2和4一定為雜種植株。(6)要篩選出高抗性的雜種植株，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的病原體接種實(shí)驗(yàn)，即接種黑腐病菌。 答案(1)纖維素酶和果膠酶 (2)葉綠體 (3) 保持原生質(zhì)體完整性細(xì)胞壁 (4) 雙親(或花椰菜和黑芥)解離漂洗 (5) 1、2、4 (6) 黑腐病菌 13.(18分)(2013?海南單科)單純皰疹病毒I型(HSV—1)可引起水泡性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗HSV—1的單克隆抗體可快速檢測(cè)H

19、SV—1。 回答下列問(wèn)題： (1) 在制備抗HSV—1的單克隆抗體的過(guò)程中，先給小鼠注射一種純化的 HSV—l蛋白，一段時(shí)間后，若小鼠血清中抗的抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，說(shuō) 明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了反應(yīng)，再?gòu)男∈蟮闹蝎@取B淋巴細(xì)胞。 將該B淋巴細(xì)胞與小鼠的細(xì)胞融合，再經(jīng)過(guò)篩選、檢測(cè)，最終可獲 得所需的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞具有的特點(diǎn)是 。 (2) 若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠 的中使其增殖，再?gòu)闹刑崛　⒓兓@得。 (3) 通過(guò)上述方法得到的單克隆抗體可準(zhǔn)確地識(shí)別這種HSV—1蛋白，其 原因是該抗體具有和等特性。 解析(1)制備單克隆抗體時(shí)，需要先給小鼠注射特定

20、抗原(HSV-1蛋白)，當(dāng)小鼠血清中抗HSV-1蛋白的抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性時(shí)，就可從小鼠脾臟中獲取B淋巴細(xì)胞，將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)過(guò)篩選和克隆化培養(yǎng)， 最終獲得既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體的雜交瘤細(xì)胞。（2）單克隆抗體的獲取有兩條途徑，一是從體外細(xì)胞培養(yǎng)液中提純獲得，二是將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的腹腔中使其增殖，再?gòu)母顾刑崛?、純化獲得。（3）單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、純度高等特點(diǎn)。 答案（1）HSV-1蛋白體液免疫（其他合理答案也可）脾臟（其他合理答案也可）骨髓瘤無(wú)限增殖且產(chǎn)生專(zhuān)一抗體（其他合理答案也可） （2）腹腔腹水 （3）純度高特異性強(qiáng)（其他合理答案也可） 14.

21、（10分）圖①表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度（bp即堿基對(duì)）和部分堿基序列，圖②表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有MspI、BamHI、MboI、SmaI4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為CjCGG、GjGATCC、jGATC、CCCjGGG。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： Il111111ifVi GGATCC CCTAGGGidGCCC II門(mén)II“I1“」Il!l!lIIII-」I⑴圖①的一條脫氧養(yǎng) 目的基因D **TTTTTTT CGGGCCCGGGGGATCC GGGCCCCCTAGG 亠"I1 —條脫氧核咄喩鏈中相鄰兩個(gè)堿I基之間依次由? 連接

22、。 末端，其產(chǎn)物長(zhǎng)度為 （2）若用限制酶SmaI完全切割圖①中DNA片段,產(chǎn)生的末端是 O （3）若圖①中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換，那么基因D就突變 為基因do從雜合子分離出圖①及其對(duì)應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaI完全 (4) 若將圖②中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩 選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 經(jīng)檢測(cè)，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中的目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是。 解析(1)在一條脫氧核苷酸鏈上，相鄰兩個(gè)脫氧核苷酸之間通過(guò)3,5-磷酸二酯鍵

23、相連，所以相鄰堿基之間通過(guò)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖相連接。⑵SmaI識(shí)別并切割的序列為CCCjGGG,所以產(chǎn)生的末端為平末端，經(jīng)Smal切割后，DNA片段會(huì)形成三個(gè)小的DNA片段，按切割位點(diǎn)計(jì)算分別是：534bp+3bp=537bp;796bp-3bp-3bp=790bp;658bp+3bp=661bp。(3)雜合子基因型為Dd。用SmaI切割基因D,會(huì)形成537bp、790bp、661bp三種類(lèi)型。題圖①中虛線方框內(nèi)C—G被T—A替換，失去了一個(gè)酶切位點(diǎn)，貝U會(huì)被切割成534bp+796bp-3bp=1327bp,和658bp+3bp=661bp。所以一共會(huì)得到4種類(lèi)型的片段。⑷如果要獲得完整的目的基因可用BamHI和MboI切割,但是MboI會(huì)破壞抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因,質(zhì)粒會(huì)失去標(biāo)記基因,無(wú)法篩選,所以只能用BamHI切割。用BamHI切割后破壞了抗生素A抗性基因,所以質(zhì)粒上存在的標(biāo)記基因是抗生素B抗性基因，因此，在加入抗生素B的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)、篩選，經(jīng)過(guò)同種限制酶切割后會(huì)產(chǎn)生相同的末端,部分目的基因與質(zhì)粒反向連接導(dǎo)致基因無(wú)法正常表達(dá)。 答案(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖 (2) 平537bp、790bp、661bp (3) 4 (4) BamHI抗生素B同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基 因D與質(zhì)粒反向連接