《實時熒光定量PCR技術(shù)詳解和總結(jié)》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《實時熒光定量PCR技術(shù)詳解和總結(jié)（22頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。
1、實時定量PCR技術(shù),目錄,實時定量PCR基本原理 實時定量PCR實驗材料 實時定量PCR實驗方法 實時定量PCR實驗結(jié)果,實時定量PCR基本原理,實時定量PCR的定義 實時定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,定量PCR技術(shù)：利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，最終精確的對起始模板的定量分析,實時定量PCR的定義,定量PCR三個基本概念,擴(kuò)增曲線,指數(shù)增長期,平臺期,線性增長期,背景期,閾值與C(t)值,閾值：是循環(huán)開始315個循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍，設(shè)定在擴(kuò)增曲線指數(shù)增長期 C(t)值：熒光信號（擴(kuò)增產(chǎn)物）到達(dá)閾值時所經(jīng)過的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù),定量PCR的數(shù)學(xué)原理,理想的
2、PCR反應(yīng)： Xn=X02n 非理想的PCR反應(yīng)： Xn=X0(1+Ex)n 方程式兩邊同時取對數(shù)得: log Xn=log (X0 (1+Ex)n) 整理方程式得: log X0= (- log(1+Ex) )n+ log Xn 將C(t)和達(dá)到C(t)值時終產(chǎn)物的量Xc(t)帶入上式得： log X0= (- log(1+Ex) ) C(t)+ log Xc(t) 初始濃度的對數(shù)與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系,n：擴(kuò)增反應(yīng)的循環(huán)次數(shù) Xn：第n次循環(huán)后的產(chǎn)物量 X0：初始模板量 Ex：擴(kuò)增效率,初始模板量越多，C(t)值越小 C(t)與初始模板濃度的對數(shù)值成線性關(guān)系,實時定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,定量原理,濃度的對數(shù)值與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系，根據(jù)樣品擴(kuò)增達(dá)到域值的循環(huán)數(shù)（Ct值）就可分析樣品中起始模板量,定量PCR的實驗步驟,標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA的提取 QPCR探針和引物的設(shè)計 陽性克隆質(zhì)粒的構(gòu)建 熒光定量PCR反應(yīng) 定量標(biāo)準(zhǔn)曲線 重復(fù)性實驗 靈敏性實驗,實驗材料,
實時熒光定量PCR技術(shù)詳解和總結(jié)
