《實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)詳解和總結(jié)》由會(huì)員分享,可在線閱讀,更多相關(guān)《實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)詳解和總結(jié)(22頁(yè)珍藏版)》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。
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2、PCR反應(yīng): Xn=X02n 非理想的PCR反應(yīng): Xn=X0(1+Ex)n 方程式兩邊同時(shí)取對(duì)數(shù)得: log Xn=log (X0 (1+Ex)n) 整理方程式得: log X0= (- log(1+Ex) )n+ log Xn 將C(t)和達(dá)到C(t)值時(shí)終產(chǎn)物的量Xc(t)帶入上式得: log X0= (- log(1+Ex) ) C(t)+ log Xc(t) 初始濃度的對(duì)數(shù)與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系,n:擴(kuò)增反應(yīng)的循環(huán)次數(shù) Xn:第n次循環(huán)后的產(chǎn)物量 X0:初始模板量 Ex:擴(kuò)增效率,初始模板量越多,C(t)值越小 C(t)與初始模板濃度的對(duì)數(shù)值成線性關(guān)系,實(shí)時(shí)定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,定量原理,濃度的對(duì)數(shù)值與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系,根據(jù)樣品擴(kuò)增達(dá)到域值的循環(huán)數(shù)(Ct值)就可分析樣品中起始模板量,定量PCR的實(shí)驗(yàn)步驟,標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA的提取 QPCR探針和引物的設(shè)計(jì) 陽(yáng)性克隆質(zhì)粒的構(gòu)建 熒光定量PCR反應(yīng) 定量標(biāo)準(zhǔn)曲線 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 靈敏性實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)材料,