北京化工大學(xué)儀器分析第三章液相色譜實例分析.ppt

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液相色譜常見問題及故障排除經(jīng)驗 液相系統(tǒng)維護流程圖 色譜柱 等度系統(tǒng) 儲液瓶 脫氣機 泵單元 手動進樣器 色譜柱 檢測器 廢液瓶 1234567 低壓梯度系統(tǒng) 123456789 高壓梯度系統(tǒng) 12345678 液相色譜故障排除經(jīng)驗 故障的確定 至少要重復(fù)出現(xiàn)兩次以上初步判斷故障引起的原因 方法或硬件由經(jīng)驗或平時的積累確定故障原因 平時做好觀察和記錄當(dāng)不能確認(rèn)故障原因時 采用排除法逐一考察可能引起故障的因素確定故障能否自行處理 不要貿(mào)然拆卸不熟悉的部件 常見故障因素 儀器環(huán)境 實驗室的溫度 濕度 酸度等 實驗室震動 灰塵等問題 電源及地線問題使用條件 流動相 pH值 均勻度 氣泡等 樣品 樣品分解 氧化 樣品溶劑等 色譜柱 污染 堵塞 塌陷等 硬件問題 輸液泵 進樣器 檢測器 平常保養(yǎng) 做好平常的保養(yǎng)可以有效的降低故障的發(fā)生率 做好平常的保養(yǎng)可以延長儀器的使用壽命常做的保養(yǎng) 保證儀器的使用環(huán)境 經(jīng)常清潔儀器 尤其是灰塵 泵的保養(yǎng) 使用緩沖鹽時要清洗柱塞 水和鹽不要長期保存在泵里 進樣器要經(jīng)常清洗 避免污染物吸附或堵塞管路 盡量進行樣品前處理 色譜柱要定期清洗 保證柱效及使用壽命 系統(tǒng)中不要長期保存水和鹽 長時間不用時應(yīng)將儀器所有部分全部更換為70 以上的甲醇 避免細(xì)菌的滋生及鹽的析出 液相色譜常見問題 壓力異常 偏高 波動 漏液保留時間漂移基線問題 漂移 噪聲 峰形異常 壓力 壓力是液相色譜中最重要的指標(biāo) 要經(jīng)常關(guān)注壓力的變化 保留時間的變化經(jīng)常是由于壓力問題引起的 不同溶劑即使在相同流速和溫度的情況下壓力也是不同的 記下儀器正常狀態(tài)時 在固定條件下 流動相 流速 溫度等 的壓力顯示值 壓力過高時 首先要確認(rèn)是色譜柱堵塞還是系統(tǒng)堵塞色譜柱堵時 確認(rèn)可能造成堵塞的樣品的性質(zhì) 相應(yīng)選擇合適的清洗溶劑 系統(tǒng)堵塞 首先應(yīng)確認(rèn)是哪一部份堵塞 依據(jù)情況由后向前進行排除 容易發(fā)生堵塞的部件 保護柱及色譜柱線路過濾器混合器過濾組件管路連接處進樣器檢測器流通池 壓力過低 如果壓力為零 泵頭中沒有液體 充滿氣泡單向閥完全堵死泵的柱塞桿折斷壓力傳感器損壞 流動相流動正常 但無壓力 如果有壓力但是壓力比正常時低 漏液單向閥堵塞 壓力波動 壓力在短時間內(nèi)劇烈波動 泵頭中有氣泡單向閥臟柱塞密封圈漏液 經(jīng)常漏液的部件 泵 柱塞密封圈 排液閥手動進樣器 轉(zhuǎn)子密封圈磨損檢測器 流通池窗口 墊片損壞 透鏡破碎 接頭處漏液 接頭松動 接頭臟 接頭磨損 部件不匹配 保留時間不穩(wěn)定 吸濾頭臟泵輸液不正常 壓力波動 氣泡等 流動相組分變化流動相緩沖能力不夠色譜柱平衡時間不夠柱溫的變化柱子問題 噪音大 流動相污染 變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成漏液流動相 泵 檢測器流通池內(nèi)有氣泡流動相各溶劑不相溶或混和不均勻檢測池能量不足流通池被污染溫度影響 檢測器和柱溫差別太大 其他電子設(shè)備的影響或電源 地線等 基線漂移 流動相污染 變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成流動相不均勻 脫氣 使用純度更高的溶劑 溫度波動系統(tǒng)平衡時間不夠流通池被污染或有氣泡流通池窗口破裂 峰形問題 死體積太大柱子被污染或堵塞色譜柱塌陷流動相緩沖不足或不合適樣品溶劑選擇不當(dāng) 與流動相之間極性差異太大樣品過載 濃度或體積 柱溫過低 鬼峰 流動相被污染進樣閥殘余峰樣品中未知物色譜柱中的污染物 管線選擇 材料不銹鋼Teflon 聚四氟乙烯 PEEK 聚醚醚酮 尺寸0 1mmI D x1 6mmO D 0 3mmI D x1 6mmO D 0 5mmI D x1 6mmO D 0 8mmI D x1 6mmO D 管線材料 不銹鋼 可用于所有連接 能承受幾千kgf cm2壓力酸性或高濃度鹽環(huán)境中易腐蝕 尤其在pH小于2時 PEEK 可用于所有連接 能承受高達(dá)250kgf cm2壓力可在整個PH范圍 pH1 14 內(nèi)使用不適用于高溶解性溶劑如氯仿等Teflon 用于柱后阻尼管 反應(yīng)管和排液管 化學(xué)惰性大能承受5kgf cm2壓力 接頭 不銹鋼接頭 墊圈主要用于輸液泵 進樣器的連接能承受400kgf cm2壓力一旦固定 墊圈不可再動PEEK接頭主要用于色譜柱 檢測器的連接易于安裝能承受250kgf cm2壓力容易產(chǎn)生死體積 不銹鋼接頭 墊圈 PEEK接頭 死體積 死體積可能會引起分離度變差和重現(xiàn)性變差等問題 管線 公螺母 死體積 好的連接 差的連接 選擇原則采用 HPLC 級溶劑避免使用會引起柱效損失或保留特性變化的溶劑對試樣有適宜的溶解度溶劑粘度要小與檢測器相匹配 流動相 水 甲醇梯度ODS柱 鬼峰 鬼峰的出現(xiàn) 流動相 水的等級純化水蒸餾水去離子水 波長 nm 純化水 去離子水 因為不純物的存在 去離子的吸光率較高 純化水中去除了無機和有機的污染物 吸光率 流動相 流動相的更換 不互溶的流動相不能直接更換 緩沖鹽不能直接用有機溶劑更換 水 正己烷 異丙醇 緩沖鹽 有機溶劑 水 過濾 0 45um或更小孔徑濾膜目的 除去溶劑中的微小顆粒 避免堵塞色譜柱 尤其是使用無機鹽配制的緩沖液時 溶劑前處理 吸濾頭 吸濾頭 材料 不銹鋼 或陶瓷 燒結(jié) 孔徑10um故障 堵塞表現(xiàn) 管路中不斷有氣泡生成措施 用異丙醇 或5 稀硝酸 超聲波清洗 再用蒸餾水清洗 LC20AT主入口閥部件號 228 45704 92 LC20AD入口閥LC20AT副入口閥部件號 228 45704 91 LC20AD出口閥部件號 228 45705 91 單向閥 LC10ADvp出口閥LC10ATvp出口閥部件號 228 34976 91 LC10ADvp入口閥部件號 228 39093 92 LC10ATvp入口閥部件號 228 32166 91 進樣器 自動進樣器手動進樣器 7725 7725i 原理 六通閥 注入方式 1 全量注入2 部分注入 7725i手動進樣閥 色譜柱的日常保養(yǎng) 購買新柱后一定要仔細(xì)閱讀說明書 確認(rèn)柱的使用條件以及清洗再生步驟 按照說明書條件測試色譜柱柱效 記錄使用壓力定期檢測柱壓和柱效不同流動相之間轉(zhuǎn)換時應(yīng)注意溶劑的互溶性確認(rèn)樣品不會在流動相中析出或帶有固體不溶物 請使用0 45um或0 2um的一次性濾膜過濾樣品 或者進行前處理 為了延長色譜柱使用壽命 請使用保護柱 定期用合適的溶劑清洗或再生色譜柱長期不用時 清洗干凈后 使用柱子說明書中指明的溶劑保存 柱子要從儀器上卸下并用堵頭密封后保存 定期用合適的流動相清洗保存的柱子 避免干涸 峰產(chǎn)生有肩或分叉的原因 1 柱子劣化 進口處產(chǎn)生不均勻的空隙 溶劑效應(yīng)3 樣品劣化 生成氧化物 分解物等 判斷標(biāo)準(zhǔn)所有的峰都產(chǎn)生有肩峰或分叉時則為柱子劣化 峰的變形 根部變寬 有肩或分叉 溶解樣品的溶劑選擇不當(dāng) 最好不要選擇高溶解性的試劑作為溶解樣品的溶劑 最好注入少量樣品 溶解性效應(yīng) 低溶解性溶劑 高溶解性溶劑 檢測器基線異常 基線噪音異常大氣泡未脫出檢測器污染燈老化出現(xiàn)漂移或不規(guī)則波動系統(tǒng)污染 如色譜柱 管路 檢測器和流動相等等產(chǎn)生規(guī)則波動室溫變化 如空氣調(diào)節(jié)器直吹檢測器泵的脈動 紫外燈的保養(yǎng) 氘燈保證壽命為2000小時保證儀器的使用環(huán)境在分析前 柱平衡得差不多時 再打開檢測器紫外燈 不要頻繁的開關(guān)紫外燈 同樣會損害紫外燈的壽命 一般間隔時間在三小時以上時 檢測池背壓 使用0 3mmIDx2m塑料管作為阻尼管連接于檢測器出口 否則檢測池中會有氣泡產(chǎn)生連接阻尼管之前 必須先確認(rèn)檢測池能夠承受的壓力