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實(shí)驗(yàn)16? 花粉活力的測(cè)定
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在作物雜交育種、作物結(jié)實(shí)機(jī)理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鑒定。掌握花粉活力快速測(cè)定的方法，是進(jìn)行雄性不育株的選育、雜交技術(shù)的改良以及揭示 內(nèi)外因素對(duì)花粉育性和結(jié)實(shí)率影響的基礎(chǔ)。
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一、花粉萌發(fā)測(cè)定法
【原理】
正常的成熟花粉粒具有較強(qiáng)的活力，在適宜的培養(yǎng)條件下便能萌發(fā)和生長(zhǎng)，在顯微鏡下可直接觀察計(jì)算其萌發(fā)率，以確定其活力。
【器材與用具】
載玻片；顯微鏡；玻棒；恒溫箱；培養(yǎng)皿；濾紙。
【試劑】
培養(yǎng)基：10%蔗糖，10mg/L硼酸，0.5%的瓊脂。稱10g蔗糖、1mg硼酸、0.5g瓊脂與90ml水放入燒杯中，在100℃水浴中
2、熔化,冷卻后加水至100ml備用。
??? ?【方 法】
??? 1.將培養(yǎng)基熔化 后，用玻棒蘸少許，涂布在載玻片上，放入墊有濕潤(rùn)試紙的培養(yǎng)皿中，保濕備用。
2.采集絲瓜、南瓜或其他 葫蘆科植物剛開放或?qū)⒁_放的成熟花朵，將花粉灑落在涂有培養(yǎng)基的載玻片上，然后將載玻片放置于墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，在25℃左右的恒溫箱（或室溫20℃條件下）中孵育，5~10min后在顯微鏡下檢查5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)其萌發(fā)率。
??? ?【注意事項(xiàng)】
??? 1.不同種類植物 的花粉萌發(fā)所需溫度、蔗糖和硼酸濃度不同，應(yīng)依植物種類而改變培養(yǎng)條件。
??? 2.此法也可用于 觀察花粉管在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度以及不同蔗
3、糖濃度，離體時(shí)間，環(huán)境條件等因素對(duì)花粉活力的影響。
3.不是所有植物的花粉都 能在此培養(yǎng)基上萌發(fā)，本法適用于易于萌發(fā)的葫蘆科等植物花粉活力的測(cè)定。
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二、碘- 碘化鉀染色測(cè)定法
【原理】
多數(shù)植物正常的成熟花粉粒呈球形，積累較多的淀粉，I2-KI溶液可將其 染成藍(lán)色。發(fā)育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或積累淀粉較少，I2-KI溶液染色呈黃褐色。因此，可用I2-KI溶液染色來測(cè)定花粉活力。
【器材與用具】
? ??顯微鏡；載玻片與 蓋玻片；鑷子；棕色試劑瓶；燒杯；量筒；天平。
??? 【試劑】
??? I2-KI溶液：取2g KI溶于5～10ml蒸餾水中，加入1g I2，
4、待完全溶解后，再加蒸鎦水300ml。貯于棕色瓶中備用。
【方法】
采集水稻、小麥或玉米可育和不育植株的成熟花藥，取一花藥于載玻片上，加一滴蒸餾水，用鑷子將花藥搗碎，使花粉粒釋放，再加1～2滴I2-KI溶液，蓋上 蓋玻片，在顯微鏡下觀察。凡是被染成藍(lán)色的為含有淀粉的活力較強(qiáng)的花粉粒，呈黃褐色的為發(fā)育不良的花粉粒。觀察2～3張片子，每片取5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)花粉的染色率，以染色率表示花 粉的育性。
? ?【注意事項(xiàng)】
此法不能準(zhǔn)確表示花粉的活力，也不適用于研究某一處理對(duì)花粉活力的影響。因?yàn)槿似谕嘶幕ǚ垡延械矸鄯e累，遇碘呈藍(lán)色反應(yīng)。另外，含有淀粉而被殺死的花 粉粒遇I2-KI也呈藍(lán)色。
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三、氯化三苯基四氮唑（TTC）法
【原理】
具有活力的花粉呼吸作用較強(qiáng)，其產(chǎn)生的NADH2或NADPH2可將無色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）還原成紅色的TTF（三苯基甲?? ）而使其本身著色，無活力的花粉呼吸作用較弱，TTC的顏色變化不明顯，故可根據(jù)花粉吸收TTC后的顏色變化判斷花粉的生活力。
【器材與用具】
顯微鏡；載玻片與蓋玻片；鑷子；恒溫箱；棕色試劑瓶；燒杯；量筒；天平。
【試劑】
0.5%TTC溶液：稱取0.5g TTC放入燒杯中，加入少許95%酒精使其溶解，然后用蒸餾水稀釋至100ml。溶液避光保存，若發(fā)紅時(shí)，則不 能再用。
【方法】?
采集任何植物的花粉，取少許放在干潔的載玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，攪勻后蓋上蓋玻片，置35℃恒溫箱中，10~15min后鏡檢，凡被染為紅色的花 粉活力強(qiáng)，淡紅次之，無色者為沒有活力或不育花粉。觀察2~3張片子，每片取5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
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青草綠2
花粉活力測(cè)定的3種方法【沐風(fēng)書屋】
