常用pH緩沖溶液的配制和pH值.doc

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1、（一）溶液配制注意事項(xiàng) 1．藥品要有較好的質(zhì)量試劑分為優(yōu)級純（保證試劑，Guaranteedreagent，G．R．）、分析試劑（Antalyticalreagent，A．R．）化學(xué)純（Chemicalpure，C．P．）和實(shí)驗(yàn)試劑（Laboratoryreagent，L．R．）等等。工業(yè)用的化學(xué)試劑，雜質(zhì)較多，只在個(gè)別情況下應(yīng)用，如配洗液用的硫酸、配干燥劑的氯化鈣等。 2．藥品稱量要精確。 3．配制試劑用水應(yīng)用新鮮的去離子水或雙蒸餾水，比電阻值在50萬歐姆以上，pH在5.5~7.0之間才可應(yīng)用，在組織培養(yǎng)等特殊用途時(shí)應(yīng)注意此項(xiàng)要求，配制一般化驗(yàn)用溶液只要求用雙蒸餾水或去離子水。

2、 ４．配好后的溶液，應(yīng)立即除菌處理（如高壓滅菌、抽濾或加抑菌物質(zhì)），以防雜菌生長。 （二）0.067（1/15）Mol/L磷酸緩沖液 1．1/15Mol/L磷酸二氫鉀溶液的配制：稱取磷酸二氫鉀（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸餾水溶解后，傾入1000ml容量瓶內(nèi)，再稀釋至刻度（1000ml）。 2．１/15Mol/L磷酸二氫鈉溶液的配制：稱取無水磷酸氫二鈉（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO42H2O11.87g）用蒸餾水溶解后，放入1000ml容量瓶內(nèi)，再加蒸餾水稀釋至刻度（1000ml）。 3．按附表的比例，配制成不同pH值的緩沖溶液。 附

3、表1磷酸鹽緩沖液配制法（單位：毫升） pH1/15Mol/LNa2HPO41/15Mol/LKH2PO4pH1/15Mol/LNa2HPO41/15Mol/LKH2PO4 5.88.092.07.166.623.4 5.99.990.17.272.028.0 6.012.287.87.376.823.2 6.115.384.77.380.819.2 6.218.681.47.584.115.9 6.322.477.67.687.013.0 6.426.773.37.789.410.6 6.531.868.27.891.58.5 6.637.562.57.

4、993.26.8 6.743.556.58.894.75.3 6.849.650.48.195.84.2 6.955.444.68.297.03.0 7.061.138.98.498.02.0 （三）0.15Mol/LPB液 附表20.15Mol/LPB液配制法 pH0.15Mol/LNa2HPO4（ml）0.15Mol/LNaH2PO4（ml） 6.426.573.5 6.637.562.5 6.849.051.0 7.061.039.0 7.272.028.0 7.481.019.0 7.687.013.0 Na2HPO4

5、2H2O分子量=175.050.15Mol/L溶液含26.7g/L。 Na2HPO412H2O分子量=358.220.15Mol/L溶液含53.7g/L。 NaH2PO4H2O分子量=138.000.15Mol/L溶液含20.7g/L。 NaH2PO42H2O分子量=156.030.15Mol/L溶液含23.4g/L。 （四）0.2Mol/LPB緩沖液 附表30.2mol/LPB緩沖液配制法 pH0.2Mol/LNa2HPO4（ml）0.2Mol/LNaH2PO4（ml） 5.88.092.0 6.012.387.7 6.218.581.5 6.426.

6、573.5 6.637.562.5 6.849.051.0 7.061.039.0 7.272.028.0 7.481.019.0 7.687.013.0 7.891.58.5 8.094.75.3 0.2Mol/LNa2HPO42H2O溶液35.61g/L Na2HPO412H2O溶液含71.64g/L 0.2Mol/LNaH2PO4H2O溶液含27.60g/L NaH2PO42H2O溶液含31.21g/L 欲配0.1Mol/LPB緩沖液則在0.2Mol/LPB緩沖液的基礎(chǔ)上加H2O稀釋1倍即可。欲配制PBS液時(shí)，則在溶液中加0.

7、85％的NaCl溶液即可。 （五）無鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水（PBS） （0.15Mol/LPH7.2） NaCl8.0g KCl0.2g Na2HPO41.15g （如為Na2HPO412H2O，則為2.89g） KH2PO40.2g 將上述試劑依次溶于1000ml去離子水中，完全溶解后，115℃高壓滅菌10min~15min，存在4℃冰箱中備用。此液可用于配制和稀釋細(xì)胞分散劑以及洗滌細(xì)胞培養(yǎng)物。 （六）硼酸鹽緩沖液（Boratesalinebuffer）文章來自：醫(yī)藥園()整理：zfg 1．硼酸（Ｈ3BO3） 0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加

8、水至1000ml。 2．硼砂（Na2B4O7） 0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1000ml。 附表4不同pH的0.2Mol/L硼酸緩沖液配制法 pH0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）pH0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml） 7.41.09.08.23.56.5 7.61.58.58.44.55.5 7.82.08.08.76.04.0 8.03.07.09.08.02.0 （七）巴比妥緩沖液 1．pH8.2離子強(qiáng)度0.05Mol/L巴比妥緩沖液 巴比妥鈉47.6g 蒸餾水3000m

9、l 1.17NHCl55.0ml （1.17NHCl=193ml濃HCl加1807ml蒸餾水） ⑴將4.76g巴比妥鈉溶于3000ml蒸餾水。 ⑵加1.17NHCl55ml。 ⑶用HCl調(diào)節(jié)pH到8.2，并加蒸餾水至4265ml。 2．pH8.40.06Mol/L巴比妥緩沖液 巴比妥1.84g 巴比妥鈉10.30g 加蒸餾水至1000.00ml 3．pH8.60.06Mol/L巴比妥緩沖液 巴比妥1.66g 巴比妥鈉12.76g 加蒸餾水1000.00ml （八）0.2Mol/L醋酸鹽緩沖液見表附表5 附表50.2Mol/L醋酸鹽緩沖

10、液配制法 pH0.2Mol/L Tris（ml）0.1Mol/L HCl（ml）pH0.2Mol/L Tris（ml）0.1Mol/L HCl（ml） 23℃37℃23℃37℃ 9.108.952558.067.902527.5 8.928.76257.57.967.822530.0 8.758.602510.57.877.732532.5 8.628.482512.57.777.632535.0 8.508.372515.57.667.522537.5 8.408.272517.57.547.402540.0 8.328.182520.07

11、.367.222542.5 （九）三羥甲基甲烷—鹽酸緩沖液（Tris—HCl緩沖液） 不同pH，0.05Mol/L 25ml0.2Mol/L三羥甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀釋至100ml（見下表） 附表6Tris—HCl緩沖液配制法 pH0.2Mol/L Tris(ml)0.1NHCl (ml)pH0.2Mol/L Tris(ml)0.1NHCl (ml) 23℃37℃23℃37℃ 9.108.962558.057.902527.5 8.928.78257.57.967.822530.0 8.748.602510.07.87

12、7.732532.5 8.628.482512.57.777.632535.0 8.508.372515.07.667.522537.5 8.408.272517.57.547.402540.0 8.328.182520.07.367.222542.5 8.238.102522.57.207.052545.0 8.148.002525.025 三羥甲基氨基甲烷（Tris） 分子量=121.14 0.2Mol/L三羥甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1000ml。 0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1000ml。 （十）0.5Mol

13、/LpH9.5碳酸鹽緩沖液 NaHCO33.70g Na2CO30.60g 溶于600.00ml蒸餾水中即得。 不用時(shí)塞緊瓶塞，以免吸收空氣中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。 （十一）甘油磷酸緩沖液 1．配制pH8.0磷酸緩沖液 0.1Mol/LNa2HPO494.50ml 0.1NNaH2PO45.50ml 混合即可 2．9份甘油與1份pH8.0磷酸緩沖液混合，即為甘油磷酸緩沖液。 用途：用于免疫熒光試驗(yàn)。 （十二）Hank’s液 1．貯存液 NaCl80.00g KCl4.00g Na2HPO412H2O1.52g KH

14、2PO40.60g 葡萄糖4.00g 0.4％酚紅液50.00ml 雙餾水加至100.00ml 115℃高壓滅菌15min，冰凍保存。 2．工作液 貯存液1份 雙餾水9份 115℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)用滅菌的5.6％NaHCO3液調(diào)pH值至7.2左右（溶液呈橙紅色）。 （十三）萘（鈉）氏試劑（Nessler’sreagent） 配方1：氯化汞6.0g 碘化鉀12.4g 20％NaOH30ml 加蒸餾水至100ml 配方2：碘化汞11.5g 碘化鉀8g 蒸餾水50ml （完全溶解后）過濾，加20％NaOH50ml。 用

15、途：檢測溶液中氨離子。 （十四）阿氏（Alsever’s）液 葡萄糖2.05g 檸檬酸鈉0.80g 氯化鈉0.42g 蒸餾水100ml 溶解后，以10%檸檬酸調(diào)節(jié)pH至6.1，過濾，分裝，10磅10min滅菌，4℃保存。 （十五）青、鏈霉素混合液（簡稱S．P．液或雙抗液） 青霉素（40萬U）5支 鏈霉素（200萬μg）1支 分別溶于100ml滅菌無離子水中或共同溶于200ml滅菌無離子水中，混合后分裝小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存?zhèn)溆茫?萬單位μg/ml）。 臨用時(shí)，按1%的量加入營養(yǎng)液或其他溶液中，最后濃度是青霉素100U/ml，鏈霉素100u

16、g/ml。 （十六）洗液（清潔液） 配方1：重鉻酸鉀150g 蒸餾水300ml 濃硫酸3000ml 將重鉻酸鉀加入蒸餾水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩堝中加熱溶解，然后慢慢加入濃硫酸，邊加邊攪拌，見發(fā)熱過劇則稍停，冷卻后再繼續(xù)加。此為強(qiáng)洗液。 盛清潔液的容器要堅(jiān)固，上加厚玻璃蓋，操作時(shí)要穿橡皮圍裙、長統(tǒng)膠靴、戴上眼鏡和厚膠皮手套，以保安全。 洗液一旦變綠，表示鉻酸已經(jīng)還原，失去了氧化能力，不宜再用。如將這樣洗液加熱，再加適量重鉻酸鉀，又可重新使用。 配方2：濃硫酸50% 蒸餾水50% 重鉻酸鉀5% 此為中等強(qiáng)度洗液。 配方3：重鉻酸鉀10

17、0g 蒸餾水1000ml 加熱溶解，冷卻后緩慢加入 工業(yè)硫酸100ml 此液為弱洗液，為棕紅色。使用此液時(shí)，必須預(yù)先用熱肥皂水將玻璃器皿洗凈，經(jīng)自來水沖洗，瀝干然后才能浸入，否則該洗液很快失效 　　緩沖溶液（英文：buffer solution）是一種能在加入少量酸或堿和水時(shí)大大減低pH變動(dòng)的溶液。pH緩沖系統(tǒng)對維持生物的正常pH值和正常生理環(huán)境起到重要作用。多數(shù)細(xì)胞僅能在很窄的pH范圍內(nèi)進(jìn)行活動(dòng)，而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現(xiàn)的pH變化。在生物體中有三種主要的pH緩沖體系，它們是蛋白質(zhì)緩沖系統(tǒng)、重碳酸鹽緩沖系統(tǒng)以及磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。每種緩沖體系所占的分量在各類細(xì)胞和

18、器官中是不同的。 　　在生化研究工作中，常常需要使用緩沖溶液來維持實(shí)驗(yàn)體系的酸堿度。研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到研究工作的成效。如果“提取酶”實(shí)驗(yàn)體系的pH值變動(dòng)或大幅度變動(dòng)，酶活性就會(huì)下降甚至完全喪失。所以配制緩沖溶液是一個(gè)不可或缺的關(guān)鍵步驟。 [編輯本段] 常用作緩沖溶液 　　常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。生化實(shí)驗(yàn)室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris（三羥甲基氨基甲烷）等系統(tǒng)，生化實(shí)驗(yàn)或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系，因?yàn)橛袝r(shí)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值，而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸

19、檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學(xué)反應(yīng)。 　　硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成復(fù)鹽、如蔗糖。 　　檸檬酸鹽：檸檬酸鹽離子容易與鈣結(jié)合，所以存在有鈣離子的情況下不能使用。 　　磷酸鹽：在有些實(shí)驗(yàn)，它是酶的抑止劑或甚至是一個(gè)代謝物，重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉淀出來。而且它在pH7.5以上時(shí)緩沖能力很小。 　　三羥甲基氨基甲烷：它可以和重金屬一起作用，但在有些系統(tǒng)中也起抑制作用。其主要缺點(diǎn)時(shí)溫度效應(yīng)。這點(diǎn)往往被忽視，在室溫pH是7.8的Tris緩沖液，4℃時(shí)是8.4，37℃時(shí)是7.4，因此，4℃配制的緩沖液在37℃進(jìn)行測量時(shí)，其氫離子濃度就增加了10倍。在

20、pH7.5以下，其緩沖能力極為不理想。 [編輯本段] 緩沖溶液組成 　　緩沖體系由 　?。?、弱酸和它的鹽（如HAc---NaAc） 　　2、弱堿和它的鹽（NH3.H2O---NH4Cl） 　　3、多元弱酸的酸式鹽及其對應(yīng)的次級鹽（如NaH2PO4---Na2HPO4） 　　的水溶液組成。 [編輯本段] 決定緩沖液pH值的因素 　　設(shè)緩沖系統(tǒng)的弱酸的電離常數(shù)為K（平衡常數(shù)），平衡時(shí)弱酸的濃度為[酸]，弱酸鹽的濃度為[鹽]，則由弱酸的電離平衡式可得下式： 　　[H+] = Ka {[弱酸]/[共軛堿]} 　　pH = pKa + log {[共軛堿]/[弱酸

21、]} 　　這就是Henderson-Hasselbach 等式。 　　如果[弱酸] = [共軛堿]， 　　pH = pKa 　　根據(jù)此式可得出下列幾點(diǎn)結(jié)論： 　　1 緩沖液的pH值與該酸的電離平衡常數(shù)K及鹽和酸的濃度有關(guān)。弱酸的pH值衡定，但酸和鹽的比例不同時(shí)，就會(huì)得到不同的pH值。酸和鹽濃度相等時(shí)，溶液的pH值與PK值相同。 　　2 酸和鹽濃度等比例增減時(shí)，溶液的pH值不便。 　　3 酸和鹽濃度相等時(shí)，緩沖液的緩沖效率為最高，比例相差越大，緩沖效率越低，緩沖液的一般有效緩沖范圍為PK1pH。 [編輯本段] 緩沖溶液的配制 　　只要知道緩沖對的PK值，和要配

22、制的緩沖液的pH值（及要求的緩沖液總濃度），就能按公式計(jì)算[鹽]和[酸]的量。這個(gè)算法涉及對數(shù)換算，較麻煩，前人為減少后人的計(jì)算麻煩，已為我們總結(jié)出pH值與緩沖液對離子用量的關(guān)系列出了表格。只要我們知道要配制的緩沖液的pH，經(jīng)查表便可計(jì)算處所用緩沖劑的比例和用量。例如配制500nmpH5.8濃度為0.1M磷酸緩沖液。 　　經(jīng)查表知pH5.8濃度為0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推論出配制100ml0.1M的磷酸緩沖液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。 　　計(jì)算好后，按計(jì)算結(jié)果準(zhǔn)確稱好固態(tài)化學(xué)成分，放于燒杯中，加少量蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)移入50ml容量瓶，加蒸餾水至刻度，搖勻，就能得到所需的緩沖液。 　　各種緩沖溶液的配制，均按表格按比例混合，某些試劑，必須標(biāo)定配成準(zhǔn)確濃度才能進(jìn)行，如醋酸、氫氧化鈉等。另外，所有緩沖溶劑的配制計(jì)量都能從以上的算式準(zhǔn)確獲得。