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1、雙向瓊脂擴散試驗,一、實驗目的,掌握雙向瓊擴試驗的原理和用途 掌握雙向瓊擴試驗操作方法 觀察抗原、抗體在瓊脂板中形成的沉淀線,一、原理,血清學反應： 凝集反應 沉淀反應 補體參與的反應 中和反應,凝集反應,顆粒性抗原，或吸附在顆粒性載體表面的可溶性性抗原，與相應抗體結合，在有適當電解質存在，經過一定時間，形成肉眼可見的凝集團塊 參與凝集反應的抗原稱凝集原，抗體稱為凝集素,,,沉淀反應,沉淀反應：將可溶性抗原與相應抗體混合，在電解質存在條件下，經過一定時間，即可形成肉眼可見的沉淀物 沉淀物只有在抗原抗體比例合適時才出現(xiàn),補體參與的反應,補體結合試驗是根據補體能與任何抗原抗體復合物結合，但不能單獨
2、同抗原或抗體結合的特性，用特定的補體來檢測抗原抗體間有無特異性結合,,中和反應,針對病毒的一些蛋白質抗原或抗原表位的抗體與病毒結合后可以中和病毒的感染性。 病毒中和試驗可以在細胞培養(yǎng)、雞胚或動物上進行，一般將抗體作稀釋，與一定量的病毒混合，然后檢測其在細胞培養(yǎng)、雞胚或動物上的殘余感染性。,,終點是以抑制細胞病變（細胞培養(yǎng)）或病毒復制（雞胚或動物）的抗體最高稀釋度來表示。 中和試驗具有很強的特異性，是檢測病毒和新分離病毒毒株的鑒定最經典的方法，也可用于檢測病毒感染動物血清中的抗體。,,單向瓊脂擴散試驗：指可溶性抗原在相應抗體的瓊脂介質中的擴散，可定性、定量抗原,,雙向瓊脂擴散試驗，是將抗原和相應
3、抗體分別加入同一凝膠板內的相鄰小孔中。兩者相互擴散，當擴散到他們的濃度比例合適的部位相遇時，就會形成抗原抗體復合物的沉淀,二、實驗材料,法氏囊病毒瓊擴抗原 法氏囊瓊擴陽性血清 1%瓊脂 玻片、打孔器、加樣器、tip頭等,三、步驟,稱取1g瓊脂粉，加至100ml 8%高滲鹽水中，配制1%瓊脂凝膠； 稍冷至55 卻后澆板(4ml/塊)，注意載玻片應放水平，瓊脂勿倒出板外； 待凝固后在瓊脂上打梅花孔(孔徑2mm,孔距3mm)，孔內的瓊脂如未吸出則用注射器針頭挑出 封底：將玻片于酒精燈上烘烤背面（溫度不宜過高，以不燙手為宜），使瓊脂與玻片緊貼； 將抗體按二倍比稀釋法稀釋成1:2，1:4，1:8，1:16，1:32 中間孔加抗原，周圍孔加倍比稀釋抗體，其中一個 孔加滴入生理鹽水作為對照（小心加樣，不要溢出） 置37 濕盒24-48h 結果觀察：在抗原抗體比例合適處，出現(xiàn)白色沉淀，以出現(xiàn)明顯的沉淀線的最高稀釋度為該抗體的效價,四、作業(yè),實驗報告（畫圖并解釋實驗結果） 瓊擴試驗應注意哪些事項？ 瓊擴試驗有何意義？,
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