生化工藝理論課復習資料.doc

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生化工藝理論課復習提綱第一章 緒論 1.生物技術(shù)產(chǎn)品的特點 （1）生物活性結(jié)構(gòu)復雜 （2）分布廣泛胞內(nèi)胞外 （3）原始濃度偏低 （4）組分復雜 （5）產(chǎn)物穩(wěn)定性差 批間差異大 （6）質(zhì)量要求高（生物醫(yī)藥） （7）經(jīng)濟性 2.生物分離純化技術(shù)的特點 （1）環(huán)境復雜、分離純化困難 （2）含量低、工藝復雜 （3）穩(wěn)定性差、操作要求嚴格 （4）目標產(chǎn)物最終的質(zhì)量要求很高 （5）終極產(chǎn)品純度的均一性與化學分離上純度的概念并不完全相同 （6）操作條件（環(huán)境）嚴格、無菌或密封 3.生物分離純化技術(shù)選擇依據(jù) 目標產(chǎn)物與雜志之間的生物學和物理化學性質(zhì)上的差異 4.以發(fā)酵液為例，生物分離純化的一般工藝流程第二章 發(fā)酵液的預處理 1.發(fā)酵液預處理目的（1）改變料液性質(zhì),促進固液分離，提高分離效率（2）除去部分雜質(zhì)(雜蛋白和不溶性的多糖等），以利后續(xù)操作（3）盡可能使產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到后處理的相(液）中，利于提取和精制的順利進行。 2.常見發(fā)酵液預處理方法 過濾特性的改善 a、加熱（降低黏度、去除雜蛋白） b、pH、稀釋 c、凝聚與絮凝（增大粒度） d、加助濾劑（改善過濾） 雜質(zhì)的去除 a、去雜蛋白（等電點、變性劑、吸附） b、去多糖（酶解） c、去離子（沉淀） 3.凝聚、絮凝與鹽析聯(lián)系： 絮凝、凝聚和鹽析都是使蛋白質(zhì)等膠體從溶 液中析出的方法，但其原理和方法有所不同。區(qū)別： 絮凝是指通過聚電解質(zhì)的架橋作用，將溶液中的蛋白質(zhì)連接起來，增大蛋白質(zhì)的尺度而不是蛋白沉淀。凝聚和鹽析雖然都是采用無機鹽使蛋白質(zhì)沉淀，但凝聚所用的是含有高價離子的無機鹽，主要是由于蛋白質(zhì)與帶相反電荷的高價離子發(fā)生電荷中和作用而使得蛋白質(zhì)聚集沉淀，所以凝聚所需的鹽濃度很低。而鹽析使用的是中性鹽，主要依靠鹽離子的親水性，奪走與蛋白質(zhì)親和的水而沉淀，因而鹽析通常需要較高的鹽濃度。 4.助濾劑-定義、原理 （1）定義： 助濾劑是一種質(zhì)地堅硬、顆粒均勻，不可壓縮的，具有吸附膠體能力的惰性物質(zhì)。 （2）原理： 助濾劑具有吸附膠體能力，可以改變?yōu)V餅的結(jié)構(gòu)（使其成網(wǎng)狀），降低濾餅的可 壓縮性（可壓縮變成部分可壓縮），從而降低過濾的阻力，加快過濾速度。 5.改善過濾的方法 a. 降低黏度：加水稀釋和加熱 b. 調(diào)整pH c、加入反應劑 d、加入助濾劑 e、增大懸浮顆粒體積 f、操作條件的改變 6. 錯流過濾（定義）：懸浮液在過濾介質(zhì)表面做切向流動，利用流動的剪切作用將過濾介質(zhì)表面的固體帶走的方 1.細胞破碎的定義、方法有哪些？ 定義：用物理、化學、酶或機械的方法破壞細胞壁或細胞膜。 方法： （1）機械破碎： 高壓勻漿法、珠磨法、超聲波破碎法、X-press法 （2）非機械破碎：酶溶法、化學試劑法、滲透壓沖擊法、反復凍融法、干燥法 2.高速球磨與高壓勻漿的影響因素 高速球磨：攪拌速度 適中 a. 破碎速率與外緣速度成正比（一定范圍） b.外緣速度增加，熱量與消耗的功率增加，產(chǎn)物失活率增加 細胞濃度最佳 珠粒的大小、用量 a.珠粒越小，細胞破碎速度越快（太小，易于漂?。?.2mm。 b.用量越多，細胞破碎速度越快（8090填充密度） T5-40 流量小 (6)微生物 高壓勻漿：a. T b.操作壓力 3.細胞破碎方法的選擇依據(jù) (1) 目標生化物質(zhì)的位置： (2) 目標生化物質(zhì)對破碎條件的敏感性： (3) 破碎程度、目的 (4) 規(guī)模、經(jīng)濟 4.各破碎方法的原理及應用 5.包涵體（定義）細菌表達的蛋白在細胞內(nèi)凝集，形成無活性的固體顆粒第三章 固相析出分離技術(shù) 1.可逆沉淀與不可逆沉淀 可逆沉淀：等電點沉淀、鹽析法、有機溶劑沉淀； 不可逆沉淀：熱變性沉淀、重金屬鹽沉淀、有機酸沉淀 2.鹽析-定義、原理及影響因素 鹽析：在高濃度的中性鹽存在下，蛋白質(zhì)（酶）等生物大分子物質(zhì) 在水溶液中的溶解度隨鹽濃度的升高會急劇下降，并產(chǎn)生沉淀， 這種現(xiàn)象稱為鹽析。鹽析原理a.鹽親水性大于pr親水性破壞水化模 b.鹽離子中和pr分子表面電荷，靜電斥力減弱。 影響因素： 鹽飽和度的影響、樣品濃度的影響、ph的影響、溫度的影響 影響因素： (1)溶質(zhì)種類的影響： (2)溶質(zhì)濃度的影響： 蛋白質(zhì)濃度大，鹽的用量小，共沉作用明顯，分辨率低； 蛋白質(zhì)濃度小，鹽的用量大，共沉作用小、分辨率高 (3)pH值：影響蛋白質(zhì)表面凈電荷的數(shù)量 通常調(diào)整體系pH值使其在pI附近；且pr穩(wěn)定性好 (4)鹽析溫度-常溫 一般在高鹽濃度下，溫度升高，其溶解度反而下降 3.有機溶劑沉淀-原理、常見沉淀劑（或條件）及影響因素 . 有機溶劑沉淀原理： （1）降低了溶質(zhì)的介電常數(shù)，使溶質(zhì)之間的靜電引力增加，從而出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，導致沉淀。 （2）由于有機溶劑的水合作用，降低了自由水的濃度，降低了親水溶質(zhì)表面水化層的厚度，從而降低了親水性，導致脫水凝聚破壞水化膜。 （3）加有機溶劑后，pr等分子的空間結(jié)構(gòu)可能發(fā)生變化，使內(nèi)部疏水基團部分外露，并與有機溶劑的疏水基團結(jié)合成疏水層，從而使蛋白沉淀。 常用的有機溶劑沉淀劑（或條件）：乙醇（常用于蛋白質(zhì)、核酸、多糖等 生物大分子的沉淀）、丙酮、甲醇 影響因素：（1）溫度預冷：低溫有利于防止溶質(zhì)變性；有利于提高收 率（溶解度下降）；（有機溶劑溶于水放熱） （2）攪拌速度散熱 （3）溶液pH值：目標蛋白與雜質(zhì)帶有相同的電荷，pI附近； 穩(wěn)定性好 （4）離子強度: 離子強度低有利于沉淀，0.010.05mol/L （5）樣品濃度: 0.52% ?。喝軇┯昧看螅厥章实?，但共沉淀作用小濃：節(jié)省溶劑用量，共沉作用強，分辨率低 4.沉淀與結(jié)晶的區(qū)別 聯(lián)系：沉淀法與結(jié)晶法都是將溶質(zhì)以固體形式從溶液中析出的方法 區(qū)別：沉淀是利用沉淀劑使所需提取的生化物質(zhì)或雜質(zhì)在溶液中的溶解 度；結(jié)晶是 溶液中的溶質(zhì)在一定條件下，因分子有規(guī)則的排列而 結(jié)合成晶體。兩者的區(qū)別在于構(gòu)成單位的排列方式不同，晶體的 原子、離子或分子排列是規(guī)則的，而沉淀是不規(guī)則的。 5.影響結(jié)晶的因素 (1)雜質(zhì)： a.促進生長、抑制生長、影響晶體外形 b.其透經(jīng)不同：晶體內(nèi)、吸附在晶體表面、晶體與溶液界面上的液層 (2)攪拌：加速晶體生長、加速晶核的生成； (3)溫度：T升高有利于擴散，增加結(jié)晶速度； (4)過飽和度：過飽和度增高一般使晶體生長速度增大，但粘度增大，結(jié) 晶速度受阻 第四章 萃取技術(shù) 1.基本概念：萃取、反萃取、分配定律及分離系數(shù) 萃取:利用溶質(zhì)在互不相溶的兩相中溶解度(或分配系數(shù)）的不同而使溶質(zhì)得到化 或濃縮的技術(shù)。 反萃取:將目標產(chǎn)物從有機相轉(zhuǎn)入水相的萃取操作。 分配定律：在恒溫恒壓條件下，溶質(zhì)在互不相溶的兩相中達到分配平衡時，在兩相 中的平衡濃度之比為常數(shù)。 分離系數(shù)：萃取劑對溶質(zhì)A和B分離能力的大小可用分離因素來表征 Ka/Kb 2.各種萃取方式的流程圖(P135)與特點 特點： 單級萃取:操作簡單、快速，但對分配系數(shù)不大的產(chǎn)物分離時回收率低 多級錯流萃取:回收率較高、但溶劑用量大、產(chǎn)物濃度低、能耗較大 。 多級逆流萃取：萃取效率高，萃取相中目標產(chǎn)物濃度高；溶劑用量少。 3.有機溶劑萃取： （1）影響因素（pH）a) 萃取劑的性質(zhì)b) 原溶劑（B）的 pH值對弱電解質(zhì)分配系數(shù)均具有顯著影響。弱酸性電解質(zhì)的分配系數(shù)隨pH降低(即氫離子濃度增大)而增大，而弱堿性電解質(zhì)則正相反。c) 溫度適宜d) 鹽析（2）萃取劑具備的條件a) 萃取容量大（如青霉素）b) 有較高的選擇性c) 不與目標產(chǎn)物發(fā)生反應，并且與水相不互溶；（d）與水相有較大的密度差，并且粘度小，表面張力適中，相分散和相分離較容易；（e）有鏈烴或芳烴，水溶性低（f）價廉易得；容易回收和再利用；（7）毒性低，腐蝕性小，使用安全。（3）乳化（定義、類型、形成條件、不利影響及消除方法）定義：一種液體以細小液滴（分散相）的形式分散在另一互不相容的液體（連續(xù)相）中。類型油包水（W/O ）型和水包油（O/W ）型兩大類乳狀液形成的條件a.互不相溶的兩相溶劑b.表面活性劑使有機溶劑（油）和水的表面張力降低 不利影響:相分離困難；夾帶目的物，導致收率低a) 去乳化方法：加熱、稀釋、吸附b) 離心或過濾（乳化現(xiàn)象不嚴重 ）c) 加強電解質(zhì)，破壞乳狀液雙電層d) 轉(zhuǎn)型：加相反的界面活性劑，促使乳狀液轉(zhuǎn)型。（如：對于o /w乳狀液，加親油性表面活性劑如SDS ，可使o /w向w/o轉(zhuǎn)化，但由于溶液條件不允許w/o的形成，從而達到破乳目的，相反對于w/o型乳濁液，加入親水性表面活性劑可達到破乳的目的）。e) 加入表面活性更強的物質(zhì)，把界面活性劑替代出來的頂替法f) 凝聚或絮凝等預處理4.雙水相萃取（1）雙水相萃取特點 (a) 條件溫和，保留產(chǎn)物活性(b) 通用性強（大分子及小分子萃?。?c) 步驟簡單,可連續(xù)操作（除去細胞的同時純化蛋白質(zhì)）、易于放大(d) 細胞碎片不需要去除(e) 成本高（2）雙水相形成的條件、相圖條件：至少有一種親水性很強的高聚物，另一種可以是親水性很高的無機鹽或高聚物相圖:（3）雙水相體系的類型及原因類型：1、 兩種都是非離子型高聚物（PEG / DEX、聚丙二醇/ DEX等）2、非離子型高聚物和離子型高聚物（羧甲基纖維素鈉/葡聚糖DEX）3、兩種都是離子型高聚物（羧甲基纖維素鈉/羧甲基葡聚糖鈉）4、高聚物和無機鹽（磷酸鹽、硫酸鹽等）原因：1、聚合物/聚合物體系高聚物不相容性2、對于聚合物/無機鹽雙水相系統(tǒng)主要是由于鹽析作用分相的（4）聚合物的不相容性（5）影響雙水相萃取的因素1. 雙水相中聚合物組成的影響2. 雙水相中聚合物濃度影響3.鹽與緩沖液 4.pH5. 溫度的影響(離開臨界點遠，不太敏感，粘度)5.反膠團萃取 （1）反膠團萃取的特點a) 成本低b) 選擇性好、萃取率和反萃取率高c) 操作方便、放大容易d) 萃取劑 (反膠團相 )可循環(huán)利用e) 蛋白質(zhì)不易變性等優(yōu)點f) 影響因素多 （2）膠團與反膠團的定義、結(jié)構(gòu)特征膠團：表面活性劑分子的兩親性質(zhì)使之在水溶液中能自發(fā)形成結(jié)構(gòu)有序的多分子聚集體反膠團：是指當油相中表面活性劑的濃度超過臨界膠束濃度后,其分子在非極性溶劑中自發(fā)形成的親水基向內(nèi)、疏水基向外的具有極性內(nèi)核(polarcore)的多分子聚集體結(jié)構(gòu)特征：膠團：極性頭向外，非極性頭向內(nèi)，形成非極性核，溶解非極性化合物 反膠團：極性頭向內(nèi)，非極性頭向外，形成極性核（3）表面活性劑的結(jié)構(gòu)、種類 結(jié)構(gòu)：表面活性劑是由親水憎油的極性基團和親油憎水的非極 種類：可分為陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑和非離子型表面活性劑。（4）反膠團萃取的影響因素（pH、離子強度）a) 水相的pH值決定了蛋白質(zhì)表面電荷的狀態(tài)；b) 離子強度對萃取率的影響以下幾個方面： 影響蛋白質(zhì)與表面活性劑極性基團的靜電作用； 影響反膠團的大??； 離子進入“微水池”影響其他溶質(zhì)的進入。c) 表面活性劑類型及濃度的影響d) 離子種類對萃取的影響e) 影響反膠束結(jié)構(gòu)的其他因素 1）有機溶劑的影響 2）溫度的影響 3） 助表面活性劑6.超臨界流體萃取 （1）基本概念（夾帶劑、Tc、Tp） 超臨界流體（SCF）：溫度和壓力均超過臨界點時，物質(zhì)介于氣體和液體之間的一 種特殊的非凝縮性的高密度流體。 臨界溫度（Tc）：當溫度超過Tc后，不管施加多大的壓力，都不能使氣體變?yōu)橐?體是氣體能夠液化的最高溫度。 臨界壓力（pc）：是指在臨界溫度下，氣液平衡時的壓力。 夾帶劑：在純流體中加入少量與被萃取物親和力強的組分，以提高其對被萃取組分 的選擇性和溶解度夾帶劑，也稱為改性劑或共溶劑。 （2）超臨界流體萃取原理 原理：利用超臨界流體在臨界區(qū)附近，溫度和壓力微小的變化，而引起流體密度大 的變化，而非揮發(fā)性溶質(zhì)在超臨界流體中溶解度大致和流體的密度成正比。 （3）超臨界流體的特性 a.無明顯的氣液界面，既不是氣體，也不是液體；是一種氣液不分的狀態(tài)。 b.性質(zhì)介于氣體和液體之間 c.密度隨T、P變化明顯，溶質(zhì)的溶解度隨流體的密度增大而增大。（ （4）超臨界流體具備的條件 萃取劑需具有化學穩(wěn)定性，對設(shè)備沒有腐蝕性； 臨界溫度不能太低或太高，最好在室溫附近或操作溫度附近： 操作溫度應低于被萃取溶質(zhì)的分解溫度或變質(zhì)溫度； 臨界壓力低，可節(jié)約壓縮動力費； 選擇性要好，容易得到高純度制品； 溶解度要高，可以減少溶劑的循環(huán)量； 萃取溶劑要容易獲取，價格要便宜。 當在醫(yī)藥、食品等工業(yè)上使用時，萃取溶劑必須對人體沒有任何毒性，這一點也 是很重要的。 （5）超臨界流體萃取工藝流程（3種） 1)等T法依靠壓力變化的萃取分離法 a.萃取壺T分離壺T b.萃取壺P分離壺P 2)等壓法依靠溫度變化的萃取分離法 a.萃取壺T分離壺T b.萃取壺P分離壺P 3)吸附法用吸附劑進行的萃取分離法 在分離器中，經(jīng)萃取出的溶質(zhì)被吸附劑吸附，氣體經(jīng)壓縮后返回萃取器循環(huán)使用。 PS：a.方法（1）（2）主要用于萃取相溶質(zhì)為需要的精制品 b.方法（3）萃取相溶質(zhì)溶質(zhì)為需要除去的有害成分或雜質(zhì)第五章 膜分離過程 1.膜的分類 按膜的孔徑：微濾膜、超濾膜、反滲透膜、納濾膜 按膜的結(jié)構(gòu)：對稱性膜、非對稱性膜、復合膜等 按膜的材料：合成聚合物膜、無機材料膜等 2.各種膜分離的原理、特點及應用 .微濾(MF)原理：利用微孔濾膜的篩分作用，在靜壓力差推動下，將濾液中尺寸 大小 0.01-10um的微生物和微粒子截留下來，實現(xiàn)溶液分離、 濃縮的技術(shù)。 特點 ( I ) 微濾過程不受滲透壓影響 （II）滲透量遠大于納濾、超濾、反滲透 （III）操作壓0.05-0.5MPa 應用：（I）微生物的檢測（飲用水中大腸桿菌、醫(yī)藥制品細菌） （II）微粒子的檢測（注射劑中不容性異物） 超濾(UF)原理：根據(jù)高分子溶質(zhì)之間或高分子與小分子溶質(zhì)之間相對分子質(zhì)量的 差別進行分離的方法。（相對分子質(zhì)量較小的溶質(zhì)和水分透過膜， 而相對分子質(zhì)量較大的溶質(zhì)被截留。）特點：膜材料本身無毒性，對所濾溶液及產(chǎn)品無害 除醋酸纖維素膜外，許多高分子合成膜均有較好的耐酸堿、耐溶劑性能 設(shè)備簡單經(jīng)濟，安裝操作方便 一次處理可完成濃縮及精制工作 超濾裝置整體為密閉系統(tǒng)，可減少污染機會，清洗消毒方便，可重復使用 操作過程無相變 操作過程不需要改變?nèi)芤旱膒h及離子強度 低壓操作，不引起截留物的切變損害，不形成氣溶膠，不引起產(chǎn)品變性或失活應用： UF膜的孔徑較MF膜小，主要用于處理不含固形成分的料液；純化濃縮大分子物質(zhì)（蛋白質(zhì)、酶、病毒等） 反滲透（RO)：若在溶液的一側(cè)施加一外壓，當此壓力大于滲透壓時，迫使?jié)馊?液中的溶劑反相（如B側(cè)溶液中 (水)透過到A側(cè)）透過膜向稀溶 液一側(cè)擴散。 特點 壓力（1.010MPa）大于超濾、微濾、納濾，膜孔致密。 溶劑從鹽類、糖類等濃溶液中透過膜。 應用：海水脫鹽、超純水制備、發(fā)酵液中溶劑的分離（乙醇、丙酮等）、濃縮AA、 維生素等 納濾技術(shù) 納濾是介于反滲透與超濾之間的一種以壓力為驅(qū)動力的新型膜分離過程。 特點在過濾分離過程中，它能截留小分子的有機物并可同時透析出鹽，即集濃縮 與透析為一體； 操作壓力低，因為無機鹽能通過納米濾膜而透析，使得納米過濾的滲透壓遠 比反滲透為低，這樣，在保證一定的膜通量的前提下，納米過濾過程所需的 外加壓力就比反滲透低得多，具有節(jié)約動力的優(yōu)點。 應用：a.納米過濾在抗生素的回收與精制上的應用 b.納米過濾在各類肽的純化與濃縮中的應用 電滲析原理：a) 在離子交換膜表面和孔內(nèi)共價鍵合有可解離的基團，如磺酸基(SO3H）等酸性陽離子基和季銨基(NR3 OH)等堿性陰離子基。b) 解離后固定在膜上的基團帶正電荷的膜稱作陰離子交換膜，解離后固定在膜上的基團帶負電荷的膜稱作陽離子交換膜。 c) 在電場的作用下，前者選擇性透過陰離子，后者選擇性透過陽離子。適用： 小分子電解質(zhì)(例如氨基酸、有機酸)的分離和溶液的脫鹽、海水脫鹽。膜 分 離 法傳質(zhì)推動力分 離 原 理應 用 舉 例微 濾 （MF）壓差0.050.5篩 分除菌，回收菌，分離病毒超 濾壓差0.11.0篩 分蛋白質(zhì)、多肽和多糖的回收和濃縮反 滲 透壓差1.010篩 分鹽、氨基酸、糖的濃縮、淡水制造滲 析濃 差篩 分脫鹽，除變性劑電 滲 析電 位 差電荷、篩分脫鹽，氨基酸和有機酸分離滲透氣 化分壓差、溫差溶質(zhì)與膜的親和作用有機溶劑與水的分離，共沸物的分離 3.濃差極化定義與消除方法 定義：在膜分離過程中，膜表面上溶質(zhì)濃度高于主體溶質(zhì)濃度而使得溶質(zhì)向溶液主 體擴散的現(xiàn)象稱為濃差極化。 方法：高速、低壓、升溫、清洗等 4.截留率（MWCO）：是指對一定分子量的物質(zhì)來說,膜所能截留的程度 5.膜污染定義、原因及減小的方法 定義：指由于懸浮物或可溶物質(zhì)沉積在膜的表面、孔隙內(nèi)壁,從而造成膜通量降低的過程團原因：凝膠極化引起的凝膠層，阻力為Rg 。 溶質(zhì)在膜表面的吸附層，阻力為Ras 。 膜孔堵塞，阻力為R 膜孔內(nèi)的溶質(zhì)吸附，阻力為Rsp 方法： a.預處理供給液、膜 b.加大流速 c.開發(fā)抗污染膜 d.膜的清洗 6.膜組件定義、類型及各自優(yōu)缺點.膜組件：由膜、固定膜的支撐體以及收納這些部件的容器構(gòu)成的一個單元類型：管式、平板式、螺旋卷式、中空纖維（毛細管）組件優(yōu) 點缺 點板框式保留體積小，操作費用低的壓力降，液流穩(wěn)定，比較成熟投資費用大，大的固含量會堵塞進料液通道，拆卸比清潔管道更費時間螺旋卷式設(shè)備投資低，操作費用也低，單位體積中所含過濾面積大，換新膜容易料液需經(jīng)預處理，壓力降大，易污染，難清洗，液流不易控制管 式易清洗，單根管子容易調(diào)換，對液流易控制，無機組件可在高溫下用有機溶劑進行操作并可用化學試劑來消毒高的設(shè)備投資和操作費用，保留體積大，單位體積中所含有過濾面積較小，壓力降大中空纖維式保留體積小，單位體積中所含過濾面積大，可以逆流操作，壓力較低，設(shè)備投資低料液需要預處理，單根纖維管損壞時，需調(diào)換整個組件，不夠成熟第六章 色譜技術(shù) 1.分類 （1）根據(jù)溶質(zhì)分子與固定相相互作用的機理不同的分類： 離子交換色譜分離法 吸附色譜法 分配色譜法 親和色譜 凝膠色譜 （2）根據(jù)固定相的形狀不同的分類： 柱色譜法、薄層色譜法 （3）根據(jù)流動相的物態(tài)不同的分類 ： 液相色譜（LC）：LLC、LSC 氣相色譜（GC）：GLC、GSC （4） 根據(jù)流動相與固定相的極性分類 ： 正相色譜：固定相極性大于流動相 反相色譜：固定相極性小于流動相 2.基本概念（保留時間、保留體積） 保留時間（tR）：從開始進樣至出口處被測組分出現(xiàn)濃度最大值所需要的時間。 保留體積（VR）：從開始進樣到柱出口處 被測組分出現(xiàn)濃度最大值時所通過的流動相的體積 3.分配系數(shù)與Rf 分配系數(shù)：溶質(zhì)在固定相與流動相濃度比值 分配系數(shù)（K）與遷移率（Rf）關(guān)系： K大，Rf?。籏小，Rf大 阻滯因子Rf=溶質(zhì)的移動距離/流動相在色譜系統(tǒng)中的遷移距離 阻滯因子定義：是在色譜系統(tǒng)中溶質(zhì)的移動速度和標準物（與固定相沒有親和力的流動相 Kd=0）的遷移率之比 4.吸附（定義、作用力、常見吸附劑及影響因素）、吸附薄層色譜、吸附柱色譜 吸附定義：吸附是利用吸附劑對液體或氣體中某一組分具有選擇性吸附的能力，使 其富集在吸附劑表面的過程。 （表面吸附與吸收） 作用力： 吸附劑與吸附質(zhì)間的范德華力（定向力、誘導力、色散力）或氫鍵。 常用吸附劑：活性炭、硅膠、大孔性吸附樹脂、氧化鋁 影響因素（1）吸附劑的性質(zhì)：影響吸附容量和吸附速率 a.吸附劑表面積 b.吸附劑孔徑-適中 c.極性：極性化合物選極性吸附劑；非極性化合物選非極性吸附劑。 （2）吸附質(zhì)性質(zhì) a.溶質(zhì)從較易溶解的溶劑中被吸附時，吸附量較少（相似相容） b.極性 吸附薄層色譜基本原理： 利用吸附劑對樣品中各成分的吸附能力不同，及展開劑 對他們的解析能力不 同，使各成分達到分離 吸附柱色譜基本原理： 含有固定相和流動相，根據(jù)物質(zhì)在兩相間的分配行為不 同，經(jīng)過多次分配，達到分離的目的的一種方法 5.離子交換（離子交換劑的結(jié)構(gòu)、種類、理化性質(zhì)；離子交換的原理、選擇性及操作與應用） 結(jié)構(gòu)：基質(zhì)、功能基團、反離子（活性離子） 種類：（1）陽離子交換樹脂（含酸性基團-強酸性、弱酸性） （2）陰離子交換樹脂（含堿性基團-強堿性、 弱堿性）理化性能：外觀：球形、淺色為宜，粒度大小為1660目90%； 機械強度：90%； 含水量：0.3-0.7g/g 樹脂； 交換容量：重量交換容量、體積交換容量、工作交換容量或稱表觀 交換容量（在某一條件下）； 穩(wěn)定性：化學穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性； 膨脹度：交聯(lián)度、活性基團的性質(zhì)與數(shù)量、活性離子的性質(zhì)、介質(zhì)的 性質(zhì)和濃度、骨架結(jié)構(gòu)； 原理： 以離子交換樹脂作為固定相，選擇合適的溶劑作為流動相，使溶質(zhì)按照其 離子交換親合力的不同而得到分離的方法 選擇性：（1）離子交換常數(shù)：交換勢或交換系數(shù) （2）影響離子交換選擇性的因素 a.水合離子半徑：半徑越小，親和力越大； b.離子化合價：高價離子易于被吸附； c.溶液pH：影響交換基團和交換離子的解離程度，但不影響交換容量； d.離子強度：越低越好； e.交聯(lián)度、膨脹度、分子篩：交聯(lián)度大，膨脹度小，篩分能力增大；交聯(lián)度小，膨 脹度大，吸附量減少； 離子交換柱層析操作：a樹脂的選擇 b 樹脂的預處理及轉(zhuǎn)型 c裝柱及平衡（要保持均勻、無氣泡和斷層 d上樣吸附： e洗滌與洗脫：改變pH或離子強度離子交換應用1. 離子交換法提取蛋白質(zhì)、氨基酸2. 水處理（軟水、去離子水的制備）3. 抗生素的提取4. 肝素的提取6.正相色譜與反相色譜