《高中生物 專題5課題3 血紅蛋白的提取和分離精講導(dǎo)學(xué)課件 新人教版選修1》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《高中生物 專題5課題3 血紅蛋白的提取和分離精講導(dǎo)學(xué)課件 新人教版選修1（36頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。
1、課題3血紅蛋白的提取和分離一、蛋白質(zhì)的提取、分離和鑒定的方法一、蛋白質(zhì)的提取、分離和鑒定的方法1.1.凝膠色譜法凝膠色譜法血紅蛋白的分離方法血紅蛋白的分離方法: :(1)(1)概念概念: :根據(jù)根據(jù)_的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法, ,也也稱做稱做_。相對(duì)分子質(zhì)量相對(duì)分子質(zhì)量分配色譜法分配色譜法(2)(2)原理原理: :凝膠凝膠 分離原理分離原理: :_的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道, ,路程路程_,_,移動(dòng)速度較慢移動(dòng)速度較慢, ,通過(guò)凝膠的時(shí)間通過(guò)凝膠的時(shí)間_;_;_的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道, ,只能在
2、凝膠外部移動(dòng)只能在凝膠外部移動(dòng), ,路程路程_,_,移動(dòng)速度較快移動(dòng)速度較快, ,通過(guò)凝膠的時(shí)間通過(guò)凝膠的時(shí)間_。多孔球體多孔球體 多糖類化合物多糖類化合物 貫穿的通道貫穿的通道 相對(duì)分子質(zhì)量較小相對(duì)分子質(zhì)量較小較長(zhǎng)較長(zhǎng)較長(zhǎng)較長(zhǎng)相對(duì)分子質(zhì)量相對(duì)分子質(zhì)量較大較大較短較短較短較短2.2.緩沖溶液緩沖溶液: :(1)(1)作用作用: :在一定范圍內(nèi)在一定范圍內(nèi), ,緩沖溶液能夠抵制緩沖溶液能夠抵制_對(duì)溶對(duì)溶液液pHpH的影響的影響, ,維持維持pHpH基本不變?；静蛔儭?2)(2)配制配制: :通常由通常由1 12 2種緩沖劑溶解于水中配制而成種緩沖劑溶解于水中配制而成, ,調(diào)節(jié)緩沖調(diào)節(jié)緩沖劑的劑
3、的_就可以制得就可以制得_的緩沖液。的緩沖液。外界的酸和堿外界的酸和堿使用比例使用比例在不同在不同pHpH范圍內(nèi)使用范圍內(nèi)使用3.3.電泳電泳血紅蛋白的分離或鑒定方法血紅蛋白的分離或鑒定方法: :(1)(1)概念概念: :帶電粒子在帶電粒子在_的作用下發(fā)生的作用下發(fā)生_的過(guò)程。的過(guò)程。(2)(2)原理原理: :許多重要的生物大分子許多重要的生物大分子, ,如多肽、核酸等都具有如多肽、核酸等都具有_,_,在一定的在一定的pHpH下下, ,這些基團(tuán)會(huì)帶上這些基團(tuán)會(huì)帶上_或或_。在電場(chǎng)的作用下在電場(chǎng)的作用下, ,這些帶電分子會(huì)向著這些帶電分子會(huì)向著_移動(dòng)。移動(dòng)。電泳利用了待分離樣品中各種分子電泳利用
4、了待分離樣品中各種分子_以及分以及分子本身的子本身的_、_的不同的不同, ,使帶電分子產(chǎn)生不同的使帶電分子產(chǎn)生不同的_,_,從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。電場(chǎng)電場(chǎng)遷移遷移可解離的可解離的基團(tuán)基團(tuán)正電正電負(fù)電負(fù)電與其所帶電荷相反與其所帶電荷相反的電極的電極帶電性質(zhì)的差異帶電性質(zhì)的差異大小大小形狀形狀遷移遷移速度速度二、蛋白質(zhì)的提取和分離過(guò)程二、蛋白質(zhì)的提取和分離過(guò)程1.1.樣品處理樣品處理: :血紅蛋白由血紅蛋白由_肽鏈組成肽鏈組成, ,包括兩條包括兩條_和和兩條兩條_。每條肽鏈環(huán)繞一個(gè)。每條肽鏈環(huán)繞一個(gè)_基團(tuán)基團(tuán), ,此基團(tuán)可此基團(tuán)可攜帶攜帶_或或_。四條四條-肽
5、鏈肽鏈-肽鏈肽鏈亞鐵血紅素亞鐵血紅素一分子氧一分子氧一分子二氧化碳一分子二氧化碳(1)(1)紅細(xì)胞的洗滌紅細(xì)胞的洗滌: :目的目的:_:_。方法方法: :去除雜蛋白去除雜蛋白黃色血漿黃色血漿暗紅色暗紅色紅細(xì)胞紅細(xì)胞五倍體積五倍體積生理鹽水生理鹽水(2)(2)血紅蛋白的釋放：血紅蛋白的釋放：蒸餾水蒸餾水1010(3)(3)分離血紅蛋白溶液分離血紅蛋白溶液: :離心后試管中的溶液分為離心后試管中的溶液分為4 4層層, ,從上往下依次為從上往下依次為: :第第1 1層層: :無(wú)色透明的無(wú)色透明的_。第第2 2層層: :脂溶性物質(zhì)的脂溶性物質(zhì)的_白色薄層固體。白色薄層固體。第第3 3層層:_:_的水溶
6、液的水溶液_透明液體。透明液體。第第4 4層層: :其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。將試管中液體用將試管中液體用_過(guò)濾過(guò)濾, ,除去除去_,_,于分液漏斗中于分液漏斗中靜置片刻后靜置片刻后, ,分出下層的分出下層的_液體。液體。甲苯層甲苯層沉淀層沉淀層血紅蛋白血紅蛋白紅色紅色濾紙濾紙脂溶性沉淀層脂溶性沉淀層紅色透明紅色透明(4)(4)透析透析粗分離粗分離: :過(guò)程過(guò)程: :取取1 mL1 mL的的_溶液裝入溶液裝入_中中, ,將其放入盛有將其放入盛有300 mL300 mL的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為20 mmol20 mmol/L/L的的_中中(pH(pH為為7.0),7
7、.0),透析透析12 h12 h。原理原理: :透析袋能使透析袋能使_自由進(jìn)出自由進(jìn)出, ,而將而將_保留在袋保留在袋內(nèi)。內(nèi)。目的目的: :去除去除_。血紅蛋白血紅蛋白透析袋透析袋磷酸緩沖液磷酸緩沖液小分子小分子大分子大分子樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)2.2.純化純化凝膠色譜操作凝膠色譜操作: :制作制作_裝填裝填_:_:因?yàn)楦傻哪z和用因?yàn)楦傻哪z和用_的凝膠的的凝膠的 體積差別很大體積差別很大, ,所以裝柱前需要根據(jù)色譜柱所以裝柱前需要根據(jù)色譜柱 的內(nèi)體積計(jì)算所需要的凝膠量。在裝填色譜的內(nèi)體積計(jì)算所需要的凝膠量。在裝填色譜 柱時(shí)柱時(shí), ,不得有不得有_存在。存在
8、。_凝膠色譜柱凝膠色譜柱凝膠色譜柱凝膠色譜柱緩沖液平衡好緩沖液平衡好氣泡氣泡樣品的加入和洗脫樣品的加入和洗脫3.3.純度鑒定純度鑒定SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳: :判斷判斷_的蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)是否達(dá)到要求是否達(dá)到要求, ,需要進(jìn)行蛋白質(zhì)需要進(jìn)行蛋白質(zhì)_。鑒定方法中使用。鑒定方法中使用最多的是最多的是SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。聚丙烯酰胺凝膠電泳。純化純化純度的鑒定純度的鑒定【思考辨析【思考辨析】1.1.判斷正誤判斷正誤(1)(1)凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)只根據(jù)分子大小凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)只根據(jù)分子大小, ,與其攜帶的電荷與其攜帶的電荷性質(zhì)和大小無(wú)關(guān)。性質(zhì)和大小無(wú)關(guān)。
9、( )( )(2)(2)不同蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠時(shí)不同蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠時(shí), ,相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)易通過(guò)相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)易通過(guò)凝膠顆粒凝膠顆粒, ,先從層析柱洗脫下來(lái)。先從層析柱洗脫下來(lái)。( ( ) )【分析【分析】相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道, ,路程較長(zhǎng)路程較長(zhǎng), ,移動(dòng)速度較慢移動(dòng)速度較慢, ,通過(guò)凝膠的時(shí)間較長(zhǎng)通過(guò)凝膠的時(shí)間較長(zhǎng), ,后洗脫下來(lái)后洗脫下來(lái); ;而而相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道, ,只能在只能在凝膠外部移動(dòng)凝膠外部移動(dòng), ,路程較短路程較短,
10、 ,移動(dòng)速度較快移動(dòng)速度較快, ,通過(guò)凝膠的時(shí)間較短通過(guò)凝膠的時(shí)間較短, ,先洗脫下來(lái)。先洗脫下來(lái)。(3)SDS-(3)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)移動(dòng)速度與蛋白質(zhì)分子聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)移動(dòng)速度與蛋白質(zhì)分子大小和其攜帶的電荷都有關(guān)系。大小和其攜帶的電荷都有關(guān)系。( ( ) )【分析【分析】由于在凝膠中加入了由于在凝膠中加入了SDS,SDS,其所帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其所帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于蛋白質(zhì)分子原有的電荷量蛋白質(zhì)分子原有的電荷量, ,因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別差別, ,使電泳遷移速率完全取決于分子的大小。使電泳遷移速率完全取決于分子的大小。
11、(4)(4)透析過(guò)程中透析過(guò)程中, ,用到的透析袋是一層選擇半透膜用到的透析袋是一層選擇半透膜, ,具有選擇透具有選擇透過(guò)性。過(guò)性。( ( ) )【分析【分析】透析袋是一層半透膜透析袋是一層半透膜, ,小分子能通過(guò)小分子能通過(guò), ,大分子不能通大分子不能通過(guò)。但不是一層選擇透過(guò)性膜過(guò)。但不是一層選擇透過(guò)性膜, ,選擇透過(guò)性是針對(duì)有活性的生選擇透過(guò)性是針對(duì)有活性的生物膜來(lái)說(shuō)的。物膜來(lái)說(shuō)的。2.2.問題思考問題思考(1)(1)鳥類血液和哺乳動(dòng)物血液中鳥類血液和哺乳動(dòng)物血液中, ,最好用哪種血液來(lái)提取血紅蛋最好用哪種血液來(lái)提取血紅蛋白白? ?為什么為什么? ?提示：提示：哺乳動(dòng)物血液。由于哺乳動(dòng)物成
12、熟紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核哺乳動(dòng)物血液。由于哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核, ,容易獲得血紅蛋白。容易獲得血紅蛋白。(2)(2)紅細(xì)胞破碎混合液中不僅含有血紅蛋白紅細(xì)胞破碎混合液中不僅含有血紅蛋白, ,還含有細(xì)胞破碎物、還含有細(xì)胞破碎物、脂質(zhì)、甲苯等有機(jī)溶劑。怎樣除去這些雜質(zhì)呢脂質(zhì)、甲苯等有機(jī)溶劑。怎樣除去這些雜質(zhì)呢? ?提示：提示：紅細(xì)胞破碎混合液紅細(xì)胞破碎混合液中速長(zhǎng)時(shí)離心中速長(zhǎng)時(shí)離心(2 (2 000 r/min000 r/min10 min)10 min)濾紙過(guò)濾除去脂質(zhì)濾紙過(guò)濾除去脂質(zhì)分液漏斗分離出血紅蛋白。分液漏斗分離出血紅蛋白。一、血紅蛋白的提取和分離的原理一、血紅蛋白的提取和分離的原
13、理1.1.蛋白質(zhì)分子在凝膠中的運(yùn)動(dòng)情況分析蛋白質(zhì)分子在凝膠中的運(yùn)動(dòng)情況分析: :相對(duì)分子質(zhì)量大相對(duì)分子質(zhì)量大相對(duì)分子質(zhì)量小相對(duì)分子質(zhì)量小直徑大小直徑大小大于凝膠顆?？障吨睆酱笥谀z顆?？障吨睆叫∮谀z顆粒空隙直徑小于凝膠顆?？障吨睆竭\(yùn)動(dòng)方式運(yùn)動(dòng)方式垂直向下運(yùn)動(dòng)垂直向下運(yùn)動(dòng)無(wú)規(guī)則的擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)無(wú)規(guī)則的擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)運(yùn)動(dòng)速度運(yùn)動(dòng)速度較快較快較慢較慢運(yùn)動(dòng)路程運(yùn)動(dòng)路程較短較短較長(zhǎng)較長(zhǎng)洗脫順序洗脫順序先從凝膠柱中洗脫出來(lái)先從凝膠柱中洗脫出來(lái)后從凝膠柱中洗脫出來(lái)后從凝膠柱中洗脫出來(lái)2.2.電泳方法電泳方法: :瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳由于瓊脂糖本身不帶電荷由于瓊脂糖本身不帶電
14、荷, ,各各種分子在電場(chǎng)中遷移速度決定種分子在電場(chǎng)中遷移速度決定于所帶電荷性質(zhì)的差異及分子于所帶電荷性質(zhì)的差異及分子的大小、形狀的不同的大小、形狀的不同在凝膠中加入在凝膠中加入SDS,SDS,使蛋白質(zhì)使蛋白質(zhì)解聚成單鏈解聚成單鏈, ,與各種蛋白質(zhì)與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)-SDS-SDS復(fù)合物復(fù)合物, ,使使其遷移速度完全取決于分子其遷移速度完全取決于分子的大小的大小【易錯(cuò)提醒【易錯(cuò)提醒】(1)(1)瓊脂糖凝膠電泳操作簡(jiǎn)單瓊脂糖凝膠電泳操作簡(jiǎn)單, ,電泳速度快電泳速度快, ,樣品樣品不需要事先處理不需要事先處理; ;電泳后區(qū)帶易染色電泳后區(qū)帶易染色, ,樣品極易洗脫樣品極易洗脫, ,便于
15、定量便于定量測(cè)定。測(cè)定。(2)(2)測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量常用測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量常用SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳, ,這是因?yàn)樵摲椒ǚ蛛x蛋白質(zhì)完全取決于分子的大小這是因?yàn)樵摲椒ǚ蛛x蛋白質(zhì)完全取決于分子的大小, ,而非所帶而非所帶電荷的性質(zhì)和分子的形狀。電荷的性質(zhì)和分子的形狀。【典例訓(xùn)練【典例訓(xùn)練1 1】(2011(2011廣東高考廣東高考) )以下關(guān)于豬血紅蛋白提純的以下關(guān)于豬血紅蛋白提純的描述描述, ,不正確的是不正確的是( () )A.A.洗滌紅細(xì)胞時(shí)洗滌紅細(xì)胞時(shí), ,使用生理鹽水可防止紅細(xì)胞破裂使用生理鹽水可防止紅細(xì)胞破裂B.B.豬成熟紅細(xì)胞中缺少細(xì)胞器和
16、細(xì)胞核豬成熟紅細(xì)胞中缺少細(xì)胞器和細(xì)胞核, ,提純時(shí)雜蛋白較少提純時(shí)雜蛋白較少C.C.血紅蛋白的顏色可用于凝膠色譜法分離過(guò)程的監(jiān)測(cè)血紅蛋白的顏色可用于凝膠色譜法分離過(guò)程的監(jiān)測(cè)D.D.在凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過(guò)程中在凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過(guò)程中, ,血紅蛋白比相對(duì)分子質(zhì)血紅蛋白比相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜蛋白移動(dòng)慢量較小的雜蛋白移動(dòng)慢【解題關(guān)鍵【解題關(guān)鍵】解答本題的關(guān)鍵是明確以下三點(diǎn)解答本題的關(guān)鍵是明確以下三點(diǎn): :(1)(1)洗滌過(guò)程的目的和注意事項(xiàng)。洗滌過(guò)程的目的和注意事項(xiàng)。(2)(2)紅細(xì)胞適合作為本實(shí)驗(yàn)的材料的特點(diǎn)。紅細(xì)胞適合作為本實(shí)驗(yàn)的材料的特點(diǎn)。(3)(3)洗脫過(guò)程中哪種分子移動(dòng)更快。洗脫過(guò)
17、程中哪種分子移動(dòng)更快?！窘馕觥窘馕觥窟x選D D。本題考查血紅蛋白的提取及凝膠色譜法分離蛋。本題考查血紅蛋白的提取及凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理。相對(duì)分子質(zhì)量越大的蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠色譜柱的速白質(zhì)的原理。相對(duì)分子質(zhì)量越大的蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠色譜柱的速度越快度越快, ,故故D D錯(cuò)誤。錯(cuò)誤。A A正確正確, ,洗滌的目的是去除雜蛋白以利于后續(xù)洗滌的目的是去除雜蛋白以利于后續(xù)步驟的分離純化步驟的分離純化, ,加入的是生理鹽水加入的是生理鹽水, ,緩慢攪拌緩慢攪拌10 min,10 min,低速短低速短時(shí)間離心時(shí)間離心, ,重復(fù)洗滌三次重復(fù)洗滌三次, ,直至上清液不再呈現(xiàn)黃色直至上清液不再呈現(xiàn)黃色, ,表明紅細(xì)
18、表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。胞已洗滌干凈。B B正確正確, ,哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核與眾哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核與眾多的細(xì)胞器多的細(xì)胞器, ,提純時(shí)雜蛋白較少。提純時(shí)雜蛋白較少。C C正確正確, ,血紅蛋白是有色蛋白血紅蛋白是有色蛋白, ,因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過(guò)觀察顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過(guò)觀察顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液收集洗脫液( (如果操作都正確如果操作都正確, ,能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整帶均勻、狹窄、平整, ,隨著洗脫液緩慢流出隨著洗脫液緩慢流出),),這使得血紅蛋白這使得血紅蛋白的分離過(guò)程非常
19、直觀的分離過(guò)程非常直觀, ,簡(jiǎn)化了操作。簡(jiǎn)化了操作?！咀兪接?xùn)練【變式訓(xùn)練】以下關(guān)于血紅蛋白提取和分離的過(guò)程及原理敘以下關(guān)于血紅蛋白提取和分離的過(guò)程及原理敘述正確的是述正確的是( () )A.A.紅細(xì)胞洗滌過(guò)程中要加入紅細(xì)胞洗滌過(guò)程中要加入5 5倍體積的蒸餾水倍體積的蒸餾水, ,重復(fù)洗滌重復(fù)洗滌3 3次次B.B.將血紅蛋白溶液放在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為將血紅蛋白溶液放在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%0.9%的的NaClNaCl溶液中透析溶液中透析1212小時(shí)小時(shí)C.C.凝膠裝填在色譜柱內(nèi)要均勻凝膠裝填在色譜柱內(nèi)要均勻, ,不能有氣泡存在不能有氣泡存在D.D.蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠時(shí)蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠時(shí), ,相對(duì)分子質(zhì)量較大的移動(dòng)速
20、度慢相對(duì)分子質(zhì)量較大的移動(dòng)速度慢【解析【解析】選選C C。紅細(xì)胞洗滌過(guò)程中要加入。紅細(xì)胞洗滌過(guò)程中要加入5 5倍體積的生理鹽水倍體積的生理鹽水, ,重復(fù)洗滌重復(fù)洗滌3 3次的目的是除去雜蛋白。透析時(shí)使用物質(zhì)的量濃度次的目的是除去雜蛋白。透析時(shí)使用物質(zhì)的量濃度為為20 mmol20 mmol/L/L的磷酸緩沖液的磷酸緩沖液, ,而不是用而不是用0.9%0.9%的的NaClNaCl溶液。蛋白質(zhì)溶液。蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠時(shí)通過(guò)凝膠時(shí), ,相對(duì)分子質(zhì)量較大的在凝膠外部移動(dòng)相對(duì)分子質(zhì)量較大的在凝膠外部移動(dòng), ,移動(dòng)速度快。移動(dòng)速度快。在裝填凝膠柱時(shí)在裝填凝膠柱時(shí), ,不能有氣泡存在不能有氣泡存在, ,氣泡會(huì)攪
21、亂洗脫液中蛋白質(zhì)氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序的洗脫次序, ,降低分離效果。降低分離效果。二、提取和分離血紅蛋白的實(shí)驗(yàn)操作二、提取和分離血紅蛋白的實(shí)驗(yàn)操作1.1.樣品處理樣品處理: :2.2.凝膠色譜操作凝膠色譜操作: :(1)(1)凝膠色譜柱的裝填凝膠色譜柱的裝填: :用蒸餾水溶脹凝膠用蒸餾水溶脹凝膠均勻裝填色譜柱均勻裝填色譜柱在約在約50 cm50 cm高的操作壓下高的操作壓下, ,用用300 mL300 mL的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為20 mmol20 mmol/L/L的磷酸緩沖液充分洗滌平衡凝膠的磷酸緩沖液充分洗滌平衡凝膠12 h,12 h,使凝膠裝填使凝膠裝填緊密。緊密。(
22、2)(2)打開流出口打開流出口, ,使緩沖液與凝膠面平齊使緩沖液與凝膠面平齊, ,關(guān)閉出口。關(guān)閉出口。(3)(3)樣品的加入和洗脫。樣品的加入和洗脫?！疽族e(cuò)提醒【易錯(cuò)提醒】(1)(1)小心加入磷酸緩沖液到適當(dāng)高度后小心加入磷酸緩沖液到適當(dāng)高度后, ,再連接緩再連接緩沖液洗脫瓶沖液洗脫瓶, ,打開下端出口打開下端出口, ,進(jìn)行洗脫進(jìn)行洗脫, ,不能邊加緩沖液邊洗脫不能邊加緩沖液邊洗脫, ,這樣會(huì)擾亂洗脫順序。這樣會(huì)擾亂洗脫順序。(2)(2)待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí), ,再用試管收集流出液再用試管收集流出液, ,此時(shí)收集到的才是純度較高的血紅蛋白溶液。此時(shí)收集到
23、的才是純度較高的血紅蛋白溶液?！镜淅?xùn)練【典例訓(xùn)練2 2】下圖表示血紅蛋白提取和分離的部分實(shí)驗(yàn)裝置下圖表示血紅蛋白提取和分離的部分實(shí)驗(yàn)裝置, ,請(qǐng)回答下列問題請(qǐng)回答下列問題: :(1)(1)血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的主要組成成分血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的主要組成成分, ,其其在紅細(xì)胞中的作用體現(xiàn)了蛋白質(zhì)具有在紅細(xì)胞中的作用體現(xiàn)了蛋白質(zhì)具有功能。功能。(2)(2)甲裝置中甲裝置中,B,B是血紅蛋白溶液是血紅蛋白溶液, ,則則A A是是; ;乙裝置中乙裝置中, ,C C溶液的作用是溶液的作用是 。(3)(3)甲裝置用于甲裝置用于, ,目的是目的是_。用乙裝置分離蛋白質(zhì)的方法叫用乙裝
24、置分離蛋白質(zhì)的方法叫_,_,是根據(jù)是根據(jù)_分離蛋白質(zhì)的有效方法。分離蛋白質(zhì)的有效方法。(4)(4)用乙裝置分離血紅蛋白時(shí)用乙裝置分離血紅蛋白時(shí), ,待待_時(shí)時(shí), ,用試管收集流出液用試管收集流出液, ,每每5 mL5 mL收集一管收集一管, ,連續(xù)收集。連續(xù)收集?！窘忸}關(guān)鍵【解題關(guān)鍵】(1)(1)理解凝膠柱作用的原理理解凝膠柱作用的原理: :依據(jù)蛋白質(zhì)分子在依據(jù)蛋白質(zhì)分子在其中的移動(dòng)路徑不同導(dǎo)致的不同洗脫順序來(lái)分離不同大小的其中的移動(dòng)路徑不同導(dǎo)致的不同洗脫順序來(lái)分離不同大小的分子分子; ;(2)(2)分析磷酸緩沖液的作用分析磷酸緩沖液的作用: :抵制外界的酸和堿對(duì)溶液抵制外界的酸和堿對(duì)溶液pH
25、pH的影的影響響, ,維持維持pHpH基本不變基本不變; ;(3)(3)掌握蛋白質(zhì)的分離與提取所用到的方法掌握蛋白質(zhì)的分離與提取所用到的方法: :離心法和透析法。離心法和透析法?！窘馕觥窘馕觥?1)(1)血紅蛋白能攜帶氧氣血紅蛋白能攜帶氧氣, ,體現(xiàn)了蛋白質(zhì)具有運(yùn)輸功能。體現(xiàn)了蛋白質(zhì)具有運(yùn)輸功能。(2)(2)甲裝置中甲裝置中,B,B是血紅蛋白溶液是血紅蛋白溶液, ,則則A A是磷酸緩沖液是磷酸緩沖液; ;乙裝置中乙裝置中,C,C溶液的作用是洗脫血紅蛋白。溶液的作用是洗脫血紅蛋白。(3)(3)甲裝置用于透析甲裝置用于透析( (粗分離粗分離),),目的是去除樣品中相對(duì)分子質(zhì)量目的是去除樣品中相對(duì)分
26、子質(zhì)量較小的雜質(zhì)。用乙裝置分離蛋白質(zhì)的方法叫凝膠色譜法較小的雜質(zhì)。用乙裝置分離蛋白質(zhì)的方法叫凝膠色譜法, ,是根是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。(4)(4)待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí), ,用試管收集流出液用試管收集流出液, ,每每5 mL5 mL收集一管收集一管, ,連續(xù)收集。連續(xù)收集。答案答案: :(1)(1)運(yùn)輸運(yùn)輸(2)(2)磷酸緩沖液洗脫血紅蛋白磷酸緩沖液洗脫血紅蛋白(3)(3)透析透析( (粗分離粗分離) )去除樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)去除樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)凝膠色譜法相對(duì)分子質(zhì)量的
27、大小凝膠色譜法相對(duì)分子質(zhì)量的大小(4)(4)紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端【誤區(qū)警示【誤區(qū)警示】(1)(1)在血紅蛋白的提取和分離中在血紅蛋白的提取和分離中, ,緩沖液能維持溶緩沖液能維持溶液酸堿度穩(wěn)定液酸堿度穩(wěn)定, ,但緩沖液作用的但緩沖液作用的pHpH范圍有一定限度。范圍有一定限度。(2)(2)離心過(guò)程的主要目的是去除脂質(zhì)等脂溶性物質(zhì)離心過(guò)程的主要目的是去除脂質(zhì)等脂溶性物質(zhì), ,而透析過(guò)程而透析過(guò)程主要目的是去除小分子水溶性物質(zhì)主要目的是去除小分子水溶性物質(zhì), ,這兩個(gè)過(guò)程都屬于粗分離這兩個(gè)過(guò)程都屬于粗分離, ,洗脫過(guò)程是更進(jìn)一步的分離純化過(guò)程。洗脫過(guò)程是更進(jìn)一步的分離純化過(guò)程。
高中生物 專題5課題3 血紅蛋白的提取和分離精講導(dǎo)學(xué)課件 新人教版選修1
