反芻動物飼料降解率測定技術規(guī)程

《反芻動物飼料降解率測定技術規(guī)程》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《反芻動物飼料降解率測定技術規(guī)程（10頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1、反芻動物飼料瘤胃降解率的測定-瘤胃尼龍袋法 技術規(guī)程 Regulation for Determination of Rumen Degradability of Feeds for Ruminants — Rumen nylon bag method 1主題內容與適用范圍 1.1 主題內容 本規(guī)程規(guī)定了采用瘤胃尼龍袋法測定各種反芻動物飼料主要營養(yǎng)成分瘤胃降解率的試 驗條件、試驗方法、結果計算和結果表示。 1.2 適用范圍 1.2.1 本規(guī)程適用于一切理化性質符合采用瘤胃尼龍袋法測定其主要營養(yǎng)成分瘤胃降解率的 反芻動物飼料。 1.2.2 適用于本規(guī)程測定瘤胃降解率的飼料營養(yǎng)成

2、分主要包括：干物質、有機物、粗蛋白、 中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維。 1.2.3 本規(guī)程1.2.2中未包括的適用于采用瘤胃尼龍袋法測定的飼料其他營養(yǎng)成分和非營養(yǎng) 目標成分的瘤胃降解率的測定可參照本規(guī)程的相關條款進行。 1.2.4 本規(guī)程1.2.1中未包括的適用于采用瘤胃尼龍袋法測定的飼料類似物中營養(yǎng)成分和非 營養(yǎng)目標成分的瘤胃降解率的測定可參照本規(guī)程的相關條款進行。 1.2.5 下列飼料和飼料類似物不適用于本規(guī)程瘤胃降解率的測定： (1)水溶性超過5 %的飼料和飼料類似物。 (2)顆粒直徑過小或 45 Pm篩孔篩下物超過 5%的飼料和飼料類似物。 (3)理化特性不適用于本方法的其他飼

3、料和飼料類似物。 1.2.6 某些飼料或飼料類似物，如高含量的維生素和微量元素制品或預混料，微生態(tài)制劑和 藥物等化學制劑，有毒有害物質含量過高的飼料或飼料類似物質，在本規(guī)程所規(guī)定的 裝樣量情況下足以導致試驗動物瘤胃功能及其他生理機能異常，此類飼料和飼料類似 物不適用于直接采用本規(guī)程測定其目標成分的瘤胃降解率。但可根據(jù)其特性采取適當 降低裝樣量的方法進行測定。 2規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款，通過本規(guī)程的引用而成為本規(guī)程的條款。 凡是注明日期的引用文件， 其隨后所有的修改字 (不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本規(guī)程，然而，鼓勵根據(jù)本 規(guī)程達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最

4、新版本。 凡是不注明日期的引用文件， 其 最新版本適用于本規(guī)程。 GB6435-86 飼料中水分含量的測定 GB/T6438-2007 飼料中有機物含量的測定 GB/T6432-1994 飼料中粗蛋白含量的測定 GB/T20805-2006 飼料中中性洗滌纖維含量的測定 GB/T20805-2006 飼料中酸性洗滌纖維含量的測定 3 術語 3.1 瘤胃實時降解率( Instantaneous rumen degradability ) 被測飼料在瘤胃中停留某一定時間某成分被降解的部分占該成分原含量的百分比稱該 飼料該成分在該時間點的實時降解率，用質量百分數(shù)表示。 3.2

5、瘤胃食糜外流速率( Outflow rate of rumen digesta ) 指單位時間內從瘤胃中流出的食糜重量占瘤胃內食糜重量的百分比，用“ %/h ”表示， 是表示飼料在瘤胃內停留時間的重要指標。 3.3 瘤胃有效降解率( Effective rumen degradability ) 不同性質的飼料在瘤胃內實際停留的時間不同， 根據(jù)不同時間點的實時降解率， 結合實 際飼喂條件下瘤胃食糜外流速率計算而得的降解率稱瘤胃有效降解率， 表示被測飼料在實際 飼喂條件下的瘤胃降解程度，是配合反芻動物日糧時實際使用的降解率，又稱動態(tài)降解率。 用質量百分數(shù)表示。 3.4 飼料類似物

6、( Feed-like materials ) 指根據(jù)飼料的分類與定義未被界定為飼料的、 但可通過采食方式進入反芻動物瘤胃的物 質。 此類物質中， 有些具有某種營養(yǎng)功能或非營養(yǎng)生理調控功能， 但其可否作為飼料在反芻 動物生產中使用需要進一步研究； 有些雖然具有一定營養(yǎng)或生理功能， 但含有有毒有害成分， 其在反芻動物生產中的使用方法與限量需要進一步研究。 在對此類物質的研究中有時需要測 定其中所含某種成分的瘤胃降解率。 3.5 非營養(yǎng)目標成分 目標成分指所要測定的成分。 目標成分可以是粗蛋白、 中性洗滌纖維等營養(yǎng)成分， 也可 以是棉酚、黃曲霉毒素等非營養(yǎng)成分。 3.6 培養(yǎng)時間(

7、 Incubation time ) 指裝有待測樣品的尼龍袋在瘤胃內的停留時間。 4 試驗條件 4.1 試驗動物 試驗動物為成年普通?；虺赡昃d羊。 數(shù)量至少 4 頭以上。 要求品種相同，年齡、生理狀 態(tài)、生產性能相近，發(fā)育正常，健康狀況良好。試驗動物應安裝有永久性瘤胃痿管，痿管內 徑大于40 mm。安裝瘤胃痿管手術后 20天以上，已恢復正常生理狀態(tài)。 除特殊試驗要求外， 一般不用水牛、耗牛和瘤牛及其雜交后代作為試驗動物， 也不用山 羊（包括絨山羊、奶山羊、肉用山羊等）及其雜交后代作為試驗動物。 4.2 試驗動物的飼養(yǎng)管理 4.2.1 動物日糧 4.2.1.1 試驗動物采用常規(guī)

8、牛（羊）飼料原料，卞據(jù)相應飼養(yǎng)標準配制日糧，按 1.3倍維持水 平飼養(yǎng)，日糧精粗比為 4:6。 4.2.1.2 日糧中不可添加任何抗生素、生長促進劑、微生物和微生態(tài)制劑。也不可添加任何 諸如寡糖、小肽、有機酸等瘤胃功能和環(huán)境調控劑及干擾瘤胃正常發(fā)酵機能的物質。 4.2.2 飼養(yǎng)管理 4.2.2.1 試驗動物按該品種動物常規(guī)程序飼養(yǎng)管理，每天飼喂 2?3次，自由飲水。 4.2.2.2 測定前預飼至少 15天。 4.2.2.3 預飼期和測定過程中不能更換日糧，不能對試驗動物進行免疫、治療及實施其他可 能干擾瘤胃消化機能的任何措施。 4.3 試驗材料 4.3.1 尼龍袋 4.3.1.

9、1 選用孔徑為50 Mm的尼龍布，制成長X寬為 8 cm X 12 cm的尼龍袋，袋底部兩角呈 鈍圓形，以免樣本殘留。 4.3.1.2 尼龍袋用細滌綸線雙線縫合。針孔用在瘤胃內不易溶解或脫落的膠粘劑彌合。散邊 用電烙鐵燙平或用酒精燈烤焦，以防止尼龍布脫絲，尼龍線脫落。 4.3.1.3 新制作的尼龍袋用不易在瘤胃中褪色的墨水編號。用前放入瘤胃內 72 h,取出、洗 凈、65 c烘干后方可使用。 4.3.2 半軟塑料管 4.3.2.1 半軟塑料管的作用是固定尼龍袋，并保證裝有待測樣品的尼龍袋始終沉浸于瘤胃食 糜中。 4.3.2.2 半軟塑料管的直徑應介于 0.5?0.8 cm之間，羊

10、用的細一些，牛用的粗一些。長度羊 用 25 cm ,牛用 50 cm。 4.3.2.3 在塑料管的一端距頂端 1?2 cm處向內劃透一長 3 cm的夾縫，用于固定尼龍袋。在 塑料管的另一端距頂端 1?2 cm處打一直徑約0.5cm的孔，系一條結實的尼龍線， 用于將半軟塑料管固定于瘤胃痿管蓋上。 4.3.2.4 也可以采用其它方法固定尼龍袋，但所采用的方法必須保證尼龍袋始終沉浸于瘤胃 食糜中。 5 試驗方法 5.1 待測樣品的準備 將待測樣品 3 mm 篩孔粉碎，置于樣品瓶內，清潔干燥處保存?zhèn)錅y。 5.2 稱樣與裝袋 5.2.1 將尼龍袋、飼料樣品置于真空干燥箱或鼓風干燥箱內

11、65℃下恒重。 5.2.2 用分析天平稱取尼龍袋重量，然后采用適當工具將經稱重的待測樣品小心放入尼龍袋 底部，注意袋口處切勿沾染樣品。 精飼料樣品每個袋 4g 左右，粗飼料樣品每個袋 2g 左右。 尼龍袋和待測樣品均精確至 0.0001 克。每個待測樣品裝 48 個尼龍袋。 5.2.3 對于某些待測樣品，每個尼龍袋的樣品量可根據(jù)其特性靈活調整。 5.3 將尼龍袋固定于半軟塑料管上 分別將每兩個裝有待測樣品的尼龍袋口交叉夾于一根半軟塑料管的夾縫中， 用橡皮筋纏 繞固定，確保其不滲漏、不脫落。 5.4 尼龍袋的放置 在早晨飼喂前1 h,打開試驗動物的瘤胃痿管蓋，借助木棒（或其他適

12、宜工具）將固定 尼龍袋的半軟塑料管連同尼龍袋一起送入瘤胃腹囊食糜中。 用塑料管上端的尼龍線將半軟塑 料管固定于瘺管蓋上。 每頭 （只） 試驗動物放置 7 根半軟塑料管， 計 14 個尼龍袋。 4 頭（只） 試驗動物共放置 28 根半軟塑料管，計 56 個尼龍袋。 5.5 培養(yǎng)時間 5.5.1 精飼料的培養(yǎng)時間為：2, 4, 8, 16, 24, 36和48 h。粗飼料的培養(yǎng)時間為： 4, 8, 16, 24， 36 ， 48 和 72h。 5.5.2 也可根據(jù)待測樣品的降解特性適當增加培養(yǎng)的時間點，如 1h， 12h 等。 5.6 尼龍袋的取出 將裝有待測樣品的尼龍袋放入試驗

13、動物的瘤胃后開始記錄培養(yǎng)時間， 每個培養(yǎng)時間點從 每頭（只）試驗動物瘤胃中各取出一根管（連同上面所系的 2 個尼龍袋） ，直至所有塑料管 （尼龍袋）全部取出為止。 5.7 尼龍袋的沖洗 將取出的尼龍袋浸泡在冰水中，并立即用自來水沖洗，在沖洗過程中可用手輕輕擠壓， 直至水清為止。在沖洗過程中嚴格防止尼龍袋中的殘余物隨水逃逸。 5 5.8尼龍袋的烘干 將沖洗過的尼龍袋（連同之中的殘余物）置于真空干燥箱或鼓風干燥箱內 65c下恒重。 用分析天平稱重，精確至 0.0001克。 5.9樣品與培養(yǎng)殘余物目標成分含量的分析 分別將各培養(yǎng)時間點尼龍袋中的殘余物完全轉移出來。 采用相應

14、的國家標準或行業(yè)標準 所規(guī)定的方法分別測定裝袋樣品中和培養(yǎng)后殘余物中各目標成分 （如干物質、蛋白質、中性 洗滌纖維等）的含量，并統(tǒng)一折算為 65c下的含量。 5.10樣品空白試驗 某些細小的樣本顆?？赡懿唤浟鑫附到饩脱杆偻ㄟ^尼龍袋孔逃逸， 此部分實際上并未真 正參加瘤胃的降解過程， 因而應從裝袋樣品中扣除。 這部分未經瘤胃降解就直接從尼龍袋中 逃逸的樣品可通過空白試驗進行校正，即在進行上述操作的同時，按步驟 5.2和5.3的操作 另裝2個尼龍袋，但不將其放入瘤胃內，直接對其按步驟 5.7、5.8和5.9進行處理。 6結果計算 6.1裝袋樣品量的校正 6.1.1裝袋樣品逃逸率的

15、計算 采用下式計算裝袋樣品干物質逃逸率: 裝袋樣品逃逸率（%） 空白試驗裝袋樣品干物 質重（g）—空白試驗袋中殘余 空白試驗裝袋樣品干物 質重（g） 物重（g） -100% 6.1.2校正裝袋樣品量的計算 采用下式計算校正裝袋樣品量： 校正裝袋樣品量（g）=實際裝袋樣品量（g） x （ 1—樣品逃逸率（%）） 6.2目標成分降解量的計算 采用下式計算樣品各目標成分各培養(yǎng)時間點的降解量： 某目標成分某培養(yǎng)時間點的降解量（ g）=[校正裝袋樣品量（g） X空白試驗殘余物 中某目標成分的含量（％） ]-[某培養(yǎng)時間點殘余物的重量（g） x某培養(yǎng)時間點殘余 物中某目標成分的含量

16、（％） ] 6.3目標成分實時降解率的計算 采用如下公式計算樣品各目標成分某培養(yǎng)時間點的實時降解率: 某目標成分某時間點的 實時降解率（％） 某目標成分某時間點的 降解量（g） 一校正裝袋樣品量（g）X空白試驗殘余物中某目 標成分的含量（％） 100% 7 6.4 降解參數(shù)的計算 飼料中某成分在瘤胃中的實時降解率符合指數(shù)曲線： P

17、= a + b（ 1 － e--ct ） 式中： P 為 t 時刻被測樣品某目標成分的實時瘤胃降解率， % ； a 為被測樣品某目標成分的快速降解部分， % ； b 為被測樣品某目標成分的慢速降解部分， % ； c 為 b 部分的降解速率， %/h； t 為飼料在瘤胃內停留的時間， h。 利用各培養(yǎng)時間點實時降解率的數(shù)據(jù)（ P 和 t ） ，采用最小二乘法，或統(tǒng)計軟件中的非線 性回歸程序，或飼料瘤胃降解參數(shù)計算軟件，計算式中 a、 b 和 c 值。 6.5 有效降解率的計算 利用 6.4 的計算結果（ a、 b 、 c 值）采用下式計算待測飼料目標成分的有效降解率： P =

18、 a + bc / （ c+k） 式中： P 為待測樣品某目標成分的有效降解率， % ； a 為待測樣品某目標成分的快速降解部分， % b 為待測樣品某目標成分的慢速降解部分， % ； c 為 b 部分的降解速率， %/h； k 為待測樣品某目標成分的瘤胃外流速率， %/h 。 式中的 k 值可按本規(guī)程的附錄 《反芻動物飼料瘤胃外流速率的測定》 中所規(guī)定的方法測 定得到。 由于 k 值的測定比較復雜， 因此在無測定條件時可根據(jù)被測飼料的性質和相關文獻資料 設定 k 值。但設定的 k 值必須符合實際情況，有理有據(jù)。 7 結果表示 試驗結果應包括各目標成分在各培養(yǎng)時間點的實時

19、降解率、降解常數(shù) a 、 b、 c 值、食糜 外流速度 k 值和有效降解率。 試驗結果的表示應精確到小數(shù)點后兩位有效數(shù)字。 在試驗報告中應對試驗動物的種類、 品種、 數(shù)量等情況加以說明。 對 k 值的獲取方法加 以說明。 附錄 反芻動物飼料瘤胃外流速率的測定－鉻標記法 1 原理 利用鉻在動物消化道內基本不被消化的特性， 將待測飼料樣品與重鉻酸鉀按一定比例均 勻混合， 并使二者良好結合， 借此將待測飼料樣品用鉻標記。 將用鉻標記的飼料樣品定量飼 喂給試驗動物， 在規(guī)定的不同時間點收集試驗動物排出的糞便， 并測定糞便中鉻的含量， 得 到待測飼料樣品的排出量與時間之間的關系曲線。

20、 采用適當?shù)臄?shù)學模型， 計算出待測飼料樣 品在瘤胃內的實際停留時間或瘤胃外流速率。 2 試驗動物與飼養(yǎng)管理 除瘤胃瘺管為非必須外，其他要求與飼料瘤胃降解率測定技術規(guī)程 4.1 和 4.2 中的要求 基本相同。在條件允許時，建議使用測定飼料瘤胃降解率的試驗動物測定瘤胃的外流速率。 3 鉻標記飼料的制備 3.1 銘標記飼料中銘用量占待測飼料干物質的 4%?14%。 3.2 稱取相當于以上鉻用量的重鉻酸鉀，溶于溫水中。 3.3 將溶解后的重鉻酸鉀溶液倒入裝有待測飼料的搪瓷盤內，攪拌均勻至稠粥狀，加蓋，置 于恒溫干燥箱內， 100 ℃加熱 24 h。 3.4 將烘干的銘標記飼料放入

21、底部裝有細篩網(wǎng)（孔徑 236 ^m）的桶中，用自來水沖洗至水 澄清。 3.5 將沖洗后的鉻標記飼料放入塑料盆中，加入適量蒸餾水，將飼料懸浮于水中。加入適量 抗壞血酸，攪拌均勻，使 pH 下降至 4.0，靜置 12 h。 3.6 用水將鉻標記飼料沖洗至水清亮，恒溫干燥箱內 65 ℃烘干。 3.7 鉻標記飼料的穩(wěn)定性以 24 h 的瘤胃干物質消失率低于 10 %為標準。 4 測定步驟 4.1 將銘標記飼料于晨飼時與精料混合一起喂給試驗動物。牛的喂量為 300 g/頭；羊的喂量 為50 g/頭。 3.2 于飼喂后 4、 8、 12、 16、 20、 24、 28、 32、 36、 40、 44、 48、 54、 60、 72、 84、 96、 108、 120 h用直腸采樣法采集糞樣。 3.3 將采集的糞樣在恒溫干燥箱內 65 ℃烘干。 1.0 mm 篩粉碎，置于樣品瓶中保存?zhèn)錅y。 3.4 用原子吸收分光光度計法或比色法測定糞樣中鉻的含量。 3.5 結果計算 應用下式計算待測飼料的瘤胃外流速率： f =c0 e mg/kg； 式中： c0 為糞中鉻的初始濃度（糞中鉻濃度最高時鉻濃度） f 為糞中鉻達到高峰后的濃度， mg/kg ； t 為采樣時間點， h ； k 為待測飼料的瘤胃外流速率， %/h 。 10