《細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)》PPT課件.ppt

《《細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)》PPT課件.ppt》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《《細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)》PPT課件.ppt（92頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo) Cellular Signal Transduction 參考書目 細胞生物學(xué) 細胞生物學(xué)在線教程 細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)（第三版），孫大業(yè)，科學(xué) 出版社 第一章 細胞連接與細胞外基質(zhì) cell junction and extracellular matrix 【 目的要求 】 1掌握細胞連接的概念和種類；細胞外基 質(zhì)的概念及種類。 2熟悉各種細胞連接的結(jié)構(gòu)特點。 3了解各種細胞連接存在的部位及功能； 細胞外基質(zhì)的生物學(xué)功能。 【 教學(xué)內(nèi)容 】 一、細胞連接的類型和特點 （一）封閉連接 （二）錨定連接 1黏著帶與黏著斑 2橋粒與半橋

2、粒 （三）通訊連接 1間隙連接 2化學(xué)突觸 二、細胞外基質(zhì)概述 1細胞外基質(zhì)概念 2細胞外基質(zhì)種 類 3細胞外基質(zhì)的生物學(xué)功能 一、細胞連接的類型和特點 細胞是機體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。 機體行使的每一項功能都是多個細胞之間 甚至多種細胞之間協(xié)同作用的結(jié)果。 細胞間聯(lián)系的基本形式 接觸型 非接觸型 細胞連接的概念： 在相鄰細胞表面形成的連接結(jié)構(gòu)，以 加強細胞的機械聯(lián)系和組織的牢固性，同 時協(xié)助細胞間的代謝活動，這些結(jié)構(gòu)稱為 細胞（間）連接。 細胞連接的種類 種類 名稱 封閉連接 緊密連接 錨定連接 連接肌動蛋白 黏著帶 黏著斑 連

3、接中間纖維 橋粒 半橋粒 通訊連接 間隙連接 化學(xué)突觸 細胞連接的概況： （一）封閉連接（ occluding junction） 即緊密連接 （ tight junction）， 又稱閉鎖 小帶 （ zonula occludens） 。 存在部位：各種上皮細胞管腔面細胞間隙 頂端。 分布：消化道上皮、膀胱上皮、腦毛細血 管內(nèi)皮以及睪丸支持細胞之間等。 緊密連接的電鏡圖 ： 結(jié)構(gòu)特點及形成： 相鄰細胞膜形成 24個點狀融合，形成一 條封閉帶，融合處細胞間隙消失。 相鄰細胞由跨膜連接糖蛋白組成對合的 封閉鏈稱嵴線，嵴線相互交聯(lián)封閉了

4、細胞 之間的空隙。 緊密連接的模式圖 功能： 封閉上皮細胞的間隙，防止可溶性物質(zhì) 的反滲， 保證機體內(nèi)環(huán)境的相對穩(wěn)定 。 隔開細胞膜兩端不同功能的轉(zhuǎn)運蛋白， 保證物質(zhì)運轉(zhuǎn)的方向性。 機械性細胞連接。 （二）錨定連接 (anchoring junction) 1. 黏著帶與黏著斑 （ 1）黏著帶 (adhesion belt)， 又稱中間連接 (intermediate junction)。 存在部位：呈帶狀環(huán)繞細胞頂部，位于上 皮細胞的緊密連接下方 。 分布：在上皮細胞間和心肌細胞間多見。 黏著帶的電鏡圖 ： 結(jié)構(gòu)特點及形成： 相鄰

5、細胞間有約 1520nm的間隙， 間隙 中有一種稱鈣黏素 （ cadherin） 的跨膜連 接糖蛋白，與質(zhì)膜內(nèi)側(cè)的幾種附著蛋白結(jié) 合。 相鄰細胞中的肌動蛋白絲束通過鈣黏素 和附著蛋白編織成了一個廣泛的網(wǎng)絡(luò)，把 相鄰細胞聯(lián)合在一起。 黏著帶的模式圖 功能： 有黏著作用； 保持細胞形狀； 傳遞細胞收縮力。 （ 2）黏著斑 （ adhesion plaque） 位于細胞與細胞外基質(zhì)間，通過整合 素（ integrin）把細胞中的肌動蛋白束和基 質(zhì)連接起來。 它與黏著斑的區(qū)別： 是黏著斑結(jié)構(gòu)的一半； 穿膜連接蛋白為整合素。 2

6、. 橋粒與半橋粒 （ 1）橋粒 （ desmosome） 存在部位：在上皮細胞黏著帶的下方間隙 頂端。 分布： 易受摩擦的組織中，如皮膚、口腔、 食管等處的復(fù)層鱗狀上皮細胞之間和心肌 中 。 橋粒的電鏡圖 ： 結(jié)構(gòu)特點及形成： 相鄰細胞間有 30nm的間隙，形成一種紐 扣狀的結(jié)構(gòu)。 相鄰細胞中的中間纖維通過細胞質(zhì)斑和 膜間隙內(nèi)的鈣粘素構(gòu)成了穿胞細胞骨架網(wǎng) 絡(luò) 。 橋粒的模式圖 功能： 橋粒是最牢固的一種細胞連接，起固定 和支持作用。 （ 2）半橋粒（ hemidesmosome） 在結(jié)構(gòu)上類似橋粒，位于上皮細胞基面 與基膜之

7、間。 它與橋粒的區(qū)別： 是橋粒結(jié)構(gòu)的一半； 穿膜連接蛋白為整合素； 細胞內(nèi)的附著蛋白為角蛋白。 （三）通訊連接 （ communicating junction） 1. 間隙連接 （ gap junction） 分布：除骨骼肌細胞及循環(huán)血細胞外的 細胞之間。 間隙連接的電鏡圖 結(jié)構(gòu)特點及形成： 在連接處相鄰細胞間有 2 4nm的縫隙， 在間隙與兩層質(zhì)膜中有大量蛋白質(zhì)顆粒， 是構(gòu)成間隙連接的基本單位，稱連接子 （ connexon），由 6個相同或相似的跨膜 蛋白亞單位環(huán)繞而成，直徑 8nm，中心形 成一個直徑約 1.5nm的孔道 。 間隙連接

8、的 模式圖 功能： 1. 代謝偶聯(lián)：小分子代謝物和信號分子可 通過連接子的通道，由一個細胞進入相鄰 的另一個細胞。 2. 電偶聯(lián)：無須依賴神經(jīng)遞質(zhì)或信息物質(zhì) 即可將一些細胞的電興奮活動傳遞到相鄰 的細胞。 3. 參與細胞分化：胚胎發(fā)育的早期，細胞 間通過間隙連接相互協(xié)調(diào)發(fā)育和分化。 2. 化學(xué)突觸（ synapse） 存在部位：可興奮細胞間 。 作用：通過釋放神經(jīng)遞質(zhì)來傳導(dǎo)興奮。 組成： 突觸前膜 (presynaptic membrane) 突觸后膜 (postsynaptic membrane) 突觸間隙 (synaptic cleft)

9、 化學(xué)突觸的電鏡圖 結(jié)構(gòu)特點及形成： 突觸小體內(nèi)有許多囊泡，稱突觸小泡 (synaptic vesicle)，內(nèi)含神經(jīng)遞質(zhì)。當神 經(jīng)沖動傳到突觸前膜，突觸小泡釋放神經(jīng) 遞質(zhì)，為突觸后膜的受體接受（配體門通 道），引起突觸后膜離子通透性改變，膜 去極化或超極化。 化學(xué)突觸的模式圖 二、細胞外基質(zhì) (一）細胞外基質(zhì)概述 1. 概念 細胞外基質(zhì) （ extracellular matrix， ECM） 是指由細胞分泌的，位于上皮或內(nèi) 皮細胞下層和結(jié)締組織細胞周圍，為組織、 器官提供力學(xué)支持和物理強度，并對細胞 的黏附、遷移、增殖和分化等活動以及胚 胎發(fā)生

10、等產(chǎn)生影響的物質(zhì)。 細胞外基質(zhì) 上皮組織的細胞外基質(zhì)： 2. 細胞外基質(zhì)種類 （ 1）膠原（ collagen） 是由多種糖蛋白分子組成的家族。 （ 2）蛋白多糖（ proteoglycan） 由一個核心蛋白分子與多個糖氨多糖 側(cè)鏈結(jié)合而成的大分子復(fù)合物。通過其分 子篩形成基質(zhì)防御屏障。 1）硫酸軟骨素（ chondroitin sulfate， CS） 由葡萄糖醛酸與 N-乙酰半乳糖胺通過 -1,3連接構(gòu)成基本的重復(fù)單位。第 4或 6位 硫酸化。 2）硫酸皮膚素（

11、dermatan sulfate） 含有一個或多個艾杜糖酸殘基的硫酸軟 骨素鏈。 3）硫酸乙酰肝素（ heparan sulfate， HS） 由葡萄糖醛酸與 N-乙酰葡糖胺通過 - 1,4連接，兩個殘基可在 O-或 N-位點上發(fā)生 廣泛的硫酸化修飾。 4）硫酸角質(zhì)素（ keratan sulfate） 半乳糖與 N-乙酰葡糖胺通過 -1,4連接， 每個殘基的第 6位上發(fā)生硫酸化修飾。 5）透明質(zhì)酸（ hyaluronan， HA） 數(shù)量不定的多聚體葡糖酸與 N-乙酰葡 糖胺通過 -1,3連接構(gòu)成。 （ 3）糖蛋白（ glycoprotein） 黏附性糖蛋白

12、：與細胞的黏附及遷移 有關(guān)。 骨相關(guān)基質(zhì)糖蛋白：調(diào)節(jié)離子濃度。 彈性蛋白相關(guān)糖蛋白：在彈性蛋白的 沉積過程中具有重要影響。 3. 細胞外基質(zhì)的生物學(xué)功能 （ 1）機械支持功能 細胞外基質(zhì)是構(gòu)成基膜和結(jié)締組織及各 種器官被膜的主要成分，具有維持機體結(jié) 構(gòu)的完整性和為機體提供支架結(jié)構(gòu)的作用。 （ 2）參與細胞黏附與遷移 細胞外基質(zhì)分子中的細胞黏附位點與細 胞膜上的相應(yīng)的受體特異性結(jié)合，觸發(fā)跨 膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，對細胞的基因表達及細胞表 型和功能產(chǎn)生影響。 整合素 （ 3）參與細胞增殖與分化 某些類型的細胞外基質(zhì)如成纖維細胞生 長因子具有促有絲分裂原的功能，通

13、過促 進層粘連蛋白的合成與釋放，進一步刺激 神經(jīng)細胞的增殖與分化。 (二）膠原（ collagen） 1. 膠原的分子生物學(xué) 2. 膠原生物合成的特殊性 翻譯后加工和修飾： Pro、 Lys羥基化 羥賴氨酸糖基化 Tyr硫酸化 二硫鍵的形成 鏈間組合等 3. 膠原的生物學(xué)功能 主要是支持和抗拉力。 (三）纖連蛋白（ fibronectin， FN） 1. 纖連蛋白的分子生物學(xué) 2. 纖連蛋白的生物學(xué)功能 （ 1）參與細胞的黏附與遷移 細胞的黏附與遷移是細胞與細胞外 基質(zhì)進行特異性識別、結(jié)合與作

14、用的結(jié)果， 這在胚胎發(fā)育、組織形成、損傷修復(fù)和腫 瘤細胞的浸潤中起重要作用。 （ 2）纖連蛋白與心血管系統(tǒng) FN在心血管系統(tǒng)的正常發(fā)育、正常 生理機能的維持中起重要作用，并且與心 血管疾病的發(fā)生、發(fā)展之間也有極為密切 的聯(lián)系。 （ 3）纖連蛋白與結(jié)締組織衰老性疾病 結(jié)締組織衰老性疾病以動脈粥樣硬 化、骨質(zhì)疏松以及骨關(guān)節(jié)炎等最為常見。 這些結(jié)締組織的變化主要影響蛋白多糖和 膠原網(wǎng)絡(luò)， FN的質(zhì)和量的改變也與之有 關(guān)。 （ 4）纖連蛋白與腫瘤轉(zhuǎn)移 (四）層粘連蛋白（ laminin ， LN ） 1.層粘連蛋白的分子生物學(xué) 2. 層粘連蛋

15、白的生物學(xué)功能 基底膜的主要組成成分； 細胞黏附功能； 促進大多數(shù)類型細胞的生長； 在形態(tài)學(xué)發(fā)生中有重要作用； 對腫瘤的生長與轉(zhuǎn)移有促進作用。 (五）彈性蛋白（ elastin） 1. 彈性蛋白的分子生物學(xué) 2. 彈性蛋白的生物學(xué)功能 形成彈性纖維。借助其彈性回縮作用，在 維持呼吸和血壓，保持持續(xù)的血液灌注以 及皮膚的彈性等方面有重要意義； 促進細胞黏附。 (六）親玻粘連蛋白（ vitronectin） 1.親玻粘連蛋白的分子生物學(xué) 2.親玻粘連蛋白的生物學(xué)功能 通過與膜上相應(yīng)的受體結(jié)合，在細胞黏附、 細胞遷移、

16、補體結(jié)合、凝血鏈式反應(yīng)、纖 維溶解反應(yīng)、止血、腫瘤轉(zhuǎn)移、神經(jīng)元軸 突生長等過程中都具有十分重要的作用。 (七）粘結(jié)蛋白（ entactin） 1. 粘結(jié)蛋白的分子生物學(xué) 2. 粘結(jié)蛋白的生物學(xué)功能 主要與 基底膜各種蛋白分子結(jié)合，在基底 膜的形成過程中具有十分重要的作用； 對細胞功能進行調(diào)節(jié)，在血管形成、損傷 的修復(fù)、肝纖維化的發(fā)生、細胞的黏附及 遷移以及腫瘤細胞的外向侵襲等過程中有 重要意義 。 (八）串珠聚糖蛋白（ perlecan） 1.串珠聚糖蛋白的分子生物學(xué)

17、 2.串珠聚糖蛋白的生物學(xué)功能 與 基膜中的膠原和層粘連蛋白作用，構(gòu)成 基膜的基本結(jié)構(gòu)； 因其帶負電荷，使基膜具有電荷選擇性超 濾功能； 介導(dǎo)細胞間的黏附，參與細胞之間的相互 作用 。 (九）凝血酶應(yīng)答蛋白（ thrombospondin，TSP） 是指血小板 顆粒受到凝血酶刺激后釋 放的一種細胞外基質(zhì)蛋白。 1.凝血酶應(yīng)答蛋白的分子生物學(xué) 2. 凝血酶應(yīng)答蛋白的生物學(xué)意義 介導(dǎo)細胞的黏附、擴散與遷移 ； 抑制體內(nèi)新血管形成； 對細胞內(nèi)骨架重

18、排有一定作用； 在止血過程中具有十分重要的作用； 參與損傷修復(fù)。 (十）馮 威勒布蘭德因子 （ von Willebrand factor， vWF） 1. 馮 威勒布蘭德因子 的分子生物學(xué) 2. 馮 威勒布蘭德因子的生物學(xué)功能 在血管損傷處誘導(dǎo)血小板黏附和血栓形成， 同時與凝血因子 前體結(jié)合成 - vWF復(fù) 合物，誘發(fā)止血過程； 與腫瘤細胞的黏附以及腫瘤的轉(zhuǎn)移過程關(guān) 系密切。 (十一）骨鈣蛋白、骨連蛋白與骨橋蛋白 1. 骨鈣蛋白（ osteocalcin） 骨鈣蛋白的作用： 在骨形成過程中，對骨的礦化有負調(diào)節(jié)作 用；

19、 促進骨的吸收。 2. 骨連蛋白（ osteonectin） 又稱 BM40或 43kD蛋白，是一種膠原結(jié) 合型糖蛋白。 骨連蛋白與各種類型的膠原蛋白、 血小板衍生生長因子及其受體等相互作用， 調(diào)節(jié)細胞的黏附、遷移、增殖等活動，與 骨形成、組織分化與更新有關(guān)。 3. 骨橋蛋白（ osteopontin） 骨橋蛋白在細胞黏附、細胞的信號 轉(zhuǎn)導(dǎo)、骨的重建、泌尿系統(tǒng)結(jié)石的形成、 腫瘤

20、的轉(zhuǎn)移及免疫調(diào)節(jié)等過程中都具有十 分重要的作用。 Kr 9#I p7ZGo5XEm4VDk2TBj0Szh-Qyf) Owe*Nuc%Lt a$Jr8#I p7YGn5XEm3VCk2TBi0Szh-Qxf) Owd*Muc%Lsa!Jr8#Hp6YGn5WEl3VCk1TBi0Rzg- Qxf (Ovd*Mub%Ksa!Jq8ZHp6YFn5WEl3UCk1TAi+Rzg- Pxe(Ovd&M tb%Ks9!Jq8ZHo6YFn4WDl3UCj1SAi+Ryg)Pxe(Nvd&Mt b$Ks9! Iq7ZHo6XFm4WDl2UBj1SAh+Qyg)Pwe(Nvc&Ltb$Kr 9#I q

21、7ZGo5XFm4VDk2UBj0SAh+Qyf )Pwe*Nuc&Lta$Jr 9#I p7YGo5XEm4VDk2TBj0Szh-Qyf) Owd*Nuc%Lsa$Jr8#Hp7YGn5XEm3VCk2TBi0Rzh-Qxf( Owd*Mub%Lsa! Jr 8#Hp6YGn5WEl3VCk1TAi0Rzg- Pxi+Rzg- Pxe( O vd&Mtb%Ks9! Jq8ZHo6YFn4WDl3UCj1SAi+Ryg) Pxe(Nvc&Mtb$Ks9!Iq7ZHo6XFm 4WDl2UBj1SAh+Qyg)Pwe(Nvc&Lt b$Kr9#Iq7ZGo5XFm4VDk2UBj0SAh+Qy

22、f) Pwe*Nuc&Lt a$Jr9#Ip7YGo5XEm4VDk2TBj0Szh-Qyf) Owd*Nuc%Lsa$Jr8#Hp7YGn5XEm3VCk2TBi0Rzh-Qxf( Owd*Mub%Lsa!Jr8#Hp6YGn5WEl3VCk1TAi0Rzg- Pxf (Ovd*Mub%Ksa!Jq8ZHp6YFn4WEl3UCj1TAi+Ryg- Pxe( O vd&Mtb%Ks9! Iq8ZHo6XFn4WDl2UCj1SAi+Ryg)Pxe(Nvc&Mt b$Kr9!I q7ZGo6XFm4WDl2UBj1SAh+Qyg) Pwe*Nvc&Lta$Kr 9#Ip7ZGo5XFm4VDk

23、2UBj0Szh+Qyf) Owe*Nuc%Lt a$Jr9#I p7YGo5XEm3VDk2TBi0Szh-Qxf) Owd*Nuc%Lsa$Jr8#Hp7YGn5WEm3VCk1TBi0Rzg- Qxf (Owd*M ub%Lsa!Jq8#Hp6YFn5WEl3UCk1TAi0Rzg-Px f( Ovd&Mub%Ks9!Jq8ZHo6YFn4WEl3UCj1TAi+Ryg-Pxe( Nvd&M tb$Ks9!Iq8ZHo6XFn4WDl2UCj1SAh+Ryg)Pwe(Nvc&Ltb$Kr9!Iq7ZGo6XFm4VDl2UBj0SAh+Qyf) Pwe*Nvc&Lta$Kr 9#Ip7Z

24、Go5XEm 4VDk2TBj0Szh+Qyf) Owe*Nuc%Lta$Jr 8#Ip7YGn5XEm3VCk2TBi0Szh- Qxf)Owd*Muc%Lsa! Jr 8#Hp6YGn5WEm3VCk1TBi0Rzg-Qxf( Ovd*Mub%Ksa! Jq8#Hp6YFn5WEl3UCk1TAi+Rzg- Pxe( Ovd&Mtb%Ks9! Jq8ZHo6YFn4WDl3UCj1SAi+Ryg) Pxe(Nvd&Mtb$Ks9!Iq7ZHo6XFm 4WDl2UBj1SAh+Ryg)Pwe(Nvc&Lt b$Kr9#Iq7ZGo5XFm4VDl2UBj0SAh+Qyf )Pwe*Nuc&

25、Lta$Jr 9#I p7YGo5XEm4VDk2TBj0Szh- Q yf ) Owd*Nuc%Lsa$Jr 8#I p7YGn5XEm3VCk2TBi0Rzh-Qxf( Owd*Muc%Lsa!Jr8#Hp6YGn5WEl3VCk1TAi0Rzg- Pxf (Ovd*Mub%Ksa!Jq8ZHp6YFn4WEl3UCj1TAi+Rzg-Pxe( Ovd&Mtb%Ks9! Iq8ZHo6XFn4WDl3UCj1SAi+Ryg) Pxe(Nvc&M tb$Kr 9! Iq7ZGo6XFm4WDl2UBj1SAh+Qyg)Pwe*Nvc&Lta$Kr 9#I q7ZGo5XFm4VDk2UBj0

26、Szh+Qyf )Owe*Nuc&Lta$Juc%Lsa$Jr 8#Ip7YGn5XEm3VCk2TBi0Rzh-Qxf( Owd*Muc%Lsa! Jr 8#Hp6YGn5WEl3VCk1TAi0Rzg- Pxf( Ovd*Mub%Ksa!Jq8ZHp6YFn4WEl3UCj1TAi+Rzg-Pxe( O vd&Mtb%Ks9! Iq8ZHo6XFn4WDl3UCj1SAi+Ryg)Pxe(Nvc&Mt b$Kr9!I q7ZGo6XFm4WDl2UBj1SAh+Qyg) Pwe*Nvc&Lta$Kr 9#Iq7ZGo5XFm4VDk2UBj0Szh+Qyf) Owe*Nuc&Lta$Jr

27、9#Ip7YGo5XEm3VDk2TBi0Szh- Qxf)Owd*Nuc%Lsa$Jr 8#Hp7YGn5WEm3VCk1TBi0Rzh-Qxf( Owd*Mub%Lsa!Jq8#Hp6YFn5WEl3VCk1TAi0Rzg- Pxf (Ovd&M ub%Ks9! Jq8ZHo6YFn4WEl3UCj1TAi+Ryg- Pxe( Nvd&M tb$Ks9!Iq8ZHo6XFn4WDl2UCj1SAh+Ryg)Pwe(Nvc&M tb$Kr 9! Iq7ZGo6XFm4VDl2UBj0SAh+Qyg) Pwe*Nvc&Lt a$Kr9#Ip7ZGo5XEm4VDk2TBj0Szh+Qyf)Ow

28、e*Nuc%Lta$Jr 8#Ip7YGn5XEm 3VDk2TBi0Szh- Qxf )Owd*M uc%Lsa!Jr 8#Hp7YGn5WEm3VCk1TBi0Rzg-Qxf( Ovd*M ub%Ksa! Jq8#Hp6YFn5WEl3UCk1TAi+Rzg- Pxe(Ovd&Mub%Ks9! Jq8ZHo6YFn4WDl3UCj1SAi+Ryg- Pxe( Nvd&Mtb$Ks9!Iq7ZHo6XFm4WDl2UBj1SAh+Ryg) Pwe( Nvc&Lt b$Kr9#Iq7ZGo5XFm4VDl2UBj0SAh+Qyf)Pwe*Nuc&Lt a$Jr9#I p7ZGo5XEm4VDk

29、2TBj0Szh- Q yf ) Owd*Nuc%Lta$Jr 8#Ip7YGn5XEm 3VCk2TBi0Rzh- Qxf(Owd*Muc%Lsa! Jr 8#Hp6YGn5WEl3VCk1TAi0Rzg-Qxf( Ovd*Mub%Ksa!Jq8ZHp6YFn4WEl3UCk1TAi+Rzg-Pxe( Ovd&Mt b%Ks9!Iq8ZHo6XFn4WDl3UCj1SAi+Ryg) Pxe(Nvc&Mtb$Kr 9! Iq7ZHo6XFm4WDl2UBj1SAh+Qyg)Pwe*Nvc&Ltb$Kr9#I q7ZGo5XFm4VDk2UBj0Szh+Qyf )Owe*Nuc&Lwd*Nuc%

30、Lsa$Jr 8#Ip7YGn5XEm3VCk2TBi0Rzh-Qxf( Owd*Muc%Lsa! Jr 8#Hp6YGn5WEl3VCk1TAi0Rzg- Qxf (Ovd*Mub%Ksa!Jq8ZHp6YFn4WEl3UCj1TAi+Rzg-Pxe( O vd&Mtb%Ks9! Iq8ZHo6XFn4WDl3UCj1SAi+Ryg)Pxe(Nvc&Mt b$Kr9!I q7ZHo6XFm4WDl2UBj1SAh+Qyg) Pwe*Nvc&Ltb$Kr 9#Iq7ZGo5XFm4VDk2UBj0Szh+Qyf) Owe*Nuc&Lta$Jr 9#Ip7YGo5XEm3VDk2TBi0Szh-

31、 Qyf)Owd*Nuc%Lsa$Jr 8#Hp7YGn5WEm3VCk2TBi0Rzh-Qxf( Owd*Mub%Lsa!Jq8#Hp6YFn5WEl3VCk1TAi0Rzg- Pxf (Ovd&M ub%Ks9! Jq8ZHp6YFn4WEl3UCj1TAi+Ryg- Pxe( Nvd&M tb%Ks9! Iq8ZHo6XFn4WDl2UCj1SAh+Ryg) Pwe( Nvc&Mtb$Kr9!Iq7ZGo6XFm4VDl2UBj0SAh+Qyg)Pwe*Nvc&Lta$Kr 9#I p7ZGo5XEm4VDk2UBj0Szh+Qyf )Owe*Nuf) Owd*Nuc%Lsa$Jr8#H

32、p7YGn5WEm3VCk2TBi0Rzh- Qxf (Owd*M ub%Lsa!Jq8#Hp6YFn5WEl3VCk1TAi0Rzg-Pxf( Ovd&Mub%Ks9!Jq8ZHp6YFn4WEl3UCj1TAi+Ryg- Pxe( Nvd&Mtb%Ks9! Iq8ZKr9!I q7ZHo6XFm4WDl2UBj1SAh+Qyg) Pwe*Nvc&Lta$Kr 9#Iq7ZGo5XFm4VDk2UBj0Szh+Qyf) Owe*Nuc&Lta$Jr 9#Ip7YJr 8#Ip7YGn5XEm3VCk2TBi0Rzh-Q xf ( Owd*Muc%Lsa! Jr 8#Hp6YGn5WEp6YF

33、n5WEl3UCk1TAi+Rzg-Pxe( Ovd&Mt b%Ks9!Jq8ZHo6YFn4WDl3UCj1SAi+Ryg)Pxe( Nvd&Mtb$Ks9!I qb$Kr 9!Iq7ZGo6XFm 4VDl2UBj0SAh+Qyf) Pwe*Nvc&Lt a$Kr9#Ip7ZGo5XEm4VDk5XEm3VDk2TBi0Szh-Qxf) Owd*Muc%Lsa$Jr8#Hp7YGn5WEm 3VCk1TBi0Rzg- Qxf(Owd*Mub%Lsa! Jq8#Hp6YFn5WEl3UCk1TAi0Rzg- Pxf ( O vd&M ub%Ks9! Jq8%Ks9!I q8ZHo6XFn4W

34、Dl2UCj1SAh+Ryg)Pxe(Nvc&Mt b$Kr9!I q7ZGo6XFm4VDl2UBj1SAh+Qyg)Pwe*Nvc&Lt a$Kr9#Ip7ZGo5XFm4VDk2UBj0Szh+Qyf)Owe*Nuc%Lta$Jr 8#Lsa$Jr 8#Hp7YGn5WEm3VCk2TBi0Rzh-Qxf( Owd*Mub%Lsa!Jq8#Hp6YGn5WEl3VCk1TAi0Rzg- Pxf (Ovd&M ub%Ksa! Jq8ZHp6YFn4WEl3UCj1TAi+Ryg- Pxe(Nvd&M tb%Ks9&Mtb$Kr 9!Iq7ZHo6XFm 4WDl2UBj1SAh+Qyg)P

35、we*Nvc&Lt b$Kr9#Iq7ZGo5XFm4VDk2UBj0Szh+Qyf)Pwe*Nuc&Lt a$Jr9#I p7YGo5XEm3VDk2TBj0Szh- Q yf ) Owd*Nuc%Lsa$Jr 8#Hp7YGn5WEm3VCk2TBi0Rzh-Qxf( Owd*Mub%Lsa!Jq8#Hp6YGn5WEl3VCk1TAi0Rzg-Pxf(Ovd&Mub%Ksa! Jq8ZHp6YFn4WEl3UCj1TAi+UCj1SAi+Ryg) Pxe(Nvc&M tb$Kr 9! Iq7ZHo6XFm4WDl2UBj1SAh+Qyg)Pwe*Nvc&Ltb$Kr 9#I q7ZGo5

36、XFm4VDk2UBj0Szh+Qyf )Pwe*Nuc&Lwd*Nuc%Lt a$Jr8#I p7YGn5XEm3VCk2TBi0Rzh-Qxf( Owd*Muc%Lsa!Jr8#Hp6YGn5WEl3VCk1TAi0Rzg- Qxf(Ovd*Mub%Ksa!Jq8ZHp6YFn4WEl3UCk1TAi+Rzg-Pxe( O vd&Pxe(Nvd&Mtb$Ks9!Iq7ZHo6XFm 4WDl2UBj1SAh+Ryg)Pwe(Nvc&Lt b$Kr9#Iq7ZGo5XFm4VDl2UBj0SAh+Qyf )Pwe*Nuc&Lta$Jr 9#I ta$Jr8#Ip7YGn5XEm3VDk2TBi0Szh- Qxf )Owd*Muc%Lsa!Jr8#Hp6YGn5WEm 3VCk1TBi0Rzg- Qxf(Ovd*Mub%Ksa!Jq8#Hp6YFn5WEl3UCk1TAi+Rzg- PAi+Ryg-Pxe( Nvd&Mt b$Ks9!I q8ZHo6XFn4WDl2UCj1SAh+Ryg) Pwe( Nvc&Lt b$Kr9!I q7ZGo6XFm4VDl2UBj0SAh+Qyf )Pwe*Nvc