鄰菲羅啉分光光度法測定鐵一

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1、鄰菲羅啉分光光度法測定鐵鄰菲羅啉分光光度法測定鐵 （一）（一）E-mail:ruiting_儀器分析實(shí)驗儀器分析實(shí)驗紫外紫外- -可見分光光度法可見分光光度法 紫外紫外-可見分光光度法是研究物質(zhì)分子在紫外可見分光光度法是研究物質(zhì)分子在紫外-可見光區(qū)分子吸收可見光區(qū)分子吸收光譜的分析方法。光譜的分析方法。入射光入射光I0透射光透射光It0lglgtIATI 吸光度：吸光度：單光束紫外可見分光光度計主要部件單光束紫外可見分光光度計主要部件原理：原理：由光源發(fā)出的連續(xù)光譜，進(jìn)入單色器經(jīng)色散元件分光，由光源發(fā)出的連續(xù)光譜，進(jìn)入單色器經(jīng)色散元件分光，獲得的單色光分別通過參比溶液和樣品溶液，進(jìn)行光強(qiáng)度（吸

2、獲得的單色光分別通過參比溶液和樣品溶液，進(jìn)行光強(qiáng)度（吸收）的測定。收）的測定。0.575光源光源單色器單色器吸收池吸收池檢測器檢測器顯示顯示（一）、掌握分光光度法測定鐵的原理及方法（一）、掌握分光光度法測定鐵的原理及方法（二）、通過測定鐵的條件試驗，掌握分光光度法測定鐵的條（二）、通過測定鐵的條件試驗，掌握分光光度法測定鐵的條件及方案的擬定。件及方案的擬定。（三）、掌握分光光度計的組成部分，操作注意事項和如何使（三）、掌握分光光度計的組成部分，操作注意事項和如何使用它實(shí)現(xiàn)對物質(zhì)的檢測。用它實(shí)現(xiàn)對物質(zhì)的檢測。（四）、掌握（四）、掌握7200型分光光度計的使用方法。型分光光度計的使用方法。一、實(shí)驗

3、目的一、實(shí)驗?zāi)康腖amber-Beer定律定律 Lambert-Beer定律定律是說明物質(zhì)對單色光的吸光度（是說明物質(zhì)對單色光的吸光度（A）與吸）與吸光物質(zhì)的濃度（光物質(zhì)的濃度（c）和）和 液層厚度（液層厚度（l）間的關(guān)系的定律，是光吸）間的關(guān)系的定律，是光吸收的基本定律，是紫外收的基本定律，是紫外-可見光度法定量的基礎(chǔ)?？梢姽舛确ǘ康幕A(chǔ)。Sample (conc. C)Path length l入射光入射光 I0透射光透射光 It A Ecl濃度濃度（比爾定律）（比爾定律）厚度厚度(朗伯定律）朗伯定律）吸光系數(shù)吸光系數(shù)吸吸光光度度二、實(shí)驗原理二、實(shí)驗原理 在在pH=29的條件下，的條件下

4、，F(xiàn)e2+與鄰菲羅啉（鄰二氮菲）生成很與鄰菲羅啉（鄰二氮菲）生成很穩(wěn)定的橙紅色的絡(luò)合物，其反應(yīng)如下：穩(wěn)定的橙紅色的絡(luò)合物，其反應(yīng)如下：此絡(luò)合物的此絡(luò)合物的logK穩(wěn)穩(wěn)=21.3，=11000。 顯色反應(yīng)：使得無色物質(zhì)通過反應(yīng)生成有色物質(zhì)，提高顯色反應(yīng)：使得無色物質(zhì)通過反應(yīng)生成有色物質(zhì)，提高測定靈敏度和選擇性。測定靈敏度和選擇性。鄰菲羅啉鄰菲羅啉-Fe2+配合物的紫外吸收光譜配合物的紫外吸收光譜510nm青綠色青綠色橙紅色橙紅色4Fe3+2NH2OHHCl4Fe2+N2 +H2O+4H+ +2Cl-在顯色前，首先用在顯色前，首先用鹽酸羥胺鹽酸羥胺把把Fe3+還原為還原為Fe2+： 測定時，控制溶

5、液酸度在測定時，控制溶液酸度在pH=29較適宜，酸度過高，反較適宜，酸度過高，反應(yīng)速度慢，酸度太低，則應(yīng)速度慢，酸度太低，則Fe2+水解，影響顯色。通常在水解，影響顯色。通常在pH值值5的緩沖液介質(zhì)中測定。的緩沖液介質(zhì)中測定。 本試驗中用本試驗中用HAc-NaAc緩沖溶液緩沖溶液三、儀器和試劑三、儀器和試劑7200型可見分光光度計、型可見分光光度計、pHS-3B型酸度計型酸度計儀器：儀器：鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液（鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液（CFe3+=10 g/ml）10%鹽酸羥胺水溶液鹽酸羥胺水溶液0.1鄰菲羅啉水溶液鄰菲羅啉水溶液1mol/L NaAc緩沖溶液緩沖溶液C(HCl)=0.1mol/L溶液溶液 C(NaO

6、H)=0.4mol/L溶液溶液試劑：試劑：四、實(shí)驗步驟四、實(shí)驗步驟（一）條件試驗（一）條件試驗F 1、測定波長選擇、測定波長選擇：吸收曲線：吸收曲線(A-l l曲線曲線)的繪制，選擇最大的繪制，選擇最大吸收波長作為測定波長；吸收波長作為測定波長；F 2、反應(yīng)時間選擇、反應(yīng)時間選擇：鄰菲羅啉鐵配合物的穩(wěn)定性，繪制：鄰菲羅啉鐵配合物的穩(wěn)定性，繪制A-t曲線；曲線；F 3、顯色劑用量、顯色劑用量：顯色劑濃度的影響，繪制：顯色劑濃度的影響，繪制A-V曲線；曲線；F 4、pH選擇選擇：溶液酸度對配合物的影響，繪制：溶液酸度對配合物的影響，繪制A-pH曲線。曲線。 1、吸收曲線的繪制、吸收曲線的繪制試樣配

7、制：試樣配制：鐵標(biāo)液鐵標(biāo)液CFe3+=10g/mL鹽酸羥胺鹽酸羥胺10%NaAc緩沖液緩沖液1mol/L鄰菲羅啉鄰菲羅啉0.1%參比溶液參比溶液0.00mL1mL5mL5mL試液試液5.00mL1mL5mL5mL吸收曲線（吸收曲線（A-） 波長波長(nm)450460470480490500510吸光度吸光度A波長波長(nm)520530540550560570吸光度吸光度A用蒸餾水定容至用蒸餾水定容至50mL靜置靜置10分鐘，測試分鐘，測試 2、鄰菲羅啉配合物的穩(wěn)定性、鄰菲羅啉配合物的穩(wěn)定性試樣配制：與實(shí)驗試樣配制：與實(shí)驗1一樣，可共用。一樣，可共用。鐵標(biāo)液鐵標(biāo)液CFe3+=10g/mL鹽酸

8、羥胺鹽酸羥胺10%NaAc緩沖液緩沖液1mol/L鄰菲羅啉鄰菲羅啉0.1%參比溶液參比溶液0.00mL1mL5mL5mL試液試液5.00mL1mL5mL5mL曲線（曲線（A-t）：）：時間時間t (min)515306090吸光度吸光度A檢測波長：檢測波長：510nm用蒸餾水定容至用蒸餾水定容至50mL0 2 4 6 10 15 45 60 3、顯色劑濃度影響、顯色劑濃度影響試樣配制：試樣配制：鐵標(biāo)液鐵標(biāo)液CFe3+=10g/mL鹽酸羥胺鹽酸羥胺10%NaAc緩沖液緩沖液1mol/L鄰菲羅啉鄰菲羅啉0.1%試液試液10.00mL1mL5mLx mL曲線（曲線（c-A） 鄰菲羅啉鄰菲羅啉0.1%

9、0.10mL0.30mL0.50mL1.00mL3.00mL5.00mL10.00mL吸光度吸光度A參比：蒸餾水；檢測波長：參比：蒸餾水；檢測波長：510nm靜置靜置10分鐘，測試分鐘，測試用蒸餾水定容至用蒸餾水定容至50mL 4、溶液酸度對配合物的影響、溶液酸度對配合物的影響試樣配制：試樣配制：鐵標(biāo)液鐵標(biāo)液10g/mL鹽酸羥鹽酸羥胺胺10%pH調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)溶液溶液鄰菲羅啉鄰菲羅啉0.1%pH值值吸光度吸光度110.00mL2mL5mL 0.4mol/LNaOH5mL210.00mL2mL5mL 0.1mol/LHCl5mL310.00mL2mL5mL NaAc緩沖緩沖5mL參比：蒸餾水作參比；檢

10、測波長：參比：蒸餾水作參比；檢測波長：510nm溶液反應(yīng)溶液反應(yīng)5分鐘后測量，分鐘后測量，加樣順序從左到右加樣順序從左到右，看溶液，看溶液pH值對配值對配合物穩(wěn)定性和配位反應(yīng)的速度的影響。合物穩(wěn)定性和配位反應(yīng)的速度的影響。用蒸餾水定容至用蒸餾水定容至50mL1、移液管的使用、移液管的使用 常見移液管：標(biāo)有常見移液管：標(biāo)有溫度和容量溫度和容量(注意是注意是否標(biāo)有否標(biāo)有吹吹) 用途：用途：準(zhǔn)確移取一準(zhǔn)確移取一定體積的液體定體積的液體 操作：操作：洗滌洗滌(蒸餾水蒸餾水)、潤洗潤洗(3次次)、移液、移液、洗滌干凈洗滌干凈注意事項：注意事項：1、整個操作過程中，保持移液管的垂直；、整個操作過程中，保持

11、移液管的垂直；2、讀數(shù)、讀數(shù)時視線與凹液面平齊；時視線與凹液面平齊；3、每次移液后，錐形瓶壁用蒸餾水沖、每次移液后，錐形瓶壁用蒸餾水沖洗（洗瓶的頭不要碰到瓶壁）洗（洗瓶的頭不要碰到瓶壁）容量瓶的使用容量瓶的使用注意事項：注意事項：1、使用前要檢漏。加水至刻度，、使用前要檢漏。加水至刻度，塞上瓶塞，倒立，檢查是否漏水，塞上瓶塞，倒立，檢查是否漏水，瓶塞旋轉(zhuǎn)瓶塞旋轉(zhuǎn)180，如上操作。，如上操作。2、使用過程中，防止瓶塞被混、使用過程中，防止瓶塞被混淆污染，不能隨意放置桌上。淆污染，不能隨意放置桌上。3、洗滌時洗至不掛水珠，再用、洗滌時洗至不掛水珠，再用蒸餾水潤洗蒸餾水潤洗3次，用鉻酸洗液清次，用鉻

12、酸洗液清洗。洗。4、讀數(shù)時要用手前、讀數(shù)時要用手前3指輕輕夾起指輕輕夾起容量瓶，使之自然垂直，再讀數(shù)。容量瓶，使之自然垂直，再讀數(shù)。5、容量瓶不可烘干，防止體積、容量瓶不可烘干，防止體積變化。變化。7200可見分光光度計可見分光光度計1、選擇模式：、選擇模式：mode 透光率（透光率（Transmittance ） 吸光度（吸光度（Absorbance ）校正：校正：透光率模式透光率模式全黑比色皿：全黑比色皿：0%空白溶液：空白溶液：100%測試：測試：吸光度模式吸光度模式2、波長選擇、波長選擇轉(zhuǎn)動波長旋鈕轉(zhuǎn)動波長旋鈕每次測量前都要重新校正每次測量前都要重新校正。測試從低濃度到高濃度，測測試從低濃度到高濃度，測試前比色皿要用待測液試前比色皿要用待測液潤洗潤洗。選擇模式為透過率選擇模式為透過率再按再按0%模式不變模式不變再按再按100%選擇模式為吸光度選擇模式為吸光度讀取讀數(shù)讀取讀數(shù)數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理用用excel作圖作圖電子圖表班長收齊后壓縮電子圖表班長收齊后壓縮發(fā)送到：發(fā)送到：ruiting_另外，實(shí)驗報告每人一份，將圖表打印出來附在末尾。另外，實(shí)驗報告每人一份，將圖表打印出來附在末尾。