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1、單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,免疫分析中的干擾與消除,內(nèi)容概要,1.,概述,2.,主要內(nèi)容,3.,結(jié)語(yǔ),1.,溶血等常見內(nèi)源性干擾,2.,類風(fēng)濕因子,3.,補(bǔ)體,4.,異嗜性抗體,5.HAMA,6.,自身抗體,7.,結(jié)合蛋白,8.,其他干擾因素,概述,基礎(chǔ)、前沿的話題,普遍、常見的現(xiàn)象,復(fù)雜、多樣的本質(zhì),深刻、直接的影響,長(zhǎng)遠(yuǎn)、艱巨的任務(wù),定義,IFCC,：樣本中被分析物質(zhì)外存在的因素，產(chǎn)生的檢測(cè)信號(hào)，表現(xiàn)在檢測(cè)結(jié)果上的系統(tǒng)性錯(cuò)誤。,分析物不相關(guān)的因素,溶血、脂血、抗凝樣本、樣本保存等,分析物相關(guān)的因素,類風(fēng)濕因子，異嗜性抗體，自身抗體
2、等,免疫分析中干擾的分析,不同次檢驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比的不一致性,檢驗(yàn)結(jié)果與臨床癥狀不符,系列檢驗(yàn)結(jié)果的矛盾,極度偏離，難以置信的檢驗(yàn)結(jié)果,稀釋回收高度偏離預(yù)期,與其他檢驗(yàn)試劑或方法相背離的結(jié)果,常見“干擾”因素,溶血,高膽紅素,脂血（對(duì)脂溶性物質(zhì)的干擾，,NEFA,）,抗凝樣本（添加劑，分離膠）,樣本的穩(wěn)定性與保存條件,內(nèi)源性激素結(jié)合蛋白,白蛋白,TBG,，,SHBG,，,CBG,FDH,（家族性異常白蛋白高甲狀腺素血癥）,游離激素的測(cè)定,（標(biāo)記抗原，標(biāo)記抗原類似物，標(biāo)記抗體）,內(nèi)源性抗體等干擾因素,類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、溶菌酶、異嗜性抗體，,HAAA,等,10%,以上（,30-40%,）的病人體內(nèi)存在
3、內(nèi)源性異嗜性抗體（,CAP,）,10%-40%,的人群存在,HAMA,干擾，取決于檢測(cè)試劑（,Larry Kricka,President,AACC,）,我國(guó)臨床醫(yī)療總誤診率為,27.8%,，比國(guó)際平均臨床醫(yī)療總誤診率,25%,高,2.8,個(gè)百分點(diǎn)，其中惡性腫瘤誤診率為,40%,（,2008,），抗體干擾是其中原因之一。,異嗜性抗體產(chǎn)生的途徑,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,流行性感冒,過(guò)敏,輸血,自身免疫疾病,免疫抑制藥物,心肌病變,注射疫苗,動(dòng)物接觸（飼養(yǎng)寵物）,特定食物（奶酪）,動(dòng)物輔助治療（胸腺細(xì)胞，胚胎細(xì)胞，羊細(xì)胞）,血液透析,母嬰傳遞,腸胃炎（,E.coli,）,類風(fēng)濕因子（,Rheumatoid
4、 factors,，,RF,）,自身抗體，體內(nèi)產(chǎn)生的以變性,IgG,（一種抗體）為抗原的一種抗體，通常為,IgM,，結(jié)合,IgG,的,FC,片段。,約,90%,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（,RA,）患者的,RF,呈陽(yáng)性，在其他自身免疫疾病中也有一定的陽(yáng)性率。,正常人有,5%,左右的陽(yáng)性率,類風(fēng)濕因子（,Rheumatoid factors,，,RF,）,去除,Fc,片段，用,F,（,ab,）,2,替代完整的,IgG,熱變性,IgG,處理,檢驗(yàn)抗原時(shí)，加入,2-,巰基乙醇使,RF,降解。,類風(fēng)濕因子（,Rheumatoid factors,，,RF,）,IgM,測(cè)定方法：捕獲包被和中和,IgG,補(bǔ)體（,Co
5、mplement,）,存在于正常人和動(dòng)物血清與組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)。,約占血清球蛋白總量的,10,。極不穩(wěn)定，大部分對(duì)熱敏感，,5630,分鐘即失去活性。,結(jié)合,IgG,的,Fc,片段，封閉結(jié)合位點(diǎn)。,新鮮血清中的補(bǔ)體對(duì)試劑反應(yīng)干擾較大,除熱滅活外，可用,EDTA,稀釋標(biāo)本緩解補(bǔ)體的影響。,亦有推薦在試劑中加入雞,IgG,的，以抑制補(bǔ)體激活,溶菌酶（,Lysozyme,）,一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶，廣泛存在于人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動(dòng)物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中,強(qiáng)烈結(jié)合低等電點(diǎn)蛋白，可橋接固相和標(biāo)記抗體導(dǎo)致假陽(yáng)性。,可加入銅離子，形
6、成絡(luò)合物,可在試劑中加入卵清蛋白（,pI=4.9,）,鳥蛋白（,beckman,）,異嗜性抗體（,Heterophilic antibodies,，,HA,）,HA,是存在于人類血清中，由已知或未知的抗原物質(zhì)刺激人體產(chǎn)生的，與嚙齒類動(dòng)物（如鼠等）,Ig,（,s,）結(jié)合的一類抗體。,通常是由于直接接觸動(dòng)物，污染的食品，接種動(dòng)物血清或疫苗而產(chǎn)生。,可分為天然抗體和自身免疫抗體，親和力低，結(jié)合力弱，具有廣泛的特異性，普遍存在于人體中，多為,IgG,。,HA,可與試劑中抗體的,Fc,或者,F(ab),區(qū)域的決定簇結(jié)合，從而干擾免疫反應(yīng)。,人抗動(dòng)物抗體（,HAAA,）,與,HA,具有一定的同源性，均能發(fā)
7、生交叉反應(yīng)，造成干擾,免疫途徑較為明確，動(dòng)物免疫球蛋白治療或接觸史,具有高親和力，可定向結(jié)合到動(dòng)物的抗原表位上,HAAA,有,IgA,，,IgG,，,IgM,等多種類型，又可分為抗同種型，抗獨(dú)特型，抗抗獨(dú)特型等三類,物種廣泛，目前已報(bào)道抗鼠，牛，山羊，綿羊，馬等多種抗體,不同種動(dòng)物,Ig,分子間蛋白質(zhì)序列有大量同源性，因此抗動(dòng)物抗體可與多種動(dòng)物免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng),接觸動(dòng)物蛋白兩周后可產(chǎn)生抗體，存在時(shí)間可長(zhǎng)達(dá),30,個(gè)月,人抗鼠抗體（,HAMA,）,由于鼠抗在單克隆抗體影像，抗體治療以及診斷試劑中的廣泛應(yīng)用，使得,HAMA,尤其受關(guān)注,抗同種型，抗獨(dú)特型，抗抗獨(dú)特型,HAMA,干擾機(jī)制,HA
8、MA,干擾機(jī)制,HAMA,的鑒別,稀釋樣本測(cè)定的值不成比例,用參考試劑盒測(cè)定進(jìn)行對(duì)比,其他試劑盒驗(yàn)證,加入清潔抗體進(jìn)行對(duì)比,HAMA,測(cè)定試劑盒（,6 HAMA,試劑盒）,包被鼠抗，標(biāo)記鼠抗的夾心法,包被鼠抗，標(biāo)記抗人,IgG/IgM,的間接法,內(nèi)源性抗體干擾的消除,試劑盒的設(shè)計(jì),原材料的選擇,去除,Fc,片段,嵌合抗體（,Roche TSH/CEA,）,雞抗體,樣本的預(yù)先處理,固相血清吸附,蛋白,A,之類的固相吸附劑,PEG6000,處理樣本,樣本酸和熱聯(lián)合處理,加入阻斷劑,清潔抗體,商品化的異嗜性抗體阻斷劑,HBR,：?jiǎn)慰寺∈罂谷?IgM,IIR,：由異嗜性抗體和人抗動(dòng)物抗體為免疫原產(chǎn)生的
9、混合的鼠單抗。,簡(jiǎn)單了解,ROCHE,（,IEP,）,簡(jiǎn)單了解,ROCHE,（,IEP,）,簡(jiǎn)單了解,ROCHE,（,IEP,）,自身抗體（,Autoanalyte antibodies),嗜靶抗原的自身抗體，與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，可對(duì)靶抗原的測(cè)定結(jié)果造成干擾。,目前已知存在的自身抗體：,THAAB,、,Anti-Tg,、,IAA,，,Anti-PRL,等,干擾舉例：高泌乳素血癥（巨泌乳素）,有生物和免疫活性的,23kD,泌乳素單體；缺乏生物活性約,50-60kD,的大泌乳素；無(wú)或不發(fā)揮任何生物活性但有免疫反應(yīng)性,150-170kD,的巨泌乳素。,巨泌乳素：,PRL,與其,IgG,型抗體結(jié)合
10、形成的免疫復(fù)合物,因其分子量大而不能通過(guò)毛細(xì)血管壁,無(wú)法與受體結(jié)合而不能發(fā)揮生物活性,在體內(nèi)的半衰期較長(zhǎng),在循環(huán)中累積,被視作,PRL,檢測(cè)從而造成,PRL,濃度的假性增高。,樣本用,PEG,沉淀處理,其他一些干擾因素,副蛋白（,paraprotein,）,由異常增殖的腫瘤漿細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白。,粘度增加導(dǎo)致樣本量減小,/,非特異性的結(jié)合分析物或抗體,纖維蛋白原,干擾反應(yīng)過(guò)程,藥物，類似物，代謝物,HOOK,效應(yīng),總結(jié),監(jiān)管機(jī)構(gòu),/,制造商,/,臨床實(shí)驗(yàn)室甚至病人,作為制造商我們可以做的,試劑盒的研制,預(yù)見試劑盒的用途，在說(shuō)明書上注明試劑盒的局限性和不適用范圍。,促進(jìn)檢驗(yàn)與臨床的溝通，促使檢驗(yàn)更正確的應(yīng)用。,Thanks for your attention,！,
免疫分析中的干擾與消除
