大腸桿菌檢測(cè)醫(yī)學(xué)PPT

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PPT模板下載：www.1ppt.com/moban/,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,大腸桿菌 檢測(cè)方法,,,2,,,,,,,,,,,,,目錄,概述,檢測(cè)方法,檢測(cè)原理,討論與展望,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Your text,Your text,Your text,,,概述,大腸桿菌是人和動(dòng)物腸道中最著名的一種細(xì)菌，主要寄生于大腸內(nèi)，約占腸道菌中的1%，是一種兩端鈍圓、能運(yùn)動(dòng)、無芽孢的革蘭氏陰性短桿菌。大腸桿菌能合成維生素B和K，正常棲居條件下不會(huì)致病；若進(jìn)入膽囊、膀胱等處可引起炎癥。在水和食品中檢出，可認(rèn)為是被糞便污染的指標(biāo)。大腸菌群數(shù)常作為飲水、食物或藥物的衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。大腸桿菌是國(guó)際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)指示茵，因此大腸桿菌的檢測(cè)技術(shù)顯得十分重要，相應(yīng)出現(xiàn)了大量的大腸桿菌的各種檢測(cè)方法。我將介紹一些常用的大腸桿菌檢測(cè)的傳統(tǒng)方法以及最近出現(xiàn)的新的檢測(cè)方法，為以后大腸桿菌檢測(cè)提供一些參考。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,傳統(tǒng)檢測(cè)方法,檢測(cè)新技術(shù),多管發(fā)酵法,濾膜法,平板計(jì)數(shù)法,,,氣相色譜與液相色譜法,ATP生物發(fā)光技術(shù),PCR檢測(cè)技術(shù),生物傳感器檢測(cè)技術(shù),免疫磁珠技術(shù)IMS,基因芯片技術(shù),自動(dòng)化儀器,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Your text,Your text,Your text,,,檢測(cè)原理,多管發(fā)酵法是一種檢測(cè)食品及水體中大腸桿菌的傳統(tǒng)方法。這種方法是將樣品接種于LST肉湯中在37℃±1℃的條件下培養(yǎng)24±2h，之后對(duì)產(chǎn)氣樣品進(jìn)行復(fù)發(fā)酵；復(fù)發(fā)酵是將初發(fā)酵中產(chǎn)氣樣品接種于EC肉湯中，44.5±0.2℃條件下培養(yǎng)24±2h，若產(chǎn)氣則進(jìn)行平板分離培養(yǎng)。多管發(fā)酵法對(duì)試驗(yàn)條件要求不高，成本低，但是檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，容易受其他條件干擾，進(jìn)而影響到測(cè)定結(jié)果的精確度。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測(cè)原理,濾膜法適用于水質(zhì)監(jiān)測(cè)，是首先于濾器內(nèi)加入10mL無菌稀釋水，接著將適量充分混勻的待檢食品的水溶液加入濾器中，進(jìn)行抽濾，快濾完前加少許無菌稀釋水以沖洗濾器內(nèi)壁，使水溶液內(nèi)的細(xì)菌全部集中于濾膜上；用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放在M-FC培養(yǎng)基上,濾膜截留細(xì)菌面向上，濾膜與培養(yǎng)基完全緊貼不能有氣泡，將培養(yǎng)皿緊密蓋好后，置于能準(zhǔn)確恒溫于44.5±0.5℃的恒溫培養(yǎng)箱中,經(jīng)24±2h培養(yǎng)，糞大腸菌群呈藍(lán)色或藍(lán)綠色,計(jì)數(shù)此類菌落數(shù)目。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測(cè)原理,平板計(jì)數(shù)法首先選取較適宜的連續(xù)稀釋梯度樣品勻液，將冷卻至45℃±0.5℃的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）傾注于平皿內(nèi)，混勻并凝固后加入3~4mL的VRBA-MUG覆蓋平板表層，36±1℃下培養(yǎng)18~24h，之后在紫外燈下計(jì)數(shù)。該方法是將樣本做一定比例的稀釋，其中的微生物被稀釋后分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在一定的條件下進(jìn)行培養(yǎng)一直到生長(zhǎng)成能用肉眼觀察的菌落，最后通過樣本數(shù)量和稀釋度來計(jì)算出單位樣本中的菌數(shù)。本方法適用于除貝類產(chǎn)品外的食品中大腸桿菌檢測(cè)。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測(cè)原理,氣相色譜法主要是將大腸桿菌經(jīng)過一系列衍生化的前處理后，為接下來的分析研究提供盡可能多的化學(xué)組分。大腸桿菌的污染程度可以用頂空氣相色譜法來分析，其原理是利用食品密封系統(tǒng)頂部的微生物代謝產(chǎn)物CO2對(duì)微生物進(jìn)行分析。這種方法對(duì)食品質(zhì)量安全檢測(cè)有重大意義。與上述傳統(tǒng)技術(shù)相比，此種方法具有檢測(cè)速度快、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。高效液相色譜法（HPLC）主要是根據(jù)離子配對(duì)反相層析的原理來分析核酸。HPLC主要是針對(duì)DNA片段分離。長(zhǎng)鏈DNA所攜帶的磷酸基團(tuán)比較多，因此會(huì)有更多的TEAA與之相融合，其在柱內(nèi)停留的時(shí)間增加。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測(cè)原理,ATP生物發(fā)光技術(shù)是近些年來發(fā)展較快的微生物快速檢測(cè)方法。ATP是活細(xì)胞中最普遍的能量代謝產(chǎn)物，為細(xì)胞提供各種生理活動(dòng)所需的能量，而且其在生物體內(nèi)含量維持在一定的范圍內(nèi)。ATP含量檢測(cè)的一種方法是熒光光度法，生物發(fā)光是活細(xì)胞在熒光素酶催化下發(fā)出的熒光。與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，不同之處在于幾分鐘內(nèi)便可獲得檢測(cè)結(jié)果，而且熒光光度計(jì)是便攜式的，使用非常方便，適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，這種技術(shù)可以用于檢測(cè)微小的污染物水平以及食品加工設(shè)備及其表面的清潔程度的檢測(cè)。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測(cè)原理,PCR檢測(cè)技術(shù)是在1971年首先被Kleppe等提出，1985年才作為一種檢測(cè)方法獲得認(rèn)可。PCR檢測(cè)技術(shù)是一種聚合酶鏈反應(yīng)，其采用變性—退火—延伸三個(gè)步驟使DNA基因能夠在體外實(shí)現(xiàn)解旋解鏈，類似于一種體外增加、復(fù)制形式。史云等建立了用于肉及肉制品中大腸桿菌的兩重PCR檢測(cè)方法，但該方法需要較長(zhǎng)的時(shí)間的樣品純化處理，且對(duì)操作人員的專業(yè)知識(shí)的要求也較高。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測(cè)原理,生物傳感器主要是以生物化學(xué)傳感技術(shù)為基礎(chǔ)，用抗體、酶、細(xì)胞等作為識(shí)別元件，并與信號(hào)轉(zhuǎn)換器和電子測(cè)量?jī)x聯(lián)合構(gòu)成的一種分析工具。目前已經(jīng)成熟的商品化的傳感器有免疫傳感器、酶?jìng)鞲衅?、DNA雜交傳感器、微生物傳感器、分子印跡傳感器等。生物傳感器具有諸多優(yōu)點(diǎn)，如高靈敏度、高選擇性、較好的穩(wěn)定性、低成本、且能在復(fù)雜的體系中快速在線監(jiān)測(cè)。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測(cè)原理,免疫磁珠技術(shù)是一種大腸桿菌的分離技術(shù)。其原理是以磁珠為抗體載體，磁珠和大腸桿菌結(jié)合，通過磁力來實(shí)現(xiàn)力學(xué)移動(dòng)進(jìn)而將大腸桿菌進(jìn)行分離。與其他的細(xì)菌分離方法相比，免疫磁珠技術(shù)在很大程度上提高了樣本中病原性副溶血性弧菌的檢測(cè)效率。免疫磁珠技術(shù)可以快速地在不同菌種的樣本中處理不同的微生物，該方法可以大幅度地提升檢測(cè)效率。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測(cè)原理,自動(dòng)免疫測(cè)定分析儀誕生于20世紀(jì)70年代。隨著科技的發(fā)展，自動(dòng)免疫測(cè)定分析儀在各領(lǐng)域的應(yīng)用也越來越多，該儀器使用簡(jiǎn)單，無太多操作干擾，既省時(shí)省力，又大大提高了檢測(cè)的精確度和靈敏度。這種自動(dòng)酶標(biāo)免疫測(cè)試系統(tǒng)目前在國(guó)內(nèi)外是酶免疫自動(dòng)化系統(tǒng)中應(yīng)用最為廣泛的一種。但是由于與其配套的試劑昂貴，從而限制了其在基層實(shí)驗(yàn)室的使用。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測(cè)原理,基因芯片技術(shù)(gene chip)是20世紀(jì)90年代興起的生物技術(shù)，也叫DNA微陣列(DNA mi—croarray)。采用原位合成(insitu synthesis)或顯微打印方法，將數(shù)以萬計(jì)的DNA探針固化在支持物表面，產(chǎn)生二維DNA探針陣列，接著與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過檢測(cè)雜交信號(hào)來實(shí)現(xiàn)對(duì)生物樣品快速、并行、高效地檢測(cè)，由于它常用硅芯片作為固相支持物，而且制備中運(yùn)用了計(jì)算機(jī)芯片的制備技術(shù)，所以稱為基因芯片技術(shù)。基因芯片可以對(duì)食品中的致病菌實(shí)行高通量和平行檢測(cè)，一次實(shí)驗(yàn)就可以得出全部檢測(cè)結(jié)果。另外整個(gè)檢測(cè)在很短時(shí)間內(nèi)即可得出檢測(cè)結(jié)果，且敏感性高，特異性強(qiáng)。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,討論與展望,近年來，世界各國(guó)針對(duì)水環(huán)境和食品中大腸桿菌的快速檢測(cè)技術(shù)展開了大量研究，在已知的檢測(cè)方法中均有自己的優(yōu)勢(shì)與不足。隨著科學(xué)和生物生化技術(shù)的發(fā)展，食品中大腸桿菌的檢測(cè)計(jì)數(shù)也將趨于提高精度與速度，不斷改進(jìn)與完善才能切實(shí)解決食品安全問題，為人品生活提供保障。,Your text,Your text,Your text,Your text,,,參考文獻(xiàn),[1] 4種食品中大腸桿菌檢測(cè)方法評(píng)價(jià).周宏霞. [2]關(guān)于食品中大腸桿菌檢測(cè)方法的研究.姚勇. [3]食源性大腸桿菌快速檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展.董妍. [4]水中細(xì)菌總數(shù)與大腸桿菌檢測(cè)方法的比較研究.黃友芳. [5]GB4789.38-2012 食品微生物學(xué)檢測(cè) 大腸埃希氏菌計(jì)數(shù) [6]HJ/T 347-2007 水質(zhì) 糞大腸菌群的測(cè)定 [7]快速檢測(cè)大腸菌群數(shù)的研究.徐爾尼.,,,Thank you!,,