高中生物 專題5課題1 DNA的粗提取與鑒定課件2 新人教版選修1

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1、一、基礎(chǔ)知識(shí)一、基礎(chǔ)知識(shí)（一）提?。ㄒ唬┨崛NADNA的方法的方法1 1、提取生物大分子的基本思路、提取生物大分子的基本思路選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子2 2、生物大分子、生物大分子主要指蛋白質(zhì)、酶和核酸主要指蛋白質(zhì)、酶和核酸3 3、提取、提取DNADNA的基本思路的基本思路利用利用DNADNA與與RNARNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取質(zhì)方面的差異，提取DNADNA，去除其他成分，去除其他成分4 4、DNADNA的溶解性的溶解性DNADNA和蛋白

2、質(zhì)等其他成分在不同濃度的和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaClNaCl溶液溶液中溶解度不同，利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}中溶解度不同，利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使?jié)舛染湍苁笵NADNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反相反5 5、討論：、討論：根據(jù)根據(jù)DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度曲線圖，溶液中的溶解度曲線圖，思考在什么濃度下，思考在什么濃度下， DNADNA的溶解度最??？的溶解度最??？ DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度是如何變化的？溶液中的溶解度是如何變化的？在在NaClNaCl溶液濃度低于溶液濃度低于0.14 mol/L0.14

3、 mol/L時(shí)，時(shí)，DNADNA的溶的溶解度隨解度隨NaClNaCl溶液濃度的增加而逐漸降低；在溶液濃度的增加而逐漸降低；在0.14 mol/L0.14 mol/L時(shí)，時(shí)，DNADNA溶解度最??；當(dāng)溶解度最小；當(dāng)NaClNaCl溶液溶液濃度繼續(xù)增加時(shí)，濃度繼續(xù)增加時(shí)，DNADNA的溶解度又逐漸增大。的溶解度又逐漸增大。當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol2 molL L時(shí)，時(shí)，DNADNA的溶解度最大，濃度為的溶解度最大，濃度為 0 014 mol14 molL L時(shí)，時(shí)，DNADNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使的溶解度最低。利用這一原理，可以使DNADNA在在鹽

4、溶液中溶解或析出。鹽溶液中溶解或析出。如何通過控制如何通過控制NaClNaCl溶液的濃度使溶液的濃度使DNADNA在鹽溶在鹽溶液中溶解或析出？液中溶解或析出？DNADNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則可以溶于酒精。利用這一原理，可以將質(zhì)則可以溶于酒精。利用這一原理，可以將DNADNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離6 6、DNADNA在酒精溶液中的溶解性在酒精溶液中的溶解性7 7、DNADNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對(duì)蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對(duì)DNADNA沒有影響沒有影響大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受大

5、多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60608080C C的高溫，而的高溫，而DNADNA在在8080C C以上才會(huì)變性以上才會(huì)變性洗滌劑可以溶解細(xì)胞的細(xì)胞膜，去除脂質(zhì)和洗滌劑可以溶解細(xì)胞的細(xì)胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì)蛋白質(zhì), ,但對(duì)但對(duì)DNADNA沒有影響沒有影響補(bǔ)充：補(bǔ)充：DNADNA的變性是指的變性是指DNADNA分子在高溫下解螺旋，其溫分子在高溫下解螺旋，其溫度在度在8080以上，如在以上，如在PCRPCR技術(shù)中技術(shù)中DNADNA變性溫度在變性溫度在9595。8 8、DNADNA的鑒定的鑒定 DNA DNA與二苯胺（沸水?。?huì)染成藍(lán)色，因此，與二苯胺（沸水?。?huì)染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定二苯胺可以作

6、為鑒定DNADNA的試劑的試劑 紫外燈照射法紫外燈照射法A A、配制染色劑，用蒸餾水配制萬(wàn)分之五的溴、配制染色劑，用蒸餾水配制萬(wàn)分之五的溴化已錠（化已錠（EBEB）B B、將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹于蠟紙上，、將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹于蠟紙上，再滴一滴再滴一滴EBEB溶液染色溶液染色C C、將蠟紙放在紫外燈、將蠟紙放在紫外燈(260 nm)(260 nm)下照射（暗室下照射（暗室中），可見橙紅色的熒光中），可見橙紅色的熒光(DNA(DNA的紫外吸收高峰的紫外吸收高峰在在260 nm260 nm處處) )甲基綠甲基綠 （藍(lán)綠色）（藍(lán)綠色）原理總結(jié)：原理總結(jié)：通過利用通過利用不同濃度不同濃度

7、NaClNaCl溶液溶液溶解或析出溶解或析出DNADNA，可以從細(xì)胞中，可以從細(xì)胞中提取和提純提取和提純DNADNA；再利用；再利用酒精酒精進(jìn)一步將進(jìn)一步將DNADNA與蛋白質(zhì)分離與蛋白質(zhì)分離開來，達(dá)到提純的目的；最后利用開來，達(dá)到提純的目的；最后利用二苯胺試劑二苯胺試劑鑒定提取鑒定提取的物質(zhì)是否是的物質(zhì)是否是DNADNA二、二、DNADNA的粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）實(shí)驗(yàn)材料的選?。ㄒ唬?shí)驗(yàn)材料的選取 1 1、材料：、材料：魚卵、豬肝、菜花、香蕉、雞血、哺乳動(dòng)物的魚卵、豬肝、菜花、香蕉、雞血、哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體紅細(xì)胞、獼猴桃、洋蔥、豌

8、豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌。（從中選取培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌。（從中選取2 23 3種種實(shí)驗(yàn)材料）實(shí)驗(yàn)材料） 2 2、原則：凡是含有、原則：凡是含有DNADNA的生物材料都可以考慮，的生物材料都可以考慮，但選用但選用DNADNA含量相對(duì)較高的生物組織，成功的可含量相對(duì)較高的生物組織，成功的可能性更大能性更大動(dòng)物細(xì)胞的破碎較易，例如，在雞血細(xì)胞液中動(dòng)物細(xì)胞的破碎較易，例如，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可濾后收集濾液即可（二）破碎細(xì)胞，獲取含（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNADNA的濾液的濾液1 1、動(dòng)物細(xì)胞、動(dòng)

9、物細(xì)胞答：蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，答：蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機(jī)械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂加上攪拌的機(jī)械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂( (細(xì)胞膜和核膜的破裂細(xì)胞膜和核膜的破裂) )，從而釋放出，從而釋放出DNADNA討論：為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？討論：為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？植物細(xì)胞需要先用一定的植物細(xì)胞需要先用一定的洗滌劑洗滌劑和和食鹽溶食鹽溶解細(xì)胞膜解細(xì)胞膜2 2、植物細(xì)胞、植物細(xì)胞討論：加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？討論：加入洗滌劑和食鹽的

10、作用分別是什么？答：洗滌劑是一些離子去污劑，答：洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，能溶解細(xì)胞膜，有利于有利于DNADNA的釋放；的釋放；食鹽的主要成分是食鹽的主要成分是NaClNaCl，有有利于利于DNADNA的溶解的溶解實(shí)例：提取洋蔥實(shí)例：提取洋蔥DNADNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行從分的攪拌和研磨，一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行從分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液過濾后收集研磨液答：研磨不充分會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的答：研磨不充分會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的DNADNA釋放不完全，釋放不完全，提取的提取的DNADNA量變少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致看不到量變少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致

11、看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等討論：如果研磨不充分，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣討論：如果研磨不充分，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？的影響？（三）去除濾液中的雜質(zhì)（三）去除濾液中的雜質(zhì)為了純化提取的為了純化提取的DNADNA需要將濾液作進(jìn)一步處理需要將濾液作進(jìn)一步處理討論：此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞討論：此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？成分？答：可能含有答：可能含有核蛋白、多糖和核蛋白、多糖和RNARNA等雜質(zhì)等雜質(zhì)討論：為什么反復(fù)地溶解與析出討論：為什么反復(fù)地溶解與析出DNADNA，能，能夠去除雜質(zhì)夠去除雜質(zhì)答：用答：用高鹽濃度的溶液溶解

12、高鹽濃度的溶液溶解DNADNA，能除去在高，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNADNA析出，析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通因此，通過反復(fù)溶解與析出過反復(fù)溶解與析出DNADNA，就能夠除去與，就能夠除去與DNADNA溶溶解度不同的多種雜質(zhì)解度不同的多種雜質(zhì)討論：方案二與方案三的原理有什么不同？討論：方案二與方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用答：方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從從而使提取的而使提取的DNADNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是的是DNADNA和蛋白

13、質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同，從，從而使蛋白質(zhì)變性，與而使蛋白質(zhì)變性，與DNADNA分離分離（四）（四） DNADNA的析出與鑒定的析出與鑒定DNADNA的析出用的是與濾液體積相等的的析出用的是與濾液體積相等的冷卻的酒冷卻的酒精溶液（體積分?jǐn)?shù)為精溶液（體積分?jǐn)?shù)為95 95 ） ，靜置，靜置2 23min3min，溶液中會(huì)出現(xiàn)溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，白色絲狀物，這就是粗提取這就是粗提取DNADNA。用玻璃棒沿用玻璃棒沿一個(gè)方向一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水用濾紙吸取上面的水1 1、DNADNA的析出的析出2 2、 DNADNA的鑒定的鑒定鑒定

14、鑒定DNADNA時(shí)在試管中先加入物質(zhì)的量的濃度時(shí)在試管中先加入物質(zhì)的量的濃度為為2mol/L 2mol/L 的的NaClNaCl溶液溶液5ml5ml于兩只試管中，于兩只試管中，其中一只加入其中一只加入DNADNA絲狀物，各加入絲狀物，各加入二苯胺二苯胺4ml 4ml 試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水沸水中加熱中加熱5min,5min,待試管冷卻后，比較兩只試管待試管冷卻后，比較兩只試管中溶液顏色的變化，看看溶解有中溶液顏色的變化，看看溶解有DNADNA的溶液的溶液是否有是否有藍(lán)色藍(lán)色。（一）案例一：（一）案例一： 以雞血為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行以雞血為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行DNADNA

15、的粗提取的粗提取三、實(shí)驗(yàn)案例三、實(shí)驗(yàn)案例雞血細(xì)胞極易吸水漲破，而用動(dòng)物肝臟細(xì)胞雞血細(xì)胞極易吸水漲破，而用動(dòng)物肝臟細(xì)胞作實(shí)驗(yàn)材料常常需要?jiǎng)驖{和離心，對(duì)設(shè)備要求作實(shí)驗(yàn)材料常常需要?jiǎng)驖{和離心，對(duì)設(shè)備要求較高，操作繁瑣，歷時(shí)較長(zhǎng)較高，操作繁瑣，歷時(shí)較長(zhǎng)1 1、雞血細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)材料的原因、雞血細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)材料的原因雞血細(xì)胞核的雞血細(xì)胞核的DNADNA含量豐富，材料易得含量豐富，材料易得2 2、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)原理 DNA DNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度，是隨著溶液中的溶解度，是隨著NaClNaCl的的濃度的變化而改變的。當(dāng)濃度的變化而改變的。當(dāng)NaClNaCl的物質(zhì)的量濃度的物質(zhì)的量濃度為為0.14

16、 mol0.14 molL L時(shí)時(shí),DNA,DNA的溶解度最低。的溶解度最低。利用這一利用這一原理，可以使溶解在原理，可以使溶解在NaClNaCl溶液中的溶液中的DNADNA析出。析出。 DNA DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶于酒精溶液。白質(zhì)可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNADNA。 DNA DNA遇二苯胺（沸水?。?huì)染成藍(lán)色遇二苯胺（沸水浴）會(huì)染成藍(lán)色，因，因此，二苯胺可以作為鑒定此，二苯胺可以作為鑒定DNADNA的試劑。的試劑。3 3、實(shí)驗(yàn)材料和用具：、實(shí)驗(yàn)材料和

17、用具：雞血細(xì)胞液（雞血細(xì)胞液（510ml510ml）；體積分?jǐn)?shù)為）；體積分?jǐn)?shù)為95%95%的冷酒的冷酒精溶液（實(shí)驗(yàn)前置于冰箱內(nèi)冷卻精溶液（實(shí)驗(yàn)前置于冰箱內(nèi)冷卻24h24h）；蒸餾水；）；蒸餾水；質(zhì)量濃度為質(zhì)量濃度為0 0g/mlg/ml的檸檬酸鈉溶液；的檸檬酸鈉溶液；2mol/L2mol/L和和0 0015mol/L015mol/L的氯化納溶液；二苯胺試劑。鐵的氯化納溶液；二苯胺試劑。鐵架臺(tái)；鐵環(huán)；鑷子；三角架；酒精燈；石棉網(wǎng)；架臺(tái)；鐵環(huán)；鑷子；三角架；酒精燈；石棉網(wǎng)；載玻片；玻璃棒；濾紙；滴管；量筒（載玻片；玻璃棒；濾紙；滴管；量筒（100ml100ml，一個(gè)）；燒杯；（一個(gè)）；燒杯；（10

18、0ml100ml，一個(gè)，一個(gè)，50ml50ml、500ml500ml各二個(gè)）；試管（各二個(gè)）；試管（20ml20ml，二個(gè)）；漏斗；試管夾；，二個(gè)）；漏斗；試管夾；紗布。紗布。 4 4、課前準(zhǔn)備雞血細(xì)胞液、課前準(zhǔn)備雞血細(xì)胞液取質(zhì)量濃度為取質(zhì)量濃度為0 01g/ml1g/ml的的檸檬酸納溶液（抗凝檸檬酸納溶液（抗凝劑）劑）100ml100ml，置于，置于500ml500ml燒杯中。注入新鮮的雞燒杯中。注入新鮮的雞血（約血（約180ml180ml），同時(shí)用玻璃棒攪拌，使血液與），同時(shí)用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸納溶液充分混合，以免凝血。將燒杯中檸檬酸納溶液充分混合，以免凝血。將燒杯中的血液置于冰箱

19、內(nèi)，精置一天，使血細(xì)胞自行的血液置于冰箱內(nèi)，精置一天，使血細(xì)胞自行沉淀。（也可以將血液倒入離心管內(nèi)，用沉淀。（也可以將血液倒入離心管內(nèi)，用1000r/min1000r/min（轉(zhuǎn)每分）的離心機(jī)離心（轉(zhuǎn)每分）的離心機(jī)離心2min2min，血細(xì)，血細(xì)胞沉淀于離心管底部。實(shí)驗(yàn)時(shí)。胞沉淀于離心管底部。實(shí)驗(yàn)時(shí)。用吸管除去離用吸管除去離心管上部的澄清液，就可以得到雞血細(xì)胞液。）心管上部的澄清液，就可以得到雞血細(xì)胞液。）過程過程防止血液凝固防止血液凝固作用機(jī)理作用機(jī)理檸檬酸鈉能與血漿中的檸檬酸鈉能與血漿中的CaCa2+2+發(fā)生反應(yīng)，生成發(fā)生反應(yīng)，生成檸檬酸鈣絡(luò)合物，血漿中游離的檸檬酸鈣絡(luò)合物，血漿中游離的C

20、aCa2+2+大大減大大減少，血液就不會(huì)凝固少，血液就不會(huì)凝固雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的DNADNA，容易被玻，容易被玻璃容器吸附，所以在提取過程中為了減少璃容器吸附，所以在提取過程中為了減少DNADNA的損失，最好使用塑料的燒杯和試管盛的損失，最好使用塑料的燒杯和試管盛放雞血細(xì)胞液放雞血細(xì)胞液注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)討論：提取雞血中的討論：提取雞血中的DNADNA時(shí)，為什么除去血液時(shí)，為什么除去血液中的上清液？中的上清液？答：血液分為兩部分，一部分是血漿，一部分答：血液分為兩部分，一部分是血漿，一部分是血細(xì)胞，離心后除去的上清液是血漿是血細(xì)胞，離心后除去的上清液是血漿5 5、方

21、法步驟、方法步驟 將制備好的雞血細(xì)胞液將制備好的雞血細(xì)胞液5 mL5 mL10mL10mL，注入到，注入到50 50 mLmL燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水20 mL20 mL，同時(shí)，同時(shí)用用玻璃棒玻璃棒充分?jǐn)嚢璩浞謹(jǐn)嚢? min5 min，使血細(xì)胞加速破裂。使血細(xì)胞加速破裂。然后，用放有然后，用放有紗布的漏斗紗布的漏斗將血細(xì)胞液過濾至將血細(xì)胞液過濾至500mL500mL。取其濾液。取其濾液。提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)答：讓細(xì)胞內(nèi)濃度大于周圍溶液的濃度，細(xì)胞答：讓細(xì)胞內(nèi)濃度大于周圍溶液的濃度，細(xì)胞會(huì)吸水以至脹破會(huì)吸水以至脹破（1 1）為什么要加入蒸餾

22、水？加入蒸餾水后細(xì)胞）為什么要加入蒸餾水？加入蒸餾水后細(xì)胞會(huì)有什么變化？會(huì)有什么變化？（2 2）用玻璃棒攪拌有什么意義？）用玻璃棒攪拌有什么意義？答：用玻璃棒攪拌可以加速血細(xì)胞和細(xì)胞核的答：用玻璃棒攪拌可以加速血細(xì)胞和細(xì)胞核的破裂。注意應(yīng)沿一個(gè)方向快速攪拌，但也不能破裂。注意應(yīng)沿一個(gè)方向快速攪拌，但也不能太快太猛，防止打碎太快太猛，防止打碎DNADNA（3 3）濾去的是什么物質(zhì)？）濾去的是什么物質(zhì)？得到的是什么？得到的是什么？答：過濾將濾去的是細(xì)胞膜和核膜等物質(zhì)；答：過濾將濾去的是細(xì)胞膜和核膜等物質(zhì)；得到的是與蛋白質(zhì)等物質(zhì)結(jié)合在一起的得到的是與蛋白質(zhì)等物質(zhì)結(jié)合在一起的DNADNA將物質(zhì)量濃度為

23、將物質(zhì)量濃度為 2 mol/L2 mol/L的氯化鈉溶液的氯化鈉溶液40mL40mL加加入到濾液中，并用入到濾液中，并用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌1min1min，使其混合均勻，這時(shí)使其混合均勻，這時(shí)DNADNA在溶液中呈溶解狀態(tài)在溶液中呈溶解狀態(tài)沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時(shí)用沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒不停玻璃棒不停地輕輕攪拌，地輕輕攪拌，這時(shí)燒杯中有絲狀物出現(xiàn)，注意觀這時(shí)燒杯中有絲狀物出現(xiàn)，注意觀察絲狀物呈什么顏色。繼續(xù)加入蒸餾水，溶液中察絲狀物呈什么顏色。繼續(xù)加入蒸餾水，溶液中出現(xiàn)的粘稠物會(huì)越來越多。當(dāng)粘稠物不再增加時(shí)出現(xiàn)的粘稠物會(huì)越來越多。當(dāng)粘稠物不再增加時(shí)停

24、止加入蒸餾水（這時(shí)溶液中氯化鈉的物質(zhì)的量停止加入蒸餾水（這時(shí)溶液中氯化鈉的物質(zhì)的量濃度相當(dāng)于濃度相當(dāng)于0.14 mol0.14 molL L）析出含析出含DNADNA的粘稠物的粘稠物討論：加入蒸餾水的目的？討論：加入蒸餾水的目的？降低降低NaClNaCl溶液濃度到使溶液濃度到使DNADNA溶解度最低點(diǎn)，使溶解度最低點(diǎn)，使DNADNA從從NaClNaCl溶液中析出溶液中析出將溶液中的將溶液中的DNADNA與其他雜質(zhì)分離，這一步驟是實(shí)與其他雜質(zhì)分離，這一步驟是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該緩慢貼壁加入蒸餾實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該緩慢貼壁加入蒸餾水，并輕輕地沿一個(gè)方向不停地均勻攪拌，以水，并輕輕地沿一個(gè)

25、方向不停地均勻攪拌，以利于利于DNADNA分子的附著和纏繞分子的附著和纏繞注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：濾取含濾取含DNADNA的粘稠物的粘稠物用放有用放有多層紗布多層紗布的漏斗，過濾步驟的漏斗，過濾步驟3 3中的溶液中的溶液至至 500mL500mL的燒杯中，含的燒杯中，含 DNADNA的的粘稠物被留在紗粘稠物被留在紗布上布上將將DNADNA的粘稠物再溶解的粘稠物再溶解取取 1 1個(gè)個(gè) 50 mL50 mL燒杯，向燒杯內(nèi)注入氯化鈉的物質(zhì)燒杯，向燒杯內(nèi)注入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為的量濃度為 2 mol2 molL L的溶液的溶液 20mL20mL。用鈍頭鑷子。用鈍頭鑷子將紗布上的粘稠物夾至氯化鈉溶液中，將

26、紗布上的粘稠物夾至氯化鈉溶液中，用玻璃棒用玻璃棒不停地?cái)嚢瑁煌５財(cái)嚢?，使粘稠物盡可能多地溶解于溶液中使粘稠物盡可能多地溶解于溶液中過濾含有過濾含有DNADNA的氯化鈉溶液的氯化鈉溶液取取1 1個(gè)個(gè)100 mL100 mL燒杯，用放有燒杯，用放有兩層紗布兩層紗布的漏斗過的漏斗過濾步驟濾步驟5 5中的溶液。取其濾液，中的溶液。取其濾液，DNADNA溶于濾液溶于濾液中中提取含雜質(zhì)較少的提取含雜質(zhì)較少的DNADNA在上述濾過的溶液中，加入在上述濾過的溶液中，加入冷卻的、酒精的體積冷卻的、酒精的體積分?jǐn)?shù)為分?jǐn)?shù)為 9595的溶液的溶液 50mL50mL（使用冷卻的酒精，（使用冷卻的酒精，對(duì)對(duì)DNADNA

27、的凝集效果較佳），并用的凝集效果較佳），并用玻璃棒攪拌，玻璃棒攪拌，溶溶液中會(huì)出現(xiàn)含雜質(zhì)較少的絲狀物。用玻璃棒將絲液中會(huì)出現(xiàn)含雜質(zhì)較少的絲狀物。用玻璃棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。這種絲狀狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。這種絲狀物的主要成分就是物的主要成分就是DNADNA答：因?yàn)榇穑阂驗(yàn)镈NADNA不溶于冷酒精，而其他物質(zhì)不溶于冷酒精，而其他物質(zhì)可以溶解在酒精中，使含雜質(zhì)較少的可以溶解在酒精中，使含雜質(zhì)較少的DNADNA絲狀物可以析出絲狀物可以析出, ,懸浮于溶液中懸浮于溶液中討論：討論：（2 2）觀察絲狀物呈什么顏色？）觀察絲狀物呈什么顏色？答：白色答：白色（1 1）為什么要加）

28、為什么要加50mL50mL的冷酒精？的冷酒精？取兩支取兩支20 mL20 mL的試管，各加入氯化鈉的物質(zhì)的量的試管，各加入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為濃度為2mol2molL L的溶液的溶液5 mL5 mL，將絲狀物放入其中，將絲狀物放入其中一支試管中，一支試管中，用玻璃棒攪拌，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入后，向兩支試管中各加入4mlL4mlL的二苯胺試劑?；斓亩桨吩噭??；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱合均勻后，將試管置于沸水中加熱 5 min5 min，待試，待試管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液顏色的管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液顏色的變化變化

29、DNA DNA的鑒定的鑒定討論：討論：答：有絲狀物的試管變成藍(lán)色，另一試管還是答：有絲狀物的試管變成藍(lán)色，另一試管還是原來顏色原來顏色（2 2）這一鑒定結(jié)果說明什么問題？）這一鑒定結(jié)果說明什么問題？（1 1）比較兩個(gè)試管中溶液的顏色有什么不同？）比較兩個(gè)試管中溶液的顏色有什么不同？答：提取出的絲狀物是答：提取出的絲狀物是DNADNA（3 3） DNADNA的直徑約為的直徑約為202010-10 m10-10 m，實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的絲狀物的粗細(xì)是否表示的絲狀物的粗細(xì)是否表示1 1個(gè)個(gè)DNADNA分子直徑的大??？分子直徑的大??？答：答： DNADNA分子直徑只有分子直徑只有2 nm2 nm。

30、絲狀物是多個(gè)。絲狀物是多個(gè)DNADNA子聚在一起形成的子聚在一起形成的 答：整個(gè)實(shí)驗(yàn)共答：整個(gè)實(shí)驗(yàn)共“兩次蒸餾水，三次過濾，兩兩次蒸餾水，三次過濾，兩次析出，六次攪拌次析出，六次攪拌”兩次蒸餾水兩次蒸餾水第一次：細(xì)胞吸水漲破第一次：細(xì)胞吸水漲破 第一步第一步第二次：使第二次：使 DNADNA黏稠物析出黏稠物析出 第三步第三步（1 1）此實(shí)驗(yàn)過程中有幾次使用蒸餾水？幾次過）此實(shí)驗(yàn)過程中有幾次使用蒸餾水？幾次過濾，幾次析出，幾次攪拌？分別在哪一步？濾，幾次析出，幾次攪拌？分別在哪一步？過濾時(shí)使用的紗布層數(shù)與需用濾液或黏稠物有過濾時(shí)使用的紗布層數(shù)與需用濾液或黏稠物有關(guān)，第二次要用其濾出的黏稠物有關(guān)，

31、所以要關(guān)，第二次要用其濾出的黏稠物有關(guān)，所以要使用多層紗布，第一次和第三次均要用其濾液，使用多層紗布，第一次和第三次均要用其濾液，使用的紗布為使用的紗布為1 12 2層層三次過濾三次過濾第一次：第一次： DNADNA存在于濾液里存在于濾液里 第一步第一步第二次：第二次： DNADNA被留在紗布上被留在紗布上 第四步第四步第三次：第三次： DNADNA存在于濾液里存在于濾液里 第六步第六步兩次析出兩次析出第一次：用第一次：用0.14 mol0.14 molL L 的的NaCINaCI溶液溶液含雜質(zhì)多含雜質(zhì)多第三步第三步第二次：用冷卻的第二次：用冷卻的9595的酒精的酒精第七步第七步六次攪拌：第一

32、、二、三、五、七、八步六次攪拌：第一、二、三、五、七、八步其中除第八步外，其余均要朝一個(gè)方向攪拌，其中除第八步外，其余均要朝一個(gè)方向攪拌，在第三、五步攪動(dòng)還要輕緩，玻璃棒不要直插在第三、五步攪動(dòng)還要輕緩，玻璃棒不要直插燒杯底部，這樣才能保證得到完整的燒杯底部，這樣才能保證得到完整的DNADNA（2 2）為什么反復(fù)地溶解與析出）為什么反復(fù)地溶解與析出DNADNA，能夠去除，能夠去除雜質(zhì)？雜質(zhì)？答：用高鹽濃度的溶液溶解答：用高鹽濃度的溶液溶解DNADNA，能除去在高，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNADNA析出，析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此

33、，通過能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復(fù)溶解與析出反復(fù)溶解與析出DNADNA，就能夠除去與，就能夠除去與DNADNA溶解度溶解度不同的多種雜質(zhì)不同的多種雜質(zhì)（二）案例二：以菜花為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行（二）案例二：以菜花為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行DNADNA的粗的粗提取提取1 1、課前準(zhǔn)備、課前準(zhǔn)備將新鮮菜花和體積分?jǐn)?shù)為將新鮮菜花和體積分?jǐn)?shù)為9595的乙醇溶液放的乙醇溶液放入冰箱冷凍室入冰箱冷凍室24 h24 h2 2、提取、提取DNADNA的具體步驟的具體步驟取材：稱取取材：稱取30 g30 g菜花，去梗取花，切碎菜花，去梗取花，切碎研磨：將碎菜花放入研缽中，倒入研磨：將碎菜花放入研缽中，倒入10 mL

34、10 mL研磨研磨液，充分研磨液，充分研磨10 min10 min研磨液的配制方法如下：將研磨液的配制方法如下：將10.1 g Tris10.1 g Tris加入到加入到50 mL50 mL蒸餾水中，使其溶解，然后，用蒸餾水中，使其溶解，然后，用2 moL/L2 moL/L的的HClHCl溶液調(diào)節(jié)溶液調(diào)節(jié)pHpH至至8.08.0，再加入，再加入8.76 g NaCl 8.76 g NaCl 、37.2 g EDTA 37.2 g EDTA 、20 g SDS20 g SDS。待上述藥品全部溶。待上述藥品全部溶解后，再用蒸餾水定容至解后，再用蒸餾水定容至1 000 mL1 000 mLTris/

35、HCl:Tris/HCl:提供緩沖體系，提供緩沖體系，DNADNA在這一體系中呈在這一體系中呈穩(wěn)定態(tài)（穩(wěn)定態(tài)（TrisTris為三羥甲基氨基甲烷）為三羥甲基氨基甲烷）EDTAEDTA（乙二胺四乙酸二鈉）：是（乙二胺四乙酸二鈉）：是DNADNA酶的抑制劑，酶的抑制劑，可以防止細(xì)胞破碎后可以防止細(xì)胞破碎后DNADNA酶降解酶降解DNADNASDSSDS（十二烷基磺酸鈉）：可以使蛋白質(zhì)變性，（十二烷基磺酸鈉）：可以使蛋白質(zhì)變性，與與DNADNA分離分離過濾：過濾：在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液過濾到燒杯中液過濾到燒杯中( (有條件的學(xué)?？蓪V液倒入有條件的學(xué)?？蓪?/p>

36、濾液倒入塑料離心管中進(jìn)行離心，用塑料離心管中進(jìn)行離心，用1000 r/min1000 r/min的轉(zhuǎn)速，的轉(zhuǎn)速，離心離心2 25 min5 min，取上清液放入燒杯中，取上清液放入燒杯中) )。在。在4 4 冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液沉淀：沉淀：將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分?jǐn)?shù)為體積分?jǐn)?shù)為9595的預(yù)冷乙醇溶液中，并用玻璃的預(yù)冷乙醇溶液中，并用玻璃棒緩緩、輕輕地?cái)嚢枞芤喊艟従彙⑤p輕地?cái)嚢枞芤? (玻璃棒不要直插到玻璃棒不要直插到燒杯底部燒杯底部) )。沉淀。沉淀3 35 min5 min后，可見白色的后，可見白色的DNA

37、DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn)，將絮狀物纏絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn)，將絮狀物纏繞在玻璃棒上繞在玻璃棒上觀察你提取的觀察你提取的DNADNA顏色，如果不是顏色，如果不是白色絲狀白色絲狀物，物，說明說明DNADNA中的雜質(zhì)較多；二苯胺中的雜質(zhì)較多；二苯胺鑒定出鑒定出現(xiàn)現(xiàn)藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功，藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功，如果不呈現(xiàn)如果不呈現(xiàn)藍(lán)藍(lán)色，色，可能所提取的可能所提取的DNADNA含量低含量低，或是實(shí)驗(yàn)操，或是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)錯(cuò)誤，需要重新制備作中出現(xiàn)錯(cuò)誤，需要重新制備四、課題成果評(píng)價(jià)四、課題成果評(píng)價(jià)（一）是否提取出了（一）是否提取出了DNADNA本實(shí)驗(yàn)提取的本實(shí)驗(yàn)提取的DNADNA粗制品有可

38、能仍然含有粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖核蛋白、多糖等雜質(zhì)等雜質(zhì)（二）分析（二）分析DNADNA中的雜質(zhì)中的雜質(zhì)（三）不同實(shí)驗(yàn)方法的比較（三）不同實(shí)驗(yàn)方法的比較對(duì)于不同的實(shí)驗(yàn)方法，本課題可以采用分對(duì)于不同的實(shí)驗(yàn)方法，本課題可以采用分組的方法進(jìn)行研究。首先選取不同的實(shí)驗(yàn)組的方法進(jìn)行研究。首先選取不同的實(shí)驗(yàn)材料，其次同種材料還可以采用不同方法，材料，其次同種材料還可以采用不同方法，從多方面比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如從多方面比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如DNADNA的純度、的純度、DNADNA的顏色、二苯胺顯色的深淺等的顏色、二苯胺顯色的深淺等，看看哪，看看哪種實(shí)驗(yàn)材料、哪種提取方法的效果更好種實(shí)驗(yàn)材料、哪種提取方法的效果更好