《基因工程的基本操作程序》ppt

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1、原 核 細(xì) 胞 的 基 因 結(jié) 構(gòu) (補(bǔ) 充 內(nèi) 容 ）非 編 碼 區(qū) 非 編 碼 區(qū)編 碼 區(qū)編 碼 區(qū) 上 游 編 碼 區(qū) 下 游 與 RNA聚 合 酶 結(jié) 合 位 點(diǎn)啟 動 子 終 止 子 不 編 碼 蛋 白 質(zhì) 。： 編 碼 蛋 白 質(zhì) ,連 續(xù) 不 間 斷編 碼 區(qū)非 編 碼 區(qū)原 核細(xì) 胞的 基 因結(jié) 構(gòu) 調(diào) 控 遺 傳 信 息 表 達(dá) ,上 游 有 啟 動 子 ， 下 游 有 終 止 子 真 核 細(xì) 胞 的 基 因 結(jié) 構(gòu) （ 補(bǔ) 充 內(nèi) 容 ）編 碼 區(qū)非 編 碼 區(qū) 非 編 碼 區(qū)與 RNA聚 合 酶結(jié) 合 位 點(diǎn) 內(nèi) 含 子 外 顯 子 啟 動 子 終 止 子編 碼 區(qū) 上

2、 游 編 碼 區(qū) 下 游 真 核細(xì) 胞的 基 因結(jié) 構(gòu) 編 碼 區(qū)非 編 碼 區(qū) 外 顯 子 ： 能 編 碼 蛋 白 質(zhì) 的 序 列內(nèi) 含 子 ： 不 能 編 碼 蛋 白 質(zhì) 的 序 列： 有 調(diào) 控 作 用 ,上 游 有 啟 動 子 ， 下游 有 終 止 子非 編 碼 序 列 ： 包 括 非 編 碼 區(qū) 和 內(nèi) 含 子 原 核 細(xì) 胞 真 核 細(xì) 胞不 同 點(diǎn) 編 碼 區(qū) 是_的 編 碼 區(qū) 是 間 隔 的 、_的相 同 點(diǎn) 都 由 能 夠 編 碼 蛋 白 質(zhì) 的 _和 具有 調(diào) 控 作 用 的 _區(qū) 組 成 的原 核 細(xì) 胞 與 真 核 細(xì) 胞 的 基 因 結(jié) 構(gòu) 比 較連 續(xù) 不 連 續(xù)

3、編 碼 區(qū)非 編 碼 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序1、 目 的 基 因 的 獲 取2、 基 因 表 達(dá) 載 體 的 構(gòu) 建3、 將 目 的 基 因 導(dǎo) 入 受 體 細(xì) 胞4、 目 的 基 因 的 檢 測 與 鑒 定 一 、 目 的 基 因 的 獲 取1、 目 的 基 因 主 要 是 指 _編 碼 蛋 白 質(zhì) 的 結(jié) 構(gòu) 基 因2、 獲 取 目 的 基 因 的 常 用 方 法（ 1） 從 基 因 文 庫 中 獲 ?。?2） 利 用 PCR技 術(shù) 擴(kuò) 增（ 3） 人 工 合 成例 如 ： 蘇 云 金 桿 菌 抗 蟲 基 因 、 人 胰 島 素 基 因 、 人 干 擾 素 基 因 、植

4、 物 抗 病 基 因 等 1、 從 基 因 文 庫 中 獲 取 目 的 基 因 將 含 有 某 種 生物 不 同 基 因 的 許 多DNA片 斷 ， 導(dǎo) 入 到受 體 菌 的 群 體 中 ，各 個 受 體 菌 分 別 含有 這 種 生 物 的 不 同基 因 ， 稱 為 基 因 文庫 ?；?因 文 庫 基 因 組 文 庫部 分 基 因 文 庫 (CDNA文 庫 ) 基 因 文 庫 基 因 組 文 庫部 分 基 因 文 庫 (CDNA文 庫 ) 某 生 物 體 內(nèi) 全 部 DNA 許 多 DNA片 段受 體 菌 群 體基 因 組 文 庫 的 構(gòu) 建限 制 酶與 運(yùn) 載 體 連 接 導(dǎo) 入基 因 組

5、 文 庫 某 種 生 物 某 個 時(shí) 期 的 mRNAcDNA反 轉(zhuǎn) 錄受 體 菌 群 體與 運(yùn) 載 體 連 接 導(dǎo) 入部 分 基 因 文 庫（ cDNA文 庫 ）cDNA文 庫 的 構(gòu) 建 基 因 組 文 庫 和 部 分 基 因 文 庫 比 較 （ 3） 如 何 從 基 因 文 庫 中 得 到 所 需 要 的 基 因 ？依 據(jù) ： 目 的 基 因 的 有 關(guān) 信 息 。如 ： 根 據(jù) 基 因 的 核 苷 酸 序 列 基 因 的 功 能 基 因 在 染 色 體 上 的 位 置 基 因 的 轉(zhuǎn) 錄 產(chǎn) 物 mRNA 基 因 翻 譯 產(chǎn) 物 蛋 白 質(zhì) 等 特 性 。 （ 2） 利 用 PCR技

6、術(shù) 擴(kuò) 增 目 的 基 因PCR多 聚 酶 鏈 式 反 應(yīng) 是 一 項(xiàng) 生 物 體 外 復(fù) 制 特 定 DNA片段 的 核 酸 合 成 技 術(shù) 。 通 過 此 技 術(shù) 使 其數(shù) 量 呈 指 數(shù) 方 式 增 加 ， 可 獲 取 大 量 的目 的 基 因 。 PCR技 術(shù) 原 理 ： 前 提 ： 原 料 ： 方 式 DNA復(fù) 制一 段 已 知 目 的 基 因 的 核 苷 酸 序 列： 以 _方 式 擴(kuò) 增 ， 即 _（ n為 擴(kuò) 增 循 環(huán) 的 次 數(shù) ）指 數(shù)2 n一 段 已 知 目 的 基 因 的 核 苷 酸 序 列 （ DNA模 板 ）引 物 ；四 種 脫 氧 核 苷 酸 ；熱 穩(wěn) 定 DN

7、A聚 合 酶 （ Taq酶 ） 過 程 ： “ 變 性 、 退 火 、 延 伸 ” 三 步曲變 性 ： 加 熱 至 9095 雙 鏈 DNA解 鏈 成 為單 鏈 DNA退 火 ： 冷 卻 至 5560 部 分 引 物 與 模 板 的單 鏈 DNA的 特 定 互 補(bǔ) 部位 相 配 對 和 結(jié) 合延 伸 ： 加 熱 至 7075 以 目 的 基 因 為 模 板 ，合 成 互 補(bǔ) 的 新 DNA鏈 變 性退 火 延 伸 逆 轉(zhuǎn) 錄 法目 的 基 因 的 信 使 RNA 雙 鏈 DNA（ 目 的 基 因 ) 化 學(xué) 合 成 法蛋 白 質(zhì) 的 氨 基 酸 序 列信 使 RNA序 列基 因 的 核 苷 酸

8、 序 列目 的 基 因人 工 合 成逆 轉(zhuǎn) 錄 酶3、 人 工 合 成 目 的 基 因 推 測推 測單 鏈 DNADNA聚 合 酶 1、 下 列 獲 取 目 的 基 因 的 方 法 中 需 要 模 板 鏈 的 是 從 基 因 文 庫 中 獲 取 目 的 基 因 利 用 PCR技 術(shù)擴(kuò) 增 目 的 基 因 反 轉(zhuǎn) 錄 法 通 過 DNA合 成 儀 利用 化 學(xué) 方 法 人 工 合 成A B C D D 3、 目 的 基 因 主 要 是 指 _的 結(jié) 構(gòu) 基 因 。獲 得 目 的 基 因 的 常 見 方 法 有 三 種 ： （ 1） 從 基 因 文 庫 中獲 取 目 的 基 因 ， 根 據(jù) 基 因

9、 的 _序 列 ， 基 因 在_上 的 位 置 ， 基 因 的 _產(chǎn) 物 mRNA， 基因 的 _產(chǎn) 物 蛋 白 質(zhì) 等 獲 取 目 的 基 因 。 （ 2） 利 用PCR技 術(shù) 擴(kuò) 增 目 的 基 因 ， 該 技 術(shù) 是 一 項(xiàng) 在 _完成 的 核 酸 合 成 技 術(shù) ， 前 提 條 件 是 有 一 段 已 知 目 的 基 因 的_序 列 ， 以 便 于 合 成 _。 （ 3） 如 果 基因 較 小 且 核 苷 酸 序 列 已 知 ， 可 以 通 過 _方法 。 編 碼 蛋 白 質(zhì)核 苷 酸染 色 體 轉(zhuǎn) 錄表 達(dá) 體 外核 苷 酸 引 物 人 工 合 成 基 因 表 達(dá) 載 體 的 作 用

10、 ：a、 使 目 的 基 因 在 受 體 細(xì) 胞 中 穩(wěn) 定 存 在 并 遺 傳 給 子 代b、 同 時(shí) 使 目 的 基 因 能 表 達(dá) 和 發(fā) 揮 作 用思 考 ： 作 為 基 因 工 程 表 達(dá) 載 體 ， 只 需 含 有 目 的 基 因 就 可以 完 成 任 務(wù) 嗎 ？ 為 什 么 ？二 、 基 因 表 達(dá) 載 體 的 構(gòu) 建 核 心 不 可 以 。 因 為 目 的 基 因 在 表 達(dá) 載 體 中 得 到 表 達(dá) 并 發(fā) 揮 作 用 ，還 需 要 有 其 他 控 制 元 件 ， 如 啟 動 子 、 終 止 子 和 標(biāo) 記 基 因 等 。必 須 構(gòu) 建 上 述 元 件 的 主 要 理 由

11、是 ：（ 1） 生 物 之 間 進(jìn) 行 基 因 交 流 ， 只 有 使 用 受 體 生 物 自 身 基 因的 啟 動 子 才 能 比 較 有 利 于 基 因 的 表 達(dá) ；（ 2） 通 過 cDNA文 庫 獲 得 的 目 的 基 因 沒 有 啟 動 子 ， 只 將 編 碼序 列 導(dǎo) 入 受 體 生 物 中 無 法 轉(zhuǎn) 錄 ；（ 3） 目 的 基 因 是 否 導(dǎo) 入 受 體 生 物 中 需 要 有 篩 選 標(biāo) 記 ；（ 4） 為 了 增 強(qiáng) 目 的 基 因 的 表 達(dá) 水 平 ， 往 往 還 要 增 加 一 些 其他 調(diào) 控 元 件 ， 如 增 強(qiáng) 子 等 ；（ 5） 有 時(shí) 需 要 確 定 目

12、 的 基 因 表 達(dá) 的 產(chǎn) 物 存 在 于 細(xì) 胞 的 什 么部 位 ， 往 往 要 加 上 可 以 標(biāo) 識 存 在 部 位 的 基 因 （ 或 做 成 目 的 基因 與 標(biāo) 識 基 因 的 融 合 基 因 ） ， 如 綠 色 熒 光 蛋 白 基 因 等 。 2、 基 因 表 達(dá) 載 體 的 組 成 ：目 的 基 因 +啟 動 子 +終 止 子 +標(biāo) 記 基 因它 們 各 自的 作 用 是什 么 ? 啟 動 子 ： 位 于 基 因 的 首 端 的一 段 特 殊 的 DNA片 斷 ， 它 是RNA聚 合 酶 識 別 和 結(jié) 合 的 部位 ， 有 了 它 才 能 驅(qū) 動 基 因 轉(zhuǎn)錄 出 mRN

13、A， 最 終 獲 得 蛋 白 質(zhì)終 止 子 ： 位 于 基 因 的 尾 端 的一 段 特 殊 的 DNA片 斷 ， 能 終止 mRNA的 轉(zhuǎn) 錄標(biāo) 記 基 因 的 作 用 是 為 了 鑒 別受 體 細(xì) 胞 中 是 否 含 有 目 的 基因 ， 從 而 將 有 目 的 基 因 的 細(xì)胞 篩 選 出 來 （ 1） 用 一 定 的 _切割 質(zhì) 粒 ， 使 其 出 現(xiàn) 一 個 切 口 ，露 出 _。（ 2） 用 _切 斷 目 的 基 因 ， 使 其 產(chǎn) 生 _ _。（ 3） 將 切 下 的 目 的 基 因 片 段 插 入 質(zhì) 粒 的 _處 ， 再 加 入 適 量 _， 形 成 了 一 個 重 組 DN

14、A分 子 （ 重 組 質(zhì) 粒 ）限 制 酶黏 性 末 端同 一 種 限 制 酶的 黏 性 末 端 切 口DNA連 接 酶相 同1.過 程 : 1、 下 列 關(guān) 于 基 因 表 達(dá) 載 體 的 敘 述 不 正 確 的 是A 啟 動 子 是 與 RNA聚 合 酶 識 別 和 結(jié) 合 的 部 位 ， 是 起始 密 碼 子B 啟 動 子 和 終 止 子 都 是 特 殊 結(jié) 構(gòu) 的 DNA短 片 段 ， 對mRNA的 轉(zhuǎn) 錄 起 調(diào) 控 作 用C 標(biāo) 記 基 因 是 為 了 鑒 別 受 體 細(xì) 胞 中 是 否 有 目 的 基 因從 而 便 于 篩 選D 基 因 表 達(dá) 載 體 的 構(gòu) 建 視 受 體 細(xì)

15、 胞 及 導(dǎo) 入 方 式 不 同而 有 所 差 別 A2、 目 前 轉(zhuǎn) 基 因 工 程 可 以A. 打 破 地 理 隔 離 但 不 能 突 破 生 殖 隔 離B. 打 破 生 殖 隔 離 但 不 能 突 破 地 理 隔 離C. 完 全 突 破 地 理 隔 離 和 生 殖 隔 離D. 部 分 突 破 地 理 隔 離 和 生 殖 隔 離 C (三 )將 目 的 基 因 導(dǎo) 入 受 體 細(xì) 胞轉(zhuǎn) 化 目 的 基 因 進(jìn) 入 _內(nèi) ， 并 且 在 受 體 細(xì) 胞 內(nèi) 維 持 _和 _的 過 程受 體 細(xì) 胞穩(wěn) 定 表 達(dá) 方 法 導(dǎo) 入 植 物 細(xì) 胞導(dǎo) 入 動 物 細(xì) 胞導(dǎo) 入 微 生 物 細(xì) 胞

16、農(nóng) 桿 菌 轉(zhuǎn) 化 法基 因 槍 法花 粉 管 通 道 法顯 微 注 射 法 感 受 態(tài) 細(xì) 胞 吸 收DNA分 子(三 )將 目 的 基 因 導(dǎo) 入 受 體 細(xì) 胞 1、 將 目 的 基 因 導(dǎo) 入 植 物 細(xì) 胞（ 1） 農(nóng) 桿 菌轉(zhuǎn) 化 法 特 點(diǎn) : 能 感 染 雙 子 葉 植 物 和 祼 子 植 物 ,對單 子 葉 植 物 無 感 染 能 力Ti質(zhì) 粒 的 TDNA可 轉(zhuǎn) 移 至 受 體 細(xì)胞 并 整 合 到 其 染 色 體 上轉(zhuǎn) 化 過 程 :Ti質(zhì) 粒目 的 基 因 構(gòu) 建 表達(dá)載體 導(dǎo) 入 植物細(xì)胞 插 入 植 物 細(xì) 胞染 色 DNA 表 達(dá) 新性狀轉(zhuǎn) 入 農(nóng)桿菌 （ 2）

17、基 因 槍 法 基 因 槍 法 又 稱 微 彈 轟 擊 法 ， 是 利 用 壓 縮 氣 體 產(chǎn) 生 的 動 力 ， 將 包 裹 在 金 屬 顆 粒 表 面 的 表 達(dá) 載 體 DNA打 入 受 體 細(xì) 胞 中 ， 使 目的 基 因 與 其 整 合 并 表 達(dá) 的 方 法 。 （ 3） 花 粉 通 道 法 植 物 花 粉 在 柱 頭 上 萌 發(fā) 后 ， 花 粉 管 要 穿 過 花 柱 直 通 胚 囊 。花 粉 管 通 道 法 就 是 在 植 物 受 粉 后 ， 花 粉 形 成 的 花 粉 管 還 未 愈 合 前 ， 剪 去 柱 頭 ， 然 后 ， 滴 加 DNA（ 含 目 的 基 因 ） ， 使

18、 目 的 基因 借 助 花 粉 管 通 道 進(jìn) 入 受 體 細(xì) 胞 。 2、 將 目 的 基 因 導(dǎo) 入 動 物 細(xì) 胞 方 法 ： 顯 微 注 射 法 程 序 ：目 的 基 因 表 達(dá) 載 體 提 純 取 卵 （ 受 精 卵 ） 顯 微 注 射 受 精 卵 新 性 狀 動 物 3、 將 目 的 基 因 導(dǎo) 入 微 生 物 細(xì) 胞常 用 法 ： Ca2+處 理常 用 菌 ： 大 腸 桿 菌微 生 物 作 受 體 細(xì) 胞 原 因 ：繁 殖 快 、 多 為 單 細(xì) 胞 、 遺 傳 物 質(zhì) 相 對 少過 程 ：Ca2+處 理大 腸 桿 菌 感 受 態(tài)細(xì) 胞 表 達(dá) 載 體與 感 受 態(tài)細(xì) 胞 混 合

19、 感 受 態(tài) 細(xì)胞 吸 收DNA 1、 基 因 工 程 中 科 學(xué) 家 常 用 細(xì) 菌 、 酵 母 菌 等 微 生 物 作為 受 體 細(xì) 胞 ， 原 因 是 A 結(jié) 構(gòu) 簡 單 、 操 作 方 便 B 繁 殖 速 度 快 C 遺 傳 物 質(zhì) 含 量 少 、 簡 單 D 性 狀 穩(wěn) 定 、 變 異 少2、 基 因 工 程 常 用 的 受 體 細(xì) 胞 有 大 腸 桿 菌 枯 草 桿 菌 支 原 體 動 植 物 細(xì) 胞A B C D BD3、 基 因 工 程 是 在 DNA分 子 水 平 上 進(jìn) 行 設(shè) 計(jì) 施 工 的 ， 在基 因 操 作 的 基 本 步 驟 中 ， 不 進(jìn) 行 堿 基 互 補(bǔ) 配

20、 對 的 步 驟 是A.人 工 合 成 基 因 B.目 的 基 因 與 運(yùn) 載 體 結(jié) 合C.將 目 的 基 因 導(dǎo) 入 受 體 細(xì) 胞 D.目 的 基 因 的 檢 測 和 表 達(dá) C 4. 采 用 基 因 工 程 的 方 法 培 育 抗 蟲 棉 ， 下 列 導(dǎo) 入 目 的 基 因的 做 法 正 確 的 是 將 毒 素 蛋 白 質(zhì) 注 射 到 棉 受 精 卵 中 將 編 碼 毒 素 蛋 白的 DNA序 列 注 射 到 棉 受 精 卵 中 將 編 碼 毒 素 蛋 白 的DNA序 列 與 細(xì) 菌 質(zhì) 粒 重 組 ， 注 射 到 棉 的 子 房 并 進(jìn) 入 受 精卵 中 將 編 碼 毒 素 蛋 白

21、的 DNA序 列 與 質(zhì) 粒 重 組 ， 導(dǎo) 入細(xì) 菌 感 染 棉 的 體 細(xì) 胞 ， 再 進(jìn) 行 組 織 培 養(yǎng)A B C D C5. 下 列 屬 于 基 因 工 程 中 導(dǎo) 入 目 的 基 因 方 法 的 是 農(nóng) 桿 菌 轉(zhuǎn) 化 法 基 因 槍 法 花 粉 管 道 法 顯 微 注射 法 胚 胎 移 植 DNA分 子 雜 交 法A B C D C (四 )目 的 基 因 的 檢 測 與 鑒 定檢 測 導(dǎo) 入 檢 測 ： 目 的 基 因 是 否 導(dǎo) 入 受 體 細(xì) 胞方 法 DNA分 子 雜 交 表 達(dá) 檢 測 轉(zhuǎn) 錄 檢 測 分 子 雜 交翻 譯 檢 測 抗 原 抗 體 雜 交 分子檢測法鑒

22、 定 抗 蟲 鑒 定抗 病 鑒 定活 性 鑒 定 等 個 體 水 平 的 鑒 定 知 識 延 伸 DNA分 子 雜 交 技 術(shù) 該 方 法 是 根 據(jù) 堿 基 互 補(bǔ) 配 對 原 則 ， 把 互 補(bǔ) 的 雙 鏈DNA解 開 ， 把 單 股 的 DNA小 片 段 用 同 位 素 、 熒 光 分 子 或化 學(xué) 發(fā) 光 催 化 劑 等 進(jìn) 行 標(biāo) 記 ， 之 后 同 被 檢 測 的 DNA中 的同 源 互 補(bǔ) 序 列 雜 交 ， 從 而 檢 出 所 要 查 明 的 DNA或 基 因 。 1、 用 -珠 蛋 白 的 DNA探 針 可 以 檢 測 出 的 遺 傳 病 是 A 鐮 刀 狀 細(xì) 胞 貧 血

23、癥 B 白 血 病C 壞 血 病 D 苯 丙 酮 尿 癥 A2、 應(yīng) 用 基 因 工 程 技 術(shù) 診 斷 疾 病 的 過 程 中 必 須 使 用 基因 探 針 才 能 達(dá) 到 檢 測 疾 病 的 目 的 。 這 里 的 基 因 探 針 是 A 用 于 檢 測 疾 病 的 醫(yī) 療 器 械B 用 放 射 性 同 位 素 或 熒 光 分 子 等 標(biāo) 記 的 DNA分 子C 合 成 -珠 蛋 白 的 DNAD 合 成 苯 丙 羥 化 酶 的 DNA片 段 B 思 考 與 探 究 ：2.根 據(jù) 農(nóng) 桿 菌 可 將 目 的 基 因 導(dǎo) 入 雙 子 葉 植 物 的 機(jī) 理 ,你 能 分析 出 不 能 導(dǎo) 入

24、 單 子 葉 植 物 的 原 因 嗎 ?若 將 一 個 抗 病 基 因 導(dǎo)入 小 麥 中 ,理 論 上 講 你 應(yīng) 該 怎 樣 做 ? 要 選 擇 合 適 的 農(nóng) 桿 菌 菌 株 ， 因 為 不 是 所 有 的 農(nóng) 桿 菌 菌 株 都可 以 侵 染 單 子 葉 植 物 ； 要 加 趨 化 和 誘 導(dǎo) 的 物 質(zhì) ， 一 般 為 乙酰 丁 香 酮 等 ， 目 的 是 使 農(nóng) 桿 菌 向 植 物 組 織 的 受 傷 部 位 靠 攏（ 趨 化 性 ） 和 激 活 農(nóng) 桿 菌 的 Vir區(qū) （ 誘 導(dǎo) ） 的 基 因 ， 使 T-DNA轉(zhuǎn) 移 并 插 入 到 染 色 體 DNA上 。3.利 用 大 腸

25、 桿 菌 可 以 生 產(chǎn) 出 人 的 胰 島 素 ， 聯(lián) 系 前 面 有 關(guān) 細(xì) 胞 器 功能 的 知 識 ， 結(jié) 合 基 因 工 程 操 作 程 序 的 基 本 思 路 ， 思 考 一 下 ， 若 要生 產(chǎn) 人 的 糖 蛋 白 ， 可 以 用 大 腸 桿 菌 嗎 ？有 些 蛋 白 質(zhì) 肽 鏈 上 有 共 價(jià) 結(jié) 合 的 糖 鏈 ， 這 些 糖 鏈 是 在 內(nèi) 質(zhì) 網(wǎng)和 高 爾 基 復(fù) 合 體 上 加 工 完 成 的 ， 內(nèi) 質(zhì) 網(wǎng) 和 高 爾 基 復(fù) 合 體 存 在 于 真 核 細(xì) 胞 中 ， 大 腸 桿 菌 不 存 在 這 兩 種 細(xì) 胞 器 ， 因 此 ， 在 大腸 桿 菌 中 生 產(chǎn)

26、這 種 糖 蛋 白 是 不 可 能 的 。 4. -珠 蛋 白 是 動 物 血 紅 蛋 白 的 重 要 組 成 成 分 。 當(dāng) 它 的 成 分 異常 時(shí) ， 動 物 有 可 能 患 某 種 疾 病 ， 如 鐮 刀 形 細(xì) 胞 貧 血 癥 。 假 如讓 你 用 基 因 工 程 的 方 法 ， 使 大 腸 桿 菌 生 產(chǎn) 出 鼠 的 -珠 蛋 白 ，想 一 想 ， 應(yīng) 如 何 進(jìn) 行 設(shè) 計(jì) ？（ 1） 從 小 鼠 中 克 隆 出 -珠 蛋 白 基 因 的 編 碼 序 列 （ cDNA)。（ 2） 將 cDNA前 接 上 在 大 腸 桿 菌 中 可 以 適 用 的 啟 動 子 ， 另 外加 上 抗

27、 四 環(huán) 素 的 基 因 ， 構(gòu) 建 成 一 個 表 達(dá) 載 體 。（ 3） 將 表 達(dá) 載 體 導(dǎo) 入 無 四 環(huán) 素 抗 性 的 大 腸 桿 菌 中 ， 然 后 在含 有 四 環(huán) 素 的 培 養(yǎng) 基 上 培 養(yǎng) 大 腸 桿 菌 。 如 果 表 達(dá) 載 體 未 進(jìn) 入大 腸 桿 菌 中 ， 大 腸 桿 菌 會 不 含 有 抗 四 環(huán) 素 基 因 而 死 掉 ； 如 果培 養(yǎng) 基 上 長 出 大 腸 桿 菌 菌 落 ， 則 表 明 -珠 蛋 白 基 因 已 進(jìn) 入其 中 。（ 4） 培 養(yǎng) 進(jìn) 入 了 -珠 蛋 白 基 因 的 大 腸 桿 菌 ， 收 集 菌 體 ， 破 碎 后 從 中 提 取

28、 -珠 蛋 白 。 復(fù) 習(xí) 題1） 將 目 的 基 因 導(dǎo) 入 受 體 細(xì) 胞 有 哪 些 方法 ?(試 舉 例 說 明 )2） 簡 述 農(nóng) 桿 菌 轉(zhuǎn) 化 法 1、 目 的 基 因 可 從 基 因 文 庫 中 獲 得 ， 下 列 有 關(guān) 基 因 文 庫的 描 述 正 確 的 是A、 某 生 物 的 全 套 基 因 就 是 一 個 基 因 文 庫B、 將 含 有 某 種 生 物 不 同 的 許 多 DNA片 段 ， 導(dǎo) 入 某 個 生 物 體 內(nèi) ， 則 這 個 生 物 就 是 一 個 基 因 文 庫C、 含 有 一 種 生 物 所 有 基 因 的 基 因 文 庫 叫 做 基 因 組 文庫D、

29、 含 有 一 種 生 物 的 一 部 分 基 因 的 基 因 文 庫 叫 cDNA文庫 C 6） （ 多 選 ） 人 們 利 用 基 因 工 程 的 方 法 ， 用 大 腸 桿 菌 生 產(chǎn)人 類 胰 島 素 ， 這 一 過 程 涉 及 到 （ ）A.用 適 當(dāng) 的 酶 對 胰 島 素 基 因 與 運(yùn) 載 體 進(jìn) 行 切 割 并 連 接B.把 重 組 后 的 DNA分 子 導(dǎo) 入 受 體 細(xì) 菌 內(nèi) 進(jìn) 行 擴(kuò) 增C.檢 測 重 組 DNA分 子 是 否 導(dǎo) 入 受 體 細(xì) 菌 內(nèi) 并 表 達(dá) 出 性 狀D.篩 選 出 能 產(chǎn) 生 胰 島 素 的 “ 工 程 菌 ” 7） 下 列 哪 項(xiàng) 不 屬 于 基 因 工 程 技 術(shù) 的 步 驟 （ ） A 基 因 轉(zhuǎn) 移 B 基 因 擴(kuò) 增C 基 因 檢 測 D 基 因 表 達(dá)