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1、 2007年 年 終 工 作 總 結(jié) 高 雙 全 07年 總 結(jié) 07年 掌 握 的 新 技 術(shù) ； 07年 參 與 的 各 項 工 作 ； 07年 的 心 得 ； 08年 展 望 。 07年 掌 握 的 新 技 術(shù) 進 一 步 掌 握 了 ELSA技 術(shù) (HRP)： 主 要 是 雙 抗 夾 心 法 和 間接 法 ： 1-雙 抗 夾 心 p24抗 原 ； 2- 間 接 法 p24、 gp41及 gp120抗 體 。 基 本 掌 握 western Blot的 技 術(shù) （ AP） SDS-PAGE電 泳 轉(zhuǎn) 膜 （ PVDF或 硝 酸 纖 維 素 膜 ） 封 閉 一 抗 洗 滌 酶 標 二 抗
2、 反 應(yīng) 洗 滌 顯 色 或 化 學 發(fā) 光 顯 影 進 一 步 熟 練 掌握 PCR技 術(shù) ： P2內(nèi) 的 操 作 ： 1- 基 本 熟 悉 P2內(nèi) 的 實 驗 規(guī) 范 ； 2- 在 P2內(nèi) 熟 練 進 行 操 作 。 RNAi相 關(guān) 實 驗 ： HIV相 關(guān) RNAi共 轉(zhuǎn) 染 抑 制 效 果 鑒 定 。 NL 4-3 + Vif 37 293FT， 檢 測 培 養(yǎng) 上 清 p24水 平 。 H9、 Hela細 胞 電 轉(zhuǎn) ： 掌 握 了 H9細 胞 電 轉(zhuǎn) 技 術(shù) ， 并 對 Hela細 胞 進 行 電 轉(zhuǎn)條 件 優(yōu) 化 。 基 本 掌 握 了 流 式 細 胞 檢 測 技 術(shù) ： 1-
3、FL1綠 色 熒 光 相 關(guān) 的 檢 測 ； 2- 劃 門 選 擇 細 胞 群 及 選 定 陽 性 區(qū) 域 。 初 步 掌 握 了 HIV中 和 實 驗 ： 1- 基 本 掌 握 HIV病 毒 滴 度 測 定 步 驟 ； （ TZM-B1） 2- 基 本 掌 握 HIV中 和 實 驗 步 驟 。 （ TZM-B1） 致 敏 脾細 胞 骨 髓 瘤細 胞離 心 1500rpm 10min 50%PEG2000 1ml 培 養(yǎng) 液 10ml離 心 1500rpm 10min均 勻 混 合 1min 加 入 HAT培 養(yǎng)液 懸 浮 細 胞 ，置 于 培 養(yǎng) 孔 內(nèi)細 胞 融 合 實 驗 SP20 DN
4、A合 成脾 臟 細 胞 利 用 LG+U （ A）利 用 H和 T繞 過 A注 ： 脾 臟 細 胞 在 正 常 培 養(yǎng) 基 中 無 法 長 期 生 存 ， 2周 內(nèi) 就 會 死 亡 SP20無 法 利 用 H和 T繞 過 A， 直 接 死 亡 。隨機融合后的細胞篩選SP20+脾 臟 細 胞 07年 參 與 的 工 作 實 驗 室 慢 病 毒 相 關(guān) 的 質(zhì) 粒 大 提 及 病 毒 生 產(chǎn) 。 1- 除 了 Rev（ 070416） 質(zhì) 量 較 差 ， 其 他 大 提 質(zhì) 粒 質(zhì)量 都 比 較 穩(wěn) 定 ， 質(zhì) 粒 濃 度 基 本 都 在 10ug/uL以 上 。 2- 病 毒 生 產(chǎn) 比 較 穩(wěn)
5、 定 。 HIV感 染 性 克 隆 的 大 提 及 生 產(chǎn) ： HIV感 染 性 克 隆 大 提 （ 4-3： 10.8 ug/uL， 89.6： 8.6 ug/uL， 94： 14 ug/uL， 249： 2.9 ug/uL ， MJ4：6.8 ug/uL ） ， 生 產(chǎn) 做 的 還 比 較 少 。 參 與 了 慢 病 毒 各 質(zhì) 粒 的 構(gòu) 建 工 作 ： 包 括 Luc、 Lumio、 H2Kk及 HIV gp160等 系 列 質(zhì)粒 的 構(gòu) 建 。 細 胞 研 究 方 面 的 一 些 實 驗 ： 如 電 轉(zhuǎn) ， 流 式 檢 測 H2Kk表 面 標 記 ， HIV RNAi實驗 等 。 H
6、IV中 和 單 抗 實 驗 ： 學 習 并 參 與 了 部 分 工 作 ， 此 方 向 是 今 后 的 工 作 重點 。 07年 心 得 原 有 的 操 作 得 到 進 一 步 提 高 ， 大 提 、 病 毒 生 產(chǎn) 都比 較 穩(wěn) 定 ， 質(zhì) 量 也 較 好 。 操 作 熟 練 、 條 件 固 定 是主 要 的 因 素 ， 這 些 是 需 要 保 持 和 推 廣 的 。 今 年 掌 握 了 不 少 新 技 術(shù) ， 參 與 到 了 各 個 方 向 的 工作 中 ， 今 年 在 技 術(shù) 方 面 進 步 比 較 明 顯 。 參 與 的 工 作 ， 新 掌 握 的 技 術(shù) 增 加 ， 也 反 過 來 顯 示出 了 基 礎(chǔ) 知 識 的 不 足 ,也 進 一 步 制 約 了 在 技 術(shù) 上 的進 步 與 發(fā) 展 。 08年 展 望 工 作 重 心 基 本 放 到 HIV中 和 性 單 抗 的 篩 選 上 。進 一 步 學 習 各 方 面 知 識 ， 多 問 多 想 ， 把 技術(shù) 做 好 做 精 ， 力 爭 成 為 相 關(guān) 技 術(shù) 的 行 家 。同 時 在 實 驗 設(shè) 計 和 數(shù) 據(jù) 分 析 方 面 爭 取 有 質(zhì)的 突 破 。
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