無菌及環(huán)氧乙烷殘留量檢測ppt課件

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無菌及環(huán)氧乙烷殘留量檢測,1,提綱,1. 常用滅菌方法,3. 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí),4. 醫(yī)療器械無菌檢查,2. 環(huán)氧乙烷殘留量,2,常用的滅菌方法,滅菌的方法： 物理方法 干熱滅菌 濕熱滅菌 射線滅菌 濾過滅菌 化學(xué)方法 氣體滅菌 藥液滅菌,3,干熱滅菌法,干熱滅菌法可用于能耐受較高溫度，卻不宜被蒸汽穿透、或者易被濕熱破壞的物品的滅菌。 分類： 火焰滅菌法：是將待滅菌物品直接置于火焰中燒灼進(jìn)行滅菌的方法，滅菌迅速、可靠、簡便。 適用于：耐火焰材質(zhì)的物品如金屬、玻璃用具或容器及瓷器等的滅菌 干熱空氣滅菌法：是將待滅菌物品置于高溫干熱空氣中滅菌的方法，需要長時(shí)間高熱環(huán)境才能達(dá)到滅菌效果。 適用于：耐高溫材質(zhì)的物品（玻璃、金屬制品等）及耐高溫、不允許濕氣穿透的油脂類和粉末化學(xué)藥品。 干熱空氣滅菌常用：135～145℃滅菌3～5h；160～170℃滅菌2～4h；180～200℃滅菌0.5～1h。,4,濕熱滅菌法,濕熱滅菌法是通過熱蒸汽或沸水使細(xì)菌蛋白質(zhì)變性而殺滅微生物的方法。 分類: 煮沸滅菌 流通蒸汽滅菌 熱壓滅菌 適用于：耐高溫、耐高壓蒸氣的物品。金屬或玻璃容器及用具、瓷器、橡膠塞、膜濾器等均能采用此法。 常用條件（溫度、蒸氣表壓與時(shí)間）為：115℃（67kPa），30min；121℃（97kPa），20min；126℃（139 kPa），15min。 影響濕熱滅菌的因素有： 細(xì)菌的種類與數(shù)量 器械（被滅菌物）性質(zhì) 滅菌溫度、壓力與時(shí)間,5,射線滅菌法,常用的有： 輻射滅菌法： 原理是射線可直接破壞細(xì)菌DNA，導(dǎo)致微生物死亡。輻射滅菌的特點(diǎn)是不升高滅菌產(chǎn)品的溫度，穿透性強(qiáng)。 適用于：羊腸線、高分子材料等醫(yī)療器械的滅菌。 紫外線滅菌法： 是利用紫外線作用于菌體核酸蛋白促使其變性，同時(shí)空氣受紫外線照射后產(chǎn)生微量臭氧，從而起共同殺菌作用。紫外光波長190-350nm之間，其中波長為260nm左右，對微生物的生物效應(yīng)最大。 適用于：無菌室、某些工作區(qū)的空氣滅菌、物體表面滅菌。 微波滅菌法： 采用頻率300MHz～300kMHz的電磁波照射產(chǎn)生熱能殺滅微生物的方法。,6,紫外線照射滅菌時(shí)注意的問題,紫外線的殺菌力，隨使用時(shí)間增加而減退，一般使用時(shí)間達(dá)到額定時(shí)間70％時(shí)應(yīng)更換紫外線燈管，以保證殺菌效果。紫外線燈平均壽命一般為2000h。 紫外線的殺菌作用隨菌種不同而不同，殺霉菌的照射量要比殺桿菌大40~ 50倍。 紫外線照射通常按相對濕度為60％的基礎(chǔ)設(shè)計(jì)，室內(nèi)濕度增加時(shí)，照射量應(yīng)相應(yīng)增加。 紫外線滅菌效果與照射的時(shí)間長短有關(guān)，這需要通過驗(yàn)證來確定照射時(shí)間。 紫外照射燈的安裝形式及高度，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況，參考使用說明決定,7,濾過除菌法,濾過除菌法：指用濾過方法除去活的或死的微生物的方法，是一種機(jī)械除菌方法，供除菌用的濾器，要求能有效地從溶液中除凈微生物，溶液能順暢地通過，容易清洗，操作簡便。 適用于：對熱不穩(wěn)定的藥物溶液、氣體、水等的除菌。 常用除菌濾器（應(yīng)在無菌操條件下進(jìn)行）： 0.22μm或0.3μm的微孔濾膜 G6垂熔玻璃濾器,8,化學(xué)滅菌法,氣體滅菌法：指用化學(xué)藥品的氣體或蒸氣殺滅微生物的方法。 常用氣態(tài)殺菌劑：為環(huán)氧乙烷、甲醛、丙二醇、臭氧、乳酸、過氧 乙酸等。 藥液滅菌法: 藥液滅菌法利用藥液殺滅微生物的方法。 常用的有0.1%～0.2%苯扎溴銨溶液，75%乙醇、2%煤酚皂溶液、1%聚維 酮碘溶液等。,9,小結(jié),高壓蒸汽滅菌: 工作服、口罩、稀釋液等，置高壓殺菌鍋內(nèi)，一般采用121℃滅菌半小時(shí), 不同的培養(yǎng)基有不同的要求,應(yīng)分別處理。 火焰滅菌：接種針、接種環(huán)等可直接火焰滅菌。 高溫干燥滅菌：各種玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃滅菌2小時(shí)。 一般消毒: 無菌室內(nèi)的凳、工作臺(tái)、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無法進(jìn)行滅菌，必須用其他方法進(jìn)行消毒處理，可采用適當(dāng)?shù)南疽翰潦孟荆ぷ魅藛T的手也用此法進(jìn)行消毒。 空氣的消毒：開啟紫外燈照射30—60分鐘即可。,10,提綱,1. 常用滅菌方法,3. 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí),4. 醫(yī)療器械無菌檢查,2. 環(huán)氧乙烷殘留量,11,環(huán)氧乙烷滅菌相關(guān)知識(shí),環(huán)氧乙烷滅菌利用環(huán)氧乙烷在常溫下為氣態(tài)，蒸汽壓較大，對滅菌物品的穿透性強(qiáng)，可以穿透微孔而達(dá)到物品的深部，環(huán)氧乙烷是一種非?；顫姷臏缇鷦瑲⒕芰?qiáng)且廣泛，有很強(qiáng)的穿透能力，適合于包裝物品的滅菌，對物品損壞輕微，且費(fèi)用較低?，F(xiàn)大部分的醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)采用此種方法滅菌。 環(huán)氧乙烷能夠高效地對醫(yī)療產(chǎn)品進(jìn)行滅菌，在殺滅微生物的同時(shí)醫(yī)療產(chǎn)品上的環(huán)氧乙烷殘留也會(huì)對使用者和患者的身體帶來一定的毒害。其毒性包括兩個(gè)方面： 一為環(huán)氧乙烷本身的毒性。通過呼吸器官吸入體內(nèi)刺激呼吸道，引起惡心、嘔吐、頭昏、頭痛、嗜睡等癥狀。嚴(yán)重者可引起肺水腫；通過皮膚、粘膜接觸后，引起紅腫、水泡及血泡，嚴(yán)重者可出現(xiàn)局部皮膚燒傷及粘膜組織灼傷，造成毛發(fā)脫落；超量進(jìn)入人體血液內(nèi)，可致紅細(xì)胞溶解，補(bǔ)體滅活和凝血酶破壞引起全身性溶血。 二是滅菌后生成物的毒性。環(huán)氧乙烷與氯元素接觸產(chǎn)生毒性很大的氯醇，與水接觸形成乙二醇，對環(huán)境和種植物的生產(chǎn)起到很大的破壞作用。,12,環(huán)氧乙烷滅菌相關(guān)知識(shí),醫(yī)療器械產(chǎn)品如采用環(huán)氧乙烷滅菌，應(yīng)由有資格的人員負(fù)責(zé)設(shè)備維護(hù)滅菌的確認(rèn)和常規(guī)控制及產(chǎn)品放行工作。應(yīng)不斷提高各類人員對環(huán)氧乙烷殘留量造成健康風(fēng)險(xiǎn)的意識(shí)， 首先經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌的醫(yī)療器械必須按規(guī)定進(jìn)行解析，即紙塑包裝滅菌后解析7天，全塑包裝滅菌后解析14天，并經(jīng)檢測確定器械上的環(huán)氧乙烷殘留量小于10μg/g后出廠； 其次經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌的醫(yī)療器械應(yīng)采用透氣性好，有助于消除殘留環(huán)氧乙烷的紙塑包裝，以最大限度地降低環(huán)氧乙烷殘留，降低器械使用的風(fēng)險(xiǎn)； 第三體積越大，環(huán)氧乙烷含量絕對就越高；對于醫(yī)用敷料、無紡布、合成醫(yī)用乳膠手套等對環(huán)氧乙烷氣體有很強(qiáng)的吸附性，吸附在這類產(chǎn)品上的殘留量很難徹底解析，所以對此類產(chǎn)品，不應(yīng)選用環(huán)氧乙烷滅菌。,13,環(huán)氧乙烷殘留量測定方法,氣相色譜法 比色分析法 原理：環(huán)氧乙烷在酸性條件下水解成乙二醇，乙二醇經(jīng)高碘酸氧化生成 甲醛，甲醛與品紅-亞硫酸試液反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色化合物，通過比色法分析 可求得環(huán)氧乙烷含量。 所用試劑：高碘酸，硫代硫酸鈉，無水亞硫酸鈉，堿性品紅，鹽酸，乙二醇等 浸提方法：分模擬使用浸提法和極限浸提法。 模擬使用浸提法：用0.1mol/L鹽酸作為浸提介質(zhì),整個(gè)或部分與人體接觸的器械在37℃(人體溫度)浸提,不直接與人體接觸的器械在25℃(室溫)浸提.浸提時(shí)間應(yīng)考慮在推薦或預(yù)期使用最為嚴(yán)格的時(shí)間條件下進(jìn)行,但不短于1h.浸提表面為器械與藥液或血液接觸的表面. 極限浸提法:取樣品上有代表性的部位,截為5mm長碎塊,稱取2.0g置于容器中,加0.1mol/L鹽酸10ml,室溫放置1h,作為供試液;對于容器類樣品,可加0.1mol/L鹽酸至公稱容量,在37℃±1℃下恒溫1h.,14,環(huán)氧乙烷殘留量,試驗(yàn)步驟 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：取5支納氏比色管，分別精確加入0.1mol/L鹽酸2ml,再精確加入0.5m、1.0ml、1.5ml 、2.0ml 、2.5ml乙二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。另取一支納氏比色管，精確加入0.1mol/L鹽酸2ml作為空白對照。于上述各管中分別加入高碘酸溶液（5g/L)0.4ml，搖勻，放1h，然后分別滴加硫代硫酸鈉溶液（10g/L）至出現(xiàn)的黃色恰好消失。再分別加入品紅-亞硫酸試液0.2ml，用蒸餾水稀釋到10ml，搖勻，35 ℃～37 ℃條件下放置1h,于560nm波長處以空白液作參比，測定吸光度。繪制吸光度-體積標(biāo)準(zhǔn)曲線。 試驗(yàn)方法：精確量取供試液2.0ml于納氏比色管中，按上面的步驟操作，以測得的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試液相應(yīng)的體積。,、,15,提綱,1. 常用滅菌方法,3. 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí),4. 醫(yī)療器械無菌檢查,2. 環(huán)氧乙烷殘留量,16,微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí),無菌技術(shù)：是指在微生物試驗(yàn)工作中，控制或防止各類微生物的污染及 其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施，其中包括無菌環(huán)境設(shè)施、無菌試 驗(yàn)器材以及無菌操作。 無菌環(huán)境設(shè)施 無菌室的使用與管理要求 超凈工作臺(tái)的使用與管理要求 生物安全柜 無菌試驗(yàn)器材 無菌操作： 概念：是指在無菌環(huán)境條件下，在對無菌制品或無菌器械進(jìn)行檢驗(yàn)的過程中，能防止微生物污染與干擾的一種常規(guī)操作方法。 注意事項(xiàng)。,17,提綱,1. 常用滅菌方法,2. 環(huán)氧乙烷殘留量,4. 醫(yī)療器械無菌檢查,3. 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí),18,醫(yī)療器械無菌檢查引用標(biāo)準(zhǔn),中華人民共和國藥典2005版 ＧＢ/Ｔ１４２３３．２－２００５ 醫(yī)用輸液．輸血．注射器具檢驗(yàn)方法 第２部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法,19,無菌檢查法的定義,中華人民共和國藥典2005版：無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品，醫(yī)療器具，原料，輔料及其他品種是否無菌的一種方法． ＧＢ/Ｔ１４２３３．２－２００５：本試驗(yàn)系將醫(yī)療器械或其浸提液接種于培養(yǎng)基內(nèi)，以檢驗(yàn)供試品是否有細(xì)菌和真菌污染．,20,無菌檢查方式,直接接種法 薄膜過濾法,21,主要設(shè)備,超凈工作臺(tái) 恒溫培養(yǎng)箱 恒溫水浴箱 壓力蒸汽滅菌器 電熱干燥箱 光學(xué)顯微鏡,22,主要器具,試管及試管架 酒精燈 75％乙醇棉 滅菌刻度吸管(1ml) 滅菌平皿（9cm） 錐形瓶 三角燒瓶 滅菌剪刀、鑷子等,23,主要培養(yǎng)基,流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基 改良馬丁培養(yǎng)基 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,24,稀釋液、沖洗液及其制備方法,無菌氯化鈉溶液：質(zhì)量濃度為9g/L的無菌氯化鈉溶液 蛋白胨水溶液（ 0.1％ ） 制備方法： 取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，調(diào)節(jié)pH值至7.1±0.2，分裝，滅菌。 pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液 制備方法： 取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌,25,培養(yǎng)基要求,用于培養(yǎng)需（厭）氣菌和真菌的培養(yǎng)基的制備、培養(yǎng)基靈敏度檢查及其他各項(xiàng)要求應(yīng)符合《中國藥典（二部）》附錄中《無菌檢查法》的規(guī)定。 培養(yǎng)基可按藥典的處方制備，也可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。制備后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2~25℃、避光的環(huán)境。培養(yǎng)基若保存于非密閉容器中，一般在三周內(nèi)使用;若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用。,26,培養(yǎng)基,27,靈敏度試驗(yàn)的菌種,金黃色葡萄球菌 枯草芽孢桿菌 銅綠假單胞菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 ＣＭＣＣ:中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心,28,器具滅菌,與供試液接觸的所有器具應(yīng)采用可靠方法滅菌，通常置壓力蒸氣滅菌器內(nèi)121℃30min，或置電熱干燥箱內(nèi)160℃2h。,29,無菌室菌落數(shù)要求,無菌室操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)局部應(yīng)符合潔凈度100級單向流空氣區(qū)域要求。 無菌室在消毒處理完畢后，應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)。 方法：取直徑約90mm培養(yǎng)皿，無菌操作注入融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20mL，在30℃～35℃培養(yǎng)48h證明無菌后，取3只培養(yǎng)皿在無菌室操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)平均位置打開上蓋，暴露30min后蓋好，置30℃～35℃培養(yǎng)48h后取出檢查，3只雙碟上生長的菌落數(shù)平均不得超過1個(gè). 無菌試驗(yàn)過程中應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)，方法同上。在試驗(yàn)開始進(jìn)行時(shí)打開平皿蓋，至試驗(yàn)結(jié)束蓋好照上法培養(yǎng)，應(yīng)符合上述要求。,30,陽性對照,應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽性對照菌： 無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對照菌； 抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希氏菌為對照菌； 抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對照菌； 抗真菌的供試品，以白色念珠菌為對照菌。 陽性對照試驗(yàn)的菌液制備同培養(yǎng)基靈敏度檢查（大腸埃希氏的菌液制備同培養(yǎng)基的靈敏度檢查中的金黃色葡萄球菌） 加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽性對照管培養(yǎng)48～72小時(shí)應(yīng)生長良好。,,31,供試品數(shù)量,同一批號(hào)至少3個(gè)~11個(gè)單位供試品。 批出廠產(chǎn)品最少檢驗(yàn)數(shù)量： ≤１００個(gè)： １０％或４個(gè)（取較大者） １００５００： ２％或２０件（取較少者）,32,上市抽驗(yàn)樣品（液體制劑）的最少檢驗(yàn)量,33,上市抽驗(yàn)樣品（固體制劑）的最少檢驗(yàn)量,M≤50mg 全量 20 50mg＜M＜300mg 半量 10 300mg≤M＜5g 150mg 10 M≥5g 500mg 10 外科用敷料棉花及紗布取100mg或1cm×3cm 10 縫合線、一次性醫(yī)用材料整個(gè)材料 20 帶導(dǎo)管的一次性醫(yī)療器具（如輸液袋） 10 其他醫(yī)療器具 整個(gè)器具（切碎或拆散開） 20,34,備注,每種培養(yǎng)基各接種10支供試品。 如果醫(yī)用器械體積過大，培養(yǎng)基用量可在2000ml以上，將其完全浸沒。,35,供試液制備及接種,制備及接種優(yōu)先采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。 如供試品不適宜直接投放，可按下列方法制備供試液，應(yīng)使介質(zhì)充分洗提供試品的浸提表面。 管類器具：按管內(nèi)表面積每10cm2流過管內(nèi)腔1mL浸提介質(zhì)，流量約為10ml/min; 容器類器具：容器內(nèi)已裝有液體的或直接抽取容器內(nèi)液體為供試液;空容器按容器內(nèi)表面積每10cm2加入浸提介質(zhì)1ml，振搖數(shù)次。 實(shí)體類器具：實(shí)體類器具按表面積每10cm2加入加入浸提介質(zhì)1ml，振搖數(shù)次。 供試液制備應(yīng)按無菌操作法進(jìn)行，在制備后2h內(nèi)使用。,36,接種后的培養(yǎng)基,37,培養(yǎng)基裝量,直接接種法即每支供試品按規(guī)定量分別接種到各含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的容器中。 除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10％，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15ml，改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10ml。 每種培養(yǎng)基接種的管數(shù)同供試品的檢驗(yàn)數(shù)量。,38,培養(yǎng)及觀察,上述含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌培養(yǎng)2天，真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁或斜面是否有菌生長;或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。,39,結(jié)果判斷,若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定;若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無效，即生長的微生物非供試品所含。,40,有下列至少一個(gè)條件時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果無效,無菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求; 回顧無菌試驗(yàn)過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素; 陰性對照管有菌生長 ; 供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。 試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。 重試時(shí)，重新取同量供試品，依法重試，若無菌生長，判供試品符合規(guī)定;若有菌生長，判供試品不符合規(guī)定。,41,謝 謝！,浙江省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所,42,