無菌及環(huán)氧乙烷殘留量檢測.ppt

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無菌及環(huán)氧乙烷殘留量檢測,浙江省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所虞海瑩,提綱,1.常用滅菌方法,3.微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí),4.醫(yī)療器械無菌檢查,2.環(huán)氧乙烷殘留量,常用的滅菌方法,滅菌的方法：物理方法干熱滅菌濕熱滅菌射線滅菌濾過滅菌化學(xué)方法氣體滅菌藥液滅菌,干熱滅菌法,干熱滅菌法可用于能耐受較高溫度，卻不宜被蒸汽穿透、或者易被濕熱破壞的物品的滅菌。分類：火焰滅菌法：是將待滅菌物品直接置于火焰中燒灼進(jìn)行滅菌的方法，滅菌迅速、可靠、簡便。適用于：耐火焰材質(zhì)的物品如金屬、玻璃用具或容器及瓷器等的滅菌干熱空氣滅菌法：是將待滅菌物品置于高溫干熱空氣中滅菌的方法，需要長時(shí)間高熱環(huán)境才能達(dá)到滅菌效果。適用于：耐高溫材質(zhì)的物品（玻璃、金屬制品等）及耐高溫、不允許濕氣穿透的油脂類和粉末化學(xué)藥品。干熱空氣滅菌常用：135～145℃滅菌3～5h；160～170℃滅菌2～4h；180～200℃滅菌0.5～1h。,濕熱滅菌法,濕熱滅菌法是通過熱蒸汽或沸水使細(xì)菌蛋白質(zhì)變性而殺滅微生物的方法。分類:煮沸滅菌流通蒸汽滅菌熱壓滅菌適用于：耐高溫、耐高壓蒸氣的物品。金屬或玻璃容器及用具、瓷器、橡膠塞、膜濾器等均能采用此法。常用條件（溫度、蒸氣表壓與時(shí)間）為：115℃（67kPa），30min；121℃（97kPa），20min；126℃（139kPa），15min。影響濕熱滅菌的因素有：細(xì)菌的種類與數(shù)量器械（被滅菌物）性質(zhì)滅菌溫度、壓力與時(shí)間,射線滅菌法,常用的有：輻射滅菌法：原理是射線可直接破壞細(xì)菌DNA，導(dǎo)致微生物死亡。輻射滅菌的特點(diǎn)是不升高滅菌產(chǎn)品的溫度，穿透性強(qiáng)。適用于：羊腸線、高分子材料等醫(yī)療器械的滅菌。紫外線滅菌法：是利用紫外線作用于菌體核酸蛋白促使其變性，同時(shí)空氣受紫外線照射后產(chǎn)生微量臭氧，從而起共同殺菌作用。紫外光波長190-350nm之間，其中波長為260nm左右，對(duì)微生物的生物效應(yīng)最大。適用于：無菌室、某些工作區(qū)的空氣滅菌、物體表面滅菌。微波滅菌法：采用頻率300MHz～300kMHz的電磁波照射產(chǎn)生熱能殺滅微生物的方法。,紫外線照射滅菌時(shí)注意的問題,紫外線的殺菌力，隨使用時(shí)間增加而減退，一般使用時(shí)間達(dá)到額定時(shí)間70％時(shí)應(yīng)更換紫外線燈管，以保證殺菌效果。紫外線燈平均壽命一般為2000h。紫外線的殺菌作用隨菌種不同而不同，殺霉菌的照射量要比殺桿菌大40~50倍。紫外線照射通常按相對(duì)濕度為60％的基礎(chǔ)設(shè)計(jì)，室內(nèi)濕度增加時(shí)，照射量應(yīng)相應(yīng)增加。紫外線滅菌效果與照射的時(shí)間長短有關(guān)，這需要通過驗(yàn)證來確定照射時(shí)間。紫外照射燈的安裝形式及高度，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況，參考使用說明決定,濾過除菌法,濾過除菌法：指用濾過方法除去活的或死的微生物的方法，是一種機(jī)械除菌方法，供除菌用的濾器，要求能有效地從溶液中除凈微生物，溶液能順暢地通過，容易清洗，操作簡便。適用于：對(duì)熱不穩(wěn)定的藥物溶液、氣體、水等的除菌。常用除菌濾器（應(yīng)在無菌操條件下進(jìn)行）：0.22m或0.3m的微孔濾膜G6垂熔玻璃濾器,化學(xué)滅菌法,氣體滅菌法：指用化學(xué)藥品的氣體或蒸氣殺滅微生物的方法。常用氣態(tài)殺菌劑：為環(huán)氧乙烷、甲醛、丙二醇、臭氧、乳酸、過氧乙酸等。藥液滅菌法:藥液滅菌法利用藥液殺滅微生物的方法。常用的有0.1%～0.2%苯扎溴銨溶液，75%乙醇、2%煤酚皂溶液、1%聚維酮碘溶液等。,小結(jié),高壓蒸汽滅菌:工作服、口罩、稀釋液等，置高壓殺菌鍋內(nèi)，一般采用121℃滅菌半小時(shí),不同的培養(yǎng)基有不同的要求,應(yīng)分別處理?；鹧鏈缇航臃N針、接種環(huán)等可直接火焰滅菌。高溫干燥滅菌：各種玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃滅菌2小時(shí)。一般消毒:無菌室內(nèi)的凳、工作臺(tái)、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無法進(jìn)行滅菌，必須用其他方法進(jìn)行消毒處理，可采用適當(dāng)?shù)南疽翰潦孟荆ぷ魅藛T的手也用此法進(jìn)行消毒。空氣的消毒：開啟紫外燈照射30—60分鐘即可。,提綱,1.常用滅菌方法,3.微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí),4.醫(yī)療器械無菌檢查,2.環(huán)氧乙烷殘留量,環(huán)氧乙烷滅菌相關(guān)知識(shí),環(huán)氧乙烷滅菌利用環(huán)氧乙烷在常溫下為氣態(tài)，蒸汽壓較大，對(duì)滅菌物品的穿透性強(qiáng)，可以穿透微孔而達(dá)到物品的深部，環(huán)氧乙烷是一種非常活潑的滅菌劑，殺菌能力強(qiáng)且廣泛，有很強(qiáng)的穿透能力，適合于包裝物品的滅菌，對(duì)物品損壞輕微，且費(fèi)用較低。現(xiàn)大部分的醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)采用此種方法滅菌。環(huán)氧乙烷能夠高效地對(duì)醫(yī)療產(chǎn)品進(jìn)行滅菌，在殺滅微生物的同時(shí)醫(yī)療產(chǎn)品上的環(huán)氧乙烷殘留也會(huì)對(duì)使用者和患者的身體帶來一定的毒害。其毒性包括兩個(gè)方面：一為環(huán)氧乙烷本身的毒性。通過呼吸器官吸入體內(nèi)刺激呼吸道，引起惡心、嘔吐、頭昏、頭痛、嗜睡等癥狀。嚴(yán)重者可引起肺水腫；通過皮膚、粘膜接觸后，引起紅腫、水泡及血泡，嚴(yán)重者可出現(xiàn)局部皮膚燒傷及粘膜組織灼傷，造成毛發(fā)脫落；超量進(jìn)入人體血液內(nèi)，可致紅細(xì)胞溶解，補(bǔ)體滅活和凝血酶破壞引起全身性溶血。二是滅菌后生成物的毒性。環(huán)氧乙烷與氯元素接觸產(chǎn)生毒性很大的氯醇，與水接觸形成乙二醇，對(duì)環(huán)境和種植物的生產(chǎn)起到很大的破壞作用。,環(huán)氧乙烷滅菌相關(guān)知識(shí),醫(yī)療器械產(chǎn)品如采用環(huán)氧乙烷滅菌，應(yīng)由有資格的人員負(fù)責(zé)設(shè)備維護(hù)滅菌的確認(rèn)和常規(guī)控制及產(chǎn)品放行工作。應(yīng)不斷提高各類人員對(duì)環(huán)氧乙烷殘留量造成健康風(fēng)險(xiǎn)的意識(shí)，首先經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌的醫(yī)療器械必須按規(guī)定進(jìn)行解析，即紙塑包裝滅菌后解析7天，全塑包裝滅菌后解析14天，并經(jīng)檢測確定器械上的環(huán)氧乙烷殘留量小于10g/g后出廠；其次經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌的醫(yī)療器械應(yīng)采用透氣性好，有助于消除殘留環(huán)氧乙烷的紙塑包裝，以最大限度地降低環(huán)氧乙烷殘留，降低器械使用的風(fēng)險(xiǎn)；第三體積越大，環(huán)氧乙烷含量絕對(duì)就越高；對(duì)于醫(yī)用敷料、無紡布、合成醫(yī)用乳膠手套等對(duì)環(huán)氧乙烷氣體有很強(qiáng)的吸附性，吸附在這類產(chǎn)品上的殘留量很難徹底解析，所以對(duì)此類產(chǎn)品，不應(yīng)選用環(huán)氧乙烷滅菌。,環(huán)氧乙烷殘留量測定方法,氣相色譜法比色分析法原理：環(huán)氧乙烷在酸性條件下水解成乙二醇，乙二醇經(jīng)高碘酸氧化生成甲醛，甲醛與品紅-亞硫酸試液反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色化合物，通過比色法分析可求得環(huán)氧乙烷含量。所用試劑：高碘酸，硫代硫酸鈉，無水亞硫酸鈉，堿性品紅，鹽酸，乙二醇等浸提方法：分模擬使用浸提法和極限浸提法。模擬使用浸提法：用0.1mol/L鹽酸作為浸提介質(zhì),整個(gè)或部分與人體接觸的器械在37℃(人體溫度)浸提,不直接與人體接觸的器械在25℃(室溫)浸提.浸提時(shí)間應(yīng)考慮在推薦或預(yù)期使用最為嚴(yán)格的時(shí)間條件下進(jìn)行,但不短于1h.浸提表面為器械與藥液或血液接觸的表面.極限浸提法:取樣品上有代表性的部位,截為5mm長碎塊,稱取2.0g置于容器中,加0.1mol/L鹽酸10ml,室溫放置1h,作為供試液;對(duì)于容器類樣品,可加0.1mol/L鹽酸至公稱容量,在37℃1℃下恒溫1h.,環(huán)氧乙烷殘留量,試驗(yàn)步驟繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：取5支納氏比色管，分別精確加入0.1mol/L鹽酸2ml,再精確加入0.5m、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml乙二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。另取一支納氏比色管，精確加入0.1mol/L鹽酸2ml作為空白對(duì)照。于上述各管中分別加入高碘酸溶液（5g/L)0.4ml，搖勻，放1h，然后分別滴加硫代硫酸鈉溶液（10g/L）至出現(xiàn)的黃色恰好消失。再分別加入品紅-亞硫酸試液0.2ml，用蒸餾水稀釋到10ml，搖勻，35℃～37℃條件下放置1h,于560nm波長處以空白液作參比，測定吸光度。繪制吸光度-體積標(biāo)準(zhǔn)曲線。試驗(yàn)方法：精確量取供試液2.0ml于納氏比色管中，按上面的步驟操作，以測得的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試液相應(yīng)的體積。,、,提綱,1.常用滅菌方法,3.微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí),4.醫(yī)療器械無菌檢查,2.環(huán)氧乙烷殘留量,微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí),無菌技術(shù)：是指在微生物試驗(yàn)工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施，其中包括無菌環(huán)境設(shè)施、無菌試驗(yàn)器材以及無菌操作。無菌環(huán)境設(shè)施無菌室的使用與管理要求超凈工作臺(tái)的使用與管理要求生物安全柜無菌試驗(yàn)器材無菌操作：概念：是指在無菌環(huán)境條件下，在對(duì)無菌制品或無菌器械進(jìn)行檢驗(yàn)的過程中，能防止微生物污染與干擾的一種常規(guī)操作方法。注意事項(xiàng)。,提綱,1.常用滅菌方法,2.環(huán)氧乙烷殘留量,4.醫(yī)療器械無菌檢查,3.微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí),醫(yī)療器械無菌檢查引用標(biāo)準(zhǔn),中華人民共和國藥典2005版ＧＢ/Ｔ１４２３３．２－２００５醫(yī)用輸液．輸血．注射器具檢驗(yàn)方法第２部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法,無菌檢查法的定義,中華人民共和國藥典2005版：無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品，醫(yī)療器具，原料，輔料及其他品種是否無菌的一種方法．ＧＢ/Ｔ１４２３３．２－２００５：本試驗(yàn)系將醫(yī)療器械或其浸提液接種于培養(yǎng)基內(nèi)，以檢驗(yàn)供試品是否有細(xì)菌和真菌污染．,無菌檢查方式,直接接種法薄膜過濾法,主要設(shè)備,超凈工作臺(tái)恒溫培養(yǎng)箱恒溫水浴箱壓力蒸汽滅菌器電熱干燥箱光學(xué)顯微鏡,主要器具,試管及試管架酒精燈75％乙醇棉滅菌刻度吸管(1ml)滅菌平皿（9cm）錐形瓶三角燒瓶滅菌剪刀、鑷子等,主要培養(yǎng)基,流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,稀釋液、沖洗液及其制備方法,無菌氯化鈉溶液：質(zhì)量濃度為9g/L的無菌氯化鈉溶液蛋白胨水溶液（0.1％）制備方法：取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，調(diào)節(jié)pH值至7.10.2，分裝，滅菌。pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液制備方法：取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌,培養(yǎng)基要求,用于培養(yǎng)需（厭）氣菌和真菌的培養(yǎng)基的制備、培養(yǎng)基靈敏度檢查及其他各項(xiàng)要求應(yīng)符合《中國藥典（二部）》附錄中《無菌檢查法》的規(guī)定。培養(yǎng)基可按藥典的處方制備，也可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。制備后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2~25℃、避光的環(huán)境。培養(yǎng)基若保存于非密閉容器中，一般在三周內(nèi)使用;若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用。,培養(yǎng)基,靈敏度試驗(yàn)的菌種,金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌銅綠假單胞菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉ＣＭＣＣ:中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心,器具滅菌,與供試液接觸的所有器具應(yīng)采用可靠方法滅菌，通常置壓力蒸氣滅菌器內(nèi)121℃30min，或置電熱干燥箱內(nèi)160℃2h。,無菌室菌落數(shù)要求,無菌室操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)局部應(yīng)符合潔凈度100級(jí)單向流空氣區(qū)域要求。無菌室在消毒處理完畢后，應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)。方法：取直徑約90mm培養(yǎng)皿，無菌操作注入融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20mL，在30℃～35℃培養(yǎng)48h證明無菌后，取3只培養(yǎng)皿在無菌室操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)平均位置打開上蓋，暴露30min后蓋好，置30℃～35℃培養(yǎng)48h后取出檢查，3只雙碟上生長的菌落數(shù)平均不得超過1個(gè).無菌試驗(yàn)過程中應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)，方法同上。在試驗(yàn)開始進(jìn)行時(shí)打開平皿蓋，至試驗(yàn)結(jié)束蓋好照上法培養(yǎng)，應(yīng)符合上述要求。,陽性對(duì)照,應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽性對(duì)照菌：無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希氏菌為對(duì)照菌；抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對(duì)照菌；抗真菌的供試品，以白色念珠菌為對(duì)照菌。陽性對(duì)照試驗(yàn)的菌液制備同培養(yǎng)基靈敏度檢查（大腸埃希氏的菌液制備同培養(yǎng)基的靈敏度檢查中的金黃色葡萄球菌）加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽性對(duì)照管培養(yǎng)48～72小時(shí)應(yīng)生長良好。,<,供試品數(shù)量,同一批號(hào)至少3個(gè)~11個(gè)單位供試品。批出廠產(chǎn)品最少檢驗(yàn)數(shù)量：≤１００個(gè)：１０％或４個(gè)（取較大者）１００５００：２％或２０件（取較少者）,上市抽驗(yàn)樣品（液體制劑）的最少檢驗(yàn)量,上市抽驗(yàn)樣品（固體制劑）的最少檢驗(yàn)量,M≤50mg全量2050mg＜M＜300mg半量10300mg≤M＜5g150mg10M≥5g500mg10外科用敷料棉花及紗布取100mg或1cm3cm10縫合線、一次性醫(yī)用材料整個(gè)材料20帶導(dǎo)管的一次性醫(yī)療器具（如輸液袋）10其他醫(yī)療器具整個(gè)器具（切碎或拆散開）20,備注,每種培養(yǎng)基各接種10支供試品。如果醫(yī)用器械體積過大，培養(yǎng)基用量可在2000ml以上，將其完全浸沒。,供試液制備及接種,制備及接種優(yōu)先采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。如供試品不適宜直接投放，可按下列方法制備供試液，應(yīng)使介質(zhì)充分洗提供試品的浸提表面。管類器具：按管內(nèi)表面積每10cm2流過管內(nèi)腔1mL浸提介質(zhì)，流量約為10ml/min;容器類器具：容器內(nèi)已裝有液體的或直接抽取容器內(nèi)液體為供試液;空容器按容器內(nèi)表面積每10cm2加入浸提介質(zhì)1ml，振搖數(shù)次。實(shí)體類器具：實(shí)體類器具按表面積每10cm2加入加入浸提介質(zhì)1ml，振搖數(shù)次。供試液制備應(yīng)按無菌操作法進(jìn)行，在制備后2h內(nèi)使用。,接種后的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基裝量,直接接種法即每支供試品按規(guī)定量分別接種到各含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的容器中。除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10％，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15ml，改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10ml。每種培養(yǎng)基接種的管數(shù)同供試品的檢驗(yàn)數(shù)量。,培養(yǎng)及觀察,上述含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌培養(yǎng)2天，真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁或斜面是否有菌生長;或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。,結(jié)果判斷,若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定;若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無效，即生長的微生物非供試品所含。,有下列至少一個(gè)條件時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果無效,無菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求;回顧無菌試驗(yàn)過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素;陰性對(duì)照管有菌生長;供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法重試，若無菌生長，判供試品符合規(guī)定;若有菌生長，判供試品不符合規(guī)定。,謝謝！,浙江省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所,