（浙江選考）2019版高考生物一輪總復(fù)習(xí) 第九單元 生物技術(shù)實(shí)踐 第30講 微生物的利用學(xué)案

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1、 第30講　微生物的利用 考試標(biāo)準(zhǔn) 必考 加試 考試標(biāo)準(zhǔn) 必考 加試 1.大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 √ 2.分離以尿素為氮源的微生物 √ 考點(diǎn)一　微生物的培養(yǎng)和分離 1．大腸桿菌 (1)特性：大腸桿菌是革蘭氏陰性、兼性厭氧(代謝類型)的腸道桿菌，在腸道中一般對(duì)人無害，但若進(jìn)入人的泌尿系統(tǒng)，就會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。 (2)用途：是基因工程技術(shù)中被廣泛采用的工具。 2．細(xì)菌的培養(yǎng)和分離 (1)細(xì)菌的繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，約20 min分裂一次。 (2)培養(yǎng)的方法：需要將已有細(xì)菌的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基中，一般用接種環(huán)(工具)轉(zhuǎn)移帶菌的培養(yǎng)

2、物。 (3)細(xì)菌分離的方法與特點(diǎn) 分離方法 特點(diǎn) 劃線分離法 操作簡(jiǎn)單 涂布分離法 操作復(fù)雜，單菌落更易分開 3.大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實(shí)驗(yàn) (1)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：將大腸桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)和劃線分離，即用LB液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)大腸桿菌，培養(yǎng)后再在LB固體平面培養(yǎng)基上劃線進(jìn)行分離，隨后培養(yǎng)基上就會(huì)形成一個(gè)個(gè)單獨(dú)的菌落。 (2)實(shí)驗(yàn)步驟 培養(yǎng)基滅菌 倒平板 接種 劃線分離 培養(yǎng)觀察 50 mL LB液體培養(yǎng)基和50 mL LB固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌 將培養(yǎng)基分別倒至4個(gè)滅菌后的培養(yǎng)皿中，水平放置，使之形成平面 在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌

3、，培養(yǎng)12 h 用接種環(huán)在接種有大腸桿菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線，蓋好培養(yǎng)皿 培養(yǎng)皿倒置(蓋在下面)，放在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～24 h后，可看到劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)菌落 (3)大腸桿菌分離的用途：?jiǎn)尉涞姆蛛x是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達(dá)量菌株的最簡(jiǎn)便方法之一。 4．微生物兩種常用的接種方法比較 比較 劃線分離法 涂布分離法 工具 接種環(huán) 玻璃刮刀 原理 通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的細(xì)胞群體，即

4、菌落 將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落 特點(diǎn) 方法簡(jiǎn)單，但不適宜計(jì)數(shù) 單菌落更易分開，但操作復(fù)雜些 目的 使培養(yǎng)基上形成由單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來的子細(xì)胞群體——菌落 思考討論 1．連線無菌技術(shù)的方法、類型及對(duì)象，并總結(jié)消毒與滅菌的區(qū)別。 消毒和滅菌的區(qū)別 項(xiàng)目 條件 結(jié)果 常用的方法 消毒 較為溫和的物理或化學(xué)方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 煮沸消毒法、巴氏消

5、毒法、紫外線或化學(xué)藥物消毒法 滅菌 強(qiáng)烈的理化因素 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌 2.觀察甲、乙、丙、丁四幅圖，熟悉倒平板的操作流程，請(qǐng)?zhí)羁眨? (1)請(qǐng)用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。 (2)甲、乙、丙中的滅菌方法是灼燒滅菌。 (3)丁中的操作需要等待平板冷卻凝固才能進(jìn)行。 3．下圖中甲為劃線分離法中最重要的環(huán)節(jié)，乙為操作的結(jié)果： (1)每一次劃線后都要將接種環(huán)灼燒(　√　) (2)除第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)都是第一次劃線的末端(　×　) 提示　平板劃線時(shí)除第一次劃線外，每一次劃線的起

6、點(diǎn)都是上一次劃線的末端，而不是第一次劃線的末端。 (3)說明乙圖劃線結(jié)束后，培養(yǎng)皿要倒置(蓋在下面)在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的原因是什么？ 提示　平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)；防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基中造成污染。 4．如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請(qǐng)思考： (1)獲得圖A效果和B效果的接種方法分別是什么？ 提示　獲得效果A的接種方法為涂布分離法，獲得效果B的接種方法為劃線分離法。 (2)某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？ 提示　最可能的原因是菌液濃度過

7、高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。 1．(2017·杭州一模)據(jù)報(bào)道，一些企業(yè)生產(chǎn)的速凍食品中檢出金黃色葡萄球菌超標(biāo)，加上熟鹵制品的大腸桿菌超標(biāo)，“細(xì)菌門”事件引起公眾普遍關(guān)注。金黃色葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養(yǎng)基上形成的菌落周圍會(huì)出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)。請(qǐng)回答下列問題： (1)某生物興趣小組欲檢測(cè)某果汁類食品中是否含有金黃色葡萄球菌以及該菌的含量。 ①配制培養(yǎng)基：稱取適量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等，加入蒸餾水，攪拌加熱至完全溶解后____________，分裝到錐形瓶后利用_____

8、___________進(jìn)行滅菌，在無菌狀態(tài)下加入卵黃液(100 mL 10%滅菌NaCl溶液中加一個(gè)雞蛋黃，振蕩均勻)搖勻后立即倒平板。 ②接種：該小組采用涂布分離法檢測(cè)果汁樣品中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是__________________________；然后，將1 mL果汁樣品稀釋10倍，在3個(gè)平板上用涂布分離法分別接入0.1 mL稀釋液。 ③培養(yǎng)及結(jié)果：將培養(yǎng)皿____________放入恒溫培養(yǎng)箱中經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為19、18和17。據(jù)此可得出每升果汁樣品中的活菌數(shù)為__________個(gè)。 (2)示

9、意圖A和B中____________表示的是用涂布分離法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。 (3)下列有關(guān)常用涂布分離法的操作正確的是________。 A．在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行接種時(shí)應(yīng)關(guān)閉紫外燈 B．接種前需先稀釋，然后過濾除去雜菌 C．在每個(gè)固體培養(yǎng)基表面都可形成單菌落 D．玻璃刮刀浸泡在70%的酒精中滅菌，不用灼燒 (4)菌種保存：在無菌條件下將單菌落用接種環(huán)取出，再用劃線法接種在________上，在37 ℃下培養(yǎng)24 h后，置于4 ℃冰箱中保存。 答案　(1)①調(diào)節(jié)pH　高壓蒸汽滅菌鍋?、跈z測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格?、鄣怪谩?.8×106　(2)B　(3)A　(4)斜面 解析　

10、(1)①培養(yǎng)基配制好后應(yīng)調(diào)節(jié)酸堿度(pH)，分裝到錐形瓶后利用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌。②涂布接種前，將制好的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間，目的是檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；③接種后，培養(yǎng)皿需要倒置培養(yǎng)，防止皿蓋上凝集的水滴滴落造成污染；0.1 mL稀釋液(稀釋10倍)含細(xì)菌數(shù)約為18個(gè)，得出每升果汁含有活菌數(shù)1.8×106個(gè)。(2)圖中A為劃線分離得到的結(jié)果，B為涂布分離得到的結(jié)果。(3)在超凈工作臺(tái)進(jìn)行接種操作時(shí)應(yīng)關(guān)閉紫外燈，A正確；涂布分離前需稀釋，但不能過濾除菌，B錯(cuò)誤；稀釋度較大的溶液涂布分離不一定出現(xiàn)菌落，C錯(cuò)誤；玻璃刮刀浸泡后需要灼燒，D錯(cuò)誤。(4)純化的菌種保存在斜面上。 2．下圖為

11、“大腸桿菌的培養(yǎng)和分離”實(shí)驗(yàn)的基本流程，請(qǐng)回答下列問題： ―→―→C.擴(kuò)大培養(yǎng)(液體培養(yǎng)基)―→ D.劃線分離和培養(yǎng)(固體培養(yǎng)基)―→ (1)A過程配制的是通用細(xì)菌培養(yǎng)基，稱為____________培養(yǎng)基。配制時(shí)除了加入特定的營養(yǎng)物質(zhì)以外，還要加入一定量的氯化鈉，以維持一定的__________________。對(duì)培養(yǎng)基酸堿度的調(diào)節(jié)，應(yīng)該在B過程的________(填“前面”或“后面”)。 (2)D過程與C過程相比，培養(yǎng)基中增加的物質(zhì)是____________，E過程所需的溫度是_______。 (3)D過程后，一個(gè)菌體便會(huì)形成一個(gè)______________，這種分離方法是___

12、_________的通用方法，也是篩選特定菌株的最簡(jiǎn)便方法之一。 (4)植物組織培養(yǎng)時(shí)，先配制MS培養(yǎng)基，再加入一定比例的植物激素，當(dāng)生長(zhǎng)素相對(duì)較多時(shí)，可促進(jìn)________________________________________________________________________。 (5)植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)都需要無菌操作，下列不適宜用高壓蒸汽滅菌的是(　　) A．接種環(huán)和鑷子 B．三角瓶和廣口瓶 C．發(fā)芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基 D．用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽 答案　(1)LB液體　滲透壓　前面　(2)瓊脂　4 ℃　(3)(單)菌落　消除污染雜菌(或純化菌種)　(

13、4)生根　(5)D 解析　(1)LB液體培養(yǎng)基是通用的細(xì)菌培養(yǎng)基，LB固體平面培養(yǎng)基則用于劃線分離形成單菌落。氯化鈉的作用是維持培養(yǎng)基的滲透壓。調(diào)節(jié)好酸堿度后才能進(jìn)行滅菌，若滅菌后再進(jìn)行酸堿度調(diào)節(jié)，又會(huì)產(chǎn)生新的污染。(2)在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入一定量的瓊脂可形成固體培養(yǎng)基。菌種應(yīng)置于4 °C冰箱中保存。(3)通過劃線分離后，一個(gè)菌體就會(huì)繁殖出一個(gè)菌落。(4)植物組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)素相對(duì)較多時(shí)，有利于生根，而細(xì)胞分裂素相對(duì)較多時(shí)，則有利于生芽。(5)高壓蒸汽滅菌常用于培養(yǎng)基、培養(yǎng)器材等的滅菌，而用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽則不能進(jìn)行任何滅菌操作，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。 3．(2017·嘉興期末)下列是有

14、關(guān)大腸桿菌的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答問題： (1)配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時(shí)，根據(jù)“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和__________作為營養(yǎng)物質(zhì)，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的________________。 (2)大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實(shí)驗(yàn)中，在____________中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)________后，在LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行________，并將培養(yǎng)皿____________放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以獲得如圖效果。為了檢測(cè)接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及________________，應(yīng)同時(shí)將未接種的培養(yǎng)基放入相同條件的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 (3)通

15、常對(duì)獲得的純菌種可以依據(jù)________的形狀、大小等特征進(jìn)行初步的鑒定。 (4)下列關(guān)于“大腸桿菌培養(yǎng)和分離”的操作中，敘述正確的是(　　) A．高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋 B．倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C．為了防止污染，接種工具經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落 D．用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上 答案　(1)酵母提取物　NaCl　(2)LB液體培養(yǎng)基　稀釋　分離　倒置　無菌操作是否規(guī)范　(3)菌落　(4)D 解析　(1)配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時(shí)，根據(jù)“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白

16、胨和酵母提取物作為營養(yǎng)物質(zhì)，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的NaCl。(2)大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實(shí)驗(yàn)中，在LB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)稀釋后，在LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行分離，并將培養(yǎng)皿倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；為了檢測(cè)接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及無菌操作是否規(guī)范，應(yīng)同時(shí)將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(3)通常對(duì)獲得的純菌種可以依據(jù)菌落的形狀、大小等特征進(jìn)行初步的鑒定。(4)高壓滅菌加熱結(jié)束，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能直接打開放氣閥使壓力表指針回到零，A錯(cuò)誤；倒平板過程中不能打開培養(yǎng)皿的皿蓋，以防止雜菌污染，B錯(cuò)誤；接種環(huán)在火焰上灼燒后，待冷卻后才可以快速挑取

17、菌落，C錯(cuò)誤；用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上，D正確。 培養(yǎng)基的成分和類型 (1)培養(yǎng)基成分：一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。 (2)培養(yǎng)基的類型及其應(yīng)用 劃分標(biāo)準(zhǔn) 培養(yǎng)基種類 特點(diǎn) 用途 物理性質(zhì) 液體培養(yǎng)基 不加凝固劑 工業(yè)生產(chǎn) 半固體培養(yǎng)基 加凝固劑，如瓊脂 觀察微生物的運(yùn)動(dòng)及微生物的分類、鑒定 固體培養(yǎng)基 加凝固劑，如瓊脂 微生物的分離、鑒定及活菌計(jì)數(shù) 目的用途 選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)、促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng) 特

18、定微生物的培養(yǎng)、分離 鑒別培養(yǎng)基 根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品 不同種類的微生物的鑒別 考點(diǎn)二　分離以尿素為氮源的微生物 1．菌種特點(diǎn) 含有脲酶，可以通過降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。 2．培養(yǎng)基 用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基培養(yǎng)，以LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基為對(duì)照。 3．實(shí)驗(yàn)原理 (1)篩選以尿素為氮源的微生物，可使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)選擇。 (2)細(xì)菌合成的脲酶能將尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚紅指示劑變紅。 4．實(shí)驗(yàn)步驟 5．反應(yīng)的鑒定 在配制培養(yǎng)基時(shí)，加入指示劑酚紅，培養(yǎng)時(shí)細(xì)菌將尿素分解并產(chǎn)生堿性的氨，使培養(yǎng)基

19、上菌落周圍出現(xiàn)紅色的環(huán)帶。 思考討論 1．分析下表所示培養(yǎng)基的配方，回答下列問題。 成分 含量 成分 含量 KH2PO4 1.4 g 葡萄糖 10.0 g Na2HPO4 2.1 g 尿素 1.0 g MgSO4·7H2O 0.2 g 瓊脂糖 15.0 g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL (1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物提供碳源的物質(zhì)是葡萄糖，提供氮源的物質(zhì)是尿素。 (2)該培養(yǎng)基是(填“是”或“否”)具有選擇作用，因?yàn)橹挥心芊纸饽蛩氐奈⑸锊拍苌L(zhǎng)。 (3)用瓊脂糖代替瓊脂配制固體培養(yǎng)基的原因是什么？ 提示　瓊脂是未被

20、純化的混合物，內(nèi)含一定量的含氮化合物。如果用瓊脂固體培養(yǎng)基，會(huì)為細(xì)菌提供一定量的非尿素類氮源，這樣會(huì)在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)生大量以非尿素為氮源的細(xì)菌，所以用經(jīng)純化的瓊脂糖做固化劑。 2．如圖為分離以尿素為氮源的微生物的實(shí)驗(yàn)，思考回答下列問題： (1)實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖鞘褂煤心蛩氐呐囵B(yǎng)基分離能產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌，使用酚紅作為指示劑。 (2)有脲酶的細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)有色環(huán)帶的原因是什么？ 提示　細(xì)菌向胞外分泌脲酶，使培養(yǎng)基中尿素水解產(chǎn)生呈堿性的氨，遇培養(yǎng)基中的酚紅指示劑產(chǎn)生顏色變化，形成紅色環(huán)帶。 (3)制備尿素固體培養(yǎng)基的過程中采用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌法、G6玻璃砂漏斗過濾法。 (4)與

21、全營養(yǎng)培養(yǎng)基相比，尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落的原因是什么？ 提示　土壤中能利用尿素的細(xì)菌占極少數(shù)。因?yàn)槿撕推渌溉閯?dòng)物產(chǎn)生的排泄物畢竟是少量的，此外尿素還可以在高溫下自然分解，因此，以尿素為氮源的菌群較少。 (5)從上圖所示實(shí)驗(yàn)過程中可判斷出細(xì)菌懸液C的稀釋度為10－4，用涂布分離法分離細(xì)菌。 3．判斷下列敘述的正誤 (1)土樣應(yīng)從有哺乳動(dòng)物排泄物的地方取(　√　) 提示　有哺乳動(dòng)物排泄物的地方含脲酶的細(xì)菌較多。 (2)取10－4、10－5的土壤稀釋液各0.1 mL，分別涂布于全營養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基、尿素固體培養(yǎng)基上(　√　) (3)將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37 °C恒溫培養(yǎng)24～

22、48 h(　√　) (4)在尿素固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌都是以尿素為氮源的細(xì)菌(　×　) 4．海洋發(fā)生石油泄漏事件后，可用一些微生物有效分解石油，如何配制選擇培養(yǎng)基將這類微生物選擇出來？ 提示　配制的選擇培養(yǎng)基中，石油作為唯一的碳源，然后用這種培養(yǎng)基培養(yǎng)多種微生物，凡是能在該種培養(yǎng)基上生存的就是能分解石油的微生物。 1．(2017·紹興市魯迅高級(jí)中學(xué)期中質(zhì)檢)回答下列問題： 尿素是一種高濃度氮肥，且長(zhǎng)期施用沒有不良影響，但尿素只有通過土壤中某些細(xì)菌的分解作用，才能被植物吸收利用。某同學(xué)要分離出土壤中能分解尿素的細(xì)菌，并嘗試進(jìn)行計(jì)數(shù)，培養(yǎng)基配方如下： K2HPO4 NaCl H

23、2O 葡萄糖 尿素 酚紅 瓊脂 0.12 g 0.12 g 15 mL 0.025 g 2.0 g 0.25 mg 0.5 g (1)上述培養(yǎng)基配制完成后，應(yīng)選擇________________法滅菌，根據(jù)培養(yǎng)基的成分推斷，該同學(xué)能否分離出土壤中只分解尿素的細(xì)菌？________(填“能”或“否”)，推斷理由是________________________________________________________________________。 (2)分離得到分解尿素的細(xì)菌后，則應(yīng)選擇____________培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。培養(yǎng)一段時(shí)間后，要借助顯微

24、鏡對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)過程中，下列哪種行為會(huì)影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性____________。 A．計(jì)數(shù)時(shí)直接從靜置培養(yǎng)的試管底部取培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù) B．如果方格內(nèi)微生物細(xì)胞數(shù)量多于300個(gè)，應(yīng)將培養(yǎng)液先稀釋后再計(jì)數(shù) C．如果微生物細(xì)胞有粘連，要數(shù)出團(tuán)塊中的每一個(gè)細(xì)胞 D．壓在方格線上的細(xì)胞只計(jì)左線和上線上的細(xì)胞數(shù) (3)為了提高尿素肥效，可以將分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”。為了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用________________技術(shù)。 答案　(1)高壓蒸汽滅菌　否　瓊脂是未純化的混合物，內(nèi)含一定量的含氮化合物，導(dǎo)致尿素不是唯一的氮源 (2)液體　A　(3

25、)固定化酶 解析　(1)高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫的物品，如培養(yǎng)基、金屬器械、玻璃等，題述培養(yǎng)基配制完成后，應(yīng)選擇高壓蒸汽滅菌；該同學(xué)不能分離出土壤中只分解尿素的細(xì)菌，因?yàn)榄傊俏醇兓幕旌衔?，?nèi)含一定量的含氮化合物，導(dǎo)致尿素不是唯一的氮源。(2)應(yīng)選擇液體培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；由于重力作用，試管底部培養(yǎng)液中細(xì)菌種群密度較大，應(yīng)將培養(yǎng)液搖勻后進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)為了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用固定化酶技術(shù)，使酶與尿素分開，可重復(fù)利用。 2．(2016·浙江10月選考)請(qǐng)回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細(xì)菌和脲酶固定化實(shí)驗(yàn)的有關(guān)問題： (1)LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入

26、一定量的蒸餾水溶解，再加___________，滅菌備用。 (2)尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用____________________滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因?yàn)镚6玻璃砂漏斗________________________，故用于過濾除菌。然后將尿素溶液加入到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。 (3)取適量含產(chǎn)脲酶細(xì)菌的10－4、10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48 h，推測(cè)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)最少的是____________。 (A.10－5稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基　B．10－5稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基　C．10－4稀釋液

27、＋尿素固體培養(yǎng)基　D．10－4稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基)。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)________，其原因是細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生________所致。 (4)制備固定化脲酶時(shí)，用石英砂吸附脲酶，裝柱。再用蒸餾水洗滌固定化酶柱，其作用是________________________________________________________________________。 答案　(1)瓊脂　(2)高壓蒸汽　孔徑小，細(xì)菌不能濾過 (3)A　紅色環(huán)帶　氨(或NH3)　(4)除去游離的脲酶 解析　(1)固體培養(yǎng)基中需添加瓊脂起到凝固的作用。(2)因?yàn)镚6玻璃砂漏

28、斗中存在雜菌，所以在其過濾除菌之前需進(jìn)行高壓蒸汽滅菌；G6玻璃砂漏斗能過濾除菌的原理是其孔徑較小，細(xì)菌不能通過。(3)土壤中的微生物在LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基中都能生長(zhǎng)，在尿素固體培養(yǎng)基中只有能利用尿素的微生物能生長(zhǎng)，10－4土壤稀釋液中微生物數(shù)量較多，所以推測(cè)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)最少的是10－5＋尿素固體培養(yǎng)基；在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶的細(xì)菌菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是因?yàn)榧?xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生了氨(NH3)，導(dǎo)致培養(yǎng)基呈堿性，培養(yǎng)基中的酚紅遇堿性條件會(huì)變紅。(4)并不是所有的脲酶都吸附在石英砂上，所以裝柱后需用蒸餾水洗滌固定化酶柱，以洗去多余的未吸附的脲酶。 3．如圖是從土壤中篩選產(chǎn)

29、脲酶細(xì)菌的過程。 (1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以__________為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加__________作為指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周圍的指示劑將變成________色。 (2)在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液0.1 mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。 該過程采取的接種方法是____________，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為________×108個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較________。 答案　(1)尿素　酚紅　紅　(2)涂布分離法

30、　1.75　少 解析　(1)脲酶能夠催化尿素分解為氨，故圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成了氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，使酚紅指示劑變紅色。(2)用于計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)的接種方法是涂布分離法，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)應(yīng)介于30～300之間，故選擇細(xì)菌菌落數(shù)為156、178和191的平板計(jì)數(shù)，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為(156＋178＋191)/3÷0.1×105＝1.75×108個(gè)。由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連接在一起時(shí)，往往統(tǒng)計(jì)的是一個(gè)菌落，故用此方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)偏少。 1．培養(yǎng)基中觀測(cè)指標(biāo)的分析 (1)培養(yǎng)基中的酚紅指示劑產(chǎn)生顏色變化(變紅)，標(biāo)志著存在脲酶水解尿素的作用，從

31、而證明這一菌株能以尿素為氮源。紅色環(huán)狀區(qū)域的大小代表脲酶活性的強(qiáng)弱和含量的多少。紅色區(qū)域越大，表明菌株利用尿素的能力越強(qiáng)。 (2)與全營養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)比較，尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落，這一現(xiàn)象表明能利用尿素的細(xì)菌在土壤菌群中只占極少部分。 2．微生物篩選過程中必要的兩種對(duì)照培養(yǎng)基及其作用 對(duì)照組 作用 現(xiàn)象 結(jié)論 未接種培養(yǎng)基 有無雜菌污染的判斷 未接種的培養(yǎng)皿中無菌落生長(zhǎng) 未被雜菌污染 接種的LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基篩選作用的確認(rèn) LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目 選擇培養(yǎng)基具有篩選作用 3.樣品稀釋的原因和標(biāo)準(zhǔn) (1)稀釋原因：樣品

32、的稀釋度直接影響平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)。在適當(dāng)?shù)南♂尪认?，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。因此，恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)的關(guān)鍵。 (2)稀釋標(biāo)準(zhǔn)：選用一定范圍的樣品稀釋液進(jìn)行培養(yǎng)，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板計(jì)數(shù)。 模擬演練 1．下圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5。下列操作方法正確的是(　　) A．操作前要將接種環(huán)放在火焰旁滅菌 B．劃線操作須在火焰上進(jìn)行 C．在5區(qū)域中才有可能得到所需菌落 D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌 答案　D 解析　操作前要將接種環(huán)放在火焰上灼燒滅

33、菌，A項(xiàng)錯(cuò)誤；劃線操作須在火焰旁進(jìn)行，B項(xiàng)錯(cuò)誤；在5區(qū)域中最有可能得到所需菌落，C項(xiàng)錯(cuò)誤；在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌，D項(xiàng)正確。 2．下列關(guān)于大腸桿菌的培養(yǎng)的敘述，不正確的是(　　) A．在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮pH、溫度和滲透壓等條件 B．若對(duì)大腸桿菌活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品的稀釋度合適 C．在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行消毒 D．使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄 答案　C 解析　微生物培養(yǎng)條件有營養(yǎng)條件、pH、溫度

34、、滲透壓等，A正確；為計(jì)數(shù)活菌數(shù)，要多次實(shí)驗(yàn)求平均值、操作要嚴(yán)格，還要保證樣品的稀釋度合適，便于檢測(cè)，B正確；為防止雜菌污染，對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進(jìn)行滅菌，C錯(cuò)誤；為防止對(duì)環(huán)境的污染，用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，D正確。 3．下圖是“分離以尿素為氮源的微生物”實(shí)驗(yàn)的基本流程，請(qǐng)回答下列問題： (1)該實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基不能含有____________。 A．尿素 B．氯化鈉 C．葡萄糖 D．瓊脂 (2)尿素溶液可用____________________使之無菌。若要檢查B過程滅菌是否徹底，可以采用的方法是___________________________

35、_______________________。 (3)圖中步驟C為________________。相對(duì)于劃線分離法，過程D涂布分離法的優(yōu)點(diǎn)是__________________。 (4)如果菌落周圍出現(xiàn)____________色環(huán)帶，說明該菌落能分泌脲酶。 答案　(1)D　(2)G6玻璃砂漏斗過濾　將空白培養(yǎng)基放在適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察有無菌落出現(xiàn)　(3)倒平板　單菌落更易分開　(4)紅 解析　(1)分離以尿素為氮源的微生物，應(yīng)該以尿素為唯一氮源，所以不應(yīng)有瓊脂。(2)尿素用G6玻璃砂漏斗過濾除去其中的細(xì)菌等微生物。(4)若菌落能分泌脲酶，則菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶。 4．(

36、2017·寧波期末測(cè)試)石油烴是環(huán)境的重要污染源。為了篩選出具有強(qiáng)分解石油烴能力的微生物，進(jìn)行了一系列操作，請(qǐng)回答下列問題： (1)分解石油烴的微生物一般要從土壤中分離，獲取土壤樣品的取樣地點(diǎn)最好選在________________。 (2)微生物實(shí)驗(yàn)室采用________法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理。 A．干熱滅菌 B．過濾滅菌 C．灼燒滅菌 D．高壓蒸汽滅菌 (3)下圖為獲取土壤樣品后的培養(yǎng)研究過程： 為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①～④所用培養(yǎng)基的成分的特點(diǎn)是______________________，從而有利于分解石油烴的微生物的生長(zhǎng)。 (4)對(duì)④進(jìn)行

37、接種常采用的兩種方法分別是____________________和________________。 (5)若發(fā)現(xiàn)在⑤中無法區(qū)分菌落，可以將圖中③取出的菌液________________。 (6)若實(shí)驗(yàn)室為分離純化優(yōu)良菌種進(jìn)行了如下操作，排序最合理的是________。 A．②①④③ B．②①④①③② C．②①④②③② D．①④①③② (7)整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)的操作，一定要注意在________條件下進(jìn)行。 答案　(1)石油污染明顯處　(2)D　(3)以石油烴作為唯一碳源　(4)劃線分離法　涂布分離法　(5)進(jìn)行(梯度)稀釋　(6)B　(7)無菌 解析　(1)

38、分解石油烴的微生物在石油污染明顯處分布較多。(2)微生物實(shí)驗(yàn)室常用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基滅菌。(3)實(shí)驗(yàn)過程中，過程①～④所用培養(yǎng)基應(yīng)用石油烴作為唯一碳源，以抑制其他種類微生物的生長(zhǎng)，從而分離出以石油烴為碳源的微生物。(4)在微生物的分離實(shí)驗(yàn)中，常用劃線分離法或涂布分離法進(jìn)行接種。(5)若發(fā)現(xiàn)在⑤中無法區(qū)分菌落，可能是菌液中細(xì)菌濃度太高，可進(jìn)行梯度稀釋處理后再進(jìn)行接種。(6)圖示為用劃線分離法進(jìn)行接種分離。接種過程中應(yīng)先在酒精燈火焰上灼燒接種環(huán)后，蘸取菌液進(jìn)行接種，整個(gè)操作在酒精燈火焰旁進(jìn)行，接種結(jié)束后還須在酒精燈上灼燒接種環(huán)。(7)為避免污染，整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)的操作，一定要注意在無菌條

39、件下進(jìn)行。 課時(shí)訓(xùn)練 一、選擇題 1．下圖為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下列說法錯(cuò)誤的是(　　) A．①②③步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行 B．步驟①中，待倒入的培養(yǎng)基冷卻后蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋 C．步驟③中，每次劃線前后都需對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理 D．劃線接種結(jié)束后，將圖④平板倒置后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 答案　B 解析　由圖可知，步驟①是倒平板，步驟②是用接種環(huán)蘸取菌液，步驟③是進(jìn)行平板劃線，步驟④是培養(yǎng)。①②③步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止被雜菌污染，A項(xiàng)正確；倒完平板后應(yīng)立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，冷卻后將平板倒過來放置，B項(xiàng)錯(cuò)誤；每次劃線前后灼燒接種環(huán)

40、是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落，C項(xiàng)正確；劃線接種結(jié)束后，將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，有利于培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)和防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，D項(xiàng)正確。 2．尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培養(yǎng)基時(shí)(　　) A．葡萄糖在培養(yǎng)基中含量越多越好 B．尿素在培養(yǎng)基中含量越少越好 C．尿素分解菌有固氮能力，故培養(yǎng)基中的尿素為無機(jī)氮 D．尿素分解菌無固氮能力，故培養(yǎng)基中的尿素為有機(jī)氮 答案　D 解析　尿素既可以作為尿素分解菌的氮源，也可

41、以作為其碳源，葡萄糖在培養(yǎng)基中并不是越多越好，葡萄糖過多會(huì)使培養(yǎng)基的滲透壓過高，影響尿素分解菌的繁殖，A錯(cuò)誤；添加尿素的目的是篩選尿素分解菌，其他微生物不能很好地生活在該培養(yǎng)基上，尿素在培養(yǎng)基中不是越少越好，過少就失去了選擇作用，過多又會(huì)使細(xì)胞失水死亡，B錯(cuò)誤；尿素分解菌沒有固氮能力，故培養(yǎng)基中需要添加尿素為氮源，C錯(cuò)誤，D正確。 3．(2016·舟山中學(xué)期末測(cè)試)下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述中，不正確的是(　　) A．獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染 B．單菌落的分離是消除污染的雜菌的通用方法 C．培養(yǎng)基都必須使用高壓蒸汽滅菌法滅菌 D．倒置平板防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落 答案　C

42、 解析　微生物培養(yǎng)中獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染，A項(xiàng)正確；通?？梢圆捎猛坎挤蛛x法或劃線分離法進(jìn)行單菌落的分離，以消除污染的雜菌，B項(xiàng)正確；培養(yǎng)基通?？梢赃M(jìn)行高壓蒸汽滅菌，但對(duì)于培養(yǎng)基中有高溫易分解的成分，就不能用此方法，如培養(yǎng)基中的尿素等物質(zhì)，C項(xiàng)錯(cuò)誤；劃線接種結(jié)束后需要將培養(yǎng)皿倒置，以防止培養(yǎng)基蒸發(fā)冷凝成的水滴入培養(yǎng)基而造成污染，D項(xiàng)正確。 4．(2017·欽州期末)在做土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲組實(shí)驗(yàn)用氮源只含尿素的培養(yǎng)基，乙組實(shí)驗(yàn)用氮源除尿素外還含硝酸鹽的培養(yǎng)基，其他成分都相同，在相同條件下操作、培養(yǎng)與觀察，則乙組實(shí)驗(yàn)屬于(　　) A．空白對(duì)照 B．標(biāo)準(zhǔn)

43、對(duì)照 C．相互對(duì)照 D．條件對(duì)照 答案　D 解析　乙組和甲組實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)條件不同，形成了條件對(duì)照。 二、非選擇題 5．幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下： →→→→ 請(qǐng)回答下列問題： (1)在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有________，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會(huì)出現(xiàn)______色環(huán)帶。 (2)下列對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌的最適方法是__________滅菌。 A．高壓蒸汽 B．紫外燈照射 C．70%酒精浸泡 D．過濾 (3)步驟X表示

44、____________。在無菌條件下操作時(shí)，先將菌液稀釋，然后將菌液____________到培養(yǎng)基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得________菌落。 (4)在培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置并放在____________中，若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致_____________。 (5)臨床上用14C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標(biāo)記的________________分解為NH3和14CO2。 答案　(1)脲酶　紅　(2)D　(3)接種　涂布　單 (4)恒溫培養(yǎng)箱　無法形成單菌落　(5)尿素 解析　(1)幽門螺桿菌(Hp)含有脲酶，能以尿素為氮源，在加入尿素和酚紅指示

45、劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)Hp，由于尿素經(jīng)脲酶的降解可產(chǎn)生堿性的NH3，NH3能使培養(yǎng)基中的酚紅由紅黃色變成紅色，故菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶。(2)由于尿素加熱會(huì)分解，對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌最好用G6玻璃砂漏斗過濾。(3)微生物的分離和培養(yǎng)步驟：配制培養(yǎng)基→滅菌、倒平板→接種→培養(yǎng)。為獲得單菌落，接種操作前應(yīng)先將菌液稀釋，然后將菌液涂布到培養(yǎng)基平面上即可。(4)微生物培養(yǎng)時(shí)需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫培養(yǎng)箱中，若不倒置培養(yǎng)，則無法形成單菌落。(5)幽門螺桿菌能將14C標(biāo)記的尿素分解為NH3和14CO2，故臨床上常用14C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體內(nèi)幽門螺桿菌的存在。 6．(2017·寧波三中期末)飼養(yǎng)動(dòng)物常用的植物飼料中

46、含有難溶的植酸鈣等物質(zhì)，很難被動(dòng)物吸收利用，還影響對(duì)其他營養(yǎng)物質(zhì)的利用。若在飼料中添加植酸酶，則能催化其水解成為可以吸收利用的磷酸鹽等。以下是科研人員從作物根部土壤中分離出產(chǎn)植酸酶的菌株的過程示意圖。請(qǐng)分析作答： (1)為防止雜菌污染，要對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿等進(jìn)行__________________，而且須將接種后的培養(yǎng)皿呈________狀態(tài)放置。 (2)接種以前進(jìn)行的一系列操作，目的是在培養(yǎng)皿表面形成____________。根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋液的體積，統(tǒng)計(jì)平板上的________就能大致推測(cè)出樣品中的活菌數(shù)。 (3)由于植酸鈣的不溶解性，使培養(yǎng)基中形成白色渾濁。產(chǎn)植酸

47、酶的菌株會(huì)水解植酸鈣，菌落的周圍將形成透明的區(qū)域，根據(jù)透明區(qū)域的有無，可初步判斷該菌是否產(chǎn)植酸酶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示A～E五種菌株中，________是產(chǎn)植酸酶的最理想菌株。 (4)獲得目的菌以后，若要用于植酸酶的生產(chǎn)，還需要進(jìn)行________________。 答案　(1)(高壓蒸汽)滅菌　倒置　(2)單個(gè)菌落　菌落數(shù)　(3)E　(4)擴(kuò)大培養(yǎng) 解析　(1)為防止雜菌污染，要對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行(高壓蒸汽)滅菌處理，而且須將接種后的培養(yǎng)皿呈倒置狀態(tài)放置，以防止污染。(2)接種以前對(duì)樣品進(jìn)行稀釋的目的是在培養(yǎng)皿表面形成單個(gè)菌落；根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋液的體積，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能

48、大致推測(cè)出樣品中的活菌數(shù)。(3)根據(jù)題意，菌落體積越小，透明圈越大，說明產(chǎn)植酸酶越多，故E是產(chǎn)植酸酶的最理想菌株。(4)獲得目的菌后，若用于植酸酶的生產(chǎn)，還需要進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。 7．有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。請(qǐng)回答問題： (1)在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以________為唯一碳源的培養(yǎng)基上。從功能上講，該培養(yǎng)基屬于________(A.固體　B．液體　C．純化　D．選擇)培養(yǎng)基。 (2)純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即_________________。 (3)為了篩選

49、出高效菌株，可比較單菌落周圍透明圈的大小，透明圈越大說明該菌株的降解能力____________。 (4)通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、________和高壓蒸汽滅菌。無菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈________附近進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。 答案　(1)原油　D　(2)劃線分離法和涂布分離法 (3)越強(qiáng)　(4)干熱滅菌　火焰 解析　(1)可以將所需要的微生物從混雜的微生物群中分離出來的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基。欲篩選出能降解原油的菌株，培養(yǎng)基中應(yīng)只含有原油而無其他碳源，這樣不能降解原油的細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生存，可篩選出能分解原油的菌種。(2)

50、分離純化菌種時(shí)，接種的方法有劃線分離法和涂布分離法，其目的都是使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單菌落，以便于純化菌種。(3)降解原油能力越強(qiáng)的菌株，在菌落周圍形成的透明圈越大。(4)實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌(如接種環(huán))、干熱滅菌(如培養(yǎng)皿)和高壓蒸汽滅菌(如培養(yǎng)基)等。無菌技術(shù)要求整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作都要在酒精燈火焰附近進(jìn)行，以避免周圍微生物的污染。 8．(2016·金麗衢十校聯(lián)考)下表是3組生物實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基。請(qǐng)回答下列問題： 組別 培養(yǎng)基 a 無機(jī)鹽、蔗糖、維生素和甘氨酸等有機(jī)物、水、瓊脂 b 葡萄糖、NaCl、K2HPO4、尿素、酚紅、水、瓊脂糖 c

51、 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水、瓊脂 (1)分離以尿素為氮源的細(xì)菌應(yīng)選用培養(yǎng)基________。在含有脲酶的細(xì)菌菌落周圍會(huì)出現(xiàn)______________，這是由于尿素被分解產(chǎn)生的________使pH升高，酚紅指示劑產(chǎn)生顏色變化，從而證明這一菌株能以尿素為氮源。變色區(qū)域越大，表明該菌株利用尿素的能力________。 (2)用培養(yǎng)基a進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，則培養(yǎng)基中還需加入__________。一般先用__________(填“發(fā)芽”或“生根”)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，使之長(zhǎng)出較多的叢狀苗，然后將叢狀苗分株培養(yǎng)。 答案　(1)b　紅色環(huán)帶　氨　越強(qiáng)　(2)植物激素(植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑)　發(fā)芽

52、 解析　(1)分離以尿素為氮源的細(xì)菌應(yīng)選用以尿素為唯一氮源并添加酚紅指示劑的培養(yǎng)基。分解尿素的微生物可產(chǎn)生脲酶，脲酶可催化尿素分解產(chǎn)生氨，氨使酚紅指示劑變紅，從而在菌落周圍形成紅色環(huán)帶，形成的紅色環(huán)帶越大，表明該菌株利用尿素的能力越強(qiáng)。 (2)植物組織培養(yǎng)所需的MS培養(yǎng)基需加入植物激素。培養(yǎng)過程中一般先用發(fā)芽培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，使之長(zhǎng)出較多的叢狀苗，然后將叢狀苗分株培養(yǎng)，誘導(dǎo)生根。 9．有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長(zhǎng)期使用會(huì)污染環(huán)境，研究發(fā)現(xiàn)苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離能降解苯磺隆菌株的實(shí)驗(yàn)過程如下圖所示。請(qǐng)回答下列問題： (1)微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、___

53、_____、________四類，該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是___________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是________。在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次的末端開始劃線，這樣做的目的是____________________________________________________。 (3)若要檢測(cè)土樣中的細(xì)菌含量，應(yīng)采用________法

54、。 答案　(1)氮源　無機(jī)鹽　只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長(zhǎng)和繁殖 (2)接種環(huán)　將聚集的菌體逐步減少以便獲得單個(gè)菌落 (3)涂布分離 解析　(1)微生物生長(zhǎng)所需要的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、水和無機(jī)鹽。使用選擇培養(yǎng)基是因?yàn)檫x擇培養(yǎng)基上只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長(zhǎng)和繁殖，同時(shí)又能抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)。(2)劃線分離法接種時(shí)常使用接種環(huán)劃線。在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次的末端開始劃線。這樣做的目的是將聚集的菌體逐步減少以便獲得單個(gè)菌落。(3)涂布分離法常常用來進(jìn)行微生物的分離和計(jì)數(shù)。 10．某研究小組研究了不同濃度的土霉素(一種抗生素)對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的影響，實(shí)驗(yàn)

55、結(jié)果見圖1。 (1)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)大腸桿菌抑制作用最明顯的是濃度為________(圖1中數(shù)字)的土霉素。 (2)該實(shí)驗(yàn)中，接種大腸桿菌時(shí)所使用的接種方法是__________________，在培養(yǎng)和接種大腸桿菌時(shí)要特別注意進(jìn)行________操作。為更好地體現(xiàn)土霉素對(duì)大腸桿菌的抑制作用，實(shí)驗(yàn)中還應(yīng)增加一組____________作為空白對(duì)照。為了嚴(yán)格控制土霉素的劑量，對(duì)圓紙片的要求是__________。為減少實(shí)驗(yàn)誤差，每一濃度的土霉素還要制備________________。 (3)長(zhǎng)期大量使用土霉素容易引起大腸桿菌產(chǎn)生抗藥性，這一過程的實(shí)質(zhì)是大腸桿菌種群的_________

56、_______________發(fā)生了變化。 (4)該研究小組運(yùn)用上述實(shí)驗(yàn)方法研究了相同濃度的A、B、C三種不同抗生素對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的影響。請(qǐng)?jiān)趫D2中表示這一處理方案(可模仿圖1加以必要的注解)。 答案　(1)⑤　(2)涂布分離法　無菌　用無菌水浸泡的圓紙片　大小、質(zhì)地相同　多個(gè)圓紙片　(3)抗藥性基因頻率　(4)如圖所示 解析　(1)據(jù)圖1分析，⑤號(hào)圓紙片的抑菌圈最大，說明該濃度的土霉素對(duì)大腸桿菌抑制作用最明顯。(2)圖中接種大腸桿菌時(shí)所使用的接種方法是涂布分離法。接種和培養(yǎng)大腸桿菌的關(guān)鍵是無菌操作。該實(shí)驗(yàn)要遵循對(duì)照原則，故還應(yīng)該增加一組用無菌水浸泡的圓紙片作為空白對(duì)照。圓紙片的大小、質(zhì)地屬于無關(guān)變量，應(yīng)該相同或一致。為減少實(shí)驗(yàn)誤差，每一濃度的土霉素還要制備多個(gè)圓紙片進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。(3)長(zhǎng)期大量使用土霉素容易引起大腸桿菌產(chǎn)生抗藥性，這一過程的實(shí)質(zhì)是大腸桿菌種群發(fā)生進(jìn)化，其抗藥性基因頻率發(fā)生了變化。(4)該方案的自變量為相同濃度的A、B、C三種不同抗生素，注意在圖中要標(biāo)記清楚，具體圖解見答案。 20