《高中生物 專題2課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)精講導(dǎo)學(xué)課件 新人教版選修1》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《高中生物 專題2課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)精講導(dǎo)學(xué)課件 新人教版選修1（36頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。
1、課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)一、篩選菌株的思路一、篩選菌株的思路1.1.自然界中目的菌株的篩選：自然界中目的菌株的篩選：(1)(1)依據(jù)：根據(jù)它對依據(jù)：根據(jù)它對_的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。(2)(2)實例：實例：PCRPCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的技術(shù)過程中用到的耐高溫的_，就，就是從熱泉中篩選出來的是從熱泉中篩選出來的TaqTaq細(xì)菌中分離出來的。細(xì)菌中分離出來的。生存環(huán)境生存環(huán)境TaqTaq DNA DNA聚合酶聚合酶2.2.實驗室中目的菌株的篩選實驗室中目的菌株的篩選: :(1)(1)原理：人為提供有利于原理：人為提供有利于_生長的條件生長的
2、條件( (包括營養(yǎng)、包括營養(yǎng)、溫度、溫度、pHpH等等) )，同時抑制或阻止其他微生物生長。，同時抑制或阻止其他微生物生長。(2)(2)方法：利用方法：利用_分離。分離。選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許_種類的微生物生種類的微生物生長，同時長，同時_或或_其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基。擇培養(yǎng)基。選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基特點：選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基特點：_是唯一氮源，按是唯一氮源，按物理性質(zhì)歸類為物理性質(zhì)歸類為_。目的菌株目的菌株選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基特定特定抑制抑制阻止阻止尿素尿素固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基二、統(tǒng)計菌
3、落數(shù)目的方法和注意事項二、統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法和注意事項1.1.常用方法：稀釋涂布平板法。常用方法：稀釋涂布平板法。(1)(1)統(tǒng)計依據(jù)：統(tǒng)計依據(jù)：當(dāng)樣品的當(dāng)樣品的_足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個來源于樣品稀釋液中的一個_。通過統(tǒng)計平板上的通過統(tǒng)計平板上的_來推測樣品中大約含有的活菌數(shù)。來推測樣品中大約含有的活菌數(shù)。 稀釋度稀釋度活菌活菌菌落數(shù)菌落數(shù)(2)(2)計算公式：每克樣品中的計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)菌株數(shù)=_=_。C C：代表某一稀釋度下平板上生長的：代表某一稀釋度下平板上生長的_。V V：代表涂布平板時所用的稀釋液的
4、：代表涂布平板時所用的稀釋液的_。M M：代表：代表_。(3)(3)注意事項：注意事項：一般選擇菌落數(shù)在一般選擇菌落數(shù)在_的平板進(jìn)行計數(shù)。的平板進(jìn)行計數(shù)。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目_。統(tǒng)計結(jié)果一般用統(tǒng)計結(jié)果一般用_而不是用而不是用_來表示。來表示。設(shè)置對照：主要目的是排除實驗組中設(shè)置對照：主要目的是排除實驗組中_對實驗結(jié)對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。(C(CV)V)M M平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)體積體積稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)3030300300低低菌落數(shù)菌落數(shù)活菌數(shù)活菌數(shù)非測試因素非測試因素2.2.其他方法其他方法利用利用_
5、直接計數(shù)直接計數(shù)濾膜法濾膜法顯微鏡顯微鏡三、實驗設(shè)計三、實驗設(shè)計1.1.土壤取樣：土壤取樣：(1)(1)取樣原因：土壤有取樣原因：土壤有“_”_”之稱。同其他之稱。同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物，數(shù)量生物環(huán)境相比，土壤中的微生物，數(shù)量_，種類，種類_。(2)(2)土壤要求：富含土壤要求：富含_，pHpH接近接近_且潮濕。且潮濕。(3)(3)取樣部位：距地表約取樣部位：距地表約_的土壤層。的土壤層。 微生物的天然培養(yǎng)基微生物的天然培養(yǎng)基最大最大最多最多有機(jī)質(zhì)有機(jī)質(zhì)3 cm3 cm8 cm8 cm中性中性2.2.樣品稀釋：樣品稀釋：(1)(1)稀釋原因：樣品的稀釋原因：樣品的_直接影響平板上生
6、長的直接影響平板上生長的_。(2)(2)稀釋標(biāo)準(zhǔn)：選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，保證獲稀釋標(biāo)準(zhǔn)：選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，保證獲得菌落數(shù)在得菌落數(shù)在_之間，便于計數(shù)。之間，便于計數(shù)。(3)(3)稀釋倍數(shù)：稀釋倍數(shù)：測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用10104 4、10105 5和和10106 6倍的稀釋液倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。進(jìn)行平板培養(yǎng)。測定放線菌的數(shù)量，一般選用測定放線菌的數(shù)量，一般選用_倍稀釋。倍稀釋。測定真菌的數(shù)量，一般選用測定真菌的數(shù)量，一般選用_倍稀釋。倍稀釋。稀釋程度稀釋程度菌落菌落數(shù)目數(shù)目303030030010103 3、10104 4
7、和和10105 510102 2、10103 3和和10104 43.3.微生物的培養(yǎng)與觀察：微生物的培養(yǎng)與觀察：(1)(1)培養(yǎng)：不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)培養(yǎng)：不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)_和培和培養(yǎng)養(yǎng)_。(2)(2)觀察：每隔觀察：每隔_統(tǒng)計一次統(tǒng)計一次_數(shù)目，最后選取菌落數(shù)目數(shù)目，最后選取菌落數(shù)目_時的記錄作為結(jié)果。時的記錄作為結(jié)果。4.4.細(xì)菌的計數(shù)：當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，取同一細(xì)菌的計數(shù)：當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，取同一_下的下的3 3個平個平板進(jìn)行計數(shù)，求出板進(jìn)行計數(shù)，求出_，并根據(jù)所對應(yīng)的，并根據(jù)所對應(yīng)的_計算出樣計算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。品中細(xì)菌的數(shù)目。溫度溫度時間時間2
8、4 h24 h菌落菌落穩(wěn)定穩(wěn)定稀釋度稀釋度平均值平均值稀釋度稀釋度四、操作提示四、操作提示1.1.無菌操作：無菌操作：(1)(1)取土樣的用具在使用前都需要取土樣的用具在使用前都需要_。(2)(2)應(yīng)在應(yīng)在_旁稱取土壤，并在火焰附近將稱好的土樣倒入錐旁稱取土壤，并在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好形瓶中，塞好_。(3)(3)在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在_旁操作。旁操作。2.2.做好標(biāo)記：本實驗使用的平板和試管比較多。為避免混淆，做好標(biāo)記：本實驗使用的平板和試管比較多。為避免混淆，最好使用前就做好最好使用前就做好_。滅菌滅菌火焰火焰棉塞棉塞火焰火
9、焰標(biāo)記標(biāo)記3.3.制定計劃：對于耗時較長的生物實驗，要事先制定計劃：對于耗時較長的生物實驗，要事先_，以便提高工作效率。以便提高工作效率。4.4.菌種鑒定：細(xì)菌合成的菌種鑒定：細(xì)菌合成的_將尿素分解成將尿素分解成_，使培養(yǎng)基的，使培養(yǎng)基的堿性堿性_。在以。在以_為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入_指示指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，若指示劑變劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，若指示劑變_，可初步鑒定該種細(xì)菌，可初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。能夠分解尿素。 制定計劃制定計劃脲酶脲酶氨氨增強增強尿素尿素酚紅酚紅紅紅【思考辨析【思考辨析】1.1.判斷正誤判斷正誤(1)(1)選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為液體培
10、養(yǎng)基。選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基。( ( ) )【分析【分析】選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，固體選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基具有分離、鑒定作用。培養(yǎng)基具有分離、鑒定作用。(2)(2)統(tǒng)計菌落數(shù)目時為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)目最統(tǒng)計菌落數(shù)目時為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)目最多的平板進(jìn)行統(tǒng)計。多的平板進(jìn)行統(tǒng)計。( ( ) )【分析【分析】統(tǒng)計菌落數(shù)目時為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)統(tǒng)計菌落數(shù)目時為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在在3030300300的平板進(jìn)行統(tǒng)計。的平板進(jìn)行統(tǒng)計。 (3)(3)統(tǒng)計菌落數(shù)目時，統(tǒng)計的菌落數(shù)就是活菌的實際數(shù)目。統(tǒng)計菌落
11、數(shù)目時，統(tǒng)計的菌落數(shù)就是活菌的實際數(shù)目。 ( ( ) )【分析【分析】由于當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的由于當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，所以統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。只是一個菌落，所以統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。(4)(4)設(shè)置對照的目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的設(shè)置對照的目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。影響，提高實驗結(jié)果的可信度。( ( ) )2.2.問題思考問題思考(1)(1)統(tǒng)計菌落數(shù)目的理論依據(jù)是什么？統(tǒng)計菌落數(shù)目的理論依據(jù)是什么？提示：提示：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的
12、一個菌落，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。來源于樣品稀釋液中的一個活菌。(2)(2)為什么要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果？為什么要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果？提示：提示：盡量縮小統(tǒng)計的菌落數(shù)與實際活菌數(shù)的差值。盡量縮小統(tǒng)計的菌落數(shù)與實際活菌數(shù)的差值。一、培養(yǎng)基的類型及應(yīng)用一、培養(yǎng)基的類型及應(yīng)用依據(jù)依據(jù)培養(yǎng)基類型培養(yǎng)基類型配制特點配制特點主要應(yīng)用主要應(yīng)用物理物理性質(zhì)性質(zhì)固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多加入瓊脂較多菌種分離、鑒定、菌種分離、鑒定、計數(shù)計數(shù)半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少加入瓊脂較少菌種保存菌種保存液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基不加
13、瓊脂不加瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)依據(jù)依據(jù)培養(yǎng)基類型培養(yǎng)基類型配制特點配制特點主要應(yīng)用主要應(yīng)用化學(xué)化學(xué)組成組成合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基由已知成分配制由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成而成，培養(yǎng)基成分明確分明確菌種分類、鑒定菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基由天然成分配制由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成而成，培養(yǎng)基成分不明確分不明確工業(yè)生產(chǎn)，降低工業(yè)生產(chǎn)，降低成本成本目的目的用途用途鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑添加某種指示劑或化學(xué)藥劑或化學(xué)藥劑菌種的鑒別菌種的鑒別選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基添加添加( (或缺少或缺少) )某某種化學(xué)成分種化學(xué)成分菌種的分離菌種的分離 【易錯提醒【易錯提醒】(1)(
14、1)選擇培養(yǎng)基不一定是在培養(yǎng)基中加入某種成選擇培養(yǎng)基不一定是在培養(yǎng)基中加入某種成分，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生分，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。其實培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分的缺少或未加入特定化學(xué)成分時，長。其實培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分的缺少或未加入特定化學(xué)成分時，也可達(dá)到分離微生物的目的。也可達(dá)到分離微生物的目的。(2)(2)能夠在固體培養(yǎng)基上生長的微生物不一定是實驗所需要的能夠在固體培養(yǎng)基上生長的微生物不一定是實驗所需要的微生物，因為有些微生物可利用其他微生物的代謝產(chǎn)物進(jìn)行生微生物，因為有些微生物可利用其他微生物的代謝產(chǎn)物進(jìn)行生長繁殖。長繁殖。 【典例訓(xùn)練
15、【典例訓(xùn)練1 1】下面為一培養(yǎng)基配方，請根據(jù)下表回答問題。下面為一培養(yǎng)基配方，請根據(jù)下表回答問題。編號編號成分成分含量含量KHKH2 2POPO4 41.4 g1.4 gNaNa2 2HPOHPO4 42.1 g2.1 gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2 g0.2 g葡萄糖葡萄糖10.0 g10.0 g尿素尿素1.0 g1.0 g瓊脂瓊脂15.0 g15.0 g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL1 000 mL。(1)(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物提供碳源的是在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物提供碳源的是_，提供氮源的是提供氮源的是
16、_。(2)(2)絕大多數(shù)微生物都能利用絕大多數(shù)微生物都能利用_，但只有能合成脲，但只有能合成脲酶的微生物才能分解酶的微生物才能分解_。(3)(3)分析該培養(yǎng)基的配方，該培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作分析該培養(yǎng)基的配方，該培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？【解題關(guān)鍵【解題關(guān)鍵】解答本題應(yīng)明確兩點：解答本題應(yīng)明確兩點：(1)(1)培養(yǎng)基中特殊成分與培養(yǎng)基用途的相關(guān)性。培養(yǎng)基中特殊成分與培養(yǎng)基用途的相關(guān)性。(2)(2)該培養(yǎng)基對微生物起選擇作用的原理。該培養(yǎng)基對微生物起選擇作用的原理。【解析【解析】碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的
17、物質(zhì)，碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)，所以碳源、氮源分別是葡萄糖和尿素。絕大多數(shù)微生物都能利所以碳源、氮源分別是葡萄糖和尿素。絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這用葡萄糖，但只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這種培養(yǎng)基對微生物有選擇作用。選擇原則是只有能利用尿素的種培養(yǎng)基對微生物有選擇作用。選擇原則是只有能利用尿素的微生物才能生長。微生物才能生長。答案：答案：(1)(1)葡萄糖葡萄糖 尿素尿素 (2)(2)葡萄糖葡萄糖 尿素尿素(3)(3)該培養(yǎng)基對微生物具有選擇作用。以尿素作為唯一氮源的該培養(yǎng)基對微生物具有選擇作用。以尿素作為唯一氮
18、源的培養(yǎng)基可以分離出能產(chǎn)生脲酶的微生物。培養(yǎng)基可以分離出能產(chǎn)生脲酶的微生物?！咀兪接?xùn)練【變式訓(xùn)練】用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需要用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需要設(shè)置的對照是設(shè)置的對照是( )( )A.A.未接種的選擇培養(yǎng)基未接種的選擇培養(yǎng)基B.B.未接種的牛肉膏蛋白胨未接種的牛肉膏蛋白胨( (全營養(yǎng)全營養(yǎng)) )培養(yǎng)基培養(yǎng)基C.C.接種的牛肉膏蛋白胨接種的牛肉膏蛋白胨( (全營養(yǎng)全營養(yǎng)) )培養(yǎng)基培養(yǎng)基D.D.接種的選擇培養(yǎng)基接種的選擇培養(yǎng)基【解析【解析】選選C C。將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)。將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多
19、于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照。對照遵循的原則是單一變量，以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照。對照遵循的原則是單一變量，所以與選擇培養(yǎng)基一樣接種、培養(yǎng)。所以與選擇培養(yǎng)基一樣接種、培養(yǎng)。二、實驗過程二、實驗過程1.1.菌株計數(shù)：微生物生長量的測定有計數(shù)法、重量法、生理指菌株計數(shù)：微生物生長量的測定有計數(shù)法、重量法、生理指標(biāo)法等，但是一般使用計數(shù)法，計數(shù)法可分為直接計數(shù)法和間標(biāo)法等，但是一般使用計數(shù)法，計數(shù)法可分為直接計數(shù)法和間接計數(shù)法。接計數(shù)法。二者比較如下：二者比較如下：直接計數(shù)法直接計數(shù)法間接計數(shù)法間接計數(shù)法主要用具主
20、要用具 顯微鏡、細(xì)菌計數(shù)板顯微鏡、細(xì)菌計數(shù)板培養(yǎng)基培養(yǎng)基計數(shù)依據(jù)計數(shù)依據(jù)菌株本身菌株本身培養(yǎng)基上菌落數(shù)培養(yǎng)基上菌落數(shù)優(yōu)點優(yōu)點計數(shù)方便、操作簡單計數(shù)方便、操作簡單計數(shù)的是活菌計數(shù)的是活菌缺點缺點死菌、活菌都計算在死菌、活菌都計算在內(nèi)內(nèi)操作較復(fù)雜，且有一定操作較復(fù)雜，且有一定誤差誤差計算公式計算公式每毫升原液含菌株數(shù)每毫升原液含菌株數(shù)=400=4001 000 1 000 每小每小格平均菌株數(shù)格平均菌株數(shù)稀釋稀釋倍數(shù)倍數(shù)每毫升原液含菌株數(shù)每毫升原液含菌株數(shù)= =稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)(mL)平均菌落數(shù)所用涂布液的體積注：注：400400、1 0001 000是常數(shù)。是常數(shù)。2.2.實驗設(shè)計原則：實驗設(shè)計
21、原則：(1)(1)設(shè)立重復(fù)組：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時，要至設(shè)立重復(fù)組：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時，要至少涂布少涂布3 3個平板作重復(fù)組，增強實驗結(jié)果的說服力與準(zhǔn)確性。個平板作重復(fù)組，增強實驗結(jié)果的說服力與準(zhǔn)確性。(2)(2)設(shè)立兩種對照組：設(shè)立兩種對照組：判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染，需將未接種的選擇培養(yǎng)基同判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染，需將未接種的選擇培養(yǎng)基同時進(jìn)行培養(yǎng)。時進(jìn)行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對比養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)
22、目，進(jìn)行對比得出結(jié)論。得出結(jié)論。3.3.實驗結(jié)果分析：實驗結(jié)果分析：內(nèi)容內(nèi)容現(xiàn)象現(xiàn)象結(jié)論結(jié)論有無雜菌有無雜菌污染的判斷污染的判斷對照的培養(yǎng)皿中無菌落生長對照的培養(yǎng)皿中無菌落生長未被雜菌污染未被雜菌污染培養(yǎng)基中菌落數(shù)偏高培養(yǎng)基中菌落數(shù)偏高被雜菌污染被雜菌污染菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高培養(yǎng)基中混入其培養(yǎng)基中混入其他雜菌他雜菌選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基的篩選作用的篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目數(shù)目大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目選擇培養(yǎng)基具有選擇培養(yǎng)基具有篩選作用篩選作用樣品的樣品的稀釋操作稀釋操作得到得到3 3個或個或3 3個以上菌落數(shù)
23、目在個以上菌落數(shù)目在3030300300的平板的平板操作成功操作成功重復(fù)組的重復(fù)組的結(jié)果結(jié)果若選取同一種土樣，統(tǒng)計結(jié)果應(yīng)接近若選取同一種土樣，統(tǒng)計結(jié)果應(yīng)接近 【思維拓展【思維拓展】(1)(1)稀釋涂布平板法所選擇倒平板的稀釋度很重稀釋涂布平板法所選擇倒平板的稀釋度很重要，一般以要，一般以3 3個稀釋度中的第二個稀釋度倒平板所出現(xiàn)的平均個稀釋度中的第二個稀釋度倒平板所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在菌落數(shù)在5050個左右的最好。個左右的最好。(2)(2)在設(shè)計實驗時，一定要涂布至少在設(shè)計實驗時，一定要涂布至少3 3個平板作為重復(fù)組。個平板作為重復(fù)組。(3)(3)在分析結(jié)果時，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否
24、一在分析結(jié)果時，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致，如果差別過大，則意味著操作有誤，需要重新實驗。致，如果差別過大，則意味著操作有誤，需要重新實驗。【典例訓(xùn)練【典例訓(xùn)練2 2】在探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量變化的實驗中，在探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量變化的實驗中，需利用計數(shù)板對微生物細(xì)胞進(jìn)行直接計數(shù)。計數(shù)板是一個特制需利用計數(shù)板對微生物細(xì)胞進(jìn)行直接計數(shù)。計數(shù)板是一個特制的可在顯微鏡下觀察的玻片，樣品就滴在計數(shù)室內(nèi)。計數(shù)室由的可在顯微鏡下觀察的玻片，樣品就滴在計數(shù)室內(nèi)。計數(shù)室由252516=40016=400個個小室組成，容納液體總體積為小室組成，容納液體總體積為0.1 mm0.1 mm3 3。
25、某同學(xué)。某同學(xué)操作時將操作時將1 mL1 mL酵母菌樣品加酵母菌樣品加99 mL99 mL無菌水稀釋。用無菌吸管吸無菌水稀釋。用無菌吸管吸取少許使其自行滲入計數(shù)室，蓋上蓋玻片并用濾紙吸去多余菌取少許使其自行滲入計數(shù)室，蓋上蓋玻片并用濾紙吸去多余菌液，進(jìn)行觀察計數(shù)。液，進(jìn)行觀察計數(shù)。(1)(1)在實驗中，某同學(xué)的部分實驗操作過程是這樣的：在實驗中，某同學(xué)的部分實驗操作過程是這樣的：從靜從靜置試管中吸取酵母菌培養(yǎng)液加入計數(shù)板進(jìn)行計數(shù)，并記錄數(shù)據(jù)；置試管中吸取酵母菌培養(yǎng)液加入計數(shù)板進(jìn)行計數(shù)，并記錄數(shù)據(jù)；把酵母菌培養(yǎng)液放置在冰箱中；把酵母菌培養(yǎng)液放置在冰箱中；第七天再取樣計數(shù)，記錄第七天再取樣計數(shù)，記
26、錄數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析繪成曲線。數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析繪成曲線。請糾正該同學(xué)實驗操作中的請糾正該同學(xué)實驗操作中的3 3處錯誤：處錯誤：._._。._._。._._。(2)(2)在實驗前應(yīng)該對計數(shù)板、吸管等器具進(jìn)行在實驗前應(yīng)該對計數(shù)板、吸管等器具進(jìn)行_處理。處理。(3)(3)如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應(yīng)采取的措施如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應(yīng)采取的措施是是_。(4)(4)如果觀察到如圖所示如果觀察到如圖所示a a、b b、c c、d d、e 5e 5個大格共個大格共8080個小室內(nèi)個小室內(nèi)共有酵母菌共有酵母菌4848個，則上述個，則上述1 mL1 mL酵母菌樣品中約有酵母菌酵母菌樣品中約
27、有酵母菌_個；要獲得較為準(zhǔn)確的數(shù)值，減少誤差，你認(rèn)為該怎么做個；要獲得較為準(zhǔn)確的數(shù)值，減少誤差，你認(rèn)為該怎么做? ?_。 【解題關(guān)鍵【解題關(guān)鍵】解答本題時，需要掌握用計數(shù)板對酵母菌細(xì)胞進(jìn)解答本題時，需要掌握用計數(shù)板對酵母菌細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)的方法，理解圖中每個方格所代表的含義，還要注意若行計數(shù)的方法，理解圖中每個方格所代表的含義，還要注意若酵母菌密度過大，應(yīng)適當(dāng)稀釋后再計數(shù)。酵母菌密度過大，應(yīng)適當(dāng)稀釋后再計數(shù)?！窘馕觥窘馕觥?1)(1)在從試管中吸取酵母菌之前，應(yīng)將試管輕輕振蕩在從試管中吸取酵母菌之前，應(yīng)將試管輕輕振蕩幾次，目的是使酵母菌在培養(yǎng)液中分布均勻。酵母菌的培養(yǎng)液幾次，目的是使酵母菌在培養(yǎng)液
28、中分布均勻。酵母菌的培養(yǎng)液應(yīng)置于適宜條件下，并且每隔應(yīng)置于適宜條件下，并且每隔2424小時就要統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。小時就要統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。(2)(2)為了避免雜菌污染，實驗中所用吸管、計數(shù)板等器具需進(jìn)為了避免雜菌污染，實驗中所用吸管、計數(shù)板等器具需進(jìn)行滅菌處理。行滅菌處理。(3)(4)(3)(4)解答時要注意以下兩點：解答時要注意以下兩點：統(tǒng)一單位；統(tǒng)一單位；注意體積的變注意體積的變化?；?。400400個小室共容納液體總體積為個小室共容納液體總體積為0.1 mm0.1 mm3 3，則，則8080個小格容納個小格容納體積為體積為2 21010-2-2mmmm3 3，含酵母菌，含酵母菌4848個，
29、又因酵母菌培養(yǎng)液總體積個，又因酵母菌培養(yǎng)液總體積為為100 mL100 mL，統(tǒng)一單位后即可求出酵母菌個數(shù)。，統(tǒng)一單位后即可求出酵母菌個數(shù)。答案：答案：(1).(1).應(yīng)將試管輕輕振蕩幾次再吸取酵母菌培養(yǎng)液進(jìn)行應(yīng)將試管輕輕振蕩幾次再吸取酵母菌培養(yǎng)液進(jìn)行計數(shù)計數(shù).應(yīng)將酵母菌培養(yǎng)液放置在適宜溫度下培養(yǎng)應(yīng)將酵母菌培養(yǎng)液放置在適宜溫度下培養(yǎng).應(yīng)應(yīng)連續(xù)七天，每天觀察、取樣計數(shù)并記錄數(shù)據(jù)連續(xù)七天，每天觀察、取樣計數(shù)并記錄數(shù)據(jù)(2)(2)滅菌滅菌 (3)(3)適當(dāng)稀釋適當(dāng)稀釋(4)2.4(4)2.410108 8 多次計數(shù)，求平均值多次計數(shù)，求平均值【互動探究【互動探究】(1)(1)上題中對計數(shù)板、吸管等器具進(jìn)行滅菌的方法是什么？上題中對計數(shù)板、吸管等器具進(jìn)行滅菌的方法是什么？提示：提示：干熱滅菌。干熱滅菌。(2)(2)統(tǒng)計菌落數(shù)目除了上題中的方法外還有哪些方法？統(tǒng)計菌落數(shù)目除了上題中的方法外還有哪些方法？提示：提示：活菌計數(shù)法、濾膜法?；罹嫈?shù)法、濾膜法。
高中生物 專題2課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)精講導(dǎo)學(xué)課件 新人教版選修1
