《微生物的生長繁殖及其控制筆記》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《微生物的生長繁殖及其控制筆記（52頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。
1、單擊此處編輯母版標題樣式,,單擊此處編輯母版文本樣式,,第二級,,第三級,,第四級,,第五級,,,*,第 六 章,微 生 物 的 生 長,,繁殖 及 其 控 制,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,微生物的分離和純培養(yǎng),,微生物的生長繁殖,及其測定,,微生物生長繁殖的,控制,,內(nèi)容提要,?,,?,?,,無菌技術(shù),微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌,干熱滅菌,,濕熱滅菌,接種操作,無菌條件下進行，工具：接種環(huán)或接種針,,純培養(yǎng),的分離方法,,稀釋倒（涂）平板法,劃線法,選擇培養(yǎng)基分離法,單細胞（孢子）分離,,二元培養(yǎng)物,主要用于病毒等寄生生物的培養(yǎng),培養(yǎng)物中含有兩種微生物，并有意識地保持二者之間
2、的特定關(guān)系的培養(yǎng)物稱為二元培養(yǎng)物,,微生物的保藏技術(shù),干燥保藏法,,常用作中期保藏，時間為,1,～,5,年,傳代培養(yǎng)保藏,,常用作短期保藏，,4℃,保藏，時間為,3,～,4,月,冷凍保藏法,,常用作長期保藏，時間為,5,～,10,年及以上,,微生物的生長繁殖及其測定,微生物生長的測定,,計數(shù)法、重量法、生理指標法,微生物的生長繁殖,,細菌群體生長的規(guī)律,,細菌群體生長的數(shù)學(xué)模型,,細菌群體生長的主要參數(shù),,同步培養(yǎng),,連續(xù)培養(yǎng),,生長曲線,(growth curve),描述細菌生長規(guī)律,總菌數(shù),活菌數(shù),培養(yǎng)時間,Ⅱ,.,對數(shù)期,Ⅲ,.,穩(wěn)定期,Ⅳ,.,衰亡期,Ⅰ,.,遲緩期,細菌數(shù)目（個,/m
3、l,）,對數(shù),Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅰ,細菌群體生長的規(guī)律,,延滯期,出現(xiàn)原因,把細菌接種到新鮮的培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，并不立即進行分裂繁殖，細菌增殖數(shù)為０，這時,需要合成多種酶，輔酶和某些中間代,,謝產(chǎn)物，要經(jīng)過一個調(diào)整和適應(yīng)過程 。,,遲緩,期特點,生長速率常數(shù)等于零,菌體粗大,,,代謝活力強,,對不良條件抵抗能力降低,ＲＮＡ含量增加,,,影響延滯期限長短因素,接種齡,接種量,培養(yǎng)基成分,,,縮短延滯期的意義和方法,可以縮短生產(chǎn)周期，提高設(shè)備利用率。,,接種對數(shù)生長期的菌種，采用最適菌齡,,加大接種量,用與培養(yǎng)菌種相同組成分的培養(yǎng)基,,,指數(shù)期,(,對數(shù)期,),(exponential phase),,特
4、點,該期的細菌生產(chǎn)中多被用做種子和科學(xué)試驗材料,①,活菌數(shù)和總菌數(shù)接近,②,酶系活躍，代謝旺盛。,③,生長速率最大，,generation time,最短。,④,細胞的化學(xué)組成及形態(tài),，,生理特性比較一致,,,N,t,N,0,t,1,t,0,培養(yǎng)時間,Lg,,細胞數(shù),/ml,t,2,- t,1,3.322(lgN,t,-lgN,0,),生長速率常數(shù),R=,t,1,- t,0,3.322(lgN,t,-lgN,0,),代時,G=,指數(shù),期生長的數(shù)學(xué)模型,繁殖代數(shù),n=3.322(lgN,t,-lgN,0,),,影響,指數(shù)期,的因素,菌種,營養(yǎng)成分,營養(yǎng)物濃度,培養(yǎng)溫度,,,穩(wěn)定期,(
5、stationary phase),,出現(xiàn)原因,,營養(yǎng)的消耗,有害代謝產(chǎn)物積累,pH,值,Eh,值等理化條件不適,出現(xiàn)原因,,營養(yǎng)物比例失調(diào),,穩(wěn)定期,特點,活菌數(shù)保持相對穩(wěn)定，總菌數(shù)達最高水平。,細菌代謝物積累達到最高峰。,芽孢桿菌這時開始形成芽孢。,這是生產(chǎn)收獲時期。,,,衰亡期,(decline phase/death phase),,特點,細菌死亡數(shù)大于增殖數(shù),,,活菌數(shù)明顯減少,,,群體衰落,細胞出現(xiàn)多形態(tài),,,大小不等的 畸形,,,變成衰退型,細胞死亡,,,出現(xiàn)自溶現(xiàn)象。,,,離心法,硝酸纖維素濾膜法,獲得同步生長,(synchronous growth),的方法：,機械方法,環(huán)境
6、條件控制技術(shù)（溫度、培養(yǎng)基成分控制、其它）,過濾法,同步培養(yǎng),(synchronous culture),使培養(yǎng)基中細菌同時分裂，處于相同的生長階段叫同步生長。,,連續(xù)培養(yǎng),(continuous culture)(open culture),將微生物置于一定容積的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，最后一次收獲，叫分批培養(yǎng)，將微生物放在恒定的容積的流動系統(tǒng)中培養(yǎng)稱為連續(xù)培養(yǎng)。,優(yōu)點：縮短發(fā)酵周期；便于自動控制；產(chǎn)物質(zhì),要,量均一,,缺點：菌種易退化；易染雜菌,,,,……,含,N,量法,DNA/RNA法,葉綠素法,菌體內(nèi)重要組成測定法,微生物生長的測定,,稱,重量法,測體積法,N,×,6.25=Pr,,測生長量,(
7、,直接法,),,比 濁 法,生理指標法,測生長量,(,間接法,),,計繁殖數(shù),血球計數(shù)板法,液體稀釋法,平板菌落計數(shù)法,濾膜,培養(yǎng)法,各種型號的全自動血球計數(shù)儀,,微生物生長繁殖的控制,,環(huán)境因子對微生物生長的影響,控制微生物的物理因素,控制微生物的化學(xué)物質(zhì),,環(huán)境因子對微生物生長的影響,,營養(yǎng)物質(zhì),氧,水的活性,溫度,pH,,嗜冷微生物,（低溫微生物）,Ｅ系在低溫下仍能起催化作用,細胞膜含較多的不飽合脂肪酸在低溫下仍,,具有通透性。,上下班,嗜冷機制：,,,嗜熱微生物,的嗜熱機制,細胞內(nèi)的Ｅ具強抗熱性,產(chǎn)生的多胺，熱亞胺和高溫精胺物質(zhì)對蛋白質(zhì),,等組織結(jié)構(gòu)具有保護作用。,一一一一一口口口
8、,核酸也具有熱穩(wěn)定性的保護結(jié)構(gòu)。,細胞膜含有較多的飽和脂肪酸和直鏈脂肪酸，,,使膜具有穩(wěn)定性。,上,,,pH,影響細胞膜透性與穩(wěn)定性,影響物質(zhì)溶解度,影響細胞表面電荷分布,因此影響微生物生長、繁殖，發(fā)育。,各類微生物能夠生長的,pH,值較寬，,,但細胞內(nèi)部,pH,值,卻接近中性。,,微生物的活動也能改變環(huán)境中的,pH,值,,氧氣,專性好氧菌（,obligate or strict aerobes,）,兼性厭氧菌（,facultative anaerobes,）,,耐氧菌（,aerotolerant,anaerobes,）,厭氧菌（,anaerobes,）,微好氧菌（,microaerophil
9、ic,bacteria,）,超氧化物歧化酶,（,SOD,）和,過氧化氫酶,,,（,Catalase,,）,,厭氧菌（,anaerobes,）,將環(huán)境中氧吸掉；抽真空；深層培養(yǎng),氧對其有毒,能量來源于發(fā)酵無氧呼吸環(huán)式光合磷酸化或甲烷發(fā)酵,O,2,.,-,超氧陰離子自由基 普遍存在,H,2,O+,1/2,O,2,,,,過氧化氫酶,（好氧菌）,2H,2,O,過氧化氫酶,（耐氧菌）,NADH,2,NAD,O,2,.,+2H,+,H,2,O,2,+O,2,,,,-,SOD,（好氧菌及耐氧菌）,1,,1,,1,,細胞內(nèi)缺泛,SOD,、細胞色素氧化酶和過氧化氫酶,A,.,,+,,B,.,A,
10、:,B,,共價結(jié)合,均裂,,固體培養(yǎng)法,液體培養(yǎng)法,好氧菌的固體培養(yǎng),厭氧菌的固體培養(yǎng),好氧菌的液體培養(yǎng),厭氧菌的液體培養(yǎng),試管培養(yǎng),三角瓶（搖瓶）,臺式發(fā)酵罐,,高層瓊脂柱,厭氧培養(yǎng)皿,,厭氧罐,厭氧手套箱,好氧及厭氧,微生物培養(yǎng)法,實驗室培養(yǎng)法,生產(chǎn)實踐中的培養(yǎng)微生物裝置,固體培養(yǎng)法,液體培養(yǎng)法,好氧菌,-,曲法培養(yǎng),厭氧菌,-,堆積培養(yǎng),發(fā)酵罐（,Fermenter,）,,控制,微生物的,物理因素及化學(xué)因素,,幾個基本概念,物理滅菌因素的代表,—,高溫,化學(xué)殺菌劑、消毒劑和治療劑,,消毒,(disinfection),：殺死或消除物體上的病原微生,,物的方法,滅菌（,sterilitio
11、n,）：殺死物體上全部微生物的方法,防腐,(antisepsis),：用理化方法防止抑制微生物生長,,的方法,幾個基本概念,化療,(chemotherapy),：利用對病源菌具有高度毒力而,,對宿主基本無毒的化學(xué)物質(zhì)來抑制,,宿主體內(nèi)病源微生物的生長繁殖,,高溫滅菌,多數(shù)細菌，酵母菌和霉菌的營養(yǎng)細胞和病毒在,,50-65,o,Ｃ,10 min,可以致死。,F,,一般噬菌體,65,－,80,o,Ｃ致死，,放線菌霉菌的孢子比營養(yǎng)細胞抗熱性強，,,76,－,80,o,Ｃ,10min,可以殺死,B,,細菌芽孢，在,100,o,Ｃ下５－,20min,才能致死，,嗜熱脂肪芽孢桿菌可在,80,o,Ｃ條件下生
12、活，,,在,120,o,Ｃ，,12min,才能殺死，,BBBBBBBBBBB,同種微生物老齡菌比幼菌耐熱。,,,高溫滅菌,干熱滅菌,(dry heat sterilization),濕熱滅菌,(,mosist,heat sterilization),,焚燒滅菌法：常用與廢棄物動物尸體等處理。,烘烤滅菌法；實驗室用干燥箱烘烤接種工具。,,,濕熱滅菌,(,mosist,heat sterilization),,煮沸滅菌法（煮沸消毒法）,高壓蒸汽滅菌法,間歇滅菌法,巴斯德消毒法：（巴氏消毒法）,該法比干熱滅菌效果好，因為蛋白質(zhì)在有水的,,情況下容易凝固，如含水,50,％，蛋白質(zhì)凝固溫度,,為,56,
13、o,Ｃ,；含水６％蛋白質(zhì)凝固溫度為,160-170,o,Ｃ,,,煮沸滅菌法（煮沸消毒法）,,物品在水中煮沸,15min,，,可殺死所有營養(yǎng)細胞和一部分芽孢。在水中加入１％的Ｎ,a,2,CO,3,或２－５％的石炭酸效果更好。此法適合注射器和解剖用具的消毒。,,,,高壓蒸汽滅菌,,(normal,autoclving,),是濕熱滅中最好方法，通常在,1.05kg/cm,2,,,的壓力下面（此時,,溫度,121,o,Ｃ,）處理,15,－,30min,。,要排冷，否則會形成假壓，雖然壓力達到要求，溫度卻達不到相應(yīng)高度，而影響滅菌效果。,,間歇滅菌法,(fractional sterilization)
14、,,是用常壓蒸汽反復(fù)幾次進行滅菌的方法。,,主要用于不宜高壓滅菌的培養(yǎng)基,，,不耐熱的藥物和營養(yǎng)物等,方法是將待滅菌物品置于蒸鍋內(nèi)加熱到沸騰維持,15-30min,,殺死營養(yǎng)細胞，取出冷卻后在,37,o,Ｃ,恒溫培養(yǎng),24,小時，使芽,,孢萌發(fā)，再用此法滅菌，反復(fù)三次，即可達到滅菌目的。,,巴氏消毒法,(pasteurization),是食品（牛奶）釀造（啤酒）工業(yè)中常用的方法。,,處理溫度變化很大，一般在,60,～,85,o,Ｃ處理,30min,～,,15s,，,有些做法是,61.7,－,62.8,o,Ｃ,處理,30min,或,71.6,o,Ｃ,,處理,15min,這樣即可殺死病原微生物。又
15、不致?lián)p壞營養(yǎng)，可保留食品飲料原有用味。,根據(jù)結(jié)核桿菌在,62,o,Ｃ,下,15min,被致死。,低溫維持法,;,高溫瞬時滅菌,,輻射,可見光,紫外線,（非電離輻射）,,X,射線與,r,射線,,Ｏ,２,,紫外線,０,３,０,２,＋｛,O,｝,紫外線（非電離輻射）,殺菌機制：,誘導(dǎo)核酸形成胸腺嘧啶二聚體，從而干擾,,GGGGGGGG,了核酸的復(fù)制,H,,,,各種微生物對紫外線抗性,干細胞強于濕細胞,芽孢，孢子強于營養(yǎng)細胞,多倍體 ＞ 二倍體 ＞ 單倍體,,,,控制微生物的化學(xué)物質(zhì),(,因素,),抗微生物劑,抗代謝物,抗生素,化學(xué)治療劑,防腐劑,消毒劑,,酸和堿,重金屬極其鹽類,有機化合物,氧化
16、劑,,鹵素,,染色劑,表面活性劑,,表面消毒劑,(surface,disinfactant,),,抗代謝物,(,antimetabolite,),有些化合物在結(jié)構(gòu)上與生物體所必需的代謝物很相,,似，以至可以和特定的酶結(jié)合，從而阻礙了酶的功,,能。干擾代謝的正常代謝。這些物質(zhì)稱為抗代謝物。,,葉酸 磺胺類藥物,氨基酸,5,－甲基色氨酸,吡哆醇 異煙肼,嘌呤,6,－巰基嘌呤,抗代謝物,代謝物,,二氫蝶啶,二氫蝶酸,二氫葉酸,四氫葉酸,核 酸,,氨基酸,前 體,PABA,酶,①,酶,②,酶,③,Glu,TMP,COOH,H,2,N,NH,2,SO,2,R,
17、COOH,H,2,N,NH,2,SO,2,R,磺胺藥,(,sulphonamides,sulfa,drugs),抑菌機理,,TMP:,三甲基芐二氨嘧啶,,,(,磺胺增效劑,),選擇毒力,,是由微生物在代謝過程中產(chǎn)生,（,有的可人工合成,）,具,,有一定濃度下抑制或殺死其他微生物的有機化合物。,F,,每種抗生素都有一定的殺菌范圍，稱為抗菌譜。,G,,抗生素的誕生,神奇的抗生素,抗藥性,抗生素,(antibiotic),,神奇,,的抗生素,抑制細胞壁的形成,影響細胞膜的功能,干擾蛋白質(zhì)合成,抑制核酸復(fù)制,和固醇結(jié)合影響細胞膜透性,作用于呼吸鏈影響能量利用,氨芐青霉素（,ampicillin,）,和蛋白結(jié)合影響膜屏蔽作用,,白點是強度各異的抗生素，最底下的青霉素完全沒有黑環(huán)，顯示它對鏈球菌已毫無作用,抗藥性,(antibiotic resistance),菌體內(nèi)產(chǎn)生了鈍化,,或分解藥物的酶,F,,改變細胞膜的透,,性而導(dǎo)致抗藥性,,細胞內(nèi)被藥物作用的部位發(fā)生了改變，目前,,典型的例子是核糖體發(fā)生了改變。,J,,,抗生素 ＋核糖體,→,結(jié)合,→,蛋白質(zhì)不能合成,救護途徑,泵出機制,,第一次用藥劑量要足,,避免在一個時期或長期多次使用同種抗生素,不同抗生素（或其他藥物）混合使用,對現(xiàn)有抗生素改造,篩選新抗生素,可怕的抗藥性,(antibiotic resistance),,,
微生物的生長繁殖及其控制筆記
