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1、,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,*,“,”,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,*,“,”,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯
2、母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,大腸桿菌的分離鑒定、藥敏實驗及生化實驗,目的要求,熟悉鑒別培養(yǎng)基的原理,了解大腸桿菌的主要生理生化特性,一、鑒別培養(yǎng),大腸桿菌,沙門氏桿菌,麥康凱,培養(yǎng)基,紅色,菌落,無色或淺黃色菌落,SS瓊脂,培養(yǎng)基,紅色,菌落,淺黃色菌落,伊紅美蘭,瓊脂培養(yǎng)基,紫紅色或紫黑色,并帶有,金屬光澤,菌落,粉紅色菌落,三塘鐵,培養(yǎng)基,斜面和深層均為紅色,斜面為紅色;深層為黃色;若產(chǎn)生H,2,S,為黑色,培養(yǎng)基類別,菌種,分離鑒定-,麥康凱培養(yǎng)基,原理:在培養(yǎng)基中含有膽鹽,可抑
3、制大部分革蘭氏陽性菌的生長,培養(yǎng)基含乳糖,大腸桿菌能分離乳糖,使pH下降(中性指示劑5.5-7.5,紅-黃)形成紅色菌落,而沙門氏菌和志賀氏菌,不能分解乳糖,菌落小且為無色,術(shù)式,兩試管斜面移植時,左手斜持菌種管和被接種管,管口相齊,管底放在拇指和食指間,松動兩管棉塞,將管口進(jìn)行火焰滅菌,使其靠近火焰,將接種環(huán)深入管內(nèi),先在無菌生長的培養(yǎng)基上接觸使之冷卻,再挑取少量的細(xì)菌后,拉出接種環(huán),立即伸入另一管斜面培養(yǎng)基上,勿碰到斜面和管壁,直達(dá)斜面底部,從底部開始劃曲線,向上到斜面頂端,管口火焰滅菌,塞好棉塞,接種完畢。接種環(huán)火焰滅菌后,放下接種棒最后在斜面管壁上注明日期、接種者。置37,0,C,溫箱
4、培養(yǎng),結(jié)果判定,鮮桃紅色或微紅色,菌落中心呈深桃紅色,圓形,扁平,邊緣整齊,表面光滑,濕潤,二、藥敏試驗,方法:取一菌種,用滅菌的接種環(huán)致密劃線于瓊脂表面(可重復(fù)來回劃線),用無菌鑷子,將各種抗菌藥物圓紙片,分別貼于培養(yǎng)基表面。各片距離相等,37,0,C,24h后,觀察結(jié)果。,藥敏結(jié)果判定,抑菌直徑(mm),敏 感 性,20,極敏感,15-20,高敏感,10-14,中敏感,10,低敏感,0,不敏感,三、生化實驗,1,糖發(fā)酵試驗,原理:各種細(xì)菌具有不同的酶,有的細(xì)菌能分解某些糖類而產(chǎn)酸產(chǎn)氣,有的細(xì)菌雖能分解某種糖類,但只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,有的細(xì)菌則不能分解。從而鑒別細(xì)菌。,方法:將需要鑒別的細(xì)菌純培養(yǎng)
5、物,分別接種在各種含指示劑的糖發(fā)酵管內(nèi),將發(fā)酵管倒置與37,0,C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h,結(jié)果,:培養(yǎng)液不變色-無變化(),培養(yǎng)液變?yōu)辄S色-產(chǎn) 酸(+),培養(yǎng)液變黃并有氣泡-產(chǎn)酸產(chǎn)氣(+),2,硫化氫試驗,原理:某些細(xì)菌能分離蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸,生成硫化氫,遇培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽,形成黑色的沉淀物。,方法:將需要鑒別的細(xì)菌純培養(yǎng)物,分別接種在硫化氫培養(yǎng)基中,37,0,C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h,結(jié)果:培養(yǎng)基變黑為陽性,不產(chǎn)生黑色為陰性。大腸桿菌為陰性,沙門氏菌為陽性,3,硝酸鹽還原實驗,原理:有些細(xì)菌能將培養(yǎng)基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,在酸性條件下,亞硝酸鹽與對位氨基苯磺酸起作用后,在與,-萘胺反應(yīng),生成紅色偶氮化合物。,方法:將被檢細(xì)菌接種于硝酸鈉蛋白胨培養(yǎng)基內(nèi),,37,0,C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h。,結(jié)果:再加試劑甲、乙各2滴,在30,s,內(nèi)出現(xiàn)紅色即為陽性;若無顏色出現(xiàn),加少量的鋅渣,隨后出現(xiàn)紅色,則是真正的紅色,