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2、母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,大腸桿菌的分離鑒定、藥敏實驗及生化實驗,目的要求,熟悉鑒別培養(yǎng)基的原理,了解大腸桿菌的主要生理生化特性,一、鑒別培養(yǎng),大腸桿菌,沙門氏桿菌,麥康凱,培養(yǎng)基,紅色,菌落,無色或淺黃色菌落,SS瓊脂,培養(yǎng)基,紅色,菌落,淺黃色菌落,伊紅美蘭,瓊脂培養(yǎng)基,紫紅色或紫黑色,并帶有,金屬光澤,菌落,粉紅色菌落,三塘鐵,培養(yǎng)基,斜面和深層均為紅色,斜面為紅色；深層為黃色；若產(chǎn)生H,2,S，為黑色,培養(yǎng)基類別,菌種,分離鑒定-,麥康凱培養(yǎng)基,原理：在培養(yǎng)基中含有膽鹽，可抑
3、制大部分革蘭氏陽性菌的生長，培養(yǎng)基含乳糖，大腸桿菌能分離乳糖，使pH下降（中性指示劑5.5-7.5，紅-黃）形成紅色菌落，而沙門氏菌和志賀氏菌，不能分解乳糖，菌落小且為無色,術(shù)式,兩試管斜面移植時，左手斜持菌種管和被接種管，管口相齊，管底放在拇指和食指間，松動兩管棉塞，將管口進(jìn)行火焰滅菌，使其靠近火焰，將接種環(huán)深入管內(nèi)，先在無菌生長的培養(yǎng)基上接觸使之冷卻，再挑取少量的細(xì)菌后，拉出接種環(huán)，立即伸入另一管斜面培養(yǎng)基上，勿碰到斜面和管壁，直達(dá)斜面底部，從底部開始劃曲線，向上到斜面頂端，管口火焰滅菌，塞好棉塞，接種完畢。接種環(huán)火焰滅菌后，放下接種棒最后在斜面管壁上注明日期、接種者。置37,0,C，溫箱
4、培養(yǎng),結(jié)果判定,鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色,圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑，濕潤,二、藥敏試驗,方法：取一菌種，用滅菌的接種環(huán)致密劃線于瓊脂表面（可重復(fù)來回劃線），用無菌鑷子，將各種抗菌藥物圓紙片，分別貼于培養(yǎng)基表面。各片距離相等，37,0,C，24h后，觀察結(jié)果。,藥敏結(jié)果判定,抑菌直徑（mm）,敏 感 性,20,極敏感,15-20,高敏感,10-14,中敏感,10,低敏感,0,不敏感,三、生化實驗,1,糖發(fā)酵試驗,原理：各種細(xì)菌具有不同的酶，有的細(xì)菌能分解某些糖類而產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的細(xì)菌雖能分解某種糖類，但只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，有的細(xì)菌則不能分解。從而鑒別細(xì)菌。,方法：將需要鑒別的細(xì)菌純培養(yǎng)
5、物，分別接種在各種含指示劑的糖發(fā)酵管內(nèi)，將發(fā)酵管倒置與37,0,C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h,結(jié)果,：培養(yǎng)液不變色-無變化（）,培養(yǎng)液變?yōu)辄S色-產(chǎn) 酸（+）,培養(yǎng)液變黃并有氣泡-產(chǎn)酸產(chǎn)氣（+）,2,硫化氫試驗,原理：某些細(xì)菌能分離蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸，生成硫化氫，遇培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽，形成黑色的沉淀物。,方法：將需要鑒別的細(xì)菌純培養(yǎng)物，分別接種在硫化氫培養(yǎng)基中，37,0,C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h,結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不產(chǎn)生黑色為陰性。大腸桿菌為陰性，沙門氏菌為陽性,3,硝酸鹽還原實驗,原理：有些細(xì)菌能將培養(yǎng)基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，在酸性條件下，亞硝酸鹽與對位氨基苯磺酸起作用后，在與,-萘胺反應(yīng)，生成紅色偶氮化合物。,方法：將被檢細(xì)菌接種于硝酸鈉蛋白胨培養(yǎng)基內(nèi)，,37,0,C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h。,結(jié)果：再加試劑甲、乙各2滴，在30,s,內(nèi)出現(xiàn)紅色即為陽性；若無顏色出現(xiàn)，加少量的鋅渣，隨后出現(xiàn)紅色，則是真正的紅色,
大腸桿菌的分離鑒定
