中國藥典四部色譜法概況PPT課件
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1、 BEAConfidential.|2 主 要 內 容u2015年版藥典四部色譜法目錄及修訂情況u色譜法的基本概念u色譜法在中國藥典中的沿革u中國藥典2015年版色譜法內容概況 2015版 四 部 色 譜 法 目 錄編 號 通 則 名 稱 2010年 版 二 部 原 附 錄 名 稱0500 色 譜 法0501 紙 色 譜 法 VA紙 色 譜 法0502 薄 層 色 譜 法 VB薄 層 色 譜 法0511 柱 色 譜 法 VC柱 色 譜 法0512 高 效 液 相 色 譜 法 VD高 效 液 相 色 譜 法0513 離 子 色 譜 法 VE氣 相 色 譜 法0514 分 子 排 阻 色 譜 法
2、VF電 泳 法0521 氣 相 色 譜 法 VG毛 細 管 電 泳 法0531 超 臨 界 流 體 色 譜 法 ( 新 增 ) VH分 子 排 阻 色 譜 法0532 臨 界 點 色 譜 法 ( 新 增 ) VJ離 子 色 譜 法 0541 電 泳 法0542 毛 細 管 電 泳 法 BEAConfidential.|4 色 譜 法 的 基 本 概 念色譜法是利用混合物中各組分的理化性質的差異(吸附力、溶解度、分子形狀和大小、分子極性、分子親和力等),使各組分以不同程度分布在兩個相中,其中一個相叫固定相,另一相流過此固定相叫作流動相。由于各組分受流動相作用產(chǎn)生的推力和受固定相作用產(chǎn)生的阻力的不
3、同,使各組分產(chǎn)生不同的移動速度,使得結構上只有微小差異的各組分得到分離。再配合相應的光學、電學、電化學和或其他相關檢測手段,對各組分進行定性和定量分析的方法。 毛 細 管 電 色 譜 法 (CEC)色譜法 GSC液 相 色 譜 法 (LC) 柱 色 譜 法平 面 色 譜 法 毛 細 管 電 泳 法 (CE) LLCLSCSECIECBPC紙 色 譜 法薄 層 色 譜 法 (TLC) LLC LLCLSC 氣 相 色 譜 法 ( GC) 柱 色 譜 法 GLC 超 臨 界 流 體 色 譜 法 ( SFC) 色譜法的分類 色 譜 法 的 基 本 概 念分 離 原 理l吸 附 色 譜 法l分 配 色
4、 譜 法l離 子 交 換 色 譜 法l排 阻 色 譜 法 分 離 方 法l紙 色 譜 法l薄 層 色 譜 法l柱 色 譜 法l高 效 液 相 色 譜 法l氣 相 色 譜 法 色 譜 法 在 中 國 藥 典 中 的 沿 革l紙 色 譜 法 (1985)l薄 層 色 譜 法 (1985)l柱 色 譜 法 (1985)l高 效 液 相 色 譜 法 (1985)l氣 相 色 譜 法 (1985)l電 泳 法 (1990)l毛 細 管 電 泳 法 (2000)l分 子 排 阻 色 譜 法 (2000)l離 子 色 譜 法 (2010)l超 臨 界 流 體 色 譜 法 ( 2015)l臨 界 點 色 譜
5、法 ( 2015) 0501紙 色 譜 法系 以 紙 為 載 體 , 紙 上 所 含 水 分 或 其 他 物 質 為 固 定 相 , 用 展 開 劑 進 行 展 開 的 分 配 色 譜l鑒別l純度檢查l含量測定 0501紙 色 譜 法 二 部 P1000頁 0502薄 層 色 譜 法 薄層色譜法系將供試品溶液點于薄層板上,在展開容器內用展開劑展開,使供試品所含成分分離,所得色譜圖與適宜的標準物質按同法所得的色譜圖對比,亦可用薄層色譜掃描儀進行掃描,用于鑒別、檢査或含量測定將舊版藥典“對照物”修訂為“對照標準物質” 0502薄 層 色 譜 法新 版 藥 典 規(guī) 范 了 市 售 薄 層 板 的 要
6、 求 : 市 售 薄 層 板 按 固 定 相 種 類 分 為 硅 膠 薄 層 板 、 聚 酰 胺 薄 層 板 、 氧 化 鋁 薄層 板 等 ; 按 固 定 相 粒 徑 大 小 分 為 普 通 薄 層 板 ( 10 40um) 和 高 效 薄 層 板 ( 5 10um) ; 按 硅 膠 板 是 否 含 有 熒 光 劑 分 為 硅 膠 G 板 和 硅 膠 GF254板 。操 作 方 法 :點 樣 點 直 徑 限 值 由 3mm修 改 為 4mm。其 他 變 化 : 基 本 整 合 舊 版 藥 典 一 部 和 二 部 。 0502薄 層 色 譜 法儀 器 與 材 料l薄 層 板l點 樣 器l展 開
7、容 器l顯 色 劑l顯 色 裝 置l檢 視 裝 置 l薄 層 掃 描 儀 0502薄 層 色 譜 法操 作 方 法l薄 層 板 制 備l點 樣l展 開l顯 色 與 檢 視l記 錄 0502薄 層 色 譜 法操 作 方 法薄 層 板 制 備( 1) 市 售 薄 層 板 除 聚 酰 胺 薄 膜 外 , 110 活 化 30分 鐘 ; 如 被 空 氣 雜 質 污 染 , 可以 用 溶 劑 預 洗( 2) 自 制 薄 層 板 0502薄 層 色 譜 法操 作 方 法點 樣 在 潔 凈 干 燥 的 環(huán) 境 中 用 專 用 毛 細 管 或 配 合 相 應 的 半 自 動 、 自 動 點 樣 器 械 點 樣
8、 于 薄 層 板 上 一 般 為 圓 點 狀 或 窄 細 的 條 帶 狀 點 樣 基 線 距 底 邊 10 15mm , 高 效 板 一 般 基 線 離 底 邊 8 10mm。 圓 點 狀 直 徑 一 般 不 大 于 4mm, 高 效 板 一 般 不 大 于 2mm; 條 帶 狀 寬 度 一 般 為 5 10mm, 高 效 板 條帶 寬 度 一 般 為 4 8mm。 點 間 距 離 可 視 斑 點 擴 散 情 況 以 相 鄰 斑 點 互 不 干 擾 為 宜 , 一 般 不 少 于 8mm, 高 效 板 供 試 品 間 隔不 少 于 5mm 0502薄 層 色 譜 法展 開 示 意 圖 高 效
9、板 上 行 一 般 為 5 8cm 0502薄 層 色 譜 法操 作 方 法顯 示 與 檢 視 有 顏 色 的 物 質 直 接 可 見 光 下 檢 視 無 色 物 質 可 用 噴 霧 和 浸 漬 以 適 宜 的 顯 色 劑 顯 色 , 或 者 加 熱 顯 色 紫 外 熒 光 下 顯 色 ( 254nm和 365nm) 在 紫 外 光 下 有 吸 收 的 成 分 , 可 用 GF254板 ( 帶 熒 光 劑 ) , 觀 察 淬 滅 形 成 的 斑 點 0502薄 層 色 譜 法操 作 方 法記 錄 攝 像 設 備 拍 攝 , 記 錄 光 學 照 片 或 電 子 圖 像 薄 層 掃 描 儀 掃 描
10、 儀 掃 描 或 其 他 方 式 記 錄 色 譜 圖 0502薄 層 色 譜 法系 統(tǒng) 適 用 試 驗 要 求( 1) 比 移 值Rf = 0.20.8 0502薄 層 色 譜 法系 統(tǒng) 適 用 試 驗 要 求 按 各 品 種 項 下 要 求 對 實 驗 條 件 進 行 系 統(tǒng) 適 用 性 試 驗 , 即 用供 試 品 和 標 準 物 質 對 實 驗 條 件 進 行 試 驗 和 調 整 , 應 符 合 規(guī) 定的 要 求 。 Rf = 0.20.80502薄 層 色 譜 法( 1) 比 移 值 0502薄 層 色 譜 法( 2) 檢 出 限 指限量檢査或雜質檢査時,供試品溶液中被 測物質能被檢出
11、的最低濃度或量。 一般采用已知濃度的供試品溶液或對照標準溶液 ,與稀釋若干倍的自身對照標準溶液在規(guī)定 的色譜條件下,在同一薄層板上點樣、展開、 檢視 ,后者顯清晰可辨斑點的濃度或量作為檢出限 。 0502薄 層 色 譜 法( 3) 分 離 度 ( 分 離 效 能 )供試品與對照標準物質色譜中斑點均應清晰分離 薄層掃描法用于限量檢查和含量測定時,R1.0 0502薄 層 色 譜 法( 4) 相 對 標 準 偏 差(薄層掃描要求)同板同供試液(不顯色):RSD5.0% 同板同供試液(顯色):RSD10.0%不同板同供試液(顯色和不顯色):RSD10.0% 0502薄 層 色 譜 法測 定 法鑒別:
12、供試品與對照標準物質斑點顏色和比移值一限量檢查與雜質檢查:半定量顏色(峰面積):供試品雜質斑點雜質對照品斑點顏色(峰面積):供試品雜質斑點流 動 相 )離 子 交 換分 子 排 阻手 性 分 離0512液 相 色 譜 法 檢測器0512液 相 色 譜 法檢 測 器 是 液 相 色 譜 儀 的 “ 眼 睛 ” 其 作 用 是 把 色 譜 柱 連 續(xù) 流 出 的 樣 品 組 分 轉 變 成 易 于 測 量 的 電 信 號 , 被 數(shù) 據(jù)系 統(tǒng) 接 收 , 得 到 樣 品 分 離 的 色 譜 圖檢 測 器 性 能 的 好 壞 直 接 關 系 到 分 析 結 果 的 可 靠 性 與 準 確 性 通 用
13、 型 檢 測 器 ( 例 如 : 示 差 折 光 檢 測 器 ) 專 用 型 ( 選 擇 性 ) 檢 測 器 ( 例 如 : 紫 外 檢 測 器 、 熒 光 檢 測 器 ) 半 通 用 型 檢 測 器 ( 例 如 : 蒸 發(fā) 光 散 射 檢 測 器 )根 據(jù) 對 各 類 物 質 響 應 的 差 別 , 檢 測 器 可 分 為 三 大 類 : n 增加了超高效液相色譜柱內徑(約2mm或更?。?,粒徑(約2m或更?。ńY果產(chǎn)生爭議時,應以品種項下規(guī)定的色譜條件的測定結果為準)n 溫度會影響分離效果,品種正文中未指明色譜柱溫度時系指室溫,應注意室溫變化的影響。為改善分離效果可適當提高色譜柱的溫度,但不
14、宜超過60。n 品種正文項下規(guī)定的條件除填充劑類型、流動相組分、檢測器類型不得改變外,其余如色譜柱內徑與長度、填充劑粒徑、流動相速度、流動相組分比例、柱溫、進樣量、檢測器靈敏度等,均可適當改變,以達到系統(tǒng)適用性試驗的要求。0512液 相 色 譜 法 流 動 相 的 要 求 2015版 2010版流動相調整比例 當 小 比 例 組 分 百 分 比 X33%時 , 允 許改 變 范 圍 為 0.7X 1.3X;當 小 比 例 組 分 百 分 比 例 X 33%時 ,允 許 改 變 范 圍 為 X 10 當 小 比 例 組 分 百 分 比 例 X50%相 對于 自 身 的 改 變 量 不 超 過 3
15、0%且 相對 于 總 量 的 改 變 量 不 超 過 10%為限 ; 如 30%的 改 變 量 的 數(shù) 值 超 過 總量 的 10%時 , 則 改 變 量 以 總 量 的 10%為 限 。0512液 相 色 譜 法 HPLC:系統(tǒng)適用性要求(通則) 中國藥典要求對儀器進行適用性試驗,即用規(guī)定的對照品對儀器進行試驗和調整,要求達到規(guī)定的要求或滿足在分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度、重復性和拖尾因子等相關規(guī)定。 色譜系統(tǒng)的適用性試驗通常包括理論板數(shù)、分離度、靈敏度、拖尾因子和重復性等五個參數(shù)。按各品種正文項下要求對色譜系統(tǒng)進行適用性試驗,即用規(guī)定的對照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗溶液在規(guī)定的色譜系
16、統(tǒng)進行試驗,必要時,可對色譜系統(tǒng)進行適當調整,以符合要求。0512液 相 色 譜 法 要求: -理論塔板數(shù)N:大于規(guī)定值(按規(guī)定方法計算,具體品種) -拖尾因子T:應在0.95-1.05之間(以峰高定量時) -分離度R:應大于1.5 -重復性:連續(xù)進樣5次,峰面積的相對標準偏差不大于2.0% -靈敏度:(新增) 定量:10:1;定性:3:10512液 相 色 譜 法 系統(tǒng)適用性試驗(1)色譜柱理論板數(shù)(n) 具體品種要求不同 用于評價色譜柱的分離效能。由于不同物質在同一色譜柱上的色譜行為不同,采用理論板數(shù)作為衡量柱效能的指標時,應指明測定物質,一般為待測組分或內標物質的理論板數(shù)。 在規(guī)定的色譜
17、條件下,注入供試品溶液或各品種項下規(guī)定的內標物質溶液,記錄色譜圖,量出供試品主成分峰或內標物質峰的保留時間t R(以分鐘或長度計,下同,但應取相同單位)和峰寬(W)或半高峰寬(Wh/2),按n= 16( tR /W)2或n=5.54(tRWh2)2計算色譜柱的理論板數(shù)。 0512液 相 色 譜 法 無 論 是 定 性 鑒 別 還 是 定 量分 析 , 均 要 求 待 測 峰 與 其他 峰 、 內 標 峰 或 特 定 的 雜質 對 照 峰 之 間 有 較 好 的 分離 度 。 除 另 有 規(guī) 定 外 , 待測 組 分 與 相 鄰 共 存 物 之 間的 分 離 度 應 大 于 1.5系 統(tǒng) 適 用
18、 性 試 驗( 2) 分 離 度 ( R) 21 )(2 12 WW ttR RR )(70.1 )(2 2/,22/,1 12 hh RR WW ttR 0512液 相 色 譜 法 系統(tǒng)適用性試驗 (3)靈敏度(S/N)定量測定時,信噪比應不小于10;定性測定時,信噪比應不小于3.系統(tǒng)適用性試驗中可以設置靈敏度測試溶液來評價色譜系統(tǒng)的檢測能力。0512液 相 色 譜 法 系統(tǒng)適用性試驗 (4)拖尾因子(T)以峰高作定量參數(shù)時,除另有規(guī)定外,T值應在0.951.05之間。0512液 相 色 譜 法105.02 dWT h (5)重復性用于評價色譜系統(tǒng)連續(xù)進樣時響應值得重復性能。 采用外標法時,
19、通常取各品種項下的對照品溶液,連續(xù)進樣5次,除另有規(guī)定外,其峰面積測量值得相對標準偏差應不大于2.0%; 采用內標法時,通常配置相當于80%、100%、120%的對照品溶液,加入規(guī)定量的內標溶液,配成3中不同的濃度,分別進樣2次,計算平均校正因子,相對標準偏差應不大于2.0%0512液 相 色 譜 法 測定法 (1) 內標法 按各品種項下的規(guī)定,精密稱(量)取對照品和內標物質,分別配成溶液,精密量取各適量,混合配成校正因子側定用的對照溶液。取一定量注入儀器,記錄色譜圖,測量對照品和內標物質的峰面積或峰高,按下式計算校正因子: 再取各品種項下含有內標物質的供試品溶液,注入儀器,記錄色譜圖,測量供
20、試品中待測成分和內標物質的峰面積或峰高,按下式計算含量:0512液 相 色 譜 法 RR SS cA cA)校 正 因 子 ( f SS XX cA Afc )含 量 ( 測定法 (2) 外標法 按各品種項下的規(guī)定,精密稱(量)取對照品和供試品,配制成溶液,分別精密取一定量,注入儀器,記錄色譜圖,測量對照品溶液和供試品溶液中待測成分的峰面積(或峰高),按下式計算含量:0512液 相 色 譜 法 RXR AAc)c X含 量 ( 測定法(3)加校正因子的主成分自身對照法 測定雜質含量時,可采用加校正因子的主成分自身對照法。在建立方法時,按各品種項下的規(guī)定,精密稱(量)取雜質對照品和待測成分對照品
21、各適量,配制測定雜質校正因子的溶液,進樣,記錄色譜圖,按上述(1)法計算雜質的校正因子。此校正因子可直接載入各品種項下,用于校正雜質的實測峰面積。這些需作校正計算的雜質,通常以主成分為參照,采用相對保留時間定位,其數(shù)值一并載入各品種項下。0512液 相 色 譜 法 測定法 (3)加校正因子的主成分自身對照法 測定雜質含量時,按各品種項下規(guī)定的雜質限度,將供試品溶液稀釋成與雜質限度相當?shù)娜芤?,作為對照溶液;進樣,記錄色譜圖,必要時,調節(jié)縱坐標范圍(以噪聲水平可接受為限)使對照溶液的主成分色譜峰的峰高約達滿量程的10%25%。除另有規(guī)定外,一般進樣不少于3針,通常含量低于0.5%的雜質,峰面積的相
22、對標準偏差(RSD)應小于10%;含量在0.5%2%的雜質,峰面積的RSD應小于5%;含量大于2%的雜質,峰面積的RSD應小于2%。然后,取供試品溶液和對照溶液適量,分別進樣,除另有規(guī)定外,供試品溶液的記錄時間,應為主成分色譜峰保留時間的2倍,測量供試品溶液色譜圖上各雜質的峰面積,分別乘以相應的校正因子后與對照溶液主成分的峰面積比較,計算各雜質含量。0512液 相 色 譜 法 測定法 (4)不加校正因子的主成分自身對照法 測定雜質含量時,若沒有雜質對照品,也可采用不加校正因子的主成分自身對照法。同上述(3)法配制對照溶液并調節(jié)檢測靈敏度后,取供試品溶液和對照溶液適量,分別進樣,前者的記錄時間,
23、除另有規(guī)定外,應為主成分色譜峰保留時間的2倍,測量供試品溶液色譜圖上各雜質的峰面積并與對照溶液主成分的峰面積比較,計算雜質含量。0512液 相 色 譜 法 測定法 (5)面積歸一化法 按各品種項下的規(guī)定,配制供試品溶液,取一定量注入儀器,記錄色譜圖。測量各峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積,計算各峰面積占總峰面積的百分率。 用于雜質檢查時,由于峰面積歸一化法測定誤差大,因此,通常只用于粗略考察供試品中的雜質含量。除另有規(guī)定外,一般不宜用于微量雜質的檢查。0512液 相 色 譜 法 離子色譜法系采用高壓輸液泵系統(tǒng)將規(guī)定的洗脫液泵入裝有填充劑的色譜柱對可解離物質進行分離測定的色譜方法。
24、注入的供試品由洗脫液帶入色譜柱內進行分離后, 進 入 檢 測 器 ( 必 要 時 經(jīng) 過抑 制 器 或 衍 生 系 統(tǒng) ) ,由 積 分 儀 或 數(shù) 據(jù) 處 理 系 統(tǒng) 記 錄 并 處 理 色 譜 信 號 。 離 子 色 譜 法 常 用 于 無 機 陰 離 子 、 無 機 陽 離 子 、 有 機 酸 、 糖 醇 類 、 氨 基 糖 類 、氨 基 酸 、 蛋 白 質 、 糖 蛋 白 等 物 質 的 定 性 和 定 量 分 析 。 它 的 分 離 機 理 主 要 為 離 子 交 換 , 即 基 于 離 子 交 換 色 譜 固 定 相 上 的 離 子 與 流 動相 中 具 有 相 同 電 荷 的 溶
25、 質 離 子 之 間 進 行 的 可 逆 交 換 ; 離 子 色 譜 法 的 其 他 分 離機 理 還 有 形 成 離 子 對 、 離 子 排 阻 等 。0513 離 子 色 譜 法 0514 分 子 排 阻 色 譜 法分 子 排 阻 色 譜 法 是 根 據(jù) 待 測 組 分 的 分 子 大 小 進 行 分 離 的 一 種 液 相 色 譜 技 術 。分 子 排 阻 色 譜 法 的 分 離 原 理 為 凝 膠 色 譜 柱 的 分 子 篩 機 制 。色 譜 柱 多 以 親 水 硅 膠 、 凝 膠 或 經(jīng) 過 修 飾 的 凝 膠 如 葡 聚 糖 凝 膠 ( Sephadex)和 瓊脂 糖 凝 膠 (
26、Sepharose) 等 為 填 充 劑 。 采用氣體為流動相(載氣)流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進行分離測定的色譜方法。物質或其衍生物氣化后,被載氣帶入色譜柱進行分離,各組分先后進入檢測器,用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號。0521 氣 相 色 譜 法與 2010年 版 藥 典 相 比 無 修 訂 0521 氣 相 色 譜 法 1、 載 氣 系 統(tǒng)2、 進 樣 系 統(tǒng)3、 分 離 系 統(tǒng) 4、 溫 控 系 統(tǒng)5、 檢 測 系 統(tǒng)6、 數(shù) 據(jù) 處 理 系 統(tǒng) 0521 氣 相 色 譜 法 0521 氣 相 色 譜 法系 統(tǒng) 適 用 性 實 驗 照 高 效 液 相 色 譜 法 ( 通 則0512) 項 下
27、規(guī) 定系 統(tǒng) 適 用 性 實 驗 檢 測 器 應 用火 焰 離 子 化 檢 測 器 (FID) 有 機 化 合 物熱 導 檢 測 器 (TCD) 無 機 氣 體 、有 機 化 合 物氮 磷 檢 測 器 (NPD) 氮 、磷 化 合 物火 焰 光 度 檢 測 器 (FPD) 硫 、磷 化 合 物電 子 捕 獲 檢 測 器 (ECD) 鹵 素 等 化 合 物質 譜 檢 測 器 (MS) 結 構 確 證0521 氣 相 色 譜 法 各 品 種 項 下 規(guī) 定 的 色 譜 條 件 , 除 檢 測 器 種 類 、 固 定 液 品 種 及 特 殊 指 定 的 色 譜 柱 材 料不 得 改 變 外 , 其
28、余 如 色 譜 柱 內 徑 、 長 度 、 載 體 牌 號 、 粒 度 、 固 定 液 涂 布 濃 度 、 載 氣 流 速、 柱 溫 、 進 樣 量 、 檢 測 器 的 靈 敏 度 等 , 均 可 適 當 改 變 , 以 適 應 具 體 品 種 并 符 合 系 統(tǒng) 適 用性 試 驗 的 要 求 。 一 般 色 譜 圖 約 于 30分 鐘 內 記 錄 完 畢 。0521 氣 相 色 譜 法 測 定 法l內 標 法l外 標 法l面 積 歸 一 化 法l標 準 溶 液 加 入 法精 密 稱 ( 量 ) 取 某 個 雜 質 或 待 測 成 分 對 照 品 適 量 , 配 制 成 適 當 濃 度 的 對
29、 照 品 溶 液 , 取 一 定 量, 精 密 加 入 到 供 試 品 溶 液 中 , 根 據(jù) 外 標 法 或 內 標 法 測 定 雜 質 或 主 成 分 含 量 , 再 扣 除 加 入 的對 照 品 溶 液 含 量 , 即 得 供 試 品 溶 液 中 某 個 雜 質 和 主 成 分 含 量 。 (當 采 用 頂 空 進 樣 時 , 由 于 供 試 品 和 對 照 品 處 于 不 完 全 相 同 的 基 質 中 , 故 可 采 用 標 準 溶 液 加 入 法 以 消除 基 質 效 應 的 影 響 ; 當 標 準 溶 液 加 入 法 與 其 他 定 量 方 法 結 果 不 一 致 時 , 應 以
30、 標 準 加 入 法 結 果 為 準 。) 0521 氣 相 色 譜 法 前 面 三 種 方 法 要 求 與 液 相 色 譜一 致 對于生產(chǎn)過程中引入的有機溶劑,應在后續(xù)的生產(chǎn)環(huán)節(jié)予以有效去除。除正文已明確列有“殘留溶劑”檢查的品種必須依法進行該項檢查外,其他未在“殘留溶劑”項下明確列出的有機溶劑與未在正文中列有此項檢查的品種,如生產(chǎn)過程中引入或產(chǎn)品中殘留有機溶劑,均應按附錄“殘留溶劑測定法”檢查并應符合相應溶劑的限度規(guī)定。(凡例十七)VE氣 相 色 譜 法 0521 氣 相 色 譜 法 0531超臨界流體色譜法(新增)流動相為CO2,價格低,更環(huán)保。 0532臨界點色譜法(新增)是根據(jù)聚合物
31、的功能基團、嵌段結構的差異進行聚合物分離的一種色譜技術。 2015版 藥 典 四 部 解 析2015版 中 國 藥 典 四 部 主 要 變 化 理 化 部 分 2關 于 色 譜 柱小 粒 徑 色 譜 柱 , 提 速 趨 勢很 多 方 法 , 都 沒 有 規(guī) 定 具 體 的 色 譜 柱 規(guī) 格 , 便 于 企 業(yè) 根 據(jù) 自 己 的 實 際 情 況 ,選 擇 合 適 的 規(guī) 格 色 譜 柱 。粒 徑 較 小 的 色 譜 柱 , 柱 效 較 高 , 所 需 柱 長 較 短 , 從 而 柱 長 較 短 , 從 而 可 縮 短分 析 時 間 。 同 時 , 粒 徑 較 小 的 色 譜 柱 , 對 操
32、作 環(huán) 境 與 規(guī) 范 性 的 要 求 也 更 高 。等 度 洗 脫 方 法 , 較 容 易 進 行 方 法 轉 換 。 梯 度 洗 脫 方 法 , 需 要 注 意 梯 度 表 與 柱長 的 比 例 關 系 , 以 及 系 統(tǒng) 的 梯 度 延 遲 體 積 轉 換 。 2015版 藥 典 四 部 解 析2015版 中 國 藥 典 四 部 主 要 變 化 理 化 部 分 2關 于 檢 測 器檢 測 器 的 種 類 與 作 用檢 測 器 是 液 相 色 譜 儀 的 “ 眼 睛 ”其 作 用 是 把 色 譜 柱 連 續(xù) 流 出 的 樣 品 組 分 轉 變 成 易 于 測 量 的 電 信 號 , 被 數(shù)
33、 據(jù) 系 統(tǒng) 接 收 , 得 到 樣品 分 離 的 色 譜 圖檢 測 器 性 能 的 好 壞 直 接 關 系 到 分 析 結 果 的 可 靠 性 與 準 確 性根 據(jù) 對 各 類 物 質 響 應 的 差 別 , 檢 測 器 可 分 為 三 大 類 :通 用 型 檢 測 器 ( 例 如 : 示 差 折 光 檢 測 器 )專 用 型 ( 選 擇 性 ) 檢 測 器 ( 例 如 : 紫 外 檢 測 器 、 熒 光 檢 測 器 )半 通 用 型 檢 測 器 ( 例 如 : 蒸 發(fā) 光 散 射 檢 測 器 ) 2015版 藥 典 四 部 解 析2015版 中 國 藥 典 四 部 主 要 變 化 理 化
34、部 分 2關 于 檢 測 器衡 量 檢 測 器 的 指 標靈 敏 度 : S= R/ Q- R是 檢 測 器 響 應 值 的 增 量- Q是 樣 品 量 的 增 量噪 音 : 沒 有 樣 品 時 檢 測 器 的 最 大 輸 出 信 號漂 移 : 檢 測 器 在 一 段 時 間 內 響 應 值 的 變 化線 性 動 態(tài) 范 圍 : 最 大 線 性 響 應 與 最 小 檢 出 限 之 比最 低 檢 測 限 : 樣 品 產(chǎn) 生 兩 或 三 倍 于 噪 音 信 號 時 的 濃 度信 噪 比 : S/N注 意 : 最 低 檢 測 限 和 信 噪 比 不 是 一 個 單 純 的 檢 測 器 指 標 。 它
35、 實 際 上 是 評 價 整 個 色 譜 柱 系 統(tǒng) 的 指 標 , 包括 了 色 譜 系 統(tǒng) 、 分 離 機 理 、 色 譜 柱 內 的 綜 合 性 指 標 VD高 效 液 相 色 譜 法(2)檢測器選擇性紫外、熒光、電化學通用型蒸發(fā)光散射、示差折光 VD高 效 液 相 色 譜 法(3)流動相反相色譜系統(tǒng)的流動相首選甲醇-水系統(tǒng)(采用紫外末端波長檢測時,首選乙腈-水系統(tǒng)),如經(jīng)使用不合適時,再選用其他溶劑系統(tǒng)。應盡可能少用含有緩沖液的流動相,必須使用時,應盡可能選用含較低濃度緩沖液的流動相。其中,調整流動相組分比例時,以組分比例較低者(小于或等于50%)相對于自身的改變量不超過30%且相對于
36、總量的改變量不超過10%為限,如30%相對改變量的數(shù)值超過總量的10%時,則改變量以總量的10%為限。 VD高 效 液 相 色 譜 法系統(tǒng)適用性試驗l理論板數(shù)l分離度l重復性l拖尾因子 VD高 效 液 相 色 譜 法測定法l內標法l外標法l加校正因子的主成分自身對照法l不加校正因子的主成分自身對照法l面積歸一化法 司 帕 沙 星P221 消 旋 山 莨 菪 堿P866 硫 酸 卡 那 霉 素P967氨 基 糖 苷 類 抗 生 素蒸 發(fā) 光 散 射 檢 測 法 阿 米 卡 星P388柱 前 衍 生 化 法 VE氣 相 色 譜 法系 采 用 氣 體 為 流 動 相 (載 氣 )流 經(jīng) 裝 有 填
37、充 劑 的 色 譜 柱 進 行 分 離 測 定 的 色 譜 方 法。 物 質 或 其 衍 生 物 氣 化 后 , 被 載 氣 帶 入 色 譜 柱 進 行 分 離 , 各 組 分 先 后 進 入 檢 測 器 , 用 數(shù)據(jù) 處 理 系 統(tǒng) 記 錄 色 譜 信 號 。 VE氣 相 色 譜 法l載氣源l進樣部分l色譜柱l柱溫箱l檢測器l數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) VE氣 相 色 譜 法檢 測 器 應 用火 焰 離 子 化 檢 測 器 (FID) 有 機 化 合 物熱 導 檢 測 器 (TCD) 無 機 氣 體 、有 機 化 合 物氮 磷 檢 測 器 (NPD) 氮 、磷 化 合 物火 焰 光 度 檢 測 器 (FP
38、D) 硫 、磷 化 合 物電 子 捕 獲 檢 測 器 (ECD) 鹵 素 等 化 合 物質 譜 檢 測 器 (MS) 結 構 確 證 VE氣 相 色 譜 法各品種項下規(guī)定的色譜條件,除檢測器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得改變外,其余如色譜柱內徑、長度、載體牌號、粒度、固定液涂布濃度、載氣流速、柱溫、進樣量、檢測器的靈敏度等,均可適當改變,以適應具體品種并符合系統(tǒng)適用性試驗的要求。一般色譜圖約于30分鐘內記錄完畢。 VE氣 相 色 譜 法測定法l內標法l外標法l面積歸一化法l標準溶液加入法(當采用頂空進樣時,由于供試品和對照品處于不完全相同的基質中,故可采用標準溶液加入法以消除基質效
39、應的影響;當標準溶液加入法與其他定量方法結果不一致時,應以標準加入法結果為準。) 對于生產(chǎn)過程中引入的有機溶劑,應在后續(xù)的生產(chǎn)環(huán)節(jié)予以有效去除。除正文已明確列有“殘留溶劑”檢查的品種必須依法進行該項檢查外,其他未在“殘留溶劑”項下明確列出的有機溶劑與未在正文中列有此項檢查的品種,如生產(chǎn)過程中引入或產(chǎn)品中殘留有機溶劑,均應按附錄“殘留溶劑測定法”檢查并應符合相應溶劑的限度規(guī)定。(凡例十七)VE氣 相 色 譜 法 頭 孢 泊 肟 酯P198殘 留 溶 劑 VF電 泳 法是 指 帶 電 荷 的 供 試 品 (蛋 白 質 、 核 苷 酸 等 )在 惰 性 支 持 介 質 (如 紙 、 醋 酸 纖 維
40、素 、瓊 脂 糖 凝 膠 、 聚 丙 烯 酰 胺 凝 膠 )中 , 在 電 場 的 作 用 下 , 向 其 對 應 的 電 極 方 向 按 各 自 的 速 度 進行 泳 動 , 使 組 分 分 離 成 狹 窄 的 區(qū) 帶 , 用 適 宜 的 檢 測 方 法 記 錄 其 電 泳 區(qū) 帶 圖 譜 并 計 算 其 含 量的 方 法 。 VG毛 細 管 電 泳 法是 指 以 彈 性 石 英 毛 細 管 為 分 離 通 道 , 以 高 壓 直 流 電 場 為 驅 動 力 , 依 據(jù) 供 試 品 中 各組 分 的 淌 度 (單 位 電 場 強 度 下 的 遷 移 速 度 )和 (或 )分 配 行 為 的
41、差 異 而 實 現(xiàn) 各 組 分 分 離 的 一 種分 析 方 法 。 鹽 酸 頭 孢 吡 肟P671 VH分 子 排 阻 色 譜 法是 根 據(jù) 待 測 組 分 的 分 子 大 小 進 行 分 離 的 一 種 液 相 色 譜 技 術 。 分 子 排 阻 色 譜 法 的 分離 原 理 為 凝 膠 色 譜 柱 的 分 子 篩 機 制 。 頭 孢 拉 定P195 VJ離 子 色 譜 法系 采 用 高 壓 輸 液 泵 系 統(tǒng) 將 規(guī) 定 的 洗 脫 液 泵 入 裝 有 填 充 劑 的 色 譜 柱 進 行 分 離 的 色 譜 分 析方 法 。 注 入 的 供 試 品 由 洗 脫 液 帶 入 色 譜 柱 內
42、 進 行 分 離 后 , 經(jīng) 過 抑 制 器 或 衍 生 系 統(tǒng) 進 入 檢 測 器 , 由積 分 儀 或 數(shù) 據(jù) 處 理 系 統(tǒng) 記 錄 色 譜 信 號 。 一 、 離 子 色 譜 的 基 本 原 理 一 、 離 子 色 譜 技 術 的 基 本 原 理 淋洗液在線發(fā)生器不用化學試劑,只用水(RFIC)1. 環(huán)保:不直接接觸化學試劑2. 使用方便:只用水和鼠標,省時省力3. 重現(xiàn)性好:消除試劑雜質的干擾、配制溶液的誤差和操作誤差,結果更可靠。4. 增加IC的應用效能,提高靈敏度和分離度,改善重現(xiàn)性,擴展應用,優(yōu)良的不同時間和不同實驗室之間的可比性。5. 普通等濃度泵即可作梯度淋洗,梯度淋洗和等
43、濃度淋洗同樣簡單方便,延長泵的使用壽命。 檢測方式電導 檢測具有電導性化合物的通用型檢測器離子色譜最常用的檢測器安培法 在特定的條件下可對某些化合物直接進行氧化還原反應紫外可見光度法紫外直接吸收或可見光光度法測定選擇性強 可進行柱后衍生 熒光法 HPLC質譜 一 、 離 子 色 譜 技 術 的 基 本 原 理 一 、 離 子 色 譜 技 術 的 基 本 原 理 一 、 離 子 色 譜 技 術 的 基 本 原 理 樣 品 的 前 處 理0.22,0.45um濾膜去除顆粒狀雜質C18預處理小柱、On-GuardRP柱去除有機分子石墨化碳黑柱去除色素On-GuardP柱去除土壤中腐殖酸、苯環(huán)類的化合
44、物On-GuardH、Na柱去除溶液中的金屬離子On-GuardAg柱去除溶液中的Cl-離子,主要測定高氯(海水)物質中的NO2-,NO3-等離子 在線離線除糖氨基酸樣品分析時,除去糖對氨基酸檢測時的干擾 離子色譜法應用 三 、 離 子 色 譜 在 藥 品 分 析 中 的 應 用 三 、 離 子 色 譜 在 藥 品 分 析 中 的 應 用 三 、 離 子 色 譜 在 藥 品 分 析 中 的 應 用 三 、 離 子 色 譜 在 藥 品 分 析 中 的 應 用 三 、 離 子 色 譜 在 藥 品 分 析 中 的 應 用 帕 米 膦 酸 二 鈉 注 射 液 三 、 離 子 色 譜 在 藥 品 分 析
45、 中 的 應 用 BEAConfidential.|104 Capitalization Titleandgraphiclabelsareinitialcapstwo-to-threeletterar ticlesarenotcapped(e.g.,ThisistheTitle) Bulletedtextissentencecapsinitialcaponfirstwordonlynoperiodatend(e.g.,Thisisthebulletedcopy) Propernamesareinitialcapsandacronymsareallcaps BEAConfidential.|10
46、5 BulletSlideWithTwoColumnsHeadingis20pt.ArialBold Multi-columnbulletitemsare20pt.Arial Secondlevelbulletis16pt.Arial Secondlevelbullet Firstlevelbullet Secondlevelbullet Secondlevelbullet Secondlevelbullet Headingis20pt.ArialBold Multi-columnbulletitemsare20pt.Arial Secondlevelbulletis16pt.Arial Se
47、condlevelbullet Firstlevelbullet SecondlevelbulletInstructions:Whenusingatwocolumnbulletedslide,youshouldneveruse3rdlevelbullets. BEAConfidential.|106 HighlightingBulletPoints Samplebulletpoint Useblue(R:0,G:114,B:234)tohighlightspecificbulletpointswithinyourslidecopy Samplebulletpoint Samplebulletp
48、oint Samplebulletpoint Usethisboxtohighlightcallouttextwhichisnotincludedinyourbulletcopy BEAConfidential.|107 AgendaSlide TopicOne TopicTwo TopicThree TopicFour TopicFive TopicSix TopicSeven BEAConfidential.|108 AgendaSlide TopicOne TopicTwo TopicThree TopicFour TopicFive TopicSix TopicSeven Instru
49、ctions:Todeemphasizeagendaitemsusegraycolor(178,180,179) BEAConfidential.|109 NumberedListsListcontentis20pt.Arial1 Listcontentis20pt.Arial5 Listcontentis20pt.Arial4 Listcontentis20pt.Arial3 Listcontentis20pt.Arial2 BEAConfidential.|110 OneBigPointHeader24pt.Arial Addtexttosupportyourmainpointforthi
50、sslide.Thetextboxwillscaletofitwithinthegraybox. BEAConfidential.|111 Subtitlesare28pt.Arial(R:122,G:128,B:131)UsingSubtitlesandAdjustingtheBulletTextBox Selectthesubtitletextboxabove,CopythenPasteitontotheslidethatrequiresasubtitle Thisensuresthatsubtitlesandbulletedtextwillbeintheexactposition(ass
51、howonthisslide)throughoutthepresentationandwillnotjumpfromslide-to-slide Bulletedtextissentencecapsinitialcaponfirstwordonlynoperiodatend(e.g.,Thisisthebulletedcopy) Subtitlesneverhaveaperiodattheend BEAConfidential.|112 SlideTransitionGuidelines ThedefaultPowerPointslidetransitionsetting(foundunder
52、 theSlideShowMenuoptions)is“NoTransition” Theslidetransitionswhileinterestingoftendetractfromcommunicatingyourmessage The“RandomTransition”shouldneverbeusedinapresentation Toadjusttheslidetransitions,goto“SlideShow”“SlideTransition” BEAConfidential.|113 SlideAnimationGuidelines Thepurposeofslideanim
53、ationandbuildsistoenhancethemessage,notdetractfromit Becauseofthis,itisimpor tanttouseslideanimationsparinglyandonlywhennecessar y Toadjusttheslideanimations,select“CustomAnimation”under theTaskPane Use“Appear ”optionfor theanimation BEAConfidential.|114 SettingBlackandWhitePrintingPreferences Toset
54、theblackandwhiteprintingpreferences: Selectgrayscaleorpureblackandwhiteview ViewColor/GrayscaleGrayscale Thiswilldisplaytheslideingrayscalemodeandwillallowyoutoseehowtheslidewillprint ClickonaslideobjectandselectGrayscaleSettingfromthemenu Youwillseealistingofoptionstochoosefrom Automaticisthedefaul
55、tandisacceptable ExperimentwithalternateGrayscalesettingstoensureoptimumprinting SelectViewColor/GrayscaleColor toreturntothecolorslidemodeContinuedonslide15 BEAConfidential.|115 SettingBlackandWhitePrintingPreferences(Cont.) Ifyouareusingtransparency(forhighlights,etc.),youwillneedtoturntheblackand
56、whiteprintingsettingsto“dontshow” Tosettheblackandwhiteprintingsettingsto“dontshow” SelectViewColor/GrayscaleGrayscale Right-clickonthetransparentobject SelectGrayscaleSettingDontShow Thehighlightboxbelowisincludedasanexampleofanobjectwithproperlysetblackandwhiteprintingsettings Thisprocessaccommoda
57、tesforaprintingbugwithinPowerPointapplication BEAConfidential.|116 SavingThisTemplateasYourDefaultDesignTemplate OpentheBEACorporateTemplate GototheFilemenuandselect“Saveas” AtthebottomoftheSaveAsdialogbox,click“Saveastype,”andchoose“DesignTemplate” Inthe“Filename”box,typetheword“Blank” Click“Save”
58、Thefilewillbesavedas“Blank .pot,”whichPowerPointrecognizesasadefaulttemplatefile BEAConfidential.|117 ApplyingtheCorporateTemplateSlideDesigntoanExistingPresentation Openanexistingpresentation,selectallslidesfromtheslidesor ter viewandselectEditCopy OpenacopyofthenewBEAtemplateand“paste”theslidesint
59、otheslidesor ter view A“pasteoptions”clipboardiconwillappear Rollyourmouseover theiconandfollowthedownarrow Select“Usedesigntemplateformatting” Selecteachslideandapplyadesigntemplate Right-clickonslidesintheslidesor ter viewandselect“SlideDesign” IntheSlideDesignpane,rollyourmouseover theBEAstyleyou
60、wanttoapply,clickthearrowinsi dethethumbnailandselect“applytoselectedslides”Continuedonslide18 BEAConfidential.|118 ApplyingtheCorporateTemplateSlideDesigntoanExistingPresentation(Cont.) Next,eachslidewillneedtohavetheappropriateslidelayoutapplied Right-clickonslidesintheslidesor ter viewandselect“S
61、lideLayout” IntheSlideLayoutpane,mouseover thedesiredlayoutthumbnailandselect“applytoselectedslides” Graphicelementsontheslidesmayneedtobeadjustedtoreflectthenewcolorpalette Someslideelementswillneedlayoutadjustmentstoconformtothenewtemplatedesign BEAConfidential.|119 ImportingSlidesfromAnotherPrese
62、ntation Openth presentationyouareconver tingandacopyoftheBEAtemplateinSlideSor terView Selecttheslide(s)youwouldliketoimpor t,andchooseEditCopy SelecttheBEACorporatetemplate Selecttheslideyouwanttheimpor tedslide(s)tofollow,andchooseEditPaste Theimpor tedslidesshouldtakeontheBEAtemplate Ensureeachsl
63、idehastheappropriateslidelayoutapplied Right-clickonslidesintheslidesor ter viewandselect“SlideLayout” IntheSlideLayoutpane,mouseover thedesiredlayoutthumbnailandselect“applytoselectedslides” BEAConfidential.|120 “ Usethisformatforquotes.Textsizeshouldbeaminimumof22pt.andcanbeaslargeas32pt.Textshoul
64、dnotbecenteraligned.Pleasedonotresizethegrayboxaroundthequote.”-SourceNameQuoteSlide ColorPaletteandSampleCharts BEAConfidential.|122 ColorPaletteR:0 G:114B:234R:101G:174B:255 R:0G:60B:12 R:32G:195B:30R:138G:202B:136 R:36G:124B:34 R:182G:70B:184R:210G:144B:212 R:117G:45B:119 R:255G:0B:42R:255G:91B:9
65、1 R:158G:0B:26 R:178G:180B:179R:211G:211B:211 R:122G:128B:131 BEAConfidential.|123 FlowDiagramUsingCorporateColorsStep1 Step2 Step3Supportingbulletcopyhere Supportingbulletcopyhere SupportingbulletcopyhereSupportingbulletcopyhereSupportingbulletcopyhere SupportingbulletcopyhereSupportingbulletcopyhe
66、re BEAConfidential.|124 SampleBarChart Instructions:Thecolorpalettehasbeensetinthischart.Tocreateanewchart,copythischartontoyourslide.Toupdatethedata,double-clickonthecharttobringupthePPTcharteditor.ForadditionalinformationonworkingwiththePPTchartingfeature,followthislin khttp:/ BEAConfidential.|125 SamplePieChart Instructions:Thecolorpalettehasbeensetinthischart.Tocreateanewchart,copythischartontoyourslideandupdatethedatatosuityourneeds BEAConfidential.|126 RowHead Head Head HeadColumnHead Data
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