《動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)》PPT課件

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1、 一 、 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng)為 什 么 要 進(jìn) 行 動(dòng)物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) ？材 料 一 ： 在 治 療 燒 傷 病 人 時(shí) ， 通 常 是 取 病 人的 健 康 皮 膚 進(jìn) 行 自 體 移 植 。 對(duì) 于 大 面 積 燒 傷的 病 人 ， 自 體 健 康 皮 膚 非 常 有 限 ， 使 用 他 人皮 膚 來(lái) 源 又 不 足 ， 且 會(huì) 產(chǎn) 生 排 斥 反 應(yīng) 。 怎 樣才 能 獲 得 大 量 的 自 體 健 康 皮 膚 呢 ？材 料 二 ： 許 多 動(dòng) 物 細(xì) 胞 能 分 泌 蛋 白 質(zhì) ， 如 抗體 等 。 但 是 ， 單 個(gè) 細(xì) 胞 產(chǎn) 生 的 蛋 白 質(zhì) 很 少 ，怎 樣 才 能 獲

2、 得 大 量 的 分 泌 蛋 白 呢 ？ 、 什 么 是 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) ？ 、 具 體 培 養(yǎng) 過(guò) 程（ 1） 為 什 么 要 把 動(dòng) 物 組 織 分 散 成 單 個(gè) 細(xì) 胞 ？ 完 成 44頁(yè) 兩 個(gè) 問(wèn) 號(hào) 。（ 2） 什 么 叫 細(xì) 胞 貼 壁 ？ 什 么 叫 接 觸 抑 制 ？（ 3） 什 么 叫 原 代 培 養(yǎng) ？ 什 么 叫 傳 代 培 養(yǎng) ？（ 4） 總 結(jié) 出 具 體 的 培 養(yǎng) 過(guò) 程 ？任 務(wù) ： 閱 讀 教 材 第 44-46頁(yè) 第 一 段時(shí) 間 ： 4分 鐘問(wèn) 題 ： 就 是 從 動(dòng) 物 機(jī) 體 中 取 出 相 關(guān) 組 織 ， 將它 分 散 成 單 個(gè) 細(xì) 胞

3、 ， 然 后 ,放 在 適 宜 的 培養(yǎng) 基 中 ， 讓 這 些 細(xì) 胞 生 長(zhǎng) 和 繁 殖 。1、 概 念 ：一 、 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 2、 培 養(yǎng) 過(guò) 程 ：為 什 么 要 把 動(dòng) 物 組 織 分 散 成 單個(gè) 細(xì) 胞 ？ 怎 樣 分 散 成 單 個(gè) 細(xì) 胞的 ？ 完 成 44頁(yè) 兩 個(gè) 問(wèn) 號(hào)成 塊 的 組 織 中 細(xì) 胞 與 細(xì) 胞 靠 在一 起 ， 彼 此 限 制 了 細(xì) 胞 的 生 長(zhǎng)和 增 殖 。 另 外 ， 單 個(gè) 細(xì) 胞 所 需的 營(yíng) 養(yǎng) 容 易 供 應(yīng) ， 其 代 謝 廢 物容 易 排 出 。 所 以 分 散 成 單 個(gè) 細(xì)胞 后 培 養(yǎng) 。 用 胰 蛋 白 酶 分

4、散 細(xì) 胞 ， 說(shuō) 明 細(xì) 胞 間 的 物 質(zhì) 主 要 是 蛋白 質(zhì) 。 胃 蛋 白 酶 作 用 的 適 宜 pH約 為 2， 當(dāng) pH大 于 6時(shí) ， 胃蛋 白 酶 就 會(huì) 失 去 活 性 。 胰 蛋 白 酶 作 用 的 適 宜 環(huán) 境 pH為7.2 8.4。 多 數(shù) 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 的 適 宜 pH為 7.2 7.4， 胃蛋 白 酶 在 此 環(huán) 境 中 沒 有 活 性 ， 而 胰 蛋 白 酶 在 此 環(huán) 境 中 活性 較 高 ， 因 此 胰 蛋 白 酶 適 宜 用 于 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 時(shí) 的 消 化 。 44頁(yè) 兩 個(gè) 小 問(wèn) 題 的 答 案 胰 蛋 白 酶 除 了 可 以 消 化

5、 細(xì) 胞 間 的 蛋 白 外 ， 長(zhǎng) 時(shí) 間 的作 用 也 會(huì) 消 化 細(xì) 胞 膜 蛋 白 ， 對(duì) 細(xì) 胞 有 損 傷 作 用 ， 因 此 必須 控 制 好 胰 蛋 白 酶 的 消 化 時(shí) 間 。 3、 幾 個(gè) 重 要 的 概 念l細(xì) 胞 貼 壁懸 液 中 分 散 的 細(xì) 胞 很 快 就 貼 附 在 瓶 壁 上 (單 層 )。要 求 ： 培 養(yǎng) 瓶 （ 皿 ） 內(nèi) 表 面 光 滑 、 無(wú)毒 、 易 于 貼 附 。 l接 觸 抑 制當(dāng) 貼 壁 細(xì) 胞 分 裂 生 長(zhǎng) 到 表 面 相 互 接 觸 時(shí) ， 細(xì) 胞會(huì) 停 止 分 裂 增 殖 ， 這 種 現(xiàn) 象 稱 為 細(xì) 胞 的 接 觸 抑制 。 l

6、原 代 培 養(yǎng)l傳 代 培 養(yǎng)貼 滿 瓶 壁 的 細(xì) 胞 需 要 重 新 用 胰 蛋 白 酶 等 處 理讓 細(xì) 胞 繼 續(xù) 培 養(yǎng) ， 這 樣 的 培 養(yǎng) 過(guò) 程 通 常 被 稱為 傳 代 培 養(yǎng) 。 （ 即 從 原 培 養(yǎng) 瓶 內(nèi) 轉(zhuǎn) 接 到 新 的培 養(yǎng) 瓶 內(nèi) 過(guò) 程 。 ）通 常 將 動(dòng) 物 組 織 消 化 后 的 初 次 培 養(yǎng) 稱 為原 代 培 養(yǎng) 。 l 細(xì) 胞 株 傳 到 40-50代 后 有 部 分 細(xì) 胞 遺 傳 物 質(zhì) 發(fā)生 了 變 化 ， 具 有 癌 細(xì) 胞 的 特 點(diǎn) ， 失 去 接 觸 抑制 ， 可 能 在 培 養(yǎng) 條 件 下 無(wú) 限 制 的 傳 代 下 去 。 從

7、 原 代 培 養(yǎng) 細(xì) 胞 群 中 篩 選 出 進(jìn) 行 傳 代培 養(yǎng) 的 細(xì) 胞 ， 能 傳 到 40-50代 ， 其 遺 傳 物 質(zhì)沒 有 發(fā) 生 變 化 。l 細(xì) 胞 系l注 意目 前 使 用 的 細(xì) 胞 通 常 為 10代 以 內(nèi) ， 以 保 持細(xì) 胞 正 常 的 二 倍 體 核 型 。 胰 蛋 白 酶剪 碎 加 培 養(yǎng) 液部 分 細(xì) 胞 “ 癌 變 ” ，無(wú) 限 傳 代動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 不 能最 終 培 養(yǎng) 成 動(dòng) 物 體 原代培養(yǎng)傳 代 培 養(yǎng) 細(xì)胞貼壁剝 離 、 分 瓶培 養(yǎng) 過(guò) 程 ：分 化 程 度 低 ， 增 殖 能 力 強(qiáng) 去 掉 組 織間 蛋 白 細(xì) 胞 懸 浮 液 1

8、0代細(xì) 胞 50代細(xì) 胞 無(wú) 限傳 代原 代 培 養(yǎng) 傳 代 培 養(yǎng)細(xì) 胞 株 細(xì) 胞 系細(xì) 胞 貼 壁 生 長(zhǎng)隨 細(xì) 胞 增 多 ，出 現(xiàn) 接 觸 抑 制 部 分 細(xì) 胞 癌 變 ，失 去 接 觸 抑 制 ，無(wú) 限 傳 代 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 都 需 要 滿 足 什 么 條 件 ？任 務(wù) ： 閱 讀 教 材 第 46頁(yè) 黑 體 字 后 面時(shí) 間 ： 4分 鐘問(wèn) 題 ： 4、 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 條 件l無(wú) 菌 、 無(wú) 毒 的 環(huán) 境（ 添 加 一 定 量 的 抗 生 素 ， 定 期 更 換 培 養(yǎng) 液 ）l營(yíng) 養(yǎng)（ 葡 萄 糖 、 氨 基 酸 、 無(wú) 機(jī) 鹽 、 維 生 素 、動(dòng) 物

9、 血 清 、 微 量 元 素 等 ）l溫 度 和 PH溫 度 36.5+0.5度 ， pH 7.2 7.4l氣 體 環(huán) 境O 2和 CO2（ 95%空 氣 和 5%CO2） 離 體 培 養(yǎng) 的 細(xì) 胞 對(duì) 微 生 物 和有 毒 物 質(zhì) 沒 有 防 御 能 力 。保 證 細(xì) 胞 順利 的 生 長(zhǎng) 增殖 CO2培 養(yǎng) 箱 哺 乳 動(dòng) 物 離 體 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 和 體 內(nèi) 細(xì) 胞 一 樣 ,需要 在 恒 足 溫 度 下 才 能 生 存 ,溫 差 變 化 一 般 不 應(yīng) 超過(guò) 0.5度 ， 因 此 培 養(yǎng) 箱 對(duì) 溫 度 應(yīng) 具 有 較 高 靈 敏 度 。 CO2培 養(yǎng) 箱 的 優(yōu) 點(diǎn) 在 于 能

10、恒 定 地 供 應(yīng) 一 定 量的 CO2,一 般 5%即 可 維 持 培 養(yǎng) 液 PH值 穩(wěn) 定 。培 養(yǎng) 基 的 類 型l天 然 培 養(yǎng) 基 ：l合 成 培 養(yǎng) 基 ： 營(yíng) 養(yǎng) 價(jià) 值 高 ， 成 分 復(fù) 雜 。成 分 明 確 ， 便 于 控 制 試 驗(yàn) 條 件 。 5、 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 技 術(shù) 的 應(yīng) 用（ 1） 生 產(chǎn) 蛋 白 生 物 制 品 ： 病 毒 疫 苗 、 干 擾 素 、單 克 隆 抗 體 等 ；（ 4） 用 于 檢 測(cè) 有 毒 物 質(zhì) ；（ 2） 獲 得 大 量 自 身 的 皮 膚 細(xì) 胞 ， 用 于 植 皮 ；（ 3） 作 為 基 因 工 程 的 受 體 細(xì) 胞 。

11、（ 5） 用 于 生 理 、 病 理 、 藥 理 等 方 面 的 研 究 ，為 治 療 和 預(yù) 防 疾 病 提 供 理 論 依 據(jù) ； 6、 植 物 細(xì) 胞 和 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 的 比 較比 較 項(xiàng) 目 植 物 組 織 培 養(yǎng) 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng)原 理培 養(yǎng) 基 性 質(zhì)培 養(yǎng) 基 特 有 成 分培 養(yǎng) 結(jié) 果培 養(yǎng) 目 的 獲 得 細(xì) 胞 或 細(xì) 胞 分 泌 蛋 白細(xì) 胞 的 全 能 性 細(xì) 胞 株 、 細(xì) 胞 系植 物 體快 速 繁 殖 、 培 育無(wú) 病 毒 植 株 等 葡 萄 糖 、 動(dòng) 物 血 清促 生 長(zhǎng) 因 子蔗 糖 、 植 物 激 素 液 體 培 養(yǎng) 基固 體 培 養(yǎng)

12、基 細(xì) 胞 增 殖 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng)特 點(diǎn)原 理概 念 ： 貼 壁 生 長(zhǎng) ， 接 觸 抑 制動(dòng)物組織 胰 蛋 白 酶剪 碎 單個(gè)細(xì)胞 加 培 養(yǎng) 液 細(xì)胞懸液 分 瓶 培 養(yǎng)10代細(xì)胞 50代細(xì)胞 不死細(xì)胞細(xì) 胞 株 細(xì) 胞 系適 宜 條 件培 養(yǎng) 條 件 無(wú) 菌 無(wú) 毒 ， 營(yíng) 養(yǎng) ， 溫 度 、 PH， 氣 體 環(huán) 境過(guò) 程 細(xì) 胞 增 殖 1、 在 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 過(guò) 程 中 遺 傳 物 質(zhì) 發(fā)生 改 變 的 細(xì) 胞 是 （ ） A 細(xì) 胞 系 B 細(xì) 胞 株 C 原 代 細(xì) 胞 D 傳 代 細(xì) 胞2、 動(dòng) 物 細(xì) 胞 工 程 技 術(shù) 的 基 礎(chǔ) 是 （ ） A.動(dòng) 物

13、細(xì) 胞 融 合 B.單 克 隆 抗 體 C.胚 胎 移 植 D.動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng)A D 3、 用 于 動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 的 組 織 和 細(xì) 胞 大 都 取 自胚 胎 或 出 生 不 久 的 幼 齡 動(dòng) 物 的 器 官 或 組 織 ，其 主 要 原 因 是 這 樣 的 組 織 細(xì) 胞 （ ）A.容 易 產(chǎn) 生 各 種 變 異 B.具 有 更 強(qiáng) 的 全 能 性C.取 材 十 分 方 便 D 分 裂 增 殖 的 能 力 強(qiáng)D4.動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 與 植 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 的 重 要 區(qū) 別 在于 （ ） A.培 養(yǎng) 基 不 同 ；B.動(dòng) 物 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 不 需 要 在 無(wú) 菌 條 件 下 進(jìn) 行 ；C.動(dòng) 物 細(xì) 胞 可 以 傳 代 培 養(yǎng) ， 而 植 物 細(xì) 胞 不 能 ；D.動(dòng) 物 細(xì) 胞 能 夠 大 量 培 養(yǎng) ， 而 植 物 細(xì) 胞 能 培 養(yǎng)成 植 株 。A 1.預(yù) 習(xí) 體 細(xì) 胞 核 移 植 技 術(shù)2.完 成 練 習(xí) 冊(cè) 及 報(bào) 紙 相 關(guān) 習(xí) 題