穿心蓮內(nèi)酯體內(nèi)外抗炎

單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),*,新穿心蓮內(nèi)酯在體內(nèi)外抗炎活性研究,選自：The American Journal of Chinese Medicine,SCI影響因子0.710,Abstract,新穿心蓮內(nèi)酯，是一個(gè)來(lái)自穿心蓮植物的一種提取物。本文主要研究新穿心蓮內(nèi)酯在體內(nèi)和體外的抗炎作用及機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)口服新穿心蓮內(nèi)酯（150毫克/千克）顯著抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹。口服新穿心蓮內(nèi)酯（100150毫克/千克）也能減少醋酸致小鼠血管通透性增加。在體外進(jìn)行研究，利用巨噬細(xì)胞系RAW 264.7探討新穿心蓮內(nèi)酯抑制phorbol-12-myristate-13-acetate刺激呼吸系統(tǒng)和脂多糖誘導(dǎo)產(chǎn)生一氧化氮、腫瘤壞死因子（腫瘤壞死因子-）。,通過(guò)光學(xué)測(cè)量，結(jié)果顯示新穿心蓮內(nèi)酯抑制有刺激因子刺激呼吸系統(tǒng)產(chǎn)生炎癥因子，新穿心蓮內(nèi)酯抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一氧化氮和腫瘤壞死因子-，促進(jìn)抗炎活性的作用。這些結(jié)果表明，新穿心蓮內(nèi)酯具有顯著的抗炎作用。,關(guān)鍵詞：新穿心蓮內(nèi)酯；耳水腫；血管通透性；一氧化氮；腫瘤壞死因子-；巨噬細(xì)胞炎癥。,Materials and Methods,制備新穿心蓮內(nèi)酯的主要方法：冷浸法，干葉（1千克）被浸漬在95%乙醇在室溫下保存三天。過(guò)濾后，乙醇溶液是在真空蒸發(fā)去除溶劑。殘留（320克）浸膏用乙酸乙酯對(duì)水和乙酸乙酯部分（45克）在硅膠柱進(jìn)行層析，洗脫用石油醚/丙酮（7:3），產(chǎn)生2克純新穿心蓮內(nèi)酯。新穿心蓮內(nèi)酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定紅外，紫外，核磁共振和質(zhì)譜等進(jìn)行測(cè)定。其純度大于96%，以高效液相色譜分析（圖1）。該新穿心蓮內(nèi)酯溶解在二甲基亞砜（DMSO）存放在20的環(huán)境中。,其他化學(xué)試劑：醋酸豆寇酯、內(nèi)毒素（脂多糖），青霉素，鏈球菌霉素，魯米諾（苯巴比妥），三乙胺和其他生化試劑等。醋酸豆寇酯溶解在DMSO中，脂多糖（50克/毫升）不是加入的磷酸緩沖溶液。都存放到-20C 的環(huán)境中。,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：小白鼠（282克）,抗炎活性的新穿心蓮內(nèi)酯化學(xué)結(jié)構(gòu),實(shí)驗(yàn)一：二甲苯引起的小鼠耳腫脹,局部應(yīng)用二甲苯50微升，涂于老鼠的左耳，右耳為對(duì)照。新穿心蓮內(nèi)酯分為三個(gè)不同的劑量（50，100和150毫克/千克）一小時(shí)前讓小白鼠口服，再加一組地塞米松（20毫克/公斤）作為陽(yáng)性對(duì)照,實(shí)驗(yàn)二：醋酸刺激誘導(dǎo)小鼠內(nèi)臟痛模型,把小鼠分成5組，分別給予動(dòng)物腹腔注射1毫升/100克醋酸（0.6%，體積比）。30分鐘后注射醋酸和腹腔沖洗正常鹽水（3毫升）1小時(shí)后口服新穿心蓮內(nèi)酯（50，100和150毫克/千克），0.2毫升伊萬(wàn)斯藍(lán)染料（0.25%生理鹽水）靜脈注射部位在尾靜脈。對(duì)照組注入地塞米松（20毫克/千克）同等劑量和生理鹽水相比較。在610納米條件下對(duì)染料進(jìn)行檢測(cè)。,實(shí)驗(yàn)三：新穿心蓮內(nèi)酯對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中一氧化氮生產(chǎn)的影響,新穿心蓮內(nèi)酯并沒(méi)有顯著影響基底原料264.7巨噬細(xì)胞。然而，新穿心蓮內(nèi)酯在沒(méi)有生產(chǎn)的巨噬細(xì)胞治療內(nèi)毒素的情況下是劑量依賴性地抑制內(nèi)毒素（圖4），在濃度從30到150m。結(jié)果的基礎(chǔ)上的微量細(xì)胞活力檢測(cè)，新穿心蓮內(nèi)酯無(wú)毒性從30到90m（細(xì)胞存活超過(guò)95%與對(duì)照組相比）。只有在最高劑量（150m），一些細(xì)胞（細(xì)胞存活率明顯低于65%與對(duì)照組相比）。,實(shí)驗(yàn)四：在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞下新穿心蓮內(nèi)酯對(duì)腫瘤壞死因子-生產(chǎn)的影響。,腫瘤壞死因子-是一個(gè)重要的炎癥介質(zhì)分泌的脂多糖，誘導(dǎo)264.7巨噬細(xì)胞系巨噬細(xì)胞。圖5顯示，新穿心蓮內(nèi)酯從30到150m，腫瘤壞死因子-濃度在LPS處理組劑量依賴性減少，相比于對(duì)照組在無(wú)脂多糖誘導(dǎo)下。,Result,實(shí)驗(yàn)一：新穿心蓮內(nèi)酯顯著（0.05）的二甲基苯致耳毒水腫在150毫克/千克劑量后二甲基苯應(yīng)用（表1）。地塞米松也有顯著抑制水腫。新穿心蓮內(nèi)酯對(duì)在不同時(shí)間段由醋酸刺激小鼠所引起的內(nèi)臟絞痛誘導(dǎo)模型，而使其血管統(tǒng)透性增加有一定的抑制和調(diào)解作用。化學(xué)誘導(dǎo)的血管通透性（如乙酸）會(huì)立即持續(xù)反應(yīng)?？诜?00150毫克/公斤新穿心蓮內(nèi)酯誘發(fā)一個(gè)明顯的劑量相關(guān)的抑制醋酸致小鼠血管通透性增加（表2）。抑制表明，新穿心蓮內(nèi)酯可有效地抑制急性炎癥的滲出期。,實(shí)驗(yàn)二：新穿心蓮內(nèi)酯隨著劑量的增加能顯著增加血管的通透性。,實(shí)驗(yàn)三：新穿心蓮內(nèi)酯對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中一氧化氮的生產(chǎn) 具有明顯的抑制作用,實(shí)驗(yàn)四：在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞新穿心蓮內(nèi)酯對(duì)腫瘤壞死因子-生產(chǎn)有明顯的抑制作用。,Discussion,穿心蓮提取物已被用于傳統(tǒng)中醫(yī)治療細(xì)菌性感染和炎癥性疾病。然而，這些機(jī)制的生物活性尚未完全澄清。在目前的研究，一個(gè)從穿心蓮植物中分離出來(lái)的二萜內(nèi)酯類(lèi)化合物新穿心蓮內(nèi)酯在體內(nèi)和體外的抗炎機(jī)制和作用我們發(fā)現(xiàn)：體內(nèi)藥理結(jié)果發(fā)現(xiàn)新穿心蓮內(nèi)酯具有抗炎活性在甲基苯致小鼠耳腫脹模型和醋酸所致刺激的內(nèi)臟傷害小鼠模型。為了澄清新穿心蓮內(nèi)酯抗炎機(jī)制，新穿心蓮內(nèi)酯對(duì)活化巨噬細(xì)胞的抑制作用介紹在體外進(jìn)行試驗(yàn)。在炎癥過(guò)程，在具體的和非特異性免疫過(guò)程中。被激活的巨噬細(xì)胞釋放大量的炎癥介質(zhì)，如活性氧、白三烯、白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子-等。所有這些抗炎物質(zhì)有能力誘導(dǎo)組織損傷直接或間接增加炎癥反應(yīng)。因此，一種藥物能夠防止釋放炎癥介質(zhì)應(yīng)該可能具有抗炎作用。,從本報(bào)告數(shù)據(jù)表明，新穿心蓮內(nèi)酯引起劑量依賴性抑制一氧化氮和腫瘤壞死因子-產(chǎn)生在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中。新穿心蓮內(nèi)酯，對(duì)加脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥介質(zhì)產(chǎn)生有抑制作用但沒(méi)有細(xì)胞毒作用。這表明，新穿心蓮內(nèi)酯并不是由于細(xì)胞死亡從而減少和減輕炎癥介質(zhì)的釋放和作用。低濃度新穿心蓮內(nèi)酯有輕度刺激免疫反應(yīng)的作用對(duì)在體內(nèi)沒(méi)有生產(chǎn)免疫因子的時(shí)候。這可能意味著，新穿心蓮內(nèi)酯，在低濃度時(shí)，可作為免疫刺激劑?？梢赃M(jìn)一步的研究其機(jī)制和構(gòu)效關(guān)系的進(jìn)展。,總之，新穿心蓮內(nèi)酯的抗炎活性可能有助于對(duì)改善炎癥性疾病在早期階段的巨噬細(xì)胞活化。因此，穿心蓮植物中所含的新穿心蓮內(nèi)酯是其一個(gè)主要參與抗炎作用的組成部分。,