植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較ppt課件

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植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較,,全能性,,增殖,,固體,,液體,,蔗糖,,動物血清,,細(xì)胞株、細(xì)胞系,,細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白,1,溫故而知新——植物體細(xì)胞雜交（馬鈴薯番茄）,融合的原生質(zhì)體AB,,再生出細(xì)胞壁,植物細(xì)胞的融合,雜種細(xì)胞AB,人 工 誘 導(dǎo),動物細(xì)胞可以融合嗎？ 如果可以，兩者相同嗎？,2,2.2.2動物細(xì)胞融合 與單克隆抗體,帶著問題走進(jìn)課堂？,2.2 動物細(xì)胞工程,3,自主閱讀，p52第2自然段，思考下列問題：,什么叫動物細(xì)胞融合 ？ （概念要點）,① 兩個或多個動物細(xì)胞 ② 一個細(xì)胞（雜交單核細(xì)胞）,動物細(xì)胞融合,4,動物細(xì)胞融合過程示意圖,不同DNA的兩個細(xì)胞,,,,,滅活的病毒,,,,,,,,,,有絲分裂,,兩個完整的雜交細(xì)胞,,,,5,一、動物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）,1、概念：,指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。,2、結(jié)果：,形成單核的雜交細(xì)胞,3、原理：,細(xì)胞膜的流動性,,,4、誘導(dǎo)方式,,物理法：離心、振動、電激,化學(xué)法：聚乙二醇（PEG),生物法：滅活的病毒,6,思考討論：為什么細(xì)胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？,因為滅活的病毒能使細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂 質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅 活的話會感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。,7,5、過程：,動物細(xì)胞A 動物細(xì)胞B,,誘導(dǎo)，融合,2個完整的雜交細(xì)胞AB,有絲分裂,,（膜融合、質(zhì)融合）,,（核融合）,,注意：動物細(xì)胞的融合也需要把多個兩種細(xì)胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再從中篩選雜交細(xì)胞,8,6、意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。,7、應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段 特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體,9,思考題,1.植物體細(xì)胞雜交時首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)胞壁？,酶解法，如纖維素酶或果膠酶,2.動物細(xì)胞融合時需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？,無需，因為動物細(xì)胞無細(xì)胞壁,3.植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？,離心、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法,4.動物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？,能 還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo),5.植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形 成完整的雜種個體，動物細(xì)胞融合后能形成雜種動物個體嗎？,不能,,,,10,植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較,獲得雜種植株,細(xì)胞膜的流動性,細(xì)胞膜的流動性 細(xì)胞的全能性,去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合,使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合,物理（離心、振蕩、電刺激） 化學(xué)（聚乙二醇）,物理、化學(xué)方法（同左） 滅活的病毒,主要用于制備,單克隆抗體,11,2.動物細(xì)胞融合的概念,動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程，融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞。,,,,12,1、抗體 1.1 概念： 抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白 。 1.2 來源： B淋巴細(xì)胞。,二、單克隆抗體,13,B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：,１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。 ２．動物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。 ３．每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。,自主閱讀P52：傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及 缺陷是什么？怎樣解決這個問題？,14,2.1 、單克隆 由一個細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖(多次有絲分裂)形成的一個細(xì)胞群，叫一個克隆，即單克隆。,2、單克隆抗體的概念,2.2 、單克隆抗體 由一個效應(yīng)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖形成的一個細(xì)胞群產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體，即單克隆抗體。,要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞群。,15,3、原理：雜交瘤細(xì)胞具有兩個親本的特性，即能迅速大量增殖，又能足夠數(shù)量的單一抗體。,4、過程,B淋巴細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞,誘導(dǎo)融合,B-B細(xì)胞,,B-瘤細(xì)胞,瘤-瘤細(xì)胞,,選擇培養(yǎng),雜交瘤細(xì)胞（ B-瘤細(xì)胞）,,克隆化培養(yǎng),抗體檢測,雜交瘤細(xì)胞,,體外培養(yǎng),單克隆抗體,16,6.單克隆抗體的應(yīng)用：,特異性強(qiáng)、靈敏度高、產(chǎn)量大,①作為診斷試劑：準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合 優(yōu)點：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速,②用于,運載藥物：制成“生物導(dǎo)彈”,治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療,,5、單克隆抗體的特點：,17,思考問題：,1、本過程利用了哪些原理？,免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理,這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體,2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？,?,18,知識結(jié)構(gòu),兩個過程,,動物細(xì)胞培養(yǎng)過程,單克隆抗體制備過程,三個“一”,,一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 －－滅活的病毒,一個新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞,一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢,,,,19,1、動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是 （ ） A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和 B.制備單克隆抗體 C.培育新物種 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞 2、 動物細(xì)胞融合過程中所用的誘導(dǎo)劑——滅活的病毒，抗原性和感染力的有無是 （ ） A.失去抗原性，具有感染力 B.具有抗原性，也具有感染力 C.失去抗原性，也失去感染力 D.具有抗原性，失去感染力,B,課堂練習(xí),D,20,3、“生物導(dǎo)彈”是指 （ ） A.單克隆抗體 B.雜交瘤細(xì)胞 C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞 D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物,D,,4、科學(xué)家們用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是 （ ） A.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞 B.未經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞 C.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞 D.未經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞,C,21,5. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞 誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞， 在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是 （ ） ①淋巴細(xì)胞 ②小鼠骨髓瘤細(xì)胞 ③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞 ④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 ⑤雜交瘤細(xì)胞 A.②④ B.①③⑤ C.①②③④ D.②③,C,,,,6.動物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)融合決定于 ( ) A.細(xì)胞膜的流動性 B．細(xì)胞膜的選擇透過性 C.細(xì)胞質(zhì)的流動性 D．細(xì)胞質(zhì)酶的活性,A,22,