生物第十一單元 生物技術(shù)實(shí)踐 第39講 無(wú)菌操作技術(shù)實(shí)踐備考一體 蘇教版

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1、第39講無(wú)菌操作技術(shù)實(shí)踐第十一單元 生物技術(shù)實(shí)踐考綱要求考綱要求1.微生物的分離和培養(yǎng)。2.某種微生物數(shù)量的測(cè)定。3.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。考點(diǎn)一微生物的分離和培養(yǎng)考點(diǎn)二分離特定的微生物并測(cè)定其數(shù)量矯正易錯(cuò)強(qiáng)記長(zhǎng)句重溫高考 演練模擬內(nèi)容索引課時(shí)作業(yè)微生物的分離和培養(yǎng)考點(diǎn)一1.相關(guān)技能、技術(shù)和方法相關(guān)技能、技術(shù)和方法(1)無(wú)菌操作的技能干熱滅菌法是指將準(zhǔn)備滅菌的物品放在 內(nèi)，在 下加熱 h以達(dá)到滅菌的目的。濕熱滅菌法常采用 進(jìn)行，其使用包括加水、 、 、 、出鍋等步驟。知識(shí)梳理干熱滅菌箱12160170高壓蒸汽滅菌鍋裝鍋加熱排氣 保溫保壓(2)培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的概念：是為人工培養(yǎng)微生物而制

2、備的適合微生物_ 的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)組成：一般都含有 、 (提供碳元素的物質(zhì))、 (提供氮元素的物質(zhì))和無(wú)機(jī)鹽等最基本的物質(zhì)。此外，根據(jù)擬培養(yǎng)的微生物的不同需要，有時(shí)還要加入 等特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中 使之滿足微生物生長(zhǎng)的需要。種類： 培養(yǎng)基和 培養(yǎng)基，前者的主要優(yōu)點(diǎn)是_ ，缺點(diǎn)是營(yíng)養(yǎng)成分 ；后者的優(yōu)點(diǎn)是 ，缺點(diǎn)是 。生長(zhǎng)、繁殖或積累水代謝產(chǎn)物碳源氮源pH天然維生素合成取材便利、營(yíng)養(yǎng)豐富、配制簡(jiǎn)便難以控制、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性較差化學(xué)成分及其含量明確，實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性好配制繁瑣、成本較高(3)微生物的接種接種：是指在 條件下將微生物接入 的操作過(guò)程。常用的工具有 等，在涂布平板接種時(shí)要用 ，

3、穿刺接種時(shí)要用接種針，在 或在固體培養(yǎng)基平板上進(jìn)行 時(shí)要用接種環(huán)。無(wú)菌玻璃涂布器、接種針、接種環(huán)培養(yǎng)基玻璃涂布器斜面接種劃線接種2.大腸桿菌的接種與分離培養(yǎng)大腸桿菌的接種與分離培養(yǎng)(1)配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基其操作步驟：配制培養(yǎng)基調(diào)節(jié)pH分裝包扎滅菌擱置斜面。(2)斜面接種和培養(yǎng)大腸桿菌主要目的： 、 和 等。主要步驟：準(zhǔn)備接種 挑取少許菌種 在 中培養(yǎng)大腸桿菌24 h將增殖的菌種放置在冰箱的冷藏室中(4 )保存。菌種轉(zhuǎn)移保存純凈菌種擴(kuò)大培養(yǎng)接種環(huán)滅菌試管口滅菌劃線接種37恒溫箱(3)平板劃線分離和培養(yǎng)大腸桿菌平板制作的方法及注意事項(xiàng)a.請(qǐng)用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程： 。b.甲、乙、

4、丙中的滅菌方法是 。c.丁中的操作需要等待 后才能進(jìn)行。平板劃線法是指用帶有微生物的 在平板培養(yǎng)基表面通過(guò)_而純化分離微生物的一種方法。丙乙甲丁平板冷卻凝固灼燒滅菌接種環(huán)分區(qū)劃線消毒和滅菌消毒和滅菌易混易混辨析辨析項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對(duì)人體有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學(xué)藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器的滅菌(1)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，有時(shí)還需要加入一些

5、特殊的物質(zhì)( )(2)倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上( )(3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害( )(4)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落( )(5)用涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落( )常考基礎(chǔ)診斷?？蓟A(chǔ)診斷教材熱點(diǎn)拓展教材熱點(diǎn)拓展如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請(qǐng)分析： (1)獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么？提示提示獲得效果A的接種方法為涂布平板法，獲得效果B的接種方法為平板劃線法。提示(2)某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落

6、連成了一片，最可能的原因是什么？應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？提示提示最可能的原因是菌液濃度過(guò)高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。(3)接種操作為什么一定要在火焰附近進(jìn)行？提示提示火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域。提示命題點(diǎn)一微生物的培養(yǎng)和無(wú)菌技術(shù)分析命題點(diǎn)一微生物的培養(yǎng)和無(wú)菌技術(shù)分析1.下表為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是 A.從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基B.該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨C.該培養(yǎng)基缺少提供生長(zhǎng)因子的物質(zhì)D.該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以接種使用命

7、題探究答案解析成分蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4伊紅美藍(lán)蒸餾水含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1 000 mL解析解析分析表中成分可知，該培養(yǎng)基中沒(méi)有凝固劑，為液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分齊全，但存在伊紅、美藍(lán)等鑒別物質(zhì)，屬于鑒別培養(yǎng)基，A項(xiàng)錯(cuò)誤；該培養(yǎng)基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是絕大多數(shù)微生物最常利用的碳源，B項(xiàng)正確；該培養(yǎng)基中存在的無(wú)機(jī)鹽和蛋白胨中的某些物質(zhì)可以看作是生長(zhǎng)因子，C項(xiàng)錯(cuò)誤；培養(yǎng)基調(diào)節(jié)完pH還要進(jìn)行滅菌等操作后才能使用，D項(xiàng)錯(cuò)誤。2.(2018臨川調(diào)研)微生物培養(yǎng)過(guò)程中，要十分重視無(wú)菌操作?，F(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的許多方面也要進(jìn)行無(wú)菌操作，防止雜

8、菌污染。請(qǐng)分析下列操作中錯(cuò)誤的是 煮沸消毒可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和部分芽孢接種操作要在酒精燈火焰附近進(jìn)行無(wú)菌繁殖脫毒苗時(shí)，植物的外植體要進(jìn)行消毒家庭制作葡萄酒時(shí)要將容器和葡萄進(jìn)行滅菌培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料不需要滅菌A. B.C. D.解析答案解析解析無(wú)菌操作包括消毒和滅菌。需進(jìn)行消毒處理的有植物的外植體及操作人員的雙手等，需進(jìn)行滅菌的有器皿、培養(yǎng)基、添加劑(指示劑或染色劑)等。煮沸可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢，屬于消毒；為防止空氣中雜菌污染，接種操作要在酒精燈火焰附近進(jìn)行；家庭制作葡萄酒時(shí)所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能滅菌；培養(yǎng)基常進(jìn)行高壓蒸汽滅

9、菌。故操作錯(cuò)誤。3.高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。研究者從熱泉中篩選出了能高效生產(chǎn)高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過(guò)程如下圖所示。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)號(hào)培養(yǎng)基從物理狀態(tài)來(lái)看，屬于固體培養(yǎng)基，配制時(shí)要加入_作為凝固劑，從用途來(lái)看屬于選擇培養(yǎng)基，應(yīng)以_作為唯一碳源。解析答案瓊脂淀粉解析解析固體培養(yǎng)基通常加入瓊脂作為凝固劑。本實(shí)驗(yàn)的目的是獲得產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，故其選擇培養(yǎng)基中應(yīng)以淀粉作為唯一碳源。(2)配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是 A.計(jì)算、稱量、倒平板、溶化、滅菌B.計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C.計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D.計(jì)算、稱量、滅菌、溶化、倒平板答案解析解析解析

10、配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(3)溶化時(shí)，燒杯中加入瓊脂后要不停地_，防止瓊脂糊底引起燒杯破裂。對(duì)培養(yǎng)基滅菌的方法一般為_。答案解析解析解析配制培養(yǎng)基加熱溶化時(shí)，要注意加入瓊脂后要不斷攪拌，防止瓊脂糊底。對(duì)培養(yǎng)基的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌法。攪拌高壓蒸汽滅菌答案解析(4)過(guò)程是_，過(guò)程所使用的接種方法是_法。稀釋涂布平板解析解析仔細(xì)觀察題圖可知過(guò)程，是菌液稀釋過(guò)程，是采用涂布平板法接種。(5)部分嗜熱菌在號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可釋放_(tái)分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈，挑選相應(yīng)的菌落，接種到號(hào)培養(yǎng)基進(jìn)一步分離純化后，再對(duì)菌種進(jìn)行_培養(yǎng)。答案淀粉酶擴(kuò)大解析解析解析能

11、產(chǎn)生淀粉酶的部分細(xì)菌能分解利用淀粉，其菌落周圍會(huì)出現(xiàn)透明圈，取這樣的菌落再分離純化可獲得相應(yīng)菌種，以后可以對(duì)菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)用于生產(chǎn)。1.培養(yǎng)基的配制原則培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：配制時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。(2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要適宜：細(xì)菌為6.57.5，放線菌為7.58.5，真菌為5.06.0，培養(yǎng)不同微生物所需的pH不同。歸納歸納整合整合2.微生物對(duì)主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求特點(diǎn)微生物對(duì)主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求特點(diǎn)(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是無(wú)機(jī)鹽，碳源可來(lái)自大氣中的CO2，氮源可由含氮無(wú)機(jī)鹽提供。(2)異養(yǎng)型微生物所

12、需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要是有機(jī)物，即碳源必須由含碳有機(jī)物提供，氮源也主要是由有機(jī)物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無(wú)機(jī)氮源。命題點(diǎn)二大腸桿菌的純化方法及過(guò)程分析命題點(diǎn)二大腸桿菌的純化方法及過(guò)程分析4.下圖中甲是涂布平板法中的部分操作，乙是平板劃線法的操作結(jié)果。 下列敘述中錯(cuò)誤的是 A.甲中涂布前要將涂布器灼燒，冷卻后才能取菌液B.對(duì)于濃度較高的菌液，如甲中的稀釋倍數(shù)僅為102，則所得的菌落不一定是 由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成C.乙培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求D.乙中的連續(xù)劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端答案解析解析解析灼燒后的涂布器如果沒(méi)有冷卻就接觸菌種，會(huì)將菌體殺死，A項(xiàng)正確；稀釋倍數(shù)過(guò)低會(huì)導(dǎo)致多個(gè)菌體

13、聚集在一起繁殖成菌落，B項(xiàng)正確；平板劃線法中最后一次劃線的末端處形成的菌落才是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成，這種菌落才符合要求，C項(xiàng)錯(cuò)誤；連續(xù)劃線中，除了第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端，目的是使菌體的密度越來(lái)越小，保證最后劃線末端處的菌落是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成的，D項(xiàng)正確。5.牛奶是微生物培養(yǎng)的良好培養(yǎng)基，牛奶在飲用前都要經(jīng)過(guò)巴氏消毒，以殺死有害微生物，為檢測(cè)消毒前后牛奶中細(xì)菌含量變化情況，做如圖1所示操作。用無(wú)菌吸管從錐形瓶中吸取1 mL生牛奶稀釋液至盛有9 mL無(wú)菌水的試管中，混合均勻，如此再重復(fù)2次。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：(1)巴氏消毒的方法是_，使用這種方法對(duì)生鮮牛

14、奶進(jìn)行消毒的好處是_。解析答案 在7075 煮30 min(或在80 煮15 min) 牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞解析解析巴氏消毒的方法是在7075 煮30 min或在80 煮15 min，可以殺死牛奶中的微生物，并且使牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。(2)取最終的牛奶稀釋液0.1 mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，應(yīng)選擇的涂布工具是圖2中的_。解析解析解析涂布使用的工具是涂布器，圖B正確。答案B(3)圖1中所示方法為涂布平板法，理想情況下，培養(yǎng)一段時(shí)間后可在培養(yǎng)基表面形成菌落。若用該方法培養(yǎng)設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿，菌落數(shù)分別為35個(gè)、33個(gè)、34個(gè)，則可以推測(cè)生牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為_個(gè)，運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較

15、實(shí)際值_ (填“偏大”或“偏小”)，原因是_。解析答案3.4106偏小個(gè)別菌落可能是由2個(gè)或多個(gè)細(xì)菌形成的解析解析菌落的平均數(shù)是34個(gè)，生牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)菌落平均數(shù)/涂布量稀釋倍數(shù)34個(gè)/0.1 mL1043.4106個(gè)/mL。在統(tǒng)計(jì)菌落時(shí)，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌落連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是單個(gè)菌落，所以運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往比實(shí)際值偏小。(4)消毒后的牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死，若繼續(xù)用該方法檢測(cè)消毒后的牛奶中細(xì)菌的數(shù)量，則在操作步驟上應(yīng)做什么改動(dòng)？_。解析解析解析由于消毒后牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死，所以可減少稀釋次數(shù)。答案減少稀釋次數(shù)(5)從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落中混有各種雜菌，從中檢

16、測(cè)出大腸桿菌的方法是在培養(yǎng)基中加入_，菌落具有_特征的可以認(rèn)定為大腸桿菌。解析解析大腸桿菌的代謝產(chǎn)物會(huì)使伊紅美藍(lán)鑒別培養(yǎng)基出現(xiàn)金屬光澤的紫黑色。伊紅美藍(lán)(金屬光澤的紫)黑色分離特定的微生物并測(cè)定其數(shù)量考點(diǎn)二知識(shí)梳理1.區(qū)分涂布平板法和混合平板法區(qū)分涂布平板法和混合平板法(1)過(guò)程如圖涂布混合(2)結(jié)果不同涂布平板法：細(xì)菌菌落通常僅在平板 生長(zhǎng)?；旌掀桨宸ǎ杭?xì)菌菌落出現(xiàn)在 。(3)目的相同：分離各種目的微生物。表面平板表面及內(nèi)部2.選擇培養(yǎng)分離選擇培養(yǎng)分離(1)方法：針對(duì)某種微生物的特性，設(shè)計(jì)一個(gè)特定的環(huán)境，使之特別適合這種微生物的生長(zhǎng)，而抑制其他微生物的生長(zhǎng)。(2)原理：不同微生物有不同的 或

17、對(duì) 有不同的敏感性。(3)用途：從眾多微生物中分離出特定的微生物。營(yíng)養(yǎng)需求某種化學(xué)物質(zhì)3.菌落菌落(1)概念： 微生物在適宜的固體培養(yǎng)基 生長(zhǎng)、繁殖到一定程度，形成肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的 。(2)特征：不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的菌落一般都具有穩(wěn)定的特征，如菌落的 、形狀、邊緣特征、隆起程度、顏色等，這些可以作為對(duì)微生物進(jìn)行分類、鑒定的重要依據(jù)。單個(gè)表面或內(nèi)部子細(xì)胞生長(zhǎng)群體大小4.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(1)分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣?，這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起到 作用。脲酶催化(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目

18、一般用 法。涂布平板統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的1個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中 個(gè)活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)的計(jì)算方法是_ 。利用涂布平板法成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)?。(3)實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣 微生物的培養(yǎng)與觀察細(xì)菌的計(jì)數(shù)。130300(平均菌落數(shù)涂布的稀釋液體積)稀釋倍數(shù)稀釋度樣品的稀釋5.分解纖維素的微生物的分離分解纖維素的微生物的分離(1)土壤中能分解纖維素的微生物種類很多，有細(xì)菌、 等，它們能分泌 ，將纖維素分解成小分子糖類物質(zhì)以滿足自身生命活動(dòng)的需要，同時(shí)也能改善土壤的結(jié)構(gòu)，提高土壤的肥力。真菌纖維素酶篩

19、選方法： 染色法，即通過(guò)是否產(chǎn)生 來(lái)篩選纖維素分解菌。培養(yǎng)基：以 為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。 紅色消失，出現(xiàn)_剛果紅纖維素(2)纖維素分解菌的篩選原理 纖維素分解菌 紅色復(fù)合物透明圈剛果紅透明圈纖維素實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣：富含 的環(huán)境 選擇培養(yǎng)：用 培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的濃度 ：制備系列稀釋液 涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 挑選產(chǎn)生 的菌落纖維素選擇培養(yǎng)基梯度稀釋透明圈6.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(1)原理：利用 ，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。(2)缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌還是活菌。血球計(jì)數(shù)板 (3)1 mL培養(yǎng)液中菌體的總數(shù)換算公式為：1625型的血球計(jì)數(shù)

20、板：1 mL懸液中待測(cè)標(biāo)本(菌體)數(shù) 。2516型的血球計(jì)數(shù)板：1 mL懸液中待測(cè)標(biāo)本(菌體)數(shù) 。400104稀釋倍數(shù)400104稀釋倍數(shù)(1)選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類( )(2)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)只能采用涂布平板法，而不能用平板劃線法( )(3)篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源( )(4)分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低( )(5)剛果紅可以與纖維素形成透明復(fù)合物，所以可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌( )常考基礎(chǔ)診斷?？蓟A(chǔ)診斷研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩選到了幾株有透明降解圈的菌落如圖1所示，將篩選到的纖維素

21、酶高產(chǎn)菌株J1和J4在不同的溫度和pH條件下進(jìn)行發(fā)酵，測(cè)得發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果如圖2，請(qǐng)分析：教材熱點(diǎn)拓展教材熱點(diǎn)拓展(1)透明圈是如何形成的？提示提示剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物發(fā)生這種反應(yīng)。細(xì)菌分泌的纖維素酶能將培養(yǎng)基中的纖維素降解，形成透明圈。提示(2)圖中透明圈大小代表什么？降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是哪種？提示提示透明圈大小與纖維素酶的量和活性有關(guān)，降解纖維素能力最強(qiáng)的是菌株。提示(3)結(jié)合圖2推測(cè)哪種菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵？提示提示J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高，更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。提示命題點(diǎn)一選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析命題點(diǎn)一選擇

22、培養(yǎng)基成分及配制方法的分析1.選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或?qū)σ恍┪锢?、化學(xué)抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來(lái)。為選擇酵母菌和硝化細(xì)菌，應(yīng)選用的培養(yǎng)基分別為 A.伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基B.含青霉素的培養(yǎng)基、含氨的無(wú)機(jī)培養(yǎng)基C.含氨的無(wú)機(jī)培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基D.含青霉素的培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基命題探究答案解析解析解析酵母菌是真菌，通?？梢杂煤嗝顾氐呐囵B(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，因?yàn)榍嗝顾匾种萍?xì)菌生長(zhǎng)，但不能抑制真菌生長(zhǎng)。硝化細(xì)菌為自養(yǎng)型生物，能夠利用氨轉(zhuǎn)變?yōu)閬喯跛岷拖跛徇^(guò)程所釋放的能量，把無(wú)機(jī)物轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)物以維持自身生命活動(dòng)

23、，利用含氨的無(wú)機(jī)培養(yǎng)基可進(jìn)行硝化細(xì)菌的選擇培養(yǎng)。(1)中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入_作為碳源，中不同濃度碳源的培養(yǎng)基_ (填“影響”或“不影響”)細(xì)菌的數(shù)量，如果要測(cè)定中活細(xì)菌數(shù)量，常采用_法。2.苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，為土壤樣品。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：苯酚答案解析影響涂布平板菌落計(jì)數(shù)解析解析選擇降解利用苯酚的細(xì)菌的培養(yǎng)基是以苯酚為唯一碳源的培養(yǎng)基；苯酚是唯一的碳源，當(dāng)苯酚消耗盡時(shí)，菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)繁殖，所以中不

24、同濃度的碳源會(huì)影響細(xì)菌數(shù)量；一般采用涂布平板菌落計(jì)數(shù)法來(lái)測(cè)定中活菌數(shù)目。(2)為對(duì)照，微生物在中不生長(zhǎng)，在中生長(zhǎng)，與培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于_；使用_法可以在上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)進(jìn)行倒置培養(yǎng)的原因是_ _。答案 的培養(yǎng)基中沒(méi)有加入苯酚作為碳源，的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為碳源 涂布平板法或平板劃線 防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基解析解析解析與培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于的培養(yǎng)基中沒(méi)有加入苯酚作為碳源，的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為碳源；使用布平板法或平板劃線法可以在上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要倒置培養(yǎng)，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。(3)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如何防止其

25、他微生物的污染？_ _。答案 培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過(guò)程進(jìn)行無(wú)菌操作解析解析解析從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過(guò)程要無(wú)菌操作：無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵：a.實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；b.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；c.為避免周圍環(huán)境中微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；d.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。選擇培養(yǎng)基的制作方法選擇培養(yǎng)基的制作方法(1)在培養(yǎng)基全部營(yíng)養(yǎng)成分具備的前提下，加入物質(zhì)：依據(jù)某些微生物對(duì)某些物質(zhì)的抗性，在培養(yǎng)

26、基中加入某些物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物生長(zhǎng)，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時(shí)可抑制多種細(xì)菌的生長(zhǎng)，但不影響金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)，從而可將該菌分離出來(lái)；而在培養(yǎng)基中加入青霉素時(shí)可抑制細(xì)菌、放線菌的生長(zhǎng)，從而分離得到酵母菌和霉菌。規(guī)律規(guī)律方法方法(2)通過(guò)改變培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分達(dá)到分離微生物的目的：培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無(wú)法生存；培養(yǎng)基中若缺乏有機(jī)碳源則異養(yǎng)微生物無(wú)法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的CO2制造有機(jī)物生存。(3)利用培養(yǎng)基的特定化學(xué)成分分離特定微生物：如當(dāng)石油是唯一碳源時(shí)，可抑制不能利用石油的微生物生長(zhǎng)，使能夠利用石油

27、的微生物生長(zhǎng)，從而分離出能消除石油污染的微生物。(4)通過(guò)某些特殊環(huán)境分離微生物：如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時(shí)易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無(wú)法生存。命題點(diǎn)二微生物的分離與計(jì)數(shù)命題點(diǎn)二微生物的分離與計(jì)數(shù)3.植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)分解秸稈中纖維素的微生物種類很多，有_等。它們能分泌纖維素酶，將纖維素分解成小分子糖類物質(zhì)以滿足自身生命活動(dòng)的需要，同時(shí)也能改善土壤的結(jié)構(gòu)，提高土壤的肥力。答案細(xì)菌、真菌解析解析解析土壤中能分解纖維素的微生物種類很多，有細(xì)菌、真菌等。(2)在含纖維素的培養(yǎng)基中

28、加入剛果紅(CR)時(shí)，CR可與纖維素形成_色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的_。答案紅解析解析解析剛果紅是一種染料，可以與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。透明圈(3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見(jiàn)下表)： 酵母膏 無(wú)機(jī)鹽 淀粉 纖維素粉 瓊脂 CR溶液水培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基乙注：注：“”表示有，“”表示無(wú)。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲_(填“能”或“不能”)用于分

29、離和鑒別纖維素分解菌，原因是_；培養(yǎng)基乙_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_ _。答案不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能 培養(yǎng)基中沒(méi)有纖維素，不會(huì)形成CR-纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌解析解析解析纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，而用于分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，并且培養(yǎng)基中需含有纖維素，才能與CR形成紅色復(fù)合物，有纖維素分解菌時(shí)才能形成以纖維素分解菌為中心的透明圈。4.為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作。回答下列問(wèn)題：(1)該小組采用涂布平板法檢測(cè)水樣中細(xì)菌的含量

30、。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是_ _；答案 檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格解析解析解析在涂布接種前，隨機(jī)選取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間，目的是檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)需通過(guò)_滅菌，在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣做的目的是_。答案灼燒解析解析解析用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌，操作時(shí)，接種環(huán)需通過(guò)灼燒滅菌，在第二次及以后的劃線時(shí)，應(yīng)從上一次劃線末端開始劃線，目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落。將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落(3)示意圖A和B中

31、，_表示的是用涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。答案B解析解析解析涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果應(yīng)為圖B。(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中_的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_(dá)的利用率。答案溶解氧解析解析解析振蕩可以使細(xì)菌分散，更有利于細(xì)菌利用培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并且可以使培養(yǎng)液中的溶解氧增多。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)兩種純化細(xì)菌方法的辨析兩種純化細(xì)菌方法的辨析歸納歸納總結(jié)總結(jié)比較項(xiàng)目平板劃線法涂布平板法關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線一系列的梯度

32、稀釋涂布平板法操作注意事項(xiàng)每次劃線前后均需灼燒接種環(huán)稀釋度要足夠高，為確保實(shí)驗(yàn)成功可以增加稀釋度的范圍菌體獲取在具有顯著菌落特征的區(qū)域的菌落中挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體優(yōu)點(diǎn)可以根據(jù)菌落的特點(diǎn)獲得某種微生物的單細(xì)胞菌落既可以獲得單細(xì)胞菌落，又能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)缺點(diǎn)不能對(duì)微生物計(jì)數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板矯正易錯(cuò)強(qiáng)記長(zhǎng)句1.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。2.劃線時(shí)最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。3.劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。4.用涂布平板菌落計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低 ，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只

33、是一個(gè)菌落。5.尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運(yùn)用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。易錯(cuò)警示突破選擇題下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題： 1.圖甲是利用平板劃線平板劃線法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用涂布平板涂布平板法進(jìn)行微生物接種。對(duì)這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒的方法依次是灼燒灼燒滅菌和酒精酒精消毒。2.接種操作要在火焰附近進(jìn)行的原因是火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域。3.接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)進(jìn)行倒置培養(yǎng)的目的是防止冷凝后防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培

34、養(yǎng)基。長(zhǎng)句應(yīng)答突破簡(jiǎn)答題重溫高考 演練模擬1231.(2017全國(guó)，37)某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生_。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是_ _，但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是_ (答出兩點(diǎn)即可)。答案脲酶解析解析解析細(xì)菌分解尿素是由于細(xì)菌體內(nèi)能合成脲酶，尿素是有機(jī)物，分解尿素的細(xì)菌是分解者，屬于異養(yǎng)型生物，因此不能利用CO2作為碳源合成有機(jī)物。葡萄糖通常既作為碳源，也作為能源。 分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)型生物，不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物 為細(xì)胞

35、生命活動(dòng)提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料123(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇_(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是_ _。答案尿素解析解析解析篩選分解尿素的細(xì)菌，通常只能用尿素作為唯一氮源，“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”均含有無(wú)機(jī)氮源NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用。 其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用123(3)用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_(答

36、出兩點(diǎn)即可)。答案為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)；作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定解析解析解析KH2PO4和Na2HPO4可為微生物提供P元素和無(wú)機(jī)鹽離子如鉀離子和鈉離子，還可作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定。2.(2016全國(guó)，39)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下：配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；制作無(wú)菌平板；設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；將各組平板置于37 恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。123回答下列問(wèn)題：(1)該培

37、養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于_。若要完成步驟，該培養(yǎng)基中的成分X通常是_。123答案解析解析解析牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物，都可以作為氮源；平板為固體培養(yǎng)基，故需要加入凝固劑瓊脂。牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2)步驟中，實(shí)驗(yàn)組的操作是_ _。123答案解析解析解析實(shí)驗(yàn)探究的是教室內(nèi)“不同高度空氣”中微生物的分布，其中變量為不同高度，故需在不同高度下放置開蓋平板。同時(shí)，為了保證單一變量，需要保證開蓋放置時(shí)間一致。為了保證實(shí)驗(yàn)可靠性，需要設(shè)置多個(gè)平行組。 將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時(shí)間(3)若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)/平板，而空白對(duì)照組的一個(gè)

38、平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了_現(xiàn)象。若將30(即366)個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法_(填“正確”或“不正確”)。123答案解析解析解析在完全正確的操作情況下，空白對(duì)照組中不應(yīng)出現(xiàn)菌落。若出現(xiàn)菌落，表明操作過(guò)程中存在雜菌污染，屬于實(shí)驗(yàn)失誤，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用。污染不正確(1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以_為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加_作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周圍的指示劑將變成_色。3.(2016四川，10)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過(guò)程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。123答案解析尿素酚紅紅123解析解析脲酶能夠催化尿素分

39、解為氨，故圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成了氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，使酚紅指示劑變成紅色。(2)在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1 mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過(guò)程采取的接種方法是_，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為_108個(gè)；與血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較_。123答案解析解析解析用于計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)的接種方法是涂布平板法，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)應(yīng)介于30300之間，故選擇細(xì)菌菌落數(shù)為156、178和191的平板計(jì)數(shù)，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)為(156178191)30

40、.11051.75108個(gè)。由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連接在一起時(shí)，往往統(tǒng)計(jì)的是一個(gè)菌落，故用此方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)偏少。涂布平板法1.75少(3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個(gè)核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為_，突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含_個(gè)氨基酸。123答案解析UGA115123解析解析密碼子由三個(gè)相鄰的堿基組成，271個(gè)堿基和后面2個(gè)堿基一起共構(gòu)成91個(gè)密碼子，箭頭處插入的70個(gè)核苷酸和后面2個(gè)堿基一起共構(gòu)成24個(gè)密碼子，緊隨其后是UGA，為終止密碼子，因此表達(dá)的蛋白質(zhì)含

41、115個(gè)氨基酸。課時(shí)作業(yè)12345答案1.(2018廣州質(zhì)檢)高中生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，在接種時(shí)不進(jìn)行嚴(yán)格無(wú)菌操作對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最大的一項(xiàng)是 A.將少許干酵母加入到新鮮的葡萄汁中B.將毛霉菌液接種在切成小塊的鮮豆腐上C.將轉(zhuǎn)基因植物葉片接種到無(wú)菌培養(yǎng)基上D.將土壤浸出液涂布在無(wú)菌的選擇培養(yǎng)基上678解析12345678解析解析在釀制葡萄酒的過(guò)程中，如果滅菌不徹底會(huì)影響葡萄酒的品質(zhì)，但影響不大；在制作腐乳的過(guò)程中，發(fā)酵過(guò)程有多種微生物的參與，所以該過(guò)程不進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作對(duì)結(jié)果影響不大；在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，如果滅菌不徹底，雜菌產(chǎn)生的物質(zhì)會(huì)影響外植體的生長(zhǎng)，甚至殺死外植體，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗，對(duì)結(jié)果影響最大；

42、土壤浸出液本身就含有大量的雜菌，另外在選擇培養(yǎng)基上只能生存我們所要篩選的細(xì)菌，所以無(wú)菌操作不嚴(yán)格，對(duì)結(jié)果影響也不會(huì)太大。答案2.(2017張家口檢測(cè))下列有關(guān)微生物培養(yǎng)與應(yīng)用的說(shuō)法，正確的是 A.天然培養(yǎng)基是指直接取自自然界不需加工的培養(yǎng)基B.接種前需對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手等進(jìn)行嚴(yán)格 的滅菌處理C.大腸桿菌的純化培養(yǎng)過(guò)程包括培養(yǎng)基的配制和純化大腸桿菌兩個(gè)階段D.分離分解尿素的細(xì)菌時(shí)，尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源和碳源解析12345678解析解析天然培養(yǎng)基是指用天然物質(zhì)制成的培養(yǎng)基，但也需要加工，A項(xiàng)錯(cuò)誤；實(shí)驗(yàn)操作者的雙手應(yīng)消毒，不是滅菌，B項(xiàng)錯(cuò)誤；分離分解尿素的細(xì)菌時(shí)，尿素是培

43、養(yǎng)基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有機(jī)物(如葡萄糖)作為碳源，D項(xiàng)錯(cuò)誤。12345678答案3.下面是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5。下列敘述正確的是 A.在五個(gè)區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌B.劃線操作時(shí)完全打開皿蓋，劃完立即蓋上C.接種時(shí)不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達(dá)到分離單菌落的目的D.第1區(qū)和第5區(qū)的劃線最終要連接起來(lái)，以便比較前后的菌落數(shù)解析12345678解析解析在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌，但不能對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌；進(jìn)行劃線操作時(shí)，左手將培養(yǎng)皿的皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋；注意接

44、種時(shí)不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達(dá)到分離單菌落的目的；第1區(qū)和第5區(qū)的劃線不能相連。12345678答案解析4.下面關(guān)于土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的敘述中，正確的是 A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B.篩選分解尿素的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)C.統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目一般用平板劃線法D.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變藍(lán)，則 表明篩選到了分解尿素的細(xì)菌12345678解析解析只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，A項(xiàng)正確；篩選分解尿素的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)中，采用的是以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，B項(xiàng)錯(cuò)誤；統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目一般用涂布平板法，C項(xiàng)錯(cuò)誤；在以尿素為唯

45、一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑變紅，這樣就能初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素，D項(xiàng)錯(cuò)誤。12345678答案解析5.某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是 A.培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌B.轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線C.接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D.培養(yǎng)過(guò)程中每隔一周觀察一次12345678解析解析培養(yǎng)基滅菌后再分裝到培養(yǎng)皿中，A項(xiàng)錯(cuò)誤；轉(zhuǎn)換劃線角度后要灼燒接種環(huán)，冷卻后再?gòu)纳洗蝿澗€的末端開始進(jìn)行劃線，B項(xiàng)正確；接種后的培養(yǎng)皿必須放在恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，C項(xiàng)錯(cuò)誤；培養(yǎng)過(guò)程中一般每隔12 h或24 h觀察一次，D項(xiàng)錯(cuò)誤

46、。123456786.大腸桿菌是與我們?nèi)粘Ｉ盥?lián)系非常密切的細(xì)菌，請(qǐng)回答有關(guān)檢測(cè)飲用水中大腸桿菌的問(wèn)題：(1)檢測(cè)飲用水中大腸桿菌的含量時(shí)，通常將樣品進(jìn)行一系列的梯度稀釋，將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，然后記錄菌落數(shù)，這種方法稱為_。判斷下面所示的4個(gè)菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是_。答案涂布平板法解析D12345678解析解析D中菌落分布情況為平板劃線法所得。為判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染(滅菌是否合格)，本實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置對(duì)照組?？蓪⑽唇臃N的培養(yǎng)基在適宜的溫度條件下放置一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生，若發(fā)現(xiàn)有菌落說(shuō)明培養(yǎng)基已被污染。消毒是指使用較為

47、溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進(jìn)行滅菌處理，對(duì)操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和用酒精消毒。12345678(2)用上述方法統(tǒng)計(jì)樣本中菌落數(shù)時(shí)是否需要設(shè)置對(duì)照組？_(填“需要”或“不需要”),其原因是需要判斷培養(yǎng)基_，對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是將_的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。答案需要是否被雜菌污染(滅菌是否合格)未接種12345678(3)在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進(jìn)行_(填“消毒”或“滅菌”)處理；

48、操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和_；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使其內(nèi)蛋白質(zhì)變性，還能損傷它的_結(jié)構(gòu)。(4)檢測(cè)大腸桿菌實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)_處理才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。答案滅菌消毒DNA滅菌123456787.現(xiàn)在國(guó)家大力提倡無(wú)紙化辦公，但是每年仍然不可避免地產(chǎn)生大量廢紙，其主要成分是木質(zhì)纖維，人類正努力將其轉(zhuǎn)化為一種新的資源乙醇。下圖是工業(yè)上利用微生物分解纖維素生產(chǎn)乙醇的基本工藝流程，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題：(1)將從土壤中獲得的微生物培養(yǎng)在以_為唯一碳源的培養(yǎng)基上。純化菌種時(shí)，為了得到單一菌落，常采用的接種方法有兩種，即_和_。答案纖維素平板劃線法 涂

49、布平板法解析12345678解析解析要從土壤中獲得能分解纖維素的微生物，需要將土壤中獲得的微生物培養(yǎng)在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上。純化菌種時(shí)，常用的接種方法有平板劃線法和涂布平板法。12345678(2)在含纖維素的培養(yǎng)基中通常加入_染料，此染料可與纖維素形成_色復(fù)合物。用含有此染料的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的_。我們可以通過(guò)此方法來(lái)篩選纖維素分解菌。答案剛果紅解析解析解析在培養(yǎng)基中加入剛果紅染料，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。紅透明圈1234

50、56788.(2015全國(guó)，39)已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問(wèn)題：(1)顯微觀察時(shí)，微生物A菌體中的油脂通?？捎胈染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用_(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。答案蘇丹染色液萃取法解析解析解析生物組織中的油脂能被蘇丹染色液染成橘黃色。12345678(2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以_為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。答案油脂解析解析解析為了篩選出能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，我們應(yīng)選用只能讓該菌落生長(zhǎng)的選擇培養(yǎng)基，因

51、此只能選用以油脂作為唯一碳源的固體培養(yǎng)基。12345678(3)若要測(cè)定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用_直接計(jì)數(shù)；若要測(cè)定其活菌數(shù)量，可選用_法進(jìn)行計(jì)數(shù)。答案血球計(jì)數(shù)板解析解析解析血球計(jì)數(shù)板可用于直接計(jì)數(shù)培養(yǎng)液中的菌體數(shù)，但是不分死活，因此要計(jì)數(shù)活菌數(shù)量要通過(guò)涂布平板菌落計(jì)數(shù)法來(lái)計(jì)數(shù)。涂布平板菌落計(jì)數(shù)12345678(4)為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測(cè)得相同時(shí)間內(nèi)，在35 、40 、45 溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg，則上述三個(gè)溫度中，_條件下該酶活力最小。為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞_設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。答案45解析解析解析溫度影響酶的活性，在三個(gè)溫度中，45 需酶量最多，說(shuō)明酶活性最低；40 所需酶量最少，說(shuō)明酶活性最高，因此應(yīng)圍繞40 設(shè)計(jì)不同溫度梯度，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。4012345678