2022年高三生物考前贏分30天 第30天

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1、2022年高三生物考前贏分30天 第30天 1、DNA的粗提取與鑒定 （1）．思路：利用DNA與RNA、蛋白質等在物理和化學性質方面的差異，提取DNA，去除其他成分。 （2）．原理 利用DNA的溶解性 ①DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度NaCl中溶解度不同，鹽濃度為0.14mol/l時，DNA溶解度最小。 ②DNA不溶于酒精溶液，某些蛋白質則溶于酒精。 利用DNA的耐受性 ①蛋白酶水解：蛋白酶能水解蛋白質，但是對DNA沒有影響。 ②高溫變性：大多數蛋白質不能忍受60℃—80℃的高溫，而DNA在80℃以上才會變性。 ③洗滌劑能夠瓦解細胞膜，但對DNA沒有影響。

2、（3）．實驗設計 ①材料的選?。哼x用DNA相對較高的生物組織。 ②細胞的破碎（以雞血為例） 過濾 加蒸餾水 雞血細胞 用玻璃棒攪拌 收集濾液。 ③雜質的去除：方案之一是利用DNA在不同濃度的NaCl中溶解度的不同，通過控制NaCl溶液的濃度去除雜質。 ④DNA的析出：處理后的溶液過濾，加入與濾液體積相等的、95%冷卻的酒精溶液可使DNA析出。 *動物材料：加水-過濾-加NaCl-加水-過濾-加NaCl-過濾-加酒精-攪拌析出（輕緩，以免DNA分子斷裂） *植物材料：碎——磨（加洗滌劑和食鹽）——濾（紗布，濾去雜質）——析（加

3、冷酒精） （4）．提純方法 ①鹽濃度為0.14mol/l，DNA析出 ②木瓜蛋白酶處理，去除蛋白質雜質 ③60-75℃保溫10-15min ④95%的冷酒精：蛋白質溶解，DNA不溶 ⑤過濾、離心等 沸水浴 加熱 （5）．DNA的鑒定 DNA溶解在2 mol/l的NaCl溶液中 + 二苯胺試劑 溶液顏色變藍。 對照組不加絲狀物，其他與實驗組相同 1、分離蛋白質的常用方法和原理 （1）凝膠色譜法 ①概念：凝膠色譜法也稱作分配色譜法 ，是根據相對分子質量的大小分離蛋白質的有效方法。 ②原理：大多數凝膠是由多糖類化合物 構成的，如葡聚糖 或瓊脂糖 。

4、其內部有許多貫穿的通道，當不同的蛋白質通過凝膠時，相對分子質量較小 的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程較長 ，移動速度較慢 ；而相對分子質量較大 的蛋白質無法進入凝膠內部通道，只能在凝膠外部移動，路程較短 ，移動速度較快 。相對分子質量 不同的蛋白質因此得以分離。 （2） 緩沖液 ①作用：在一定范圍內，緩沖溶液能抵制外界的酸和堿 對溶液PH 的影響，維持PH值基本不變。 ②配置：通常由1—2 種緩沖劑溶解于水中配置而成。調節(jié)緩沖劑的使用比例 就可以制得不同PH范圍內使用 的緩沖液。 （3）電泳 ①概念：帶電粒子在電場 的作用下發(fā)生遷移 的過程。 ②原理：許多重要的生物

5、大分子，如多肽 、核酸 等都具有帶電的基團，在一定PH下，這些基團會帶上 正電 或負電。在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極 移動。電泳利用了分離樣品中各種分子帶電性質的差異 以及分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產生不同的 遷移速度 ，從而實現樣品中各種分子的分離。 2、實驗操作 蛋白質的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定。 （1） 樣品處理 血紅蛋白由四個肽鏈組成，包括兩個α-肽鏈和兩個β-肽鏈。每條肽鏈環(huán)繞一個亞鐵血紅素基團，此基團可攜帶一分子氧或一分子二氧化碳。血紅蛋白因含有血紅素而呈紅色。 ① 紅細胞的洗滌： （I）目的：去除雜

6、蛋白 （II）方法：低速短時間 離心，然后用膠頭吸管吸出上層透明的黃色血漿 ，將下層暗紅色的紅細胞液體倒入燒杯中，再加五倍體積 的生理鹽水，緩慢攪拌10min ，低速短時間離心，如此重復洗滌三次 ，直到上清液沒有黃色 ，表明紅細胞已洗滌干凈。 ② 血紅蛋白的釋放： 將洗滌好的紅細胞倒入燒杯中，加蒸餾水 到原血液的體積，再加40％體積的甲苯 ，置于磁力攪拌器 上充分攪拌10min。 ③ 分離血紅蛋白的溶液：將攪拌好的混合8高速離心后，觀察到試管中溶液分為四層 第1層：無色透明 的甲苯層 第2層：脂溶性物質 的沉淀層--白色 薄層固體 第3層：血紅蛋白 的水溶液--紅色

7、透明液體 第4層：其他雜質的暗紅色 色沉淀物。 ④透析：取1ml的血紅蛋白 溶液裝入透析袋 中，將其放入盛有300ml的20mol/L的磷酸緩沖液 中（PH為 7 ） （去除樣品中分子量較小的雜質，或用于更換樣品中的緩沖液） （2）凝膠色譜操作： （1）凝膠色譜柱的制作：（略看） （I）柱底部制作： a．選擇合適的橡皮塞，中間打孔 b．在橡皮塞頂部切出鍋底狀的凹穴 ，在0. 5ml的移液管 頭部切下5cm 長的一段，插入橡皮塞孔內，上部不得超出橡皮塞的凹穴底面。 c．剪尼龍網小圓片覆蓋在橡皮塞的凹穴 。用大小合適的100目 的尼龍紗將橡皮塞 包好，插到玻璃管上

8、部一端。 d．色譜柱的下端用移液管頭作出口部位，連接一細的尼龍管 ，并用螺旋夾 控制尼龍管的打開 與關閉 ，另一端放入收集色譜流出液 的收集器內。 （II）柱頂部制作：插入安裝了玻璃管的橡皮塞 （3）凝膠色譜柱的裝填 （I）填充材料；交聯葡聚糖凝膠 。 （II）方法：凝膠用蒸餾水 充分溶脹后，配成凝膠懸浮液 ，在與色譜柱下端連接的尼龍管打開的情況下，一次性緩慢倒入色譜柱 內 注意：色譜柱內不能有氣泡 ，一旦發(fā)現，必須重裝。 在20mmol/ L磷酸緩沖液（pH7.0）充分平衡凝膠12h （4） 樣品的加入和洗脫： （I）加樣前：打開流出口，使柱內凝膠面上的緩沖液 下

9、降到與凝膠面 平齊，關閉出口。 （II）加樣：用吸管 將1ml透析后 的樣品加到色譜柱的頂端 ，注意不要破壞凝膠面 。 *要求：沿管壁環(huán)繞移動，貼壁加樣，不接觸凝膠面，不破壞凝膠面 （III）加樣后：打開下端出口 ，使樣品滲入凝膠床內，等完全進入后，關閉下端的出口。小心加入緩沖液到適當高度 ，連接緩沖液洗脫瓶 ，打開下端出口，進行洗脫，待紅色的蛋白質 接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每5 ml 收集一管，連續(xù)收集。 （5）SDS——聚丙烯酰胺凝膠電泳 判斷純化 的蛋白質是否達到要求，需要進行蛋白質的鑒定，使用最多的是SDS——聚丙烯酰胺凝膠電泳 （掩蓋了不同種蛋白質間的電荷差別

10、，使電泳遷移率完全取決于分子的大?。? 補差糾錯 以下關于血紅蛋白提取和分離的過程及原理敘述正確的是（xx揚州一模） A．紅細胞洗滌過程中要加入5倍體積的蒸餾水，重復洗滌三次 B．將血紅蛋白溶液放在質量分數為O.9％的NaCl溶液透析12小時 C．凝膠裝填在色譜柱內要均勻，不能有氣泡存在 D．蛋白質通過凝膠時，相對分子質量較大的移動速度慢 解題規(guī)范 以下對 DNA 和血紅蛋白的提取與分離（鑒定）實驗的分析不正確的是(xx徐州二模) A ．都要用豬血細胞來做實驗 B ．在 DNA 的粗提取與鑒定試驗中，有兩次 DNA 析出，所用的方法相同 C ．在實驗中都

11、要進行除雜處理以便得到較純凈的 DNA 或血紅蛋白 D ，將析出的 DNA 溶解在 2mol/L的 NaCI 溶液中，加入二苯胺試劑后呈現藍色 考前贏分第30天 愛練才會贏 前日回顧 1．酵母菌的生長周期短，增殖速度快，是良好的實驗材料。回答下列有關問題： (1)在利用酵母菌判斷細胞死活的實驗中，被臺盼藍染液染成藍色的是????????的酵母菌細胞。 (2)在探究“培養(yǎng)液中酵母菌種群數量變化”的實驗中，需使用??????????? 在顯微鏡下對酵母菌細胞進行直接計數。向裝有10mL培養(yǎng)液的試管中接種少量酵母菌菌種，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，酵母菌種群數量(Y)隨時間(X

12、)的變化情況最可能是????? ???????????。 (3)在果酒的工業(yè)制作過程中，接種完成后要先向發(fā)酵罐中通入一段時間的無菌空氣后再密封，這樣做的目的是??????????????? 。酵母菌利用葡萄糖發(fā)酵產生酒精的反應式是?????????????????????? 。果汁發(fā)酵后是否有酒精產生，可以用???????????? 試劑來檢驗，在果酒釀造過程中，如果果汁滅菌不嚴格，含有醋酸桿菌 ，在酒精發(fā)酵旺盛時，醋酸桿菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋酸?????????????? 。 (4)在酵母細胞的固定化實驗中，將干酵母放入? ????????中，使其活化，常用???????????

13、???? 作載體包埋酵母細胞。 當天鞏固 1．某同學以菜花為實驗材料，進行“DNA的粗提取與鑒定”實驗，步驟如下： 步驟一：稱取30g菜花，去梗取花，切碎。 步驟二：將碎菜花放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。 步驟三：在漏斗中墊上濾紙，將菜花研磨液過濾到燒杯中。在冰箱中放置幾分鐘，取上清液。 步驟四：將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的某溶液中，并用玻璃棒緩緩、輕輕地攪拌溶液。將絮狀物纏繞在玻璃棒上。 請回答下列問題： （1）請指出并改正該同學實驗操作中的錯誤：___________________。 （2）步驟二的目的是使菜花細胞破碎，釋放DNA，加入

14、研磨液的主要成分有____和___等。（3）如要使步驟三所得上清液中雜質減少，可進行______操作后再置于冰箱。 （4）步驟四中所用兩倍體積的某溶液為_________________，需“緩緩、輕輕地”攪拌溶液的原因是______________。 （5）簡要說明鑒定步驟四所得絮狀物是DNA的基本實驗設計思路：____________________。 前日回顧答案： 1、 (1)死??? (2)血球計數板(顯微計數板)??? C (3)先供氧，以促進酵母菌的繁殖，使酵母菌的數目快速增加，然后讓酵母菌進行無氧呼吸 ?? ???重鉻酸鉀?不能 (4)水??? 海藻酸鈉(聚丙烯酰胺，瓊脂糖，明膠，醋酸纖維素，硝酸纖維素，答出一項即可) 當天鞏固答案：1、（1）濾紙應改為紗布（或尼龍布）? （2）洗滌劑?? NaCl? （3）離心 （4）體積分數為95%的冷酒精??? 防止DNA斷裂 （5）將絮狀物溶于0.015mol/L（或2mol/L）的NaCl溶液中，加入二苯胺試劑，沸水浴加熱，觀察顏色變化，同時用相應濃度的NaCl做對照實驗。