（浙江專版）2019版高考生物一輪復(fù)習(xí) 第29講 微生物的利用、淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù)學(xué)案

第29講微生物的利用、淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù)章知識(shí)內(nèi)容考試屬性及要求考查頻率加試微生物的利用1.大腸桿菌的培養(yǎng)和分離2.分離以尿素為氮源的微生物實(shí)驗(yàn)與探究能力(1)能獨(dú)立完成“生物知識(shí)內(nèi)容表”所列的生物實(shí)驗(yàn)(活動(dòng))，包括理解實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒃?、方法和操作步驟，掌握相關(guān)的操作技能，并能將這些實(shí)驗(yàn)涉及的方法和技能進(jìn)行綜合運(yùn)用。(2)具備驗(yàn)證簡(jiǎn)單生物學(xué)事實(shí)的能力，能設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，提出或完善實(shí)驗(yàn)思路，能對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和結(jié)果進(jìn)行處理、分析和解釋。(3)具有對(duì)一些生物學(xué)問(wèn)題進(jìn)行初步探究的能力，能提出問(wèn)題、做出假設(shè)和預(yù)期、確認(rèn)變量、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案、處理和解釋數(shù)據(jù)、做出合理的判斷，能對(duì)一些簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)方案做出恰當(dāng)?shù)脑u(píng)價(jià)和修訂。2015年10月第32題(1)(3分) 2016年10月第32題(一)(7分) 2017年4月第32題(一)(1)(2分) 酶的應(yīng)用3.果汁中的果膠和果膠酶4.淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè)2016年4月第32題(一)(7分)2016年10月第32題(一)(4)(1分)生物技術(shù)在食品加工中的應(yīng)用5.果酒及果醋的制作6.泡菜的腌制和亞硝酸的測(cè)定2017年4月第32題(一)(2)(3)(5分)淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù)7.植物的組織培養(yǎng)2015年10月第32題(3)(5)(3分)考點(diǎn)一微生物的利用一、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1.大腸桿菌(1)特性：革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌。(2)細(xì)菌的繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。2.細(xì)菌的擴(kuò)大培養(yǎng)擴(kuò)大培養(yǎng)用LB液體培養(yǎng)基。3.分離劃線分離用LB固體平面培養(yǎng)基。培養(yǎng)基滅菌倒平板接種劃線分離培養(yǎng)觀察菌種保存50 mL LB液體培養(yǎng)基和50 mL LB固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌將培養(yǎng)基分別倒入4個(gè)滅菌后的培養(yǎng)皿中，水平放置，使之形成平面在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌，培養(yǎng)12 h用接種環(huán)在接種有大腸桿菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線，蓋好培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿倒置(蓋在下面)，放在37 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1224 h，可看到劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)菌落在無(wú)菌操作下將單菌落用接種環(huán)取出，再用劃線法接種在斜面上，37 培養(yǎng)24 h后，置于4_冰箱中保存4.消毒和滅菌比較條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對(duì)人體有害的微生物紫外線消毒法接種室、超凈臺(tái)化學(xué)藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器的滅菌過(guò)濾除菌不能加熱滅菌的化合物，要用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾二、分離以尿素為氮源的微生物1.菌種特點(diǎn)含有脲酶，可以通過(guò)降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。2.培養(yǎng)基用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基培養(yǎng)，以LB全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基為對(duì)照。3.實(shí)驗(yàn)原理(1)篩選以尿素為氮源的微生物，可使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)選擇。(2)細(xì)菌合成的脲酶能將尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚紅指示劑變紅。4.實(shí)驗(yàn)步驟制備培養(yǎng)基：將已滅菌的LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基分別倒入兩個(gè)培養(yǎng)皿中，搖勻，平放至凝固制備細(xì)菌懸液：用1 g土樣和無(wú)菌水配制不同濃度的細(xì)菌懸液用涂布分離法分離細(xì)菌：將不同濃度的土壤稀釋液分別加入到有LB培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，每個(gè)濃度分別各接種到三個(gè)培養(yǎng)皿中，并用玻璃刮刀涂布到整個(gè)平面上培養(yǎng)：將培養(yǎng)皿倒置，在37 恒溫箱中培養(yǎng)2448 h觀察：培養(yǎng)基中菌落數(shù)量5.反應(yīng)的鑒定在配制培養(yǎng)基時(shí)，加入指示劑酚紅，培養(yǎng)時(shí)細(xì)菌將尿素分解產(chǎn)生堿性的氨，使培養(yǎng)基上菌落周圍出現(xiàn)紅色的環(huán)帶。6.微生物接種的兩種常用方法比較比較劃線分離法涂布分離法工具接種環(huán)玻璃刮刀原理通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的細(xì)胞群體，即菌落將菌液用無(wú)菌水進(jìn)行梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別用涂布器涂布到固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落特點(diǎn)方法簡(jiǎn)單，但不適宜計(jì)數(shù)單菌落更易分開(kāi)，但操作復(fù)雜些目的使培養(yǎng)基上形成單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體菌落1.(2015·10月浙江選考節(jié)選)科研人員擬將已知的花色基因(目的基因)轉(zhuǎn)入矮牽牛的核基因組中，培育新花色的矮牽牛。請(qǐng)回答：用_的玻璃刮刀將稀釋后的大腸桿菌液_接種到含有抗生素的固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)形成_，再進(jìn)行鑒定和擴(kuò)大培養(yǎng)。解析在細(xì)菌涂布分離時(shí)，采用滅菌的玻璃刮刀將稀釋后的菌液均勻涂布在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)形成單菌落，再進(jìn)行鑒定和擴(kuò)大培養(yǎng)。答案滅菌涂布菌落2.(2016·10月浙江選考節(jié)選)請(qǐng)回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細(xì)菌和脲酶固定化實(shí)驗(yàn)的有關(guān)問(wèn)題：(1)LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加_，滅菌備用。(2)尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用_滅菌過(guò)的G6玻璃砂漏斗過(guò)濾，因?yàn)镚6玻璃砂漏斗_，故用于過(guò)濾除菌。然后將尿素溶液加到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。(3)取適量含產(chǎn)脲酶細(xì)菌的104、105兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48 h，推測(cè)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)量最少的是_。A.105稀釋液尿素固體培養(yǎng)基B.105稀釋液LB固體培養(yǎng)基C.104稀釋液尿素固體培養(yǎng)基D.104稀釋液LB固體培養(yǎng)基在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)_，其原因是細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生_所致。解析(1)本實(shí)驗(yàn)中的LB培養(yǎng)基是要與尿素培養(yǎng)基作對(duì)比的，所以要用瓊脂糖替換瓊脂。(2)尿素培養(yǎng)基的滅菌要分開(kāi)進(jìn)行，除尿素外的其他成分仍用高壓蒸汽滅菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾除菌，再將除菌的尿素加到已滅菌的其他成分中。G6玻璃砂漏斗由于孔徑小，細(xì)菌不能濾過(guò)，可用于過(guò)濾除菌，但需要在使用前進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。(3)由于在土壤中產(chǎn)脲酶的細(xì)菌遠(yuǎn)小于普通細(xì)菌，所以在尿素培養(yǎng)基上的菌落數(shù)相對(duì)少得多，另外稀釋倍數(shù)高的土壤稀釋液中細(xì)菌數(shù)量少，在培養(yǎng)基上菌落數(shù)也相對(duì)少。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是因?yàn)殡迕复呋蛩胤纸猱a(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑在堿性下呈紅色。答案(1)瓊脂糖(2)高壓蒸汽孔徑小，細(xì)菌不能濾過(guò)(3)A紅色環(huán)帶氨(或NH3)3.(2017·4月浙江選考節(jié)選)回答與泡菜腌制和亞硝酸鹽測(cè)定有關(guān)的問(wèn)題：制作泡菜時(shí)，為縮短發(fā)酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用無(wú)菌蒸餾水稀釋后，再用_蘸取少量的稀釋液，在MRS乳酸菌專用培養(yǎng)基的平板上劃線，以獲得乳酸菌單菌落。下圖所示的劃線分離操作，正確的是_。解析從酸奶中分離乳酸菌時(shí)，可采用劃線分離，方法是用接種環(huán)蘸取少量的稀釋液，在MRS乳酸菌專用培養(yǎng)基的平板上劃線，以獲得乳酸菌單菌落。圖示的劃線分離中B圖方法是正確的，A圖不分區(qū)劃線，但劃線太稀疏了，分離效果很差，B、C、D都采用了分區(qū)劃線，但C、D都沒(méi)有注意除第一區(qū)外，之后每區(qū)劃線的第一條線都需要從上一區(qū)劃線的末端開(kāi)始。答案接種環(huán)B本題組對(duì)應(yīng)選修一P19P28，微生物的利用1.大腸桿菌是革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌，是基因工程技術(shù)中被廣泛采用的工具。2.培養(yǎng)基是指微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，一般都含有五大營(yíng)養(yǎng)要素：即：水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源、生長(zhǎng)因子。一般來(lái)講，“細(xì)菌喜葷、霉菌喜素”，大腸桿菌一般采用LB培養(yǎng)基，其主要成分為蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、水等，若要擴(kuò)大培養(yǎng)，則采用LB液體培養(yǎng)基，若要分離獲得純種，則采用LB固體培養(yǎng)基，這兩者的主要區(qū)別在于后者加入了瓊脂。霉菌培養(yǎng)基一般用無(wú)機(jī)物配制成或添加蔗糖的豆芽汁。3.單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達(dá)量菌株的最簡(jiǎn)便方法之一。常用的分離方式有劃線分離法、涂布分離法兩種。它們都采用固體平面培養(yǎng)基。其中涂布分離法單菌落更易分開(kāi)，并且可用來(lái)計(jì)數(shù)菌體數(shù)目，但操作復(fù)雜些，且往往要先將培養(yǎng)的菌液稀釋；而劃線分離操作簡(jiǎn)單，但不能用于計(jì)數(shù)。4.菌種保存往往選用固體斜面培養(yǎng)基，于4_冰箱中保存。用灼燒后的接種環(huán)從斜面取菌種時(shí)，往往要先使接種環(huán)接觸培養(yǎng)基以達(dá)到冷卻的目的，然后再取菌體。5.接種完成后應(yīng)將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)，目的是：防止水蒸氣凝結(jié)成的水滴落入培養(yǎng)基表面沖散菌落，影響單菌落的形成和分離。6.滅菌操作：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、槍頭、接種環(huán)、鑷子等用具通常用高壓蒸汽滅菌，這些用具通常需要用牛皮紙或報(bào)紙包好，其中容器先要用棉塞或封口膜封口再包好，放入滅菌鍋中，在121 (1_kg/cm2壓力)下滅菌15 min。實(shí)驗(yàn)用的棉花不能用脫脂棉，因脫脂棉易吸水，吸水后容易引起污染。如果培養(yǎng)基中有葡萄糖，為防止葡萄糖分解碳化，要用500 g/cm2壓力(90 以上)滅菌30 min。由于尿素加熱會(huì)分解，只能用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾除菌，但玻璃砂漏斗使用前也要在121 下用紙包好滅菌，用后還需用1 mol/L的HCl浸泡，并抽濾去酸，再用蒸餾水洗至洗出液呈中性，干燥后保存。將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到三角瓶和試管中時(shí)必須用三角漏斗，以免培養(yǎng)基沾到三角瓶口和試管口，發(fā)生污染。7.無(wú)菌操作通常在超凈臺(tái)中進(jìn)行，超凈臺(tái)使用前30 min，打開(kāi)紫外燈和過(guò)濾風(fēng)，注意打開(kāi)紫外燈后人必須離開(kāi)，使用時(shí)必須關(guān)閉紫外燈。角度微生物的利用1.(2017·嘉興期末節(jié)選)下列有關(guān)大腸桿菌的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答：(1)配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時(shí)，根據(jù)“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和_作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的_。(2)大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實(shí)驗(yàn)中，在_中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)_后，在LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行_，并將培養(yǎng)皿_放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以獲得如圖效果。為了檢測(cè)接種、培養(yǎng)過(guò)程是否受雜菌污染以及_，應(yīng)同時(shí)將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(3)通常對(duì)獲得的純菌種可以依據(jù)_的形狀、大小等特征進(jìn)行初步的鑒定。(4)關(guān)于“大腸桿菌培養(yǎng)和分離”的操作中，下列敘述正確的是_。A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回到零后，開(kāi)啟鍋蓋B.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種工具經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上解析(1)配制培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基通常用LB培養(yǎng)基，其成分有蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水等，固體培養(yǎng)基還有瓊脂。其中蛋白胨、酵母提取物提供營(yíng)養(yǎng)，NaCl提供無(wú)機(jī)鹽并調(diào)節(jié)滲透壓，瓊脂是凝固劑。(2)細(xì)菌培養(yǎng)通常用LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)和生產(chǎn)，用固體培養(yǎng)基進(jìn)行分離、鑒定、保存菌種。菌種分離有劃線法和涂布法，進(jìn)行涂布分離時(shí)，選稀釋菌液，再進(jìn)行涂布，完成后將培養(yǎng)皿倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可獲得分布均勻的單菌落。為了檢測(cè)接種、培養(yǎng)過(guò)程是否受雜菌污染以及培養(yǎng)基滅菌是否徹底，應(yīng)同時(shí)將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(3)菌落的形狀、大小等特征可以作為鑒定的依據(jù)。(4)高壓滅菌加熱結(jié)束后，自然冷卻待壓力表指針回到零后，開(kāi)啟鍋蓋，A錯(cuò)誤；倒平板時(shí)，應(yīng)將打開(kāi)上蓋的一邊，將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，再蓋上培養(yǎng)皿上蓋，將培養(yǎng)皿置于水平位置，輕輕晃動(dòng)，使培養(yǎng)基鋪滿底部，待其凝固，B錯(cuò)誤；接種時(shí)接種工具經(jīng)灼燒滅菌后，需先接觸培養(yǎng)基使其冷卻后，再挑取菌落，C錯(cuò)誤；由于培養(yǎng)皿是倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的，所以用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上，D正確。答案(1)酵母提取物NaCl(2)LB液體培養(yǎng)基稀釋涂布分離倒置培養(yǎng)基滅菌是否徹底(3)菌落(4)D2.(2017·金麗衢十二校節(jié)選)普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的淀粉酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種(過(guò)程如圖1所示)(1)圖1中，為達(dá)到篩選目的，平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)以_作為唯一碳源。過(guò)程需重復(fù)幾次，目的是_。(2)某同學(xué)嘗試過(guò)程的操作，其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖2所示。該同學(xué)的接種方法是_；推測(cè)該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是_。(3)上述工程酵母菌培養(yǎng)過(guò)程中，有關(guān)操作正確的是_。A.玻璃刮刀用火焰灼燒進(jìn)行滅菌B.培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌C.倒平板和取菌液都必須在酒精燈火焰旁進(jìn)行D.獲得的菌種如果需要保存，可置于37 恒溫保存解析(1)為篩選得到高效利用淀粉的工程酵母菌菌種，固體培養(yǎng)基應(yīng)以淀粉作為唯一碳源。多次重復(fù)篩選是為獲得高效利用淀粉的工程酵母菌的純化菌種。(2)由圖2的結(jié)果表明，該同學(xué)采用的是涂布分離法，其操作的失誤是涂布不均勻，造成平板上菌落未均勻分布。(3)涂布操作用的玻璃刮刀通常保存在70%酒精中，使用前引燃酒精，火焰熄滅后待其冷卻后使用；培養(yǎng)基通常先滅菌，后趁熱倒平板；保存菌種通常使用斜面培養(yǎng)基，在4 冰箱中保存；倒平板和取菌液都必須在酒精燈火焰旁進(jìn)行，這是無(wú)菌操作要求。答案(1)淀粉篩選出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌種(2)涂布分離法涂布不均勻(3)C1.培養(yǎng)基的種類劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)、擴(kuò)大培養(yǎng)半固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類、鑒定固體培養(yǎng)基微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成)分類、鑒定用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物2.培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)要素基本營(yíng)養(yǎng)要素：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽。此外還要滿足不同微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。營(yíng)養(yǎng)要素來(lái)源功能碳源無(wú)機(jī)碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳無(wú)機(jī)物構(gòu)成細(xì)胞中的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；既是碳源又是能源有機(jī)碳源糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、石油、花生粉餅等氮源無(wú)機(jī)氮源無(wú)機(jī)氮：NH3、銨鹽、硝酸鹽、N2等將無(wú)機(jī)氮合成含氮的代謝產(chǎn)物有機(jī)氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)因子維生素、氨基酸、堿基酶和核酸的組成成分；參與代謝過(guò)程中的酶促反應(yīng)考點(diǎn)二淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù)1.植物組織培養(yǎng)的原理(1)理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞具有全能性。(2)植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程(3)植物組織培養(yǎng)影響因素選材：不同植物組織或同一植物組織的不同部分，培養(yǎng)的難易程度差別很大，菊花的組織培養(yǎng)，一般選擇未開(kāi)花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝。培養(yǎng)基：植物組織培養(yǎng)需要適宜的培養(yǎng)基，常用的是MS培養(yǎng)基，在配制好的培養(yǎng)基中，常常需要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素兩種植物激素。實(shí)驗(yàn)中使用的生長(zhǎng)素類似物是萘乙酸(NAA)，細(xì)胞分裂素類似物是芐基腺嘌呤(BA)。其他條件：pH、溫度和光照等條件對(duì)植物組織培養(yǎng)也很重要。2.菊花組織培養(yǎng)過(guò)程制備MS固體培養(yǎng)基：配制好的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌外植體消毒：自然生長(zhǎng)的莖離體用70%的乙醇浸泡10 min再用5%的次氯酸鈉浸泡5 min再用另一5%的次氯酸鈉浸泡5 min最后用無(wú)菌水清洗接種：始終在酒精燈火焰旁進(jìn)行，對(duì)接種工具要用灼燒滅菌生芽培養(yǎng)：培養(yǎng)基：發(fā)芽培養(yǎng)基(MSBANAA)；培養(yǎng)條件：溫度為1825 ；光照14.5 h/d；pH為5.86.0；培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)：健壯的叢狀苗生根培養(yǎng)：培養(yǎng)基：生根培養(yǎng)基(MSNAA)；培養(yǎng)條件與發(fā)芽培養(yǎng)相同煉苗：培養(yǎng)基：草炭土或蛭石；培養(yǎng)條件：23 d內(nèi)濕度控制為80%；23 d后逐漸降低濕度至自然濕度移栽(定植)(2015·10月浙江選考節(jié)選)科研人員擬將已知的花色基因(目的基因)轉(zhuǎn)入矮牽牛的核基因組中，培育新花色的矮牽牛。請(qǐng)回答：(1)取田間矮牽牛的幼嫩葉片，經(jīng)自來(lái)水沖洗，先用70%_浸泡，再用5%次氯酸鈉浸泡，最后用_清洗，作為轉(zhuǎn)基因的受體材料。(2)取出試管苗，在適宜的光照、溫度和80%以上的_等條件下進(jìn)行煉苗。解析(1)用作組培的外植體若取自自然環(huán)境則需要消毒，方法是外植體經(jīng)自來(lái)水沖洗，先用70%酒精浸泡，再用5%次氯酸鈉浸泡，最后用無(wú)菌水清洗，才能用于接種。(2)組培時(shí)，試管苗需經(jīng)煉苗才能定植，煉苗時(shí)需將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，移栽至具適宜的光照、溫度和較低濕度的環(huán)境中。答案(1)酒精無(wú)菌水(2)濕度本題組對(duì)應(yīng)選修一P59P61，植物的組織培養(yǎng)1.組織培養(yǎng)就是取一部分植物組織，如根、莖、花瓣、葉或花粉等，在無(wú)菌的條件下接種在三角瓶中的瓊脂培養(yǎng)基上，給予一定的光照和溫度，使之產(chǎn)生愈傷組織，或進(jìn)而生根發(fā)芽。組織培養(yǎng)必須在培養(yǎng)基中加入生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素。兩者的摩爾濃度比決定組織是生根還是生芽。當(dāng)細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比例高時(shí)，誘導(dǎo)芽的生成，兩者比例大致相等時(shí)，愈傷組織繼續(xù)生長(zhǎng)而不分化；當(dāng)細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比例較低時(shí)，會(huì)趨于生根。2.本實(shí)驗(yàn)首先用細(xì)胞分裂素相對(duì)較多和生長(zhǎng)素相對(duì)較少的發(fā)芽培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，獲得叢狀苗；然后將叢狀苗分株培養(yǎng)。分株后，再移入含較多生長(zhǎng)素的生根培養(yǎng)基中，使其生根；將生根的苗從三角瓶中移至草炭土或蛭石中繼續(xù)生長(zhǎng)；苗健壯后再移至土中。角度植物組織培養(yǎng)1.某愈傷組織在如下圖甲所示的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間后得到如圖乙所示的結(jié)構(gòu)，經(jīng)分析可知該培養(yǎng)基中()A.細(xì)胞分裂素多，生長(zhǎng)素少B.細(xì)胞分裂素少，生長(zhǎng)素多C.細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素用量相等D.只有生長(zhǎng)素解析從圖乙中可以看出該培養(yǎng)基有利于生根且抑制芽的形成，所以可推斷該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素多，細(xì)胞分裂素少，B正確。答案B2.(2016·溫州選考模擬節(jié)選)卡那霉素和頭孢霉素都有抗菌作用，此外，卡那霉素還對(duì)葡萄細(xì)胞有抑制作用。研究人員將Barnase基因(雄性不育基因)轉(zhuǎn)入葡萄細(xì)胞，利用卡那霉素和頭孢霉素，通過(guò)植物克隆方法成功培育出大粒、無(wú)核的葡萄新品種。請(qǐng)回答：(1)構(gòu)建含Barnase基因、葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重組質(zhì)粒，導(dǎo)入農(nóng)桿菌，在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成_以便鑒定是否混有雜菌，再用_將農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移至LB_培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。(2)將經(jīng)過(guò)_的幼嫩葡萄葉片切成小塊，浸入農(nóng)桿菌懸浮液中，4分鐘后取出(此時(shí)已有較多農(nóng)桿菌附著在葉片小塊上)并接種到固體培養(yǎng)基中。培養(yǎng)至第3天時(shí)，可以看到在葉片小塊周圍出現(xiàn)_和大量菌落。這時(shí)再用頭孢霉素處理葉片小塊，其目的是_(A.抑制葡萄細(xì)胞脫分化B.促進(jìn)葡萄細(xì)胞再分化C.殺滅農(nóng)桿菌D.促進(jìn)農(nóng)桿菌生長(zhǎng))。(3)將葉片切成小塊放入卡那霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間后，轉(zhuǎn)移至生芽培養(yǎng)基中，待其長(zhǎng)出_后，再轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)形成試管苗?？敲顾嘏囵B(yǎng)基起著_作用，植物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是_。(4)在卡那霉素培養(yǎng)基中，由于轉(zhuǎn)化細(xì)胞對(duì)周圍的非轉(zhuǎn)化細(xì)胞有保護(hù)作用，獲得的試管苗中可能存在假的轉(zhuǎn)基因試管苗，因此還需對(duì)試管苗的_基因的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行生化檢測(cè)，才能鑒別出真正的轉(zhuǎn)基因試管苗。(5)最后，對(duì)轉(zhuǎn)基因試管苗還需進(jìn)行逐漸_濕度的鍛煉，使之適應(yīng)自然環(huán)境。解析(1)構(gòu)建含Barnase基因、葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重組質(zhì)粒，導(dǎo)入農(nóng)桿菌，在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成單菌落以便鑒定是否混有雜菌，再用接種環(huán)將農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移至LB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。(2)將經(jīng)過(guò)消毒的幼嫩葡萄葉片切成小塊，浸入農(nóng)桿菌懸浮液中，然后取出并接種到固體培養(yǎng)基中。培養(yǎng)至第3天時(shí)，可以看到在葉片小塊周圍出現(xiàn)愈傷組織和大量菌落。這時(shí)再用頭孢霉素處理葉片小塊，其目的是殺滅農(nóng)桿菌，從而獲得處理的葡萄葉片細(xì)胞。(3)將葉片小塊放入卡那霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得導(dǎo)入目的基因的葡萄葉片細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至生芽培養(yǎng)基中，待其長(zhǎng)出叢狀苗后，再轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)形成試管苗?？敲顾嘏囵B(yǎng)基起著篩選導(dǎo)入目的基因的葡萄葉片細(xì)胞作用，植物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是植物組織培養(yǎng)。(5)最后，對(duì)轉(zhuǎn)基因試管苗還需進(jìn)行逐漸降低濕度的鍛煉，使之適應(yīng)自然環(huán)境。答案(1)單菌落接種環(huán)液體(2)消毒愈傷組織C(3)叢狀苗篩選植物組織培養(yǎng)(4)葡糖苷酸酶(5)降低生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素用量比例與根、芽的分化生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素比值結(jié)果比值高時(shí)促進(jìn)根的分化，抑制芽的形成比值低時(shí)促進(jìn)芽的分化，抑制根的形成比值適中促進(jìn)愈傷組織的生長(zhǎng)(時(shí)間：40分鐘分?jǐn)?shù)：100分)1.檢驗(yàn)飲用水的細(xì)菌含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施。請(qǐng)回答下列與檢驗(yàn)飲用水有關(guān)的問(wèn)題：(1)要測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)量，常采用_法，通常將水樣進(jìn)行一系列的梯度_，然后將上述的水樣用涂布器分別涂布到_的表面進(jìn)行培養(yǎng)，記錄菌落數(shù)量。用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)時(shí)_(填“是”或“否”)需要對(duì)照組。原因：_。(2)下面所示的四種菌落分布圖中，不可能由上述方法得到的是_。(3)大腸桿菌的培養(yǎng)條件是無(wú)菌，培養(yǎng)基配制時(shí)需加入氯化鈉，以維持_。配制培養(yǎng)基時(shí)先_(填“調(diào)節(jié)pH”或“滅菌”)后_(填“調(diào)節(jié)pH”或“滅菌”)。解析對(duì)細(xì)菌計(jì)數(shù)時(shí)通常用涂布法接種到LB固體培養(yǎng)基上，必要時(shí)要先對(duì)菌液稀釋再接種。因?yàn)樾枰袛嗯囵B(yǎng)基使用之前是否被雜菌污染，所以需要空白對(duì)照組。D培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果說(shuō)明是劃線法接種的。培養(yǎng)基配制時(shí)，添加氯化鈉除提供無(wú)機(jī)鹽外還能調(diào)節(jié)滲透壓，配制培養(yǎng)基時(shí)通常先調(diào)節(jié)pH后滅菌。答案(1)涂布分離稀釋LB固體培養(yǎng)基是因?yàn)樾枰袛嗯囵B(yǎng)基使用之前是否被雜菌污染(培養(yǎng)基滅菌是否合格)(2)D(3)滲透壓調(diào)節(jié)pH滅菌2.(2017·3月稽陽(yáng)聯(lián)考節(jié)選)回答下列小題：炭疽桿菌能引起人畜患炭疽病。對(duì)炭疽病疑似患者，可通過(guò)下圖所示鑒定炭疽桿菌的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確診，其中實(shí)驗(yàn)組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌。(1)若要從炭疽病疑似患者體內(nèi)分離出炭疽桿菌，可將患者皮膚膿胞滲出物稀釋后滴于培養(yǎng)基表面，用無(wú)菌玻璃刮刀涂勻，該接種方法稱為_(kāi)。(2)制備圖中的液體培養(yǎng)基時(shí)需采取_法滅菌。接種可疑菌后，需將三角瓶置于35 下的搖床上_培養(yǎng)24小時(shí)，可疑菌會(huì)大量繁殖，液體培養(yǎng)基變渾濁。(3)圖中，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組試管同時(shí)培養(yǎng)6小時(shí)后，若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對(duì)照組_(填“高”或“低”)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。此判斷的依據(jù)是_。解析(1)將細(xì)菌培養(yǎng)液滴于培養(yǎng)基表面，用無(wú)菌玻璃刮刀涂勻，這種接種方法稱為涂布分離法。(2)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌法滅菌。液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，需將三角瓶置于35 下的搖床上振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，細(xì)菌大量繁殖，導(dǎo)致液體培養(yǎng)基變渾濁。(3)實(shí)驗(yàn)組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，炭疽桿菌大量死亡，使培養(yǎng)基渾濁度降低。答案(1)涂布分離法(2)高壓蒸汽滅菌振蕩(3)低噬菌體侵染炭疽桿菌，炭疽桿菌數(shù)量下降3.(2017·3月寧波模擬節(jié)選)回答下列小題：下表是用于從土壤中分離純化細(xì)菌的培養(yǎng)基配方。材料牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水用量5 g10 g5 g20 g1 000 mL請(qǐng)回答：(1)培養(yǎng)基的類型很多，按照“細(xì)菌喜_，霉菌喜_”的原則配制上述培養(yǎng)基后，一般還要調(diào)節(jié)pH并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行_處理。(2)分離純化微生物最常使用的劃線分離法中，接種環(huán)在菌液中蘸菌液_(A.一B.二C.三D.四)次；若用涂布分離法，則制備細(xì)菌懸液時(shí)，一般需進(jìn)行_處理，為確保操作過(guò)程不被雜菌污染，接種必須在_附近操作。(3)假設(shè)培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是什么？(列舉一項(xiàng))_。解析(1)根據(jù)微生物的營(yíng)養(yǎng)需求，培養(yǎng)基配制原則是“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”，培養(yǎng)基配制完成后，一般還要調(diào)節(jié)pH并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理。(2)在劃線分離法中，接種環(huán)在菌液中蘸菌液一次。在涂布分離法中，則制備細(xì)菌懸液時(shí)，一般需進(jìn)行稀釋處理，為確保操作過(guò)程不被雜菌污染，接種必須在酒精燈火焰附近操作。(3)假設(shè)培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是：稀釋倍數(shù)不夠，菌液的濃度太高；劃線時(shí)，劃完第一次沒(méi)有滅菌即接著劃第二次；培養(yǎng)過(guò)程滅菌不嚴(yán)格，受到微生物的污染。答案(1)葷素滅菌(2)A稀釋酒精燈火焰(3)稀釋倍數(shù)不夠，菌液的濃度太高(或劃線時(shí)，劃完第一次沒(méi)有滅菌即接著劃第二次；或培養(yǎng)過(guò)程滅菌不嚴(yán)格，受到微生物的污染。)4.(2016·10月稽陽(yáng)聯(lián)考節(jié)選)回答下列小題：為了增強(qiáng)發(fā)酵效果，提高秸稈的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株，并對(duì)其降解纖維素能力進(jìn)行了研究。請(qǐng)回答有關(guān)的問(wèn)題：(1)纖維素是植物多糖，它在植物細(xì)胞中的作用是_(A.能源物質(zhì)B.貯能物質(zhì)C.結(jié)構(gòu)組成成分D.將不同的細(xì)胞粘連在一起)。該菌株在生態(tài)系統(tǒng)中能促進(jìn)_循環(huán)。(2)用_培養(yǎng)基來(lái)擴(kuò)大培養(yǎng)纖維素酶高產(chǎn)菌株，在將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到三角瓶或試管中時(shí)必須用_，以防止培養(yǎng)基沾到三角瓶壁或試管壁上。為了測(cè)定纖維素酶高產(chǎn)菌株的數(shù)量可以用_法在培養(yǎng)基上進(jìn)行測(cè)定。(3)剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物發(fā)生這種反應(yīng)。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩選到了幾株有透明圈的菌落。透明圈的大小與纖維素酶的_有關(guān)。解析(1)纖維素是植物細(xì)胞壁的主要成分，是植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)組成成分。由于纖維素很少能被生物利用，而該菌株能利用纖維素，所以能促進(jìn)碳循環(huán)。(2)通常用液體培養(yǎng)基對(duì)菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。在將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到三角瓶或試管中時(shí)必須用三角漏斗，以防止培養(yǎng)基沾到三角瓶壁或試管壁上。為了測(cè)定菌株的數(shù)量可以用(稀釋)涂布分離法在培養(yǎng)基上進(jìn)行測(cè)定。(3)由于剛果紅不與纖維素降解產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng)，所以菌落透明圈的大小與纖維素酶的數(shù)量、活性有關(guān)。答案(1)C碳(物質(zhì))(2)液體三角漏斗涂布分離(3)數(shù)量、活性5.(2017·衢麗湖舟四地模擬節(jié)選)請(qǐng)回答黃花蒿植物組織培養(yǎng)的有關(guān)問(wèn)題：(1)黃花蒿的植物組織培養(yǎng)研究在我國(guó)已有數(shù)年歷史。選取黃花蒿的莖段后，通常用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精等藥品對(duì)莖段進(jìn)行_，然后再放入_溶液中浸泡，最后用無(wú)菌水沖洗。若外植體不慎被細(xì)菌感染，采用劃線分離法純化細(xì)菌，在4個(gè)區(qū)域內(nèi)劃線需要將接種環(huán)灼燒滅菌_次。(2)植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基可采用_滅菌。形成愈傷組織的過(guò)程中，除需無(wú)菌、營(yíng)養(yǎng)和激素外，_等外界條件也很重要。(3)23周后將生長(zhǎng)健壯的叢狀苗在_(A.LB培養(yǎng)基適宜濃度BAB.LB培養(yǎng)基適宜濃度NAAC.MS培養(yǎng)基適宜濃度BAD.MS培養(yǎng)基適宜濃度NAA)上繼續(xù)生根，形成完整植株。定植前，還需逐漸_進(jìn)行煉苗。解析(1)植物組織培養(yǎng)時(shí)，需對(duì)外植體消毒，方法是先后用70%的酒精和5%次氯酸鈉溶液浸泡，再用無(wú)菌水沖洗。采用劃線分離法純化細(xì)菌，在4個(gè)區(qū)域內(nèi)劃線需要將接種環(huán)灼燒滅菌5次，在每區(qū)劃線前都需要灼燒接種環(huán)，而最后劃線完成后還要灼燒接種環(huán)，才能結(jié)束分離操作。(2)植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基可采用高壓蒸汽滅菌法滅菌。在形成愈傷組織的過(guò)程中，除需無(wú)菌、營(yíng)養(yǎng)和激素外，光照、溫度等外界條件也很重要。(3)健壯的叢狀苗需在生根培養(yǎng)基上繼續(xù)生根培養(yǎng)，形成完整植株。生根培養(yǎng)基成分為MS培養(yǎng)基適宜濃度NAA，BA可以不加，D正確。定植前，還需逐漸降低濕度進(jìn)行煉苗。答案(1)消毒5%次氯酸鈉5(2)高壓蒸汽滅菌法光照、溫度(任寫一個(gè)也可)(3)D降低濕度6.(2017·綠色聯(lián)盟適應(yīng)性考試節(jié)選)已知某細(xì)菌的兩種突變類型細(xì)菌和細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)條件和菌落特征都相同，但細(xì)菌能分解有機(jī)物A而不能分解有機(jī)物B，細(xì)菌能分解有機(jī)物B而不能分解有機(jī)物A?，F(xiàn)有這兩種類型細(xì)菌的混合液樣品，要將其分離，有人設(shè)計(jì)了一種方案，部分操作步驟如下圖。(1)步驟一使用的是_培養(yǎng)基，其中含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需的水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，此外還必須加_，以利于對(duì)不同菌種進(jìn)行分離操作。(2)步驟一采用_方法接種，此接種法可使接種細(xì)菌逐漸稀釋，經(jīng)適宜條件培養(yǎng)，可形成單個(gè)、獨(dú)立的_，最終可能得到純種的細(xì)菌；要進(jìn)行上述接種操作，必須在_及酒精燈火焰附近進(jìn)行，以避免雜菌污染。(3)步驟三中，若對(duì)其中某瓶培養(yǎng)液中A、B兩種有機(jī)物含量進(jìn)行測(cè)定，當(dāng)培養(yǎng)液中檢測(cè)出如下的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其中能說(shuō)明培養(yǎng)液只有細(xì)菌的是_。A.化合物A與B含量都明顯下降B.化合物A含量明顯下降，B含量基本不變C.化合物A含量基本不變，B含量明顯下降D.化合物A、B含量都基本不變解析(1)從圖中不難知道步驟一是為了分離菌種，分離細(xì)菌通常采用固體培養(yǎng)基，需要向培養(yǎng)基中添加凝固劑(瓊脂)。(2)從圖中“蛇形線”描述中可知步驟一采用的是劃線分離法，通過(guò)劃線可以獲得單個(gè)菌落，從而純化菌種。(3)由于已知細(xì)菌能分解有機(jī)物A而不能分解有機(jī)物B，所以當(dāng)培養(yǎng)液中化合物A含量明顯下降，B含量基本不變時(shí)，可以確定培養(yǎng)液只有細(xì)菌沒(méi)有細(xì)菌，B正確。答案(1)LB固體瓊脂(2)劃線(單)菌落超凈臺(tái)(3)B7.(2017·名校聯(lián)盟第三次聯(lián)考節(jié)選)請(qǐng)回答野生酵母的培養(yǎng)和分離及果酒制作實(shí)驗(yàn)的有關(guān)問(wèn)題：(1)從葡萄多年生長(zhǎng)的環(huán)境中獲取少量土樣，配制成土壤稀釋液，然后取0.1 mL稀釋液加入到_培養(yǎng)基中，用_(工具)進(jìn)行_分離，最后培養(yǎng)得到野生酵母菌。將分離獲得的菌種進(jìn)行誘變培養(yǎng)后，根據(jù)不同菌株的_特征，分別篩選出高產(chǎn)谷胱甘肽酵母菌(甲)和低產(chǎn)硫化氫的酵母菌(乙)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行滅菌處理才能倒掉，目的是_。(2)成熟的紫葡萄，常用_(A.高錳酸鉀B.次氯酸鈉C.乙醇D.無(wú)菌水)溶液浸泡約5 min，然后制成勻漿放入發(fā)酵罐中，并接種相應(yīng)菌株，發(fā)酵獲得高品質(zhì)的葡萄酒。若向發(fā)酵罐中加入一定量的_，可獲得酒精含量和糖含量較高的果酒。解析(1)在進(jìn)行涂布分離微生物時(shí)，需要將稀釋的樣液0.1 mL加到固體培養(yǎng)基上，再用玻璃刮刀均勻涂布，然后進(jìn)行培養(yǎng)。菌種進(jìn)行誘變培養(yǎng)后，可根據(jù)不同菌株的菌落特征篩選出目的菌株。微生物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，要對(duì)使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行滅菌處理才能倒掉，這是因?yàn)榕囵B(yǎng)基中殘留的微生物可能污染環(huán)境。(2)釀制葡萄酒時(shí)，需要用高錳酸鉀溶液浸泡約5 min，起到消毒的作用；若向發(fā)酵罐中加入一定量的蔗糖，可獲得酒精含量和糖含量較高的果酒。答案(1)固體玻璃刮刀涂布菌落防止造成環(huán)境污染(2)A蔗糖8.(2016·7月杭州期末節(jié)選)科研人員擬用組織培養(yǎng)繁殖一種糧食作物，其基本過(guò)程為“取材消毒愈傷組織培養(yǎng)出芽生根移栽”。請(qǐng)回答：(1)用于植物組織培養(yǎng)的離體材料都需要消毒，通常消毒所用的藥劑是_。植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中無(wú)需使用的設(shè)備及用品是_(A.封口膜B.滅菌鍋C.酒精燈D.玻璃刮刀)。(2)植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上長(zhǎng)有多種細(xì)菌，若要從中分離出某種細(xì)菌，可用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌，在LB培養(yǎng)基上_，形成單_后，再進(jìn)一步觀察確認(rèn)。(3)在幼苗培養(yǎng)過(guò)程中，生根培養(yǎng)基的主要成分是_(A.MS培養(yǎng)基B.MS培養(yǎng)基蔗糖C.MS培養(yǎng)基NAA蔗糖D.MS培養(yǎng)基BANAA蔗糖)。若要誘導(dǎo)叢狀苗，培養(yǎng)基中添加的生長(zhǎng)素濃度_(填“大于”“小于”或“等于”)細(xì)胞分裂素濃度。解析(1)植物組培中外植體消毒通常用70%酒精和5%次氯酸鈉進(jìn)行。在封口膜、滅菌鍋、酒精燈和玻璃刮刀等設(shè)備及用品中，植物組培中玻璃刮刀并不需要。(2)若要分離某種細(xì)菌可采用劃線法分離純化，就是用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌，在LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線分離操作，形成單菌落后，再進(jìn)一步觀察確認(rèn)。(3)在植物組培中，生根培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基中加入蔗糖和適量NAA，BA加入量極少或不加。而誘導(dǎo)叢狀苗的生根培養(yǎng)基中，除MS培養(yǎng)基中加入蔗糖和少量NAA外，還需加入較多BA，因?yàn)榧?xì)胞分裂素濃度大于生長(zhǎng)素濃度，有利于芽的分化。答案(1)70%酒精和5%次氯酸鈉D(2)劃線分離菌落(3)C小于9.(2016·8月溫州模擬節(jié)選)鐵皮石斛是一種名貴中藥材，有生津養(yǎng)胃、降血糖和增強(qiáng)免疫力等作用，有效成分為石斛多糖、石斛堿等，溫州雁蕩山素有“中國(guó)鐵皮石斛之鄉(xiāng)”的美譽(yù)。請(qǐng)回答：(1)用優(yōu)良品種自然生長(zhǎng)的莖快速繁殖鐵皮石斛時(shí)，給莖消毒時(shí)無(wú)需使用的是_(A.乙醇B.無(wú)菌水C.甘露醇D.次氯酸鈉)。在細(xì)胞分裂素相對(duì)較多和生長(zhǎng)素相對(duì)較少的培養(yǎng)基中培養(yǎng)莖的切段，待長(zhǎng)出較多的_，將其進(jìn)行_(處理)后再轉(zhuǎn)入_培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，直至長(zhǎng)成幼苗。這種通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖植物的方法，也稱為_(kāi)。(2)研究發(fā)現(xiàn)，鐵皮石斛的生長(zhǎng)發(fā)育與其體內(nèi)的內(nèi)生菌密切相關(guān)。為進(jìn)一步研究?jī)?nèi)生菌作用，需要大量?jī)?nèi)生菌進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。分離內(nèi)生菌時(shí)最好采用_(A.G6玻璃砂漏斗過(guò)濾法B.血細(xì)胞計(jì)數(shù)法C.劃線分離法D.涂布分離法)，再將純化的內(nèi)生菌轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行_。解析(1)植物組培中，對(duì)外植體消毒需要用到70%乙醇、5%次氯酸鈉和無(wú)菌水，不需要甘露醇。在再分化階段，若培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素相對(duì)較多而生長(zhǎng)素相對(duì)較少，則將誘導(dǎo)生芽，生成叢狀苗，將叢狀苗分株后再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，直至長(zhǎng)成幼苗。這種通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖植物的方法，也稱為植物克隆。(2)通常分離細(xì)菌的方法有劃線分離法和涂布分離法，而涂布分離法更容易獲得單菌落，所以最好采用涂布分離法純化菌種，然后再將菌種轉(zhuǎn)到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。答案(1)C叢狀苗分株/分株培養(yǎng)生根植物克隆(2)D擴(kuò)大培養(yǎng)10.(原創(chuàng)題)自生固氮菌在土壤中能利用空氣中的氮?dú)膺M(jìn)行獨(dú)立固氮的細(xì)菌，它對(duì)于增加土壤中的氮素有重要意義。某研究小組按照下圖所示的實(shí)驗(yàn)方案從土壤中分離自生固氮菌株。(1)制備土壤懸浮液時(shí)，在無(wú)菌條件下將1 g土樣加到有_的三角瓶中振蕩10 min。即成102 土壤懸浮液。(2)按功能分，號(hào)培養(yǎng)基稱為_(kāi)培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基中應(yīng)有的營(yíng)養(yǎng)成分(僅列出碳源和氮源)為_(kāi)。 A.葡萄糖、硫酸銨 B.葡萄糖C.酵母提取物、蛋白胨 D.酵母提取物 (3)圖中第一次接種到號(hào)培養(yǎng)基的方法是_。(4)接種后的平板放在37 恒溫箱培養(yǎng)12天，通過(guò)觀察_的特征可統(tǒng)計(jì)自生固氮菌的種類，但培養(yǎng)時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，原因是_。答案(1)99 mL無(wú)菌水(2)選擇B(3)涂布法(4)菌落菌落會(huì)分泌含氮物質(zhì)，引起雜菌生長(zhǎng)20