2011CB505100-基于“肝藏血主疏泄”的臟象理論研究

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1、賺客寶，知庫寶 項目名稱： 基于“肝藏血主疏泄”的臟象理論研究 首席科學家： 王慶國 北京中醫(yī)藥大學 起止年限： 2011.1至2015.8 依托部門： 國家中醫(yī)藥管理局 二、預期目標 本項目的總體目標： 1、系統(tǒng)梳理肝藏血主疏泄的臟象理論，澄清其歷史源流，明確理論的含義、內(nèi)容及相互關系，發(fā)展與創(chuàng)新肝臟象理論，探索臟象學說及中醫(yī)理論發(fā)展與創(chuàng)新的新模式。 2、確立肝藏血主疏泄功能異常的主要宏觀表現(xiàn)及微觀指標，建立肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別模式。 3、闡釋肝藏血主疏泄功能的生理調(diào)控機制，分析肝藏血與主疏泄間的關聯(lián)網(wǎng)絡。 4、揭示從肝論

2、治臨床療效產(chǎn)生的機制和規(guī)律。 5、闡釋肝藏血主疏泄在神經(jīng)—內(nèi)分泌—免疫網(wǎng)絡中特異的功能區(qū)域、傳導通路以及特異的反應狀態(tài)，揭示肝藏血主疏泄的基本科學內(nèi)涵。 五年預期目標: 1.闡明肝藏血主疏泄的基本含義、學說內(nèi)容及兩者間的關系。闡明肝藏血主疏泄的應用范圍與原則。 2.澄清肝藏血主疏泄理論的演變史，探索適合臟象學說及中醫(yī)理論發(fā)展與創(chuàng)新的新模式。 3、編制健康人群調(diào)查量表，完成300例正常健康人四時八節(jié)的動態(tài)追蹤調(diào)查研究；120例健康志愿者兩種應激狀態(tài)前后的比較研究。建立肝藏血主疏泄調(diào)控機體的狀態(tài)判別模式，探討肝藏血與主疏泄的內(nèi)在調(diào)控機制及內(nèi)在相關性。 4、完成100只大鼠、

3、20只樹鼩四時八節(jié)的動態(tài)研究。 5、完成100例月經(jīng)規(guī)律的健康志愿者月經(jīng)周期觀測及應激反應測試。 6、完成120例健康志愿者兩種應激狀態(tài)前后的比較研究。建立肝藏血主疏泄調(diào)控機體的狀態(tài)判別模式，探討肝藏血與主疏泄的內(nèi)在調(diào)控機制及內(nèi)在相關性。 7、編制四種疾病的臨床調(diào)查量表，完成每種疾病各800例以上的臨床橫斷面調(diào)查；建立肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別模式。 8、完成臨床觀測與干預，五種疾病各300例；揭示五種疾病從肝論證的機制和證治規(guī)律。 9、建立4-8種可反映肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的抑郁癥等5種疾病的病證結(jié)合動物模型及其判別方法。 10、完成動物模型功能區(qū)神經(jīng)元活性、血管反應性、

4、腸敏感性、內(nèi)分泌腺體反應性等功能測定、化學物質(zhì)的含量變化、化學物質(zhì)的反饋作用等相關指標的檢測，完成關鍵組織部位的基于測序技術的轉(zhuǎn)錄組（數(shù)字基因表達譜）、小RNA分析；完成不少于20個關鍵分子的mRNA及蛋白質(zhì)水平的驗證；完成關鍵分子相關調(diào)控網(wǎng)絡的分析，揭示出與肝藏血主疏泄功能密切相關的共性分子網(wǎng)絡。 11、完成養(yǎng)血調(diào)肝方對抑郁癥等5種疾病的反證及該方對肝藏血主疏泄功能密切相關的共性分子網(wǎng)絡的作用機制研究；完成實質(zhì)性肝損傷對肝藏血主疏泄功能密切相關的共性分子網(wǎng)絡影響的研究。 12、完成相關各項數(shù)據(jù)分析及挖掘；完成信息管理系統(tǒng)的平臺建設；建立基于熵理論分析方法與隱結(jié)構(gòu)分析方法的應用規(guī)范。

5、 13、發(fā)表相關學術論文300篇左右，其中SCI 20篇左右，出版相關學術著作2部。 14、培養(yǎng)博士研究生50名，碩士研究生80名，博士后6名；形成多學科交叉、中青年為主的創(chuàng)新性研究梯隊。 三、研究方案 1、以肝藏血主疏泄為核心的肝臟象理論研究 本項目應用歷史分析的方法進行中醫(yī)理論研究。即采用知識考古學等思想史研究思路與中醫(yī)傳統(tǒng)文獻方法結(jié)合，系統(tǒng)梳理從先秦時期到新中國成立前歷代中醫(yī)及相關文獻，以肝主疏泄為切入點，分析肝主疏泄及相關專題的對象形成、陳述方式、概念的擴散、主題策略的選擇等內(nèi)容，對文獻中肝藏血主疏泄應含義及其診治體系生成變化進行具體分析，以發(fā)現(xiàn)構(gòu)成某一時期醫(yī)學思想

6、整體的深層結(jié)構(gòu)——“知識型”或“基本信碼”，也就是話語，根據(jù)話語的轉(zhuǎn)變來分析肝藏血主疏泄應含義及其診治體系的演變及背后的原因，以分析其形成和轉(zhuǎn)變的歷史；在肝藏血主疏泄及其相關理論學術發(fā)展史的基礎上，確立其理論內(nèi)涵、應用范圍與原則，論證其在臟象學說、臟腑辨證以及臨床各科疾病診治中的地位與作用，解決學術分歧與爭議。 1.1 肝藏血主疏泄及其相關理論的知識考古學研究 ⑴話語構(gòu)成分析：應用知識考古學，對文獻中肝藏血主疏泄及其相關研究單元進行話語構(gòu)成分析，分別對肝藏血主疏泄及其相關研究單元在辨證論治體系中進行對象形成、陳述方式、概念擴散、主題從屬等話語構(gòu)成的四要素分析。即：歷代醫(yī)學文獻中肝藏血主疏泄

7、對象的形成，也就是在診治過程中應用肝藏血主疏泄疾病范圍的確定、肝藏血主疏泄病癥之間的劃分方法；肝藏血主疏泄在診治體系中陳述方式，即肝藏血主疏泄以什么方式、與哪些概念、以什么次序關系出現(xiàn)在診治體系中；肝藏血主疏泄的界定，即在診治體系中，在肝藏血主疏泄與肝藏血主疏泄等其它概念、學說的相互關系中，肝藏血主疏泄是怎樣被界定的；肝藏血主疏泄的從屬的主題，即肝藏血主疏泄是在論述什么問題時才出現(xiàn)。 ⑵話語轉(zhuǎn)型分析：分析肝藏血主疏泄及其相關研究單元知識型的斷裂點，確定其話語形成系統(tǒng)的成分轉(zhuǎn)換、話語形成體系特征性的關系轉(zhuǎn)換、各種不同話語形成規(guī)則之間的轉(zhuǎn)換、各種實證性之間的關系的轉(zhuǎn)換。 1.2 肝藏血主疏泄

8、及其相關理論學術發(fā)展史的確立 在肝藏血主疏泄及其相關理論等的關系中確定肝藏血主疏泄的含義與應用范圍、應用原則，并在肝藏血主疏泄臨床適用范圍改變的基礎上確立其學術的演變史；闡明其所在診治體系的構(gòu)成要素、診斷和治療原則、處方原則及其從一個時期到另一個是其轉(zhuǎn)換的歷史。 1.3 肝藏血主疏泄理論內(nèi)涵的確定 在肝藏血主疏泄及其相關理論學術發(fā)展史的基礎上，確立其理論內(nèi)涵、應用范圍與原則，論證其在臟象學說、臟腑辨證以及臨床各科疾病診治中的地位與作用，解決學術分歧與爭議。 2、生理狀態(tài)下肝藏血主疏泄功能的調(diào)控機制研究 2.1 依據(jù)現(xiàn)代文獻提取的信息，編制半開放式健康人群調(diào)查他評量表。遵循臨床流行病學

9、抽樣調(diào)查的相關各項要求，依據(jù)2005年全國1%人口抽樣調(diào)查資料數(shù)據(jù)，在全國多家醫(yī)院的體檢中心、學校及社區(qū)，開展體檢無器質(zhì)性病變中青年人群300例（男：女=1：1）動態(tài)追蹤調(diào)查，分別在一年四時八節(jié)（立冬、冬至、立春、春分、立夏、夏至、立秋、秋分），分時間段從軀體癥狀、情緒、生活質(zhì)量、生活事件、相關指標（生命特征、體質(zhì)體能、血常規(guī)、一滴血、虹膜儀、脈象儀、舌象儀、面色分析儀、神經(jīng)遞質(zhì)、退黑素等）及一般情況等信息，建立數(shù)據(jù)庫。 2.2采用方差分析、秩和檢驗等統(tǒng)計方法，分析宏觀表現(xiàn)及微觀指標的關聯(lián)性；在不同季節(jié)的差異性；以及隨季節(jié)變化的動態(tài)規(guī)律。 2.3 應用隱結(jié)構(gòu)模型對調(diào)查數(shù)據(jù)庫進行多維樣本

10、聚類分析，由計算機自動搜索對調(diào)查人群進行分類，分析其中與肝藏血主疏泄狀態(tài)相關的人群，而后提取該人群的特征性癥狀與指標，建立肝藏血主疏泄功能狀態(tài)的判別模型。 2.4動物四時八節(jié)的動態(tài)觀測 選取W大鼠100只，樹鼩20只，根據(jù)北京市氣象局氣象科學研究所提供。2011年1月-2016年1月5年的四時八節(jié)的氣候參數(shù)：包括日照百分數(shù)、平均溫度、日溫差、平均氣壓、日降水量、平均風力、平均相對濕度、平均濕度/平均溫度共8項。分別選取四時八節(jié)（立冬、冬至、立春、春分、立夏、夏至、立秋、秋分）八個時間點，動態(tài)觀察動物的表征，進行褪黑素、神經(jīng)遞質(zhì)等多項指標的檢測，建立數(shù)據(jù)庫，描述動物四時八節(jié)各項指標的動態(tài)變

11、化曲線，提取動物狀態(tài)的核心指標，建立動態(tài)變化判別模式，分析肝藏血主疏泄功能與時間節(jié)律的相關性。 3、健康志愿者應激狀態(tài)下肝藏血主疏泄功能的調(diào)控機制研究 3.1婦女月經(jīng)周期應激研究：選取月經(jīng)規(guī)律的健康志愿者100人，連續(xù)觀測其三個月經(jīng)周期的情緒、軀體癥狀以及一般性指標的變化，并與月經(jīng)期、黃體期、月經(jīng)后期分別進行應激狀態(tài)測試，主要進行心理認知測試，檢測多導腦電等指標，建立數(shù)據(jù)庫進行分析，探索月經(jīng)周期中肝藏血狀態(tài)變化與疏泄功能的相關性，并總結(jié)肝藏血主疏泄異常狀態(tài)下應激變化規(guī)律，探討肝藏血主疏泄的內(nèi)在機制。 3.2健康志愿者應激刺激前后不同狀態(tài)與肝藏血主疏泄關系的研究：選取120例（男：女=1：

12、1）健康志愿者，采用情緒圖片、面孔、音樂、聲音、文字和影片等刺激材料，根據(jù)研究需要控制其情緒類型以及愉悅度和喚醒度水平。通過自我回憶、材料刺激、社會交互作用等誘發(fā)手段使被試處于一定情緒狀態(tài)。在情緒表達抑制、認知重評、向上和向下情緒調(diào)節(jié)、情緒分類、內(nèi)隱情緒任務、快速呈現(xiàn)、視覺掩蔽、線索－靶范式、情感啟動范式、延遲反應任務、n-back等經(jīng)典的實驗范式中，綜合運用行為學測試、生理多導儀記錄、事件相關電位（ERP）和功能磁共振成像（fMRI）等技術手段，從反應時、正確率、ERP成分的波幅和潛伏期、腦區(qū)激活以及腦功能聯(lián)結(jié)等多個方面分析肝臟在情緒產(chǎn)生、調(diào)節(jié)和情緒與認知相互作用中的地位及相應心理、生理機制

13、。 給予志愿者進行較大強度的運動任務負荷，通過主觀報告、問卷調(diào)查和客觀評分確定和劃分研究對象的情緒狀態(tài)。進行運動前后心理量表評測、視力系統(tǒng)測定、腦電圖、腦血流圖、肝血流圖的檢測，以及微循環(huán)系統(tǒng)指標的檢測，探討運動前后肝藏血功能的調(diào)節(jié)機制。并分析藏血與疏泄之間的相關性。 4、信息學管理系統(tǒng)及分析方法研究 4.1 編寫數(shù)據(jù)庫程序，應用現(xiàn)代信息管理學方法，根據(jù)研究中文獻、臨床、實驗各項研究數(shù)據(jù)的特點，編制關聯(lián)數(shù)據(jù)庫，對相關信息進行統(tǒng)一規(guī)范、標示及編碼，從而形成統(tǒng)一的數(shù)據(jù)庫錄入平臺。 4.2針對研究目標及相關研究數(shù)據(jù)的特點，進行算法研究，完善基于熵理論的數(shù)據(jù)分析方法及隱結(jié)構(gòu)模型的分析方法，并編

14、寫為軟件開展網(wǎng)絡化運行，為整體項目搭建數(shù)據(jù)分析平臺。 4.3應用兩種數(shù)據(jù)分析方法，對四種疾病的臨床宏觀表現(xiàn)及微觀指標進行綜合分析，提取與肝藏血主疏泄相關的病證結(jié)合下宏觀表現(xiàn)與微觀表現(xiàn)的共性特點和個性特征。 4.4應用兩種數(shù)據(jù)分析方法，對四種疾病提取肝藏血主疏泄相關的病證結(jié)合下動物模型的宏觀表征與微觀指標進行分析，提取其共性特點和個性特征，建立動物模型的判別模式。 4.5對項目組臟象研究的各項數(shù)據(jù)進行綜合分析，提煉肝藏血主疏泄的共性生物學基礎。 4.6 應用信息平臺對各項研究進行實時錄入、盲法核對及質(zhì)量監(jiān)控。 5、抑郁癥、經(jīng)前期綜合征從肝論治的研究 5.1 流行病學調(diào)查 5.1.1

15、編制調(diào)查表。由專家組根據(jù)研究目的，通過參考大量文獻，充分考慮可行性及有效性，設計抑郁癥（輕中度）、經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD）流行病學調(diào)查內(nèi)容，并進行預調(diào)查，在此基礎上，修改制定研究用調(diào)查表。 5.1.2開展流行病學調(diào)查。應用編制的調(diào)查表，對符合上述疾病診斷和納入標準的患者開展流行病學橫斷面調(diào)查，采集患者的一般個人信息、軀體癥狀、情緒精神癥狀、舌象、脈象，并對部分患者進行相關微觀指標檢測。 5.1.3資料整理與分析。建立流行病學研究數(shù)據(jù)庫，對資料進行邏輯檢查和處理；運用方差分析、Logist回歸分析等方法，確立肝主疏泄調(diào)暢情志功能異常的主要宏觀表現(xiàn)及微觀指標，建立宏觀與微觀相結(jié)合的肝主疏

16、泄調(diào)暢情志功能異常狀態(tài)的判別模式。 5.2 臨床療效研究 5.2.1從肝論治抑郁癥（輕中度）臨床療效。①病例選擇 符合中國精神疾病分類方案與診斷標準第3版（CCMD-Ⅲ）的抑郁癥發(fā)作診斷標準且中醫(yī)辨證為肝氣郁證、符合納入標準的患者。②分組方法 采用隨機數(shù)字表將受試者隨機分配至方藥對證組（自擬方舒郁）、方藥次對證組（自擬方舒郁加減）。③療程及隨訪 療程8周，對治療后臨床痊愈、顯效及有效的患者，治療后長期隨訪，觀察是否復發(fā)。④臨床療效評定方法 于治療前、治療1w、2w、4w、6w、8w末，采用漢密爾頓抑郁量表、臨床療效總評量表、疾病嚴重程度量表、中醫(yī)證候積分表、副反應量表進行療效及副反

17、應評定。 5.2.2從肝論治經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD）臨床療效。①病例選擇 符合西醫(yī)經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD）診斷標準且中醫(yī)辨證為肝氣逆證、符合納入標準的患者。②分組方法 采用隨機數(shù)字表將受試者隨機分配至方藥對證組（自擬方白香丹）、方藥次對證組（自擬方白香丹加減）。③療程及隨訪 療程2個月經(jīng)周期，對治療后臨床痊愈、顯效及有效的患者，治療后進行遠期隨訪，觀察是否復發(fā)。④臨床療效評定方法 采用《癥狀嚴重程度每日報告》、《經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD）肝氣逆證癥狀嚴重程度醫(yī)生記錄表》、副反應量表進行療效和副反應評定。 5.3臨床療效的作用機制 5.3.1臨床研究①腦功能區(qū)定位研

18、究 小樣本選取健康志愿者，抑郁癥（輕中度）肝氣郁證患、經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD）肝氣逆證患者，采用BLOD-fMRI技術，觀察上述研究對象治療前后相關腦區(qū)（激活、抑制）的位點及其數(shù)目、強度，并與對照組比較，探討其腦功能活動區(qū)的異同點。②定位下的腦功能區(qū)血流灌注及相關指標信號檢測 利用利用單光子/正電子發(fā)射計算機斷層顯像（SPECT/PET）及磁共振波譜成像（MRS）技術，在研究內(nèi)容①基礎上，探查其局部腦血流狀態(tài)及葡萄糖物質(zhì)代謝變化，評估其腦功能，揭示抑郁癥（輕中度）肝氣郁證患、經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD）肝氣逆證相關腦區(qū)功能改變。③外周聯(lián)系途徑相關指標變化 檢測各組受試對象血漿中相

19、關微觀指標，并通過組間及治療前后對照，比較各組療效差異，探討抑郁癥（輕中度）、經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD）不同病證的神經(jīng)體液機制。 5.3.2模型動物及離體細胞實驗。①動物模型造模及評價 經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD）肝氣逆證大鼠模型：應用情志刺激為主多因素造模法制備經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD）肝氣逆證大鼠模型。動物模型評價：采集模型動物證候表征進行證候歸屬評價，檢測模型動物生物指標進行疾病歸屬評價。② 動物模型相關腦區(qū)定位及定位下的神經(jīng)機制 進行相應腦區(qū)定位并應用腦微透析灌流技術，實時檢測去甲腎上腺素（NE）、5-羥色胺（5-HT）等關鍵指標水平變化。③動物模型外周血及不同腦區(qū)關鍵

20、指標變化特點與關鍵基因功能驗證 檢測模型動物相關腦區(qū)、外周血中關鍵生物指標含量，篩選出與經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD）肝氣逆證密切相關的神經(jīng)遞質(zhì)和激素。進行模型動物的基因表達譜分析及關鍵基因的分布、定位及功能驗證，篩選其發(fā)病及藥物干預密切相關靶基因。④相關指標的分子機制及其信號轉(zhuǎn)導 取正常大鼠相應部位神經(jīng)元進行體外培養(yǎng)，用上述病證的人或動物血清、腦脊液處理細胞，免疫熒光和Western Blot尋找病證相關神經(jīng)遞質(zhì)或激素的受體及其介導的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導。 6、腸易激、高血壓、肝硬化三種疾病病證臨床流行病學橫斷面調(diào)查 6.1 通過對三種疾病現(xiàn)代文獻分析，提取與肝藏血主疏泄相關的癥狀、證候要

21、素、證候；依據(jù)此信息建立臨床信息采集量表，通過預調(diào)查進行量表的聯(lián)合信度檢測。 6.2 應用臨床信息采集表，在全國多中心同步開展大樣本約800例/病的臨床流行病學橫斷面普查。分別對符合現(xiàn)代疾病診斷和各項納入標準的患者進行臨床軀體癥狀、情緒精神癥狀的調(diào)查，并采用統(tǒng)一的檢測標準，檢測相關實驗室指標。其中主要指標包括：三種疾病同性指標——血液流變學指標、血脂、血糖、血清促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）；血清皮質(zhì)醇，血漿去甲腎上腺素（NE）、5-羥色胺（5-HT）等；各種疾病特有指標。 6.3 建立臨床信息數(shù)據(jù)庫，進行多種統(tǒng)計分析，主要包括：頻數(shù)分析描述調(diào)查人群特征；方差分析方法統(tǒng)計不同疾病不同

22、分期的差異性；相關分析方法統(tǒng)計宏觀癥狀與微觀指標的相關性；Logist回歸分析、判別分析提取特征癥狀、指標；并結(jié)合無監(jiān)督數(shù)據(jù)分析方法（如基于熵的分析、隱結(jié)構(gòu)模型）確立肝藏血主疏泄功能異常的主要宏觀表現(xiàn)及微觀指標，及其在三種疾病中的共性表現(xiàn)特點和個性特征；建立宏觀與微觀相結(jié)合的肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別模式。 7、應用養(yǎng)血調(diào)肝系列方劑對三種疾病患者進行藥物干預 7.1按照三種疾病現(xiàn)代醫(yī)學的疾病診斷標準，及較為公認的中醫(yī)證候診斷標準，選擇腸易激綜合征肝郁脾虛證300例、脾胃虛寒證100例；高血壓病肝陽上亢證300例、肝火熾盛證100例；肝硬化脾腎陽虛、肝氣滯血瘀證100例、肝腎陰虛、氣滯血

23、瘀證200例。按照臨床為理論創(chuàng)新服務，為實驗研究奠定基礎的原則，按照1：1：1：1的比例，分別設立安慰劑對照組、方證對應組、方證次對應組、非干預證候?qū)φ战M，參照新藥創(chuàng)制的研究方法，應用養(yǎng)血調(diào)肝方劑的免煎顆粒，進行臨床干預研究。 7.2依據(jù)建立的肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別模型編制臨床觀測量表，對納入研究的患者分別在治療前、治療后及隨訪期，采集其宏觀臨床癥狀、體征及微觀指標，建立數(shù)據(jù)庫。 7.3 應用方差分析、秩和檢驗、判別分析、因子分析、多維尺度分析等多種統(tǒng)計方法，分析各項癥狀、指標在治療前后的差異性；不同證候類型間的差異性；不同疾病間的異同性等。并綜合分析結(jié)果分析從肝論證的干預機制

24、及證治規(guī)律。 8、肝藏血主疏泄現(xiàn)代科學內(nèi)涵的實驗研究 8.1肝藏血主疏泄功能異常的病證結(jié)合動物模型的構(gòu)建 8.1.1 建立公認的疾病動物模型。分別采用慢性應激和嗅球切除法制備抑郁癥大鼠模型，采用孤養(yǎng)加慢性不可預見性應激和新生鼠母子分離復合避水應激法建立腸易激綜合征大鼠模型，采用雙腎一夾法和自發(fā)高血壓大鼠構(gòu)建高血壓大鼠模型，采用腹腔注射二甲基亞硝胺法和皮下注射四氯化碳法誘導肝纖維化大鼠模型。以上的疾病模型分別按照現(xiàn)行的疾病診斷標準進行嚴格的評價，合格動物納入研究。 8.1.2 進行動態(tài)、全面的信息采集。對上述符合疾病診斷的動物模型，從模型成立的時間點起，擬定動物信息觀察表，進行規(guī)范化的動

25、態(tài)信息采集，以評價其證候?qū)傩?。信息采集表的條目主要來自于： 1) 動物實驗研究文獻提示的反映疾病的動物宏觀表征 和反映證候?qū)傩缘膭游锖暧^表征 ； 2) 臨床證候研究文獻提示的與證候密切相關的理化指標； 3) 本項目組的臨床研究提示的與具有診斷和鑒別診斷意義的臨床癥狀和可用于證候判別的理化指標特征模式。 8.1.3 動物證候?qū)傩缘谋孀R。 動物證候?qū)傩缘谋孀R以臨床診斷標準為依據(jù)，采用課題組前期建立的以宏觀特征組合、微觀指標特征組合、方劑反證相結(jié)合的三維動物證候判別方法進行辨識。首先通過宏觀特征組合和微觀指標特征組合確定各疾病模型的證候演變規(guī)律。通過不同疾病造模方法的比較，篩選出較優(yōu)的抑郁癥

26、肝氣郁結(jié)證、腸易激綜合征肝郁脾虛證、高血壓肝陽上亢證、肝硬化肝腎陰虛氣滯血瘀等病證結(jié)合動物模型。 8.1.4方劑反證。在上述病證結(jié)合動物模型證候?qū)傩苑€(wěn)定的時間窗內(nèi)，分別采用對證的養(yǎng)血調(diào)肝方藥和次對證的方藥進行干預治療，并以模型組和正常組作為對照，進一步佐證模型動物的證候?qū)傩?。各模型的干預藥物和臨床組統(tǒng)一，以相互應證。 8.2 肝藏血主疏泄的調(diào)控機制研究 8.2.1分組。通過上述篩選得到的穩(wěn)定的反映肝藏血主疏泄異常狀態(tài)的病證結(jié)合動物模型作為實驗組，以不符合相應證候診斷的疾病模型和正常組作為對照，從整體、器官、分子三個層面分析肝藏血主疏泄的調(diào)控機制，觀測指標分為共性的核心指標和反映疾病個性的

27、二級指標以及探索性的基因分析指標等三大類。 8.2.2核心指標和疾病相關的二級指標的檢測。采用HPLC－電化學檢測、ELISA、免疫組化、RT-PCR等，研究： （1）核心指標圍繞慢性應激相關的調(diào)控網(wǎng)絡，包括： 1）整體指標：行為學實驗、腦血流圖、肝血流圖、功能核磁共振。 2）血液指標：神經(jīng)遞質(zhì)（包括DA、NA、NE、5-HT、Ach等）；內(nèi)分泌激素（包括CRH、ACTH、皮質(zhì)醇、褪黑素等）；血管舒縮因子（包括ET、CGRP、 AngII 等）、肝臟合成（代謝）的生物活性分子（如 HSP70、Hcy 等）。 3）組織檢測指標：神經(jīng)遞質(zhì)、激素及其受體在特定腦區(qū)、疾病相關的效應器官的

28、表達水平（包括DA、NA、5-HT 、皮質(zhì)醇等及其受體）和病理形態(tài)學檢測。 （2）疾病相關的二級指標 1）抑郁癥：氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)含量/受體表達（Glu－NMDA受體、GABA－GABA受體），離子通道和信號轉(zhuǎn)導分子分析、對信號轉(zhuǎn)導分子調(diào)節(jié)物質(zhì)（包括PDE4等），適應性調(diào)控分子（包括GRK、β-arrestin等） 2）腸易激綜合征：在體結(jié)腸運動、離體結(jié)腸平滑肌張力、離體腸粘膜短路電流、外周血P物質(zhì)含量、GABA、肥大細胞活化程度觀察、胸腺、脾臟臟體指數(shù)計算、T淋巴細胞亞群水平分析、外周血環(huán)核苷酸水平、外周血前列腺素E2水平等。 3）高血壓：24h動態(tài)血壓、AT1、 NO 、ANP、 A

29、VP、 Ca2+ PGI2 、TXA2、 精氨酸加壓素等。 4）肝硬化：外周血HA、PCIII、LN、IV－C、 TGF-β1，血清肝功能（包括ALT,AST,ALB等）、肝組織血管緊張素受體、TGFβ1、Smad4、Smad7等。 8.2.3數(shù)字化基因表達譜分析和small RNA分析。在上述的研究結(jié)果進行分析和整合，初步確定肝藏血主疏泄的共性的特定反應腦區(qū)。對特定反應區(qū)域的組織樣本，采用測序技術數(shù)字化基因表達譜分析和small RNA分析，結(jié)合生物信息學分析，進一步探索其可能的分子調(diào)控機制。 8.2.4共性調(diào)控機制的提取。綜合研究結(jié)果，采用神經(jīng)網(wǎng)絡、圖模型等多種數(shù)據(jù)挖掘方法，對上述

30、各調(diào)控分子進行關聯(lián)和分析，初步建立起調(diào)控網(wǎng)絡。并實現(xiàn)分子、組織器官和整體水平的功能狀態(tài)的逐級整合，刻畫出肝藏血主疏泄的多級的特定調(diào)控網(wǎng)絡。 8.3養(yǎng)血調(diào)肝方干預的效應機制研究 8.3.1分組。采用本研究構(gòu)建的反映肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的病證結(jié)合動物模型，隨機分為模型組、對證治療組、次對證治療組，同時設正常對照組。 8.3.2 肝藏血主疏泄的分子調(diào)控網(wǎng)絡的檢測。在證候穩(wěn)定的時間窗內(nèi)分組給藥，觀察養(yǎng)血調(diào)肝藥物對于2.2.4獲得的特定指標群的影響，從而驗證肝藏血主疏泄的調(diào)控網(wǎng)絡并闡明養(yǎng)血調(diào)肝藥物的作用機制。 技術路線圖 四、年度計劃 年度 研究內(nèi)容 預期目標 第

31、 一 年 1、研究實施方案的論證與討論 2、文獻整理研究。 3、生理狀態(tài)研究的文獻分析 4、應激研究的文獻分析 5、信息平臺建設的籌建 6、五種疾病的現(xiàn)代文獻研究 7、五種疾病臨床調(diào)查的前期準備 8、五種疾病動物模型的構(gòu)建 9、動物模型證候評價指標體系的文獻研究 1、擬定課題實施方案，分割研究任務，簽訂研究任務書 2、完成知識考古學分析肝藏血主疏泄有關的研究單元的對象形成分析 3、完成肝臟象功能生理狀態(tài)研究的文獻分析，編制生理狀態(tài)研究調(diào)查表，分析北京地區(qū)四時八節(jié)氣象變化特點 5、完成中醫(yī)理論與應激研究相關的文獻分析，編制月經(jīng)周期研究調(diào)查表，初步篩選志愿者 6、

32、擬定信息平臺建設方案，編制相關程序，進行平臺試運行 7、建立五種疾病現(xiàn)代文獻數(shù)據(jù)庫，完成數(shù)據(jù)分析 8、擬定五種疾病臨床流行病學調(diào)查實施方案，編制調(diào)查表，進行人員培訓，并完成預調(diào)查 9、建立五種疾病動物病證結(jié)合的證候模型 10、發(fā)表文章10篇左右 第 二 年 1、肝藏血主疏泄知識考古學研究 2、開展健康人群及動物的四時八節(jié)動態(tài)觀察 3、進行月經(jīng)周期動態(tài)觀測 4、正式運行信息平臺 5、五種疾病的臨床流行病學調(diào)查 6、五種疾病動物模型的動態(tài)觀察和證候?qū)傩员孀R 7、模型動物證候?qū)傩缘姆絼┓醋C研究 8、進行課題中期總結(jié)與檢查 1、完成知識考古學對肝藏血主疏泄有關的

33、研究單元進行話語構(gòu)成分析之陳述方式分析、概念擴散分析、主題從屬分析。 2、完成300例健康人群8個時間點的動態(tài)觀察，完成宏觀指標與微觀指標的觀測； 3、完成100只大鼠，20只樹鼩8個時間點的動態(tài)觀測 4、完成100例健康志愿者月經(jīng)周期觀察與應激測試 5、進行信息平臺使用培訓，正式進行平臺運行 6、完成五種疾病各800例全國多中心臨床流行病學調(diào)查 7、基于臨床流調(diào)數(shù)據(jù)進行數(shù)據(jù)分析，建立宏觀與微觀相結(jié)合的“肝藏血主疏泄”異常狀態(tài)的判別模式。 8、4種以上的反映肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的病證結(jié)合動物模型及其判別方法。 9、撰寫課題中期總結(jié)報告，完成中期檢查 10、發(fā)表論文10篇左

34、右 第 三 年 1、完善后三年研究方案 2、肝藏血主疏泄有關的研究單元的知識考古學話語轉(zhuǎn)換分析 3、完成健康人及動物生理四時八節(jié)研究 4、開展志愿者應激狀態(tài)測試研究 5、信息平臺多中心質(zhì)量監(jiān)控及數(shù)據(jù)庫建設 6、開展五種疾病臨床干預研究 7、動物模型的實驗室指標檢測 1、擬定后三年研究實施方案，編制后三年課題任務書 2、完成肝藏血主疏泄有關的研究單元的系統(tǒng)成分轉(zhuǎn)換分析、話語關系轉(zhuǎn)換分析。 3、建立健康人生理研究數(shù)據(jù)庫，提取核心指標，描繪動態(tài)變化曲線，建立肝藏血主疏泄生理狀態(tài)判別模式 4、建立動物四時八節(jié)研究數(shù)據(jù)庫，提取相關核心指標，描繪動態(tài)變化曲線

35、5、建立月經(jīng)周期變化及應激測試的數(shù)據(jù)庫，探討肝藏血主疏泄與情緒變化的相關性，揭示其內(nèi)在機制 6、擬定應激研究實施方案，篩選研究志愿者 7、通過信息平臺對各課題組全國多中心的研究進行動態(tài)實時質(zhì)量監(jiān)控，建立大型關聯(lián)數(shù)據(jù)庫。 8、完成五種疾病各100例的臨床干預試驗，檢測各項指標 9、完成肝藏血主疏泄可能相關的核心指標及二級指標的檢測，分析其在慢性應激相關的神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡的表現(xiàn)特征 10、發(fā)表文章10篇左右 第 四 年 1、肝藏血主疏泄的文獻研究 2、志愿者應激狀態(tài)前后變化的研究 3、信息平臺的數(shù)據(jù)匯交與分析 4、五種疾病的臨床干預研究 5、動物模型的基因組學和蛋白

36、組學研究 1、完成肝藏血主疏泄的文獻研究 2、進行60例健康志愿者應激測試，分析其應激前后宏觀與微觀指標變化規(guī)律 3、完成關聯(lián)數(shù)據(jù)庫的建設，進行數(shù)據(jù)匯總 4、完成五種疾病各200例的臨床干預試驗，檢測各項指標，建立數(shù)據(jù)庫 5、完成肝藏血主疏泄相關特定腦區(qū)的數(shù)字化基因表達譜和small RNA分析 6、完成肝藏血主疏泄共性調(diào)控網(wǎng)絡的提取 7、揭示肝藏血主疏泄相關特定腦區(qū)的基因表達特征和small RNA表達特征 8、發(fā)表文章10篇左右 第 五 年 1、完成應激狀態(tài)前后變化的研究 2、進行數(shù)據(jù)匯交與分析 3、完成養(yǎng)血調(diào)肝方藥對肝藏血主疏泄共性調(diào)控網(wǎng)絡

37、的作用及其機制研究 4、總結(jié)研究成果，進行結(jié)題 1、完成120例健康志愿者應激測試，建立數(shù)據(jù)庫，分析其內(nèi)在機制 2、通過信息平臺，進行多種數(shù)據(jù)分析，進行數(shù)據(jù)匯交，綜合進行數(shù)據(jù)挖掘 3、揭示養(yǎng)血調(diào)肝方藥的對肝藏血主疏泄調(diào)控的內(nèi)在機制 4、闡明養(yǎng)血調(diào)肝方藥的對肝藏血主疏泄調(diào)控網(wǎng)絡的效應及其機制 5、發(fā)表文章10篇左右 6、撰寫結(jié)題報告，完成結(jié)題驗收 一、研究內(nèi)容 1、肝臟象理論的內(nèi)涵、外延及發(fā)展源流研究 以傳統(tǒng)中醫(yī)文獻學的研究方法為基礎，借鑒法國現(xiàn)代思想體系史家米歇爾〃?？聞?chuàng)立知識考古學的研究方法，結(jié)合現(xiàn)代數(shù)理挖掘技術，以歷代中醫(yī)文獻與史書、志書、筆記等其它相關古

38、代文獻為研究對象，系統(tǒng)總結(jié)、深入闡明肝藏血主疏泄及相關理論內(nèi)在涵義及學術發(fā)展源流。其具體研究內(nèi)容包括：系統(tǒng)梳理從先秦時期到新中國成立前歷代中醫(yī)及相關文獻，以肝主疏泄為切入點，分析肝主疏泄及相關專題的對象形成、陳述方式、概念的擴散、主題策略的選擇等內(nèi)容，對文獻中肝藏血主疏泄的含義及其診治體系生成變化進行具體分析，以發(fā)現(xiàn)構(gòu)成某一時期醫(yī)學思想整體的深層結(jié)構(gòu)——“知識型”或“基本信碼”，也就是話語，根據(jù)話語的轉(zhuǎn)變來分析肝藏血主疏泄的含義及其診治體系的演變及其原因，以分析其形成和轉(zhuǎn)變的歷史；在肝藏血主疏泄及其相關理論學術發(fā)展史的基礎上，確立其理論內(nèi)涵、應用范圍與原則，論證其在臟象學說、臟腑辨證以及臨床各

39、科疾病診治中的地位與作用，解決學術諸如“體陰用陽”“肝陽虛”等學術分歧與爭議；揭示相關疾病從肝論治臨床療效產(chǎn)生的機制和規(guī)律，進一步豐富和發(fā)展臟象理論；同時探討中醫(yī)理論發(fā)展與創(chuàng)新的規(guī)律，嘗試建立一個以歷史分析為基礎進行中醫(yī)理論研究方法。 2、生理狀態(tài)下肝藏血主疏泄功能的調(diào)控機制研究 （1）正常健康人肝藏血主疏泄與四時節(jié)律的相關性研究：遵循臨床流行病學抽樣調(diào)查的原則，依據(jù)中醫(yī)時間醫(yī)學五臟節(jié)律的原理，在全國多中心對300例（男女各150例）健康人進行四時八節(jié)的動態(tài)追蹤調(diào)查；全面采集調(diào)查者的一般信息、癥狀、情緒、生活質(zhì)量、實驗室指標等多種信息，建立數(shù)據(jù)庫。 （2）正常動物肝藏血主疏泄與四時節(jié)律

40、的相關性研究：選擇嚙齒類動物大鼠與靈長類動物樹鼩，依據(jù)中醫(yī)時間醫(yī)學五臟節(jié)律的原理，選取一年中的四時八節(jié)，采集8個時間點動物的表征，進行動物行為學檢測，以及神經(jīng)遞質(zhì)、退黑素、血管緊張素、腎上腺皮質(zhì)等神經(jīng)內(nèi)分泌指標的檢測，建立數(shù)據(jù)庫。 在統(tǒng)一的信息管理系統(tǒng)下，應用現(xiàn)代信息學手段，進行數(shù)據(jù)分析，提煉肝藏血與疏泄功能的節(jié)律性變化特點；揭示其調(diào)節(jié)機制。 3、健康志愿者應激狀態(tài)下肝藏血主疏泄功能的調(diào)控機制研究 （1）婦女月經(jīng)周期應激研究：選取月經(jīng)規(guī)律的健康志愿者100人，連續(xù)觀測其三個月經(jīng)周期的情緒、軀體癥狀以及一般性指標的變化，并與月經(jīng)期、黃體期、月經(jīng)后期分別進行應激狀態(tài)測試，主要進行心理認知測試，

41、檢測多導腦電等指標，建立數(shù)據(jù)庫進行分析，探索月經(jīng)周期中肝藏血狀態(tài)變化與疏泄功能的相關性，并總結(jié)肝藏血主疏泄異常狀態(tài)下應激變化規(guī)律，探討肝藏血主疏泄的內(nèi)在機制。 （2）健康志愿者應激刺激前后不同狀態(tài)與肝藏血主疏泄關系的研究：選取健康志愿者120例（男女各60例）進行情緒刺激和運動負荷兩種應激狀態(tài)前后的比較研究，采集志愿者應激前后的宏觀表現(xiàn)、心理與認知功能，以及神經(jīng)遞質(zhì)、退黑素、血管緊張素、腎上腺皮質(zhì)等神經(jīng)內(nèi)分泌指標的變化并建立數(shù)據(jù)庫。 4、五種疾病肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別研究 在現(xiàn)代文獻研究基礎上，借鑒心理學量表編制的方法，編制抑郁癥、經(jīng)前期綜合征、高血壓病、腸易激綜合征（腹瀉型）

42、、肝硬化五種疾病的臨床信息采集表，進行采集量表的信效度檢測。應用信息采集表，在全國多中心對符合該疾病現(xiàn)代診斷標準及各項納入標準的患者，進行800例以上/病的臨床流行病學橫斷面調(diào)查，系統(tǒng)采集患者的各項宏觀癥狀及微觀指標。在信息管理系統(tǒng)下，建立五種疾病統(tǒng)一的數(shù)據(jù)庫，進行實時質(zhì)量檢測和數(shù)據(jù)庫二次核對錄入，并分別采用有監(jiān)督與無監(jiān)督的數(shù)據(jù)分析方法，提煉與肝藏血肝疏泄功能異常相關的特異性表現(xiàn)；分析其中宏觀表現(xiàn)與微觀指標的相關性；比較五種疾病下的共性表現(xiàn)特點和個性特征；建立肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別模式。 4、抑郁癥等五種疾病從肝論治的臨床研究 養(yǎng)血調(diào)肝方治療肝藏血主疏泄功能異常五種心身疾病的臨

43、床研究：按照中醫(yī)從肝論治療效確切、臨床常見、西醫(yī)疾病診斷和療效評價標準明確的原則，每種疾病研究患者各300例。按照臨床為理論創(chuàng)新服務，為實驗研究奠定基礎的原則，按照1：1：1：1的比例，分別設立安慰劑對照組、方證對應組、方證次對應組、非干預證候?qū)φ战M，參照新藥創(chuàng)制的研究方法，應用養(yǎng)血調(diào)肝方劑的免煎顆粒，進行臨床干預研究。應用四種疾病的臨床信息采集表調(diào)查患者的宏觀癥狀并檢測其微觀指標，分析四種方劑的臨床療效，證治規(guī)律、相關機制，以及肝藏血與主疏泄功能間的相關性。 5、肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的動物模型研究 在復制抑郁癥、經(jīng)前期綜合征、高血壓、腸易激綜合征等5種疾病動物模型的基礎上，全面、

44、動態(tài)的采集信息，依據(jù)臨床以宏觀表征、生物學指標相結(jié)合的肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別模式進行動態(tài)的屬性辨識，從而篩選出可反映肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的病證結(jié)合動物模型，進一步通過方劑反證的方法加以驗證。 6、肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的共性機制研究 在同病異證、異病同證、同證異象的研究思路指導下，分別采用可反映肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的抑郁癥等4種疾病的病證結(jié)合動物模型，分析肝藏血主疏泄功能在機體對慢性應激反應過程中，大腦皮層—邊緣系統(tǒng)—自主神經(jīng)-內(nèi)分泌網(wǎng)絡調(diào)節(jié)的表現(xiàn)特征。借助基于測序的轉(zhuǎn)錄組（數(shù)字表達譜）和小RNA分析結(jié)合生物信息學技術及關鍵節(jié)點分子mRNA水平和蛋白質(zhì)水平的驗證，揭示建

45、立與肝藏血主疏泄功能密切相關的共性分子網(wǎng)絡，并采用疏肝調(diào)肝方加以驗證，進而闡明肝藏血主疏泄的現(xiàn)代科學內(nèi)涵。 7、實質(zhì)性肝損傷和肝藏血主疏泄功能的相關性研究 通過對實質(zhì)性肝損傷模型的與肝藏血主疏泄功能密切相關的共性分子網(wǎng)絡的變化特征的研究，探討實質(zhì)性肝損傷和肝藏血主疏泄功能的相關性，闡明實質(zhì)肝與肝藏血主疏泄功能的關系。 8、信息學管理系統(tǒng)及分析方法的研究 根據(jù)研究數(shù)據(jù)的特點，充分吸收現(xiàn)代信息管理學的經(jīng)驗，建立項目信息管理系統(tǒng)，將研究中相關多種數(shù)據(jù)庫進行關聯(lián)，形成統(tǒng)一的關聯(lián)網(wǎng)絡，對各項研究內(nèi)容的進展情況實行實時監(jiān)控；根據(jù)研究需求與數(shù)據(jù)特點探索、建立適宜于中醫(yī)臟象理論研究的熵理論分析方法和隱結(jié)構(gòu)模型等復雜系統(tǒng)建模及信息處理方法，確立其適用范圍，建立其應用規(guī)范，對各項研究數(shù)據(jù)進行綜合分析，揭示肝藏血主疏泄的基本科學內(nèi)涵。 QQ:58579744