【江蘇專用】2013版高中生物全程復(fù)習(xí)方略（人教版）配套課件：選修1.2微生物的利用

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1、專題2 微生物的利用一、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)一、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1.1.培養(yǎng)基培養(yǎng)基(1)(1)概念：人們按照微生物對(duì)概念：人們按照微生物對(duì)_的不同需求，配制出供的不同需求，配制出供其其_的營養(yǎng)基質(zhì)。的營養(yǎng)基質(zhì)。(2)(2)營養(yǎng)構(gòu)成：一般都含有水、營養(yǎng)構(gòu)成：一般都含有水、_、_和無機(jī)鹽。此外和無機(jī)鹽。此外還要滿足微生物生長對(duì)還要滿足微生物生長對(duì)pHpH、_以及以及_的要求。的要求。(3)(3)種類：按照物理性質(zhì)可分為種類：按照物理性質(zhì)可分為_培養(yǎng)基和培養(yǎng)基和_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖生長繁殖碳源碳源氮源氮源特殊營養(yǎng)物質(zhì)特殊營養(yǎng)物質(zhì)氧氣氧氣液體液體固體固體2.2.無菌技術(shù)無菌技術(shù)

2、(1)(1)含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。(2)(2)關(guān)鍵：關(guān)鍵：_。 _。 巴氏消毒法。巴氏消毒法。 化學(xué)藥劑消毒法?；瘜W(xué)藥劑消毒法。 _。 _。 干熱滅菌。干熱滅菌。 _。消毒消毒(3)(3)方法方法滅菌滅菌煮沸消毒法煮沸消毒法防止外來雜菌的入侵防止外來雜菌的入侵紫外線消毒法紫外線消毒法灼燒滅菌灼燒滅菌高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌3.3.大腸桿菌的純化培養(yǎng)大腸桿菌的純化培養(yǎng)(1)(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：最常用的細(xì)菌培養(yǎng)基：最常用的細(xì)菌培養(yǎng)基：_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。配制步驟：計(jì)算配制步

3、驟：計(jì)算_溶化溶化_倒平板。倒平板。(2)(2)純化大腸桿菌：純化大腸桿菌：純化大腸桿菌，其關(guān)鍵的步驟是純化大腸桿菌，其關(guān)鍵的步驟是_。純化培養(yǎng)方法：純化培養(yǎng)方法：_法和法和_法。法。純化培養(yǎng)原理：想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而純化培養(yǎng)原理：想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的來的肉眼可見的_，即可獲得較純的菌種。，即可獲得較純的菌種。牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨稱量稱量滅菌滅菌接種接種平板劃線平板劃線稀釋涂布平板稀釋涂布平板菌落菌落(3)(3)菌種的保存：菌種的保存：對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用_的方法。的方法。對(duì)于需要長期保存的菌種，可以采用

4、對(duì)于需要長期保存的菌種，可以采用_的方法。的方法。【點(diǎn)撥】【點(diǎn)撥】酒精消毒時(shí)，酒精消毒時(shí)，70%70%的酒精殺菌效果最好，原因是：濃的酒精殺菌效果最好，原因是：濃度過高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能度過高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其中；濃度過低，殺菌力減弱。滲入其中；濃度過低，殺菌力減弱。制備培養(yǎng)基過程中要進(jìn)行調(diào)制備培養(yǎng)基過程中要進(jìn)行調(diào)pHpH操作，必須在滅菌之前溶化之操作，必須在滅菌之前溶化之后進(jìn)行。后進(jìn)行。 臨時(shí)保藏臨時(shí)保藏甘油管藏甘油管藏二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1.1.分離原理分離原理土壤中細(xì)菌之

5、所以能分解尿素，是由于它們體內(nèi)能合成土壤中細(xì)菌之所以能分解尿素，是由于它們體內(nèi)能合成_，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機(jī)物的過程中起到這種物質(zhì)在把尿素分解成無機(jī)物的過程中起到_作用。作用。2.2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用_法法3.3.實(shí)驗(yàn)流程實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣土壤取樣_微生物的培養(yǎng)與觀察微生物的培養(yǎng)與觀察細(xì)菌的細(xì)菌的_。脲酶脲酶催化催化稀釋涂布平板稀釋涂布平板樣品的稀釋樣品的稀釋計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)【點(diǎn)撥】【點(diǎn)撥】培養(yǎng)后，由于細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶向周圍擴(kuò)散，將培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，由于細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶向周圍擴(kuò)散，將培養(yǎng)基中的尿素分解，產(chǎn)生的氨使培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑變紅。這表的

6、尿素分解，產(chǎn)生的氨使培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑變紅。這表明以尿素為氮源的細(xì)菌分泌了脲酶，并分解了尿素。圓形紅色區(qū)明以尿素為氮源的細(xì)菌分泌了脲酶，并分解了尿素。圓形紅色區(qū)域越大，表明這種細(xì)菌利用尿素的能力越強(qiáng)，脲酶活性越強(qiáng)，含域越大，表明這種細(xì)菌利用尿素的能力越強(qiáng)，脲酶活性越強(qiáng)，含量越多。量越多。 三、分解纖維素的微生物的分離三、分解纖維素的微生物的分離1.1.纖維素與纖維素酶纖維素與纖維素酶(1)(1)纖維素：纖維素：纖維素是一種纖維素是一種_，在棉花、木材、作物秸稈中含量較高。，在棉花、木材、作物秸稈中含量較高。(2)(2)纖維素酶：纖維素酶：組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至組成：纖維

7、素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即少包括三種組分，即_。作用：作用：纖維素纖維素 葡萄糖葡萄糖多糖多糖C C1 1酶、酶、CxCx酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶纖維二糖纖維二糖C C1 1酶酶CxCx酶酶葡萄糖葡萄糖苷酶苷酶_2.2.纖維素分解菌的篩選纖維素分解菌的篩選(1)(1)原理：原理： 纖維素分解菌纖維素分解菌 紅色復(fù)合物紅色復(fù)合物 紅色消失，出現(xiàn)透明圈紅色消失，出現(xiàn)透明圈(2)(2)培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：以以_為惟一碳源的選擇培養(yǎng)基。為惟一碳源的選擇培養(yǎng)基。剛果紅剛果紅纖維素纖維素纖維素酶纖維素酶纖維素纖維素3.3.實(shí)驗(yàn)流程實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀

8、釋挑選產(chǎn)生挑選產(chǎn)生透明圈的透明圈的菌落菌落將樣品涂布將樣品涂布到鑒別纖維到鑒別纖維素分解菌的素分解菌的培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上【點(diǎn)撥】【點(diǎn)撥】 選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，確保選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。能夠從樣品中分離到所需要的微生物。本實(shí)驗(yàn)涉及到的微生物技術(shù)主要有：培養(yǎng)基的配制、無菌操作本實(shí)驗(yàn)涉及到的微生物技術(shù)主要有：培養(yǎng)基的配制、無菌操作技術(shù)、稀釋涂布平板法、選擇培養(yǎng)基的作用、樣品稀釋等。技術(shù)、稀釋涂布平板法、選擇培養(yǎng)基的作用、樣品稀釋等。 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制1.1.培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基的成分(1)(1)碳源：碳源：含義：能提供碳

9、元素的物質(zhì)。含義：能提供碳元素的物質(zhì)。作用：構(gòu)成生物體的物質(zhì)，異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)。作用：構(gòu)成生物體的物質(zhì)，異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)。主要來源：主要來源：無機(jī)物：無機(jī)物：COCO2 2、NaHCONaHCO3 3。有機(jī)物：糖類、脂肪酸、石油、花生粉餅等。有機(jī)物：糖類、脂肪酸、石油、花生粉餅等。(2)(2)氮源：氮源：含義：能提供氮元素的物質(zhì)。含義：能提供氮元素的物質(zhì)。作用：合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮代謝產(chǎn)物。作用：合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮代謝產(chǎn)物。主要來源：主要來源：無機(jī)物：無機(jī)物：N N2 2、NHNH3 3、銨鹽、硝酸鹽。、銨鹽、硝酸鹽。有機(jī)物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等。有機(jī)物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等

10、。(3)(3)生長因子：生長因子：含義：生長不可少的微量有機(jī)物。含義：生長不可少的微量有機(jī)物。作用：酶和核酸的成分。作用：酶和核酸的成分。主要包括：維生素、氨基酸、堿基等。主要包括：維生素、氨基酸、堿基等。(4)(4)水：水：含量：在生物體內(nèi)含量很高，在低等生物體內(nèi)含量更高。含量：在生物體內(nèi)含量很高，在低等生物體內(nèi)含量更高。作用：不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)作用：不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。定。主要來源：培養(yǎng)基、大氣、代謝產(chǎn)物等。主要來源：培養(yǎng)基、大氣、代謝產(chǎn)物等。(5)(5)無機(jī)鹽：無機(jī)鹽：含義：為微生物提供除含義：為微生物提供除C C、H H、O O

11、以外的各種重要元素，包括大以外的各種重要元素，包括大量元素和微量元素。量元素和微量元素。作用：細(xì)胞內(nèi)的組成成分，生理調(diào)節(jié)物質(zhì)；某些化能自養(yǎng)菌作用：細(xì)胞內(nèi)的組成成分，生理調(diào)節(jié)物質(zhì)；某些化能自養(yǎng)菌的能源、酶的激活劑。的能源、酶的激活劑。主要來源：培養(yǎng)基、大氣等。主要來源：培養(yǎng)基、大氣等。 2.2.常見的消毒和滅菌方法常見的消毒和滅菌方法內(nèi)容內(nèi)容 種類種類 主要方法主要方法 應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍 區(qū)區(qū) 別別 聯(lián)系聯(lián)系 滅菌滅菌 灼燒灼燒滅菌滅菌法法 酒精燈火酒精燈火焰灼燒焰灼燒 微生物接種工具如接種環(huán)、微生物接種工具如接種環(huán)、接種針或其他金屬用具等，接種針或其他金屬用具等，接種過程中試管口或瓶口等接種過

12、程中試管口或瓶口等 使用強(qiáng)烈使用強(qiáng)烈的理化因的理化因素殺死物素殺死物體內(nèi)外體內(nèi)外所有的微所有的微生物，包生物，包括芽括芽孢和孢和孢子孢子 都借助理都借助理化性質(zhì)，營化性質(zhì)，營造微生物難造微生物難以生存的不以生存的不良環(huán)境良環(huán)境其作用實(shí)其作用實(shí)質(zhì)都是通過質(zhì)都是通過使蛋白質(zhì)變使蛋白質(zhì)變性來抑制微性來抑制微生物生命活生物生命活動(dòng)或殺死微動(dòng)或殺死微生物生物 干熱干熱滅菌滅菌法法 干熱滅菌干熱滅菌箱箱160 160 170 170 加熱加熱1 h1 h2 h2 h玻璃器皿玻璃器皿( (如吸管、培養(yǎng)皿如吸管、培養(yǎng)皿等等) )、金屬用具等凡不適合、金屬用具等凡不適合用其他方法滅菌而又能耐高用其他方法滅菌而又

13、能耐高溫的物品溫的物品 高壓高壓蒸汽蒸汽滅菌滅菌法法 121 121 維持維持15 min15 min30 min 30 min 培養(yǎng)基及多種器材、物品培養(yǎng)基及多種器材、物品 內(nèi)內(nèi)容容 種類種類 主要方法主要方法 應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍 區(qū)區(qū) 別別 聯(lián)系聯(lián)系 消消毒毒 巴氏巴氏消毒消毒法法 70 70 75 75 煮煮30 min30 min或或80 80 煮煮15 min15 min牛奶、啤酒、果酒和牛奶、啤酒、果酒和醬油等不宜進(jìn)行高溫醬油等不宜進(jìn)行高溫滅菌的液體滅菌的液體 使用較為溫和使用較為溫和的物理或化學(xué)的物理或化學(xué)方法殺死物體方法殺死物體表面或內(nèi)部的表面或內(nèi)部的部分微生物部分微生物( (不

14、不包括芽孢和孢包括芽孢和孢子子) )煮沸煮沸消毒消毒法法 100 100 煮沸煮沸5 min5 min6 min6 min日常食品、罐裝食品日常食品、罐裝食品 紫外紫外線消線消毒法毒法 紫外線照射紫外線照射30 min30 min接種室、接種箱等接種室、接種箱等 化學(xué)化學(xué)藥物藥物消毒消毒法法 用體積分?jǐn)?shù)為用體積分?jǐn)?shù)為70%70%75%75%的酒精、碘酒涂的酒精、碘酒涂抹，來蘇水噴灑等抹，來蘇水噴灑等用于皮膚、傷口、動(dòng)用于皮膚、傷口、動(dòng)植物組織表面消毒、植物組織表面消毒、手術(shù)器械、塑料或玻手術(shù)器械、塑料或玻璃器皿等璃器皿等 【高考警示鐘】【高考警示鐘】自養(yǎng)微生物與異養(yǎng)微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)不同自養(yǎng)

15、微生物與異養(yǎng)微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)不同(1)(1)自養(yǎng)微生物所需的碳源、氮源來自含碳、含氮的無機(jī)物，而自養(yǎng)微生物所需的碳源、氮源來自含碳、含氮的無機(jī)物，而異養(yǎng)微生物需要的碳源、氮源來自含碳、含氮的有機(jī)物，因此異養(yǎng)微生物需要的碳源、氮源來自含碳、含氮的有機(jī)物，因此可根據(jù)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)判斷微生物的代謝類型?？筛鶕?jù)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)判斷微生物的代謝類型。(2)(2)含氮無機(jī)物不但能給自養(yǎng)微生物提供氮源，也能作為能源物含氮無機(jī)物不但能給自養(yǎng)微生物提供氮源，也能作為能源物質(zhì)，提供能量，如質(zhì)，提供能量，如NHNH3 3既作為硝化細(xì)菌的氮源也作為能源。既作為硝化細(xì)菌的氮源也作為能源?！镜淅?xùn)練【典例訓(xùn)練1 1

16、】( (多選多選) )下表表示某培養(yǎng)基的配方，下列有關(guān)敘述下表表示某培養(yǎng)基的配方，下列有關(guān)敘述正確的是正確的是( )( )A.A.從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基B.B.培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨蛋白胨C.C.該培養(yǎng)基缺少提供生長因子的物質(zhì)該培養(yǎng)基缺少提供生長因子的物質(zhì)D.D.該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到合適的該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到合適的 pH pH 后就可以接種菌種后就可以接種菌種成分成分 蛋白胨蛋白胨 葡萄糖葡萄糖 K K2 2H

17、POHPO4 4伊紅伊紅 美藍(lán)美藍(lán) 蒸餾水蒸餾水 含量含量 10 g10 g 10 g10 g2g2g0.4 g0.4 g0.065 g0.065 g1 000 1 000 mLmL【解題指南】【解題指南】1.1.知識(shí)儲(chǔ)備知識(shí)儲(chǔ)備(1)(1)凝固劑瓊脂、伊紅和美藍(lán)的作用；凝固劑瓊脂、伊紅和美藍(lán)的作用；(2)(2)培養(yǎng)基中提供碳源、氮源、生長因子的物質(zhì)分析；培養(yǎng)基中提供碳源、氮源、生長因子的物質(zhì)分析；(3)(3)制備培養(yǎng)基過程中的操作步驟。制備培養(yǎng)基過程中的操作步驟。2.2.解題關(guān)鍵解題關(guān)鍵了解培養(yǎng)基成分、功能的分析及制備培養(yǎng)基的具體步驟。了解培養(yǎng)基成分、功能的分析及制備培養(yǎng)基的具體步驟。【解析

18、】【解析】選選A A、B B。培養(yǎng)基中沒有凝固劑瓊脂，為液體培養(yǎng)基，。培養(yǎng)基中沒有凝固劑瓊脂，為液體培養(yǎng)基，伊紅、美藍(lán)能使某些細(xì)菌著色，起鑒別作用，伊紅、美藍(lán)能使某些細(xì)菌著色，起鑒別作用，A A項(xiàng)正確；糖類項(xiàng)正確；糖類( (尤其是葡萄糖尤其是葡萄糖) )是最常用的碳源；蛋白胨主要用作氮源，但也是最常用的碳源；蛋白胨主要用作氮源，但也提供生長因子，并作為異養(yǎng)型微生物的碳源、能源，提供生長因子，并作為異養(yǎng)型微生物的碳源、能源，B B項(xiàng)正確、項(xiàng)正確、C C項(xiàng)錯(cuò)誤；培養(yǎng)基制備過程中調(diào)完項(xiàng)錯(cuò)誤；培養(yǎng)基制備過程中調(diào)完pHpH后要進(jìn)行滅菌處理，后要進(jìn)行滅菌處理，D D項(xiàng)錯(cuò)項(xiàng)錯(cuò)誤。誤?！净?dòng)探究】【互動(dòng)探究】

19、(1)(1)若在該培養(yǎng)基中加入青霉素，該培養(yǎng)基還能起若在該培養(yǎng)基中加入青霉素，該培養(yǎng)基還能起到鑒別作用嗎？到鑒別作用嗎？提示：提示：不能。不能。分析：分析：青霉素培養(yǎng)基往往是真菌選擇培養(yǎng)基，在加青霉素的培青霉素培養(yǎng)基往往是真菌選擇培養(yǎng)基，在加青霉素的培養(yǎng)基中，細(xì)菌養(yǎng)基中，細(xì)菌( (包括大腸桿菌包括大腸桿菌) )生長被抑制，而伊紅、美藍(lán)的作生長被抑制，而伊紅、美藍(lán)的作用是鑒別培養(yǎng)基中大腸桿菌的存在，兩者作用不相容，培養(yǎng)基用是鑒別培養(yǎng)基中大腸桿菌的存在，兩者作用不相容，培養(yǎng)基起不到鑒別作用。起不到鑒別作用。(2)(2)細(xì)菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾細(xì)菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓

20、蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理方法，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌？種不同的處理方法，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌？提示：提示：培養(yǎng)基、手、接種環(huán)。培養(yǎng)基、手、接種環(huán)。分析：分析：高壓蒸汽滅菌的設(shè)備，通常用于培養(yǎng)基的滅菌。用酒精高壓蒸汽滅菌的設(shè)備，通常用于培養(yǎng)基的滅菌。用酒精擦拭雙手是消毒的一種方法?；鹧孀茻?，可以迅速徹底地滅菌，擦拭雙手是消毒的一種方法?；鹧孀茻梢匝杆購氐椎販缇?，適用于微生物的接種工具，如接種環(huán)。適用于微生物的接種工具，如接種環(huán)。 微生物的純化培養(yǎng)技術(shù)微生物的純化培養(yǎng)技術(shù)1.1.原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其長成原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋

21、或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其長成單個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是純化的細(xì)菌菌落。單個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是純化的細(xì)菌菌落。2.2.微生物接種方法微生物接種方法(1)(1)平板劃線法：平板劃線法中細(xì)胞的分離和稀釋過程發(fā)生在接平板劃線法：平板劃線法中細(xì)胞的分離和稀釋過程發(fā)生在接種環(huán)在固體平板表面上的劃線和移動(dòng)過程中。在線的開始部分，種環(huán)在固體平板表面上的劃線和移動(dòng)過程中。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成純種的單個(gè)菌落。后可能形成純種的單個(gè)菌落。( (如下圖如下圖) )(2)(2)稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法: :

22、1010倍系列稀釋操作倍系列稀釋操作將分別盛有將分別盛有9 mL9 mL水的水的6 6支試管滅菌，并按支試管滅菌，并按10101 110106 6的順序編號(hào)。的順序編號(hào)。用移液管吸取用移液管吸取1 mL1 mL培養(yǎng)的菌液，注入培養(yǎng)的菌液，注入10101 1倍稀釋的試管中。用手倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸3 3次，使菌液與水充分混勻。次，使菌液與水充分混勻。從從10101 1倍稀釋的試管中吸取倍稀釋的試管中吸取1 mL1 mL稀釋液，注入稀釋液，注入10102 2倍稀釋的試管倍稀釋的試管中，重復(fù)中，重復(fù)步混勻操作。依次類推，直到完成最后步混勻操作。

23、依次類推，直到完成最后1 1支試管的稀支試管的稀釋。釋。【高考警示鐘】【高考警示鐘】平板劃線法純化大腸桿菌時(shí)不同階段灼燒接種環(huán)的目的不同平板劃線法純化大腸桿菌時(shí)不同階段灼燒接種環(huán)的目的不同(1)(1)第一次操作：殺死接種環(huán)上原有的微生物。第一次操作：殺死接種環(huán)上原有的微生物。(2)(2)每次劃線之前：殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下每次劃線之前：殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端。次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端。(3)(3)劃線結(jié)束后：殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境劃線結(jié)束后：殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。和

24、感染操作者?！镜淅?xùn)練【典例訓(xùn)練2 2】(2011(2011銀川模擬銀川模擬) )從自然界微生物中篩選某菌種從自然界微生物中篩選某菌種的一般步驟是：采集菌樣的一般步驟是：采集菌樣富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)純種分離純種分離性能測定。性能測定。(1)(1)不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)噬鹽菌的菌樣應(yīng)從噬鹽菌的菌樣應(yīng)從_環(huán)境中采集。環(huán)境中采集。(2)(2)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環(huán)境條富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分

25、離微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件，使其群落中的數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培件，使其群落中的數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對(duì)產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇養(yǎng)方法。對(duì)產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇_的的培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)基，并在_條件下培養(yǎng)。條件下培養(yǎng)。(3)(3)接種前要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行接種前要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行_處理。在整個(gè)微生物的分離和處理。在整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在培養(yǎng)中，一定要注意在_條件下進(jìn)行。條件下進(jìn)行。(4)(4)如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請(qǐng)分析接種的具體方法。

26、果圖，請(qǐng)分析接種的具體方法。獲得圖獲得圖A A效果的接種方法是效果的接種方法是_，圖，圖B B效果的接種方法是效果的接種方法是_。一同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片，一同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是最可能的原因是_，應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？，應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？_。(5)(5)如果探究溫度對(duì)纖維素酶活性的影響，自變量是如果探究溫度對(duì)纖維素酶活性的影響，自變量是_，應(yīng)，應(yīng)該保持該保持_等不變等不變( (至少答兩項(xiàng)至少答兩項(xiàng)) )?！窘忸}指南】【解題指南】1.1.知識(shí)儲(chǔ)備知識(shí)儲(chǔ)備(1)(1)菌種篩選的原理和方法；菌種篩選的原

27、理和方法；(2)(2)微生物純化培養(yǎng)的具體方法和情境分析。微生物純化培養(yǎng)的具體方法和情境分析。2.2.解題關(guān)鍵解題關(guān)鍵了解選擇培養(yǎng)基配制的一般規(guī)律和具體應(yīng)用，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象了解選擇培養(yǎng)基配制的一般規(guī)律和具體應(yīng)用，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象分析純化培養(yǎng)的接種方法。分析純化培養(yǎng)的接種方法?！窘馕觥俊窘馕觥?1)(1)篩選菌種應(yīng)從適于目的菌種生長、繁殖的環(huán)境中尋篩選菌種應(yīng)從適于目的菌種生長、繁殖的環(huán)境中尋找，故培養(yǎng)噬鹽菌應(yīng)從高鹽環(huán)境中采集。找，故培養(yǎng)噬鹽菌應(yīng)從高鹽環(huán)境中采集。(2)(2)富集培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件應(yīng)能促進(jìn)目的菌的生長、繁殖。富集培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件應(yīng)能促進(jìn)目的菌的生長、繁殖。(3)(3)微生物

28、的分離及培養(yǎng)中必須保證無菌，包括培養(yǎng)基的滅菌和微生物的分離及培養(yǎng)中必須保證無菌，包括培養(yǎng)基的滅菌和操作過程的滅菌等。操作過程的滅菌等。(4)(4)純化培養(yǎng)中接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，前一純化培養(yǎng)中接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，前一種方法形成的菌落分布較均勻，后一種方法形成的菌落分布不種方法形成的菌落分布較均勻，后一種方法形成的菌落分布不均勻，先劃線的部分菌落密集甚至相連，后劃線的部分菌落分均勻，先劃線的部分菌落密集甚至相連，后劃線的部分菌落分布稀疏。布稀疏。(5)(5)探究溫度對(duì)酶活性的影響時(shí)，溫度為自變量，酶活性為因變探究溫度對(duì)酶活性的影響時(shí)，溫度為自變量，酶活性為因變量

29、，其他變量如底物和酶的用量、量，其他變量如底物和酶的用量、pHpH、反應(yīng)時(shí)間等均為無關(guān)變、反應(yīng)時(shí)間等均為無關(guān)變量。量。答案：答案：(1)(1)海灘等高鹽海灘等高鹽(2)(2)以淀粉為惟一碳源以淀粉為惟一碳源 高溫高溫(3)(3)高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 無菌無菌(4)(4)稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法 菌液濃度過高菌液濃度過高增大稀釋倍數(shù)增大稀釋倍數(shù)( (或培養(yǎng)過程被雜菌污染或培養(yǎng)過程被雜菌污染 嚴(yán)格無菌操作；或嚴(yán)格無菌操作；或用接種環(huán)劃下一區(qū)域前接種環(huán)沒有滅菌用接種環(huán)劃下一區(qū)域前接種環(huán)沒有滅菌 每劃一個(gè)新區(qū)域前每劃一個(gè)新區(qū)域前都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌處理都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌

30、處理)()(原因與操作要對(duì)應(yīng)原因與操作要對(duì)應(yīng)) )(5)(5)溫度溫度 纖維素的量與濃度、反應(yīng)時(shí)間、纖維素的量與濃度、反應(yīng)時(shí)間、pHpH【變式訓(xùn)練】【變式訓(xùn)練】如圖表示平板劃線法分離純化細(xì)菌示意圖。根據(jù)如圖表示平板劃線法分離純化細(xì)菌示意圖。根據(jù)所學(xué)生物學(xué)知識(shí)，完成下列問題。所學(xué)生物學(xué)知識(shí)，完成下列問題。(1)(1)微生物所需的營養(yǎng)成分一般包括微生物所需的營養(yǎng)成分一般包括_、_、水和、水和無機(jī)鹽。無機(jī)鹽。(2)(2)培養(yǎng)微生物時(shí)，除考慮微生物生長所需的營養(yǎng)外，還要考慮培養(yǎng)微生物時(shí)，除考慮微生物生長所需的營養(yǎng)外，還要考慮微生物生長所需的溫度、微生物生長所需的溫度、_以及是否需要以及是否需要O O2

31、 2等。等。(3)(3)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)，多采用對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)，多采用_法，而對(duì)接種法，而對(duì)接種環(huán)或涂布器滅菌時(shí)則用環(huán)或涂布器滅菌時(shí)則用_法。法。(4)(4)平板劃線時(shí)，為保證每次劃線都從上次劃線末端的微生物濃平板劃線時(shí)，為保證每次劃線都從上次劃線末端的微生物濃度開始，所以每次劃線前都要度開始，所以每次劃線前都要_，平板劃線結(jié)束后，最，平板劃線結(jié)束后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線后一次劃的線不能與第一次劃的線_。(5)(5)脲酶可以將尿素分解為脲酶可以將尿素分解為NHNH3 3，從而使尿素溶液，從而使尿素溶液pHpH升高，這可升高，這可用用_試劑來檢驗(yàn)。用纖維素作惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)

32、試劑來檢驗(yàn)。用纖維素作惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物，得到的纖維素分解菌中可能還混有微生物，得到的纖維素分解菌中可能還混有_?！窘馕觥俊窘馕觥?1)(2)(1)(2)培養(yǎng)基中一般含有水、無機(jī)鹽、碳源、氮源等培養(yǎng)基中一般含有水、無機(jī)鹽、碳源、氮源等物質(zhì)；培養(yǎng)基中除含有營養(yǎng)物質(zhì)外還需提供適宜的溫度、物質(zhì)；培養(yǎng)基中除含有營養(yǎng)物質(zhì)外還需提供適宜的溫度、pHpH、O O2 2等。等。(3)(3)培養(yǎng)基常采用高壓蒸汽滅菌，玻璃器皿常采用干熱滅培養(yǎng)基常采用高壓蒸汽滅菌，玻璃器皿常采用干熱滅菌，接種環(huán)等金屬器具常采用灼燒滅菌。菌，接種環(huán)等金屬器具常采用灼燒滅菌。(4)(4)考查平板劃線法的考查平板劃線法的操作方法

33、，如果劃線相重合則不能分離出純種。操作方法，如果劃線相重合則不能分離出純種。(5)(5)酚紅可檢驗(yàn)酚紅可檢驗(yàn)堿性溶液，用纖維素作惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物，得到纖堿性溶液，用纖維素作惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物，得到纖維素分解菌，但自養(yǎng)微生物可以利用空氣中的維素分解菌，但自養(yǎng)微生物可以利用空氣中的COCO2 2作為碳源，也作為碳源，也能生存，需要進(jìn)一步分離。能生存，需要進(jìn)一步分離。答案：答案：(1)(1)碳源碳源 氮源氮源 (2)pH(2)pH(3)(3)高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 灼燒滅菌灼燒滅菌(4)(4)對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌 相交相交( (相接、相連、交叉等相接、相連、交叉等)

34、)(5)(5)酚紅酚紅 自養(yǎng)微生物自養(yǎng)微生物( (硝化細(xì)菌硝化細(xì)菌) ) 微生物的篩選與計(jì)數(shù)微生物的篩選與計(jì)數(shù)1.1.篩選菌株篩選菌株(1)(1)原則：人為提供有利于目的菌生長的條件，同時(shí)抑制或阻止原則：人為提供有利于目的菌生長的條件，同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長。其他微生物的生長。(2)(2)菌株篩選原理的比較：菌株篩選原理的比較：土壤中分解尿素的細(xì)菌土壤中分解尿素的細(xì)菌 分解纖維素的微生物分解纖維素的微生物 選擇培養(yǎng)基的成分：尿素選擇培養(yǎng)基的成分：尿素作為惟一的氮源作為惟一的氮源鑒定方法：鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，若指示劑變紅，pHpH升

35、高，說升高，說明細(xì)菌能分解尿素明細(xì)菌能分解尿素 選擇培養(yǎng)基的成分：選擇培養(yǎng)基的成分：纖維素作為惟一的碳源纖維素作為惟一的碳源鑒定方法：鑒定方法：剛果紅染色法，即剛果紅與纖維剛果紅染色法，即剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，培養(yǎng)基出現(xiàn)以纖維素分分解后，培養(yǎng)基出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈解菌為中心的透明圈 2.2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。算一定容積的樣品中微生

36、物的數(shù)量。方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。(2)(2)間接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法( (活菌計(jì)數(shù)法活菌計(jì)數(shù)法) )：原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=(C=(CV)V)M M，其中，其中,C,C代表某代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落

37、數(shù)，一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V V代表涂布平板時(shí)所用的代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積稀釋液的體積(mL)(mL)，M M代表稀釋倍數(shù)。代表稀釋倍數(shù)。操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在3030300300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。【技巧點(diǎn)撥臺(tái)】【技巧點(diǎn)撥臺(tái)】 選擇培養(yǎng)基的選擇方法選擇培養(yǎng)基的選擇方法(1)(1)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分離在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得

38、到金黃色葡萄球菌。出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。這里的加入是在主要營養(yǎng)成分完整的基礎(chǔ)上加入。這里的加入是在主要營養(yǎng)成分完整的基礎(chǔ)上加入。(2)(2)改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。例如缺乏氮源時(shí)可以分離出固氮改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。例如缺乏氮源時(shí)可以分離出固氮微生物；石油作為惟一碳源時(shí)，可以分離出消除石油污染的微微生物；石油作為惟一碳源時(shí)，可以分離出消除石油污染的微生物。生物。(3)(3)改變微生物的培養(yǎng)條件。例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境下培改變微生物的培養(yǎng)條件。例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境下培養(yǎng)，可以得到耐高溫的微生物。養(yǎng)，可以得到耐高溫的微生物?！镜淅?xùn)練【典例訓(xùn)練3 3】下

39、面是探究如何從土壤中分離自生固氮菌與計(jì)數(shù)下面是探究如何從土壤中分離自生固氮菌與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)，完成下列問題：的實(shí)驗(yàn)，完成下列問題：實(shí)驗(yàn)原理：農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多。將實(shí)驗(yàn)原理：農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多。將用表層土壤制成的稀泥漿，接種到無氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。在用表層土壤制成的稀泥漿，接種到無氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長繁殖。用這種方法，可這種情況下，只有自生固氮菌才能生長繁殖。用這種方法，可以將自生固氮菌與其他細(xì)菌分離。以將自生固氮菌與其他細(xì)菌分離。材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基

40、、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛有基、盛有9 mL9 mL無菌水的試管、無菌吸管、無菌涂布器、無菌培無菌水的試管、無菌吸管、無菌涂布器、無菌培養(yǎng)皿、盛有養(yǎng)皿、盛有90 mL90 mL無菌水的錐形瓶、恒溫箱。無菌水的錐形瓶、恒溫箱。(1)(1)方法步驟：方法步驟：倒平板：分別將無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，倒平板：分別將無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，應(yīng)在應(yīng)在_操作。操作。制備土壤稀釋液：取土樣制備土壤稀釋液：取土樣10 g10 g加入盛有加入盛有90 mL90 mL無菌水的錐形瓶無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。用無菌吸管吸取上清液中，充分搖勻。用無菌吸管吸取上清液1 mL1 mL，轉(zhuǎn)至盛有，

41、轉(zhuǎn)至盛有9 mL9 mL的的無菌水的試管中，依次稀釋到無菌水的試管中，依次稀釋到10107 7稀釋度。稀釋度。涂布：按照由涂布：按照由10107 710103 3稀釋度的順序分別吸取稀釋度的順序分別吸取0.1 mL0.1 mL進(jìn)行平板進(jìn)行平板涂布，每個(gè)稀釋度下，無氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布涂布，每個(gè)稀釋度下，無氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布_個(gè)平板，牛個(gè)平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布_個(gè)。個(gè)。培養(yǎng)：放入恒溫箱內(nèi)，在培養(yǎng)：放入恒溫箱內(nèi)，在28 28 30 30 下培養(yǎng)下培養(yǎng)3 d3 d4 d4 d。細(xì)菌的計(jì)數(shù)：當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在細(xì)菌的計(jì)數(shù)：當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在_的的平板進(jìn)行計(jì)

42、數(shù)。如果測定的平均值為平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。如果測定的平均值為5050，則每克樣品中的菌落，則每克樣品中的菌落數(shù)是數(shù)是_。( (稀釋度是稀釋度是10105 5) )(2)(2)預(yù)期結(jié)果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)預(yù)期結(jié)果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)_(_(填填“多于多于”或或“少于少于”) )無氮培養(yǎng)基上的數(shù)目。原因是無氮培養(yǎng)基上的數(shù)目。原因是_?！窘忸}指南】【解題指南】1.1.考查實(shí)質(zhì)考查實(shí)質(zhì)本題通過探究實(shí)驗(yàn)的過程考查微生物的培養(yǎng)、分離和計(jì)數(shù)等知本題通過探究實(shí)驗(yàn)的過程考查微生物的培養(yǎng)、分離和計(jì)數(shù)等知識(shí)點(diǎn)。識(shí)點(diǎn)。2.2.解題關(guān)鍵解題關(guān)鍵明確稀釋涂布平板法的操作過程，學(xué)會(huì)

43、根據(jù)計(jì)算結(jié)果得出相關(guān)明確稀釋涂布平板法的操作過程，學(xué)會(huì)根據(jù)計(jì)算結(jié)果得出相關(guān)的結(jié)論。的結(jié)論?！窘馕觥俊窘馕觥吭诰凭珶艋鹧媾缘蛊桨澹梢詼p少雜菌污染。為了保證在酒精燈火焰旁倒平板，可以減少雜菌污染。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3 35 5個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在3030300300的平板的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值，則每克樣品中的菌落數(shù)為進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值，則每克樣品中的菌落數(shù)為(50(500.1)0.1) 10105 5=5=510107 7。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照，以消除無關(guān)變量對(duì)。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照，以消除無關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，該培養(yǎng)基適合其他

44、細(xì)菌生存，所以，它比無氮實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，該培養(yǎng)基適合其他細(xì)菌生存，所以，它比無氮培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目多。培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目多。答案：答案：(1)(1)酒精燈火焰旁酒精燈火焰旁 3 13 13030300 5300 510107 7(2)(2)多于多于 無氮培養(yǎng)基上只有土壤中的自生固氮菌生存繁殖，無氮培養(yǎng)基上只有土壤中的自生固氮菌生存繁殖，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類生存而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類生存【互動(dòng)探究】【互動(dòng)探究】(1)(1)據(jù)上題可知，在稀釋涂布平板法中，為何需涂據(jù)上題可知，在稀釋涂布平板法中，為何需涂布三個(gè)平板？布三個(gè)平板？提示：提示：對(duì)照作用、減少

45、實(shí)驗(yàn)誤差等。對(duì)照作用、減少實(shí)驗(yàn)誤差等。分析：分析：一是作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)，判斷實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性；二是作為一是作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)，判斷實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性；二是作為重復(fù)實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)時(shí)取平均值，以減少實(shí)驗(yàn)誤差。重復(fù)實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)時(shí)取平均值，以減少實(shí)驗(yàn)誤差。(2)(2)用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實(shí)際用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實(shí)際值相比如何？值相比如何？提示：提示：比實(shí)際值低。比實(shí)際值低。分析：分析：培養(yǎng)基上的一個(gè)菌落也可能由相連的兩個(gè)或多個(gè)菌體繁培養(yǎng)基上的一個(gè)菌落也可能由相連的兩個(gè)或多個(gè)菌體繁殖而來，因此統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)要少于菌體實(shí)際值。殖而來，因此統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)要少于菌體實(shí)際值。1

46、.1.下列說法正確的是下列說法正確的是( )( )A.A.銨鹽、硝酸鹽可以作為自養(yǎng)微生物的氮源銨鹽、硝酸鹽可以作為自養(yǎng)微生物的氮源B.B.凡是碳源都能提供能量凡是碳源都能提供能量C.C.除水以外的無機(jī)物僅提供無機(jī)鹽除水以外的無機(jī)物僅提供無機(jī)鹽D.D.無機(jī)氮源不能提供能量無機(jī)氮源不能提供能量【解析】【解析】選選A A。本題考查微生物生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)及其功能。本題考查微生物生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)及其功能。銨鹽、硝酸鹽是最常用的無機(jī)氮源，可以被自養(yǎng)微生物利用；銨鹽、硝酸鹽是最常用的無機(jī)氮源，可以被自養(yǎng)微生物利用；COCO2 2是微生物的碳源，但不能提供能量；氨可為硝化細(xì)菌提供能是微生物的碳源，但不

47、能提供能量；氨可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。量和氮源。2.(20122.(2012泰州模擬泰州模擬) )關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，下列敘關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，下列敘述錯(cuò)誤的是述錯(cuò)誤的是( )( )A.A.操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌B.B.將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C.C.待培養(yǎng)基冷卻至待培養(yǎng)基冷卻至 5050左右時(shí)進(jìn)行倒平板左右時(shí)進(jìn)行倒平板D.D.待平板冷卻凝固約待平板冷卻凝固約 5 min5 min10 min 10 min 后將平板倒過來放置后將平板倒過來放置【解析】【解析】選

48、選A A。制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱。制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，不能顛倒。牛肉膏容易吸潮，所以當(dāng)量、溶化、滅菌、倒平板，不能顛倒。牛肉膏容易吸潮，所以當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。待培養(yǎng)基牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。待培養(yǎng)基冷卻至冷卻至 5050左右，用手觸摸錐形瓶剛剛不燙手，并且培養(yǎng)基處左右，用手觸摸錐形瓶剛剛不燙手，并且培養(yǎng)基處于熔化狀態(tài)，即可倒平板。平板冷卻幾分鐘后還需倒置。于熔化狀態(tài)，即可倒平板。平板冷卻幾分鐘后還需倒置。3.3.分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過程中操作有誤的是分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)

49、過程中操作有誤的是( )( )A.A.經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上B.B.富集培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)纖維素分解菌少富集培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)纖維素分解菌少C.C.可通過定時(shí)測定葡萄糖產(chǎn)量的變化來衡量纖維素分解菌培養(yǎng)液可通過定時(shí)測定葡萄糖產(chǎn)量的變化來衡量纖維素分解菌培養(yǎng)液中的纖維素酶產(chǎn)量中的纖維素酶產(chǎn)量D.D.對(duì)照組可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上對(duì)照組可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上【解析】【解析】選選A A。本題考查對(duì)土壤中分解纖維素的微生物的分離過。本題考查對(duì)土壤中分解纖維素的微生物的分離過

50、程。從實(shí)驗(yàn)的原理、基本流程入手來解答該題。經(jīng)選擇培養(yǎng)后，程。從實(shí)驗(yàn)的原理、基本流程入手來解答該題。經(jīng)選擇培養(yǎng)后，再經(jīng)稀釋，才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上；富再經(jīng)稀釋，才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上；富集培養(yǎng)可省略；在纖維素酶的作用下，纖維素能被水解成葡萄糖。集培養(yǎng)可省略；在纖維素酶的作用下，纖維素能被水解成葡萄糖。所以可通過定時(shí)測定葡萄糖產(chǎn)量的變化來衡量纖維素分解菌培養(yǎng)所以可通過定時(shí)測定葡萄糖產(chǎn)量的變化來衡量纖維素分解菌培養(yǎng)液中的纖維素酶產(chǎn)量；設(shè)置對(duì)照能證明經(jīng)富集培養(yǎng)的確得到了欲液中的纖維素酶產(chǎn)量；設(shè)置對(duì)照能證明經(jīng)富集培養(yǎng)的確得到了欲分離的微生物。分離的微生物。4.4.

51、下面的資料表明在各種培養(yǎng)基中細(xì)菌的生長狀況下面的資料表明在各種培養(yǎng)基中細(xì)菌的生長狀況(S(S、C C、M M為簡為簡單培養(yǎng)基；單培養(yǎng)基；U U、V V、X X、Y Y、Z Z代表加入培養(yǎng)基的不同物質(zhì)代表加入培養(yǎng)基的不同物質(zhì)) )，據(jù)表推，據(jù)表推測細(xì)菌自身不能合成的物質(zhì)是測細(xì)菌自身不能合成的物質(zhì)是( (說明：說明：“+”+”表示能正常生長，表示能正常生長，“-”-”表示不能生長表示不能生長) )。( )( )培養(yǎng)基培養(yǎng)基 生長狀態(tài)生長狀態(tài) S S、C C、M M- -S S、C C、M,+V+ZM,+V+Z- -S S、C C、M,+U+YM,+U+Y+ +S S、C C、M,+Z+XM,+Z+

52、X- -S S、C C、M,+V+YM,+V+Y+ +S S、C C、M,+U+XM,+U+X- -S S、C C、M,+Y+ZM,+Y+Z+ +A.U B.V C.Y D.ZA.U B.V C.Y D.Z【解析】【解析】選選C C。細(xì)菌只有在加入。細(xì)菌只有在加入Y Y的培養(yǎng)基上生長，而在加入的培養(yǎng)基上生長，而在加入U(xiǎn) U、V V、X X、Z Z的培養(yǎng)基上均不能生長，因此推測細(xì)菌自身不能合成物質(zhì)的培養(yǎng)基上均不能生長，因此推測細(xì)菌自身不能合成物質(zhì)Y Y。5.(5.(多選多選) )下列關(guān)于大腸桿菌的培養(yǎng)中敘述正確的是下列關(guān)于大腸桿菌的培養(yǎng)中敘述正確的是( )( )A.A.在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考

53、慮營養(yǎng)條件外，還要考慮在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮pHpH、溫、溫度和滲透壓等條件度和滲透壓等條件B.B.在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行消毒養(yǎng)皿進(jìn)行消毒C.C.若用稀釋涂布平板法測定大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估若用稀釋涂布平板法測定大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的稀釋度樣品稀釋的稀釋度D.D.使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物

54、必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄【解析】【解析】選選A A、C C、D D。本題主要考查微生物培養(yǎng)和無菌操作的相。本題主要考查微生物培養(yǎng)和無菌操作的相關(guān)知識(shí)。培養(yǎng)過程中，除營養(yǎng)條件要滿足需要外，還要考慮溫度、關(guān)知識(shí)。培養(yǎng)過程中，除營養(yǎng)條件要滿足需要外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件是否適宜；滅菌是使用強(qiáng)烈的理化因素殺酸堿度和滲透壓等條件是否適宜；滅菌是使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，所以，對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿應(yīng)進(jìn)行滅菌死物體內(nèi)外所有的微生物，所以，對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿應(yīng)進(jìn)行滅菌而不是消毒；使用稀釋涂布平板法時(shí)要保證樣品稀釋比例合適，而不是消毒；使用稀釋涂布平板法時(shí)要保證樣品稀釋比例合適，這樣

55、才會(huì)有更科學(xué)的數(shù)據(jù)；有的大腸桿菌會(huì)釋放一種強(qiáng)烈的毒素，這樣才會(huì)有更科學(xué)的數(shù)據(jù)；有的大腸桿菌會(huì)釋放一種強(qiáng)烈的毒素，并可能導(dǎo)致腸道出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀，所以使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物并可能導(dǎo)致腸道出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀，所以使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。6.6.微生物在生物技術(shù)的運(yùn)用中具有非常重要的地位，請(qǐng)你回答下微生物在生物技術(shù)的運(yùn)用中具有非常重要的地位，請(qǐng)你回答下列關(guān)于微生物在生物技術(shù)中運(yùn)用的問題。列關(guān)于微生物在生物技術(shù)中運(yùn)用的問題。(1)(1)微生物的培養(yǎng)和接種等環(huán)節(jié)都需要嚴(yán)格做好無菌操作，包括微生物的培養(yǎng)和接種等環(huán)節(jié)都需

56、要嚴(yán)格做好無菌操作，包括滅菌和消毒兩種方式，下列所列舉的實(shí)驗(yàn)材料和用具中，需要滅滅菌和消毒兩種方式，下列所列舉的實(shí)驗(yàn)材料和用具中，需要滅菌的是菌的是_(_(填數(shù)字填數(shù)字) )，需要消毒的是，需要消毒的是_(_(填數(shù)字填數(shù)字) )。培養(yǎng)基培養(yǎng)基 接種環(huán)接種環(huán) 實(shí)驗(yàn)者的雙手實(shí)驗(yàn)者的雙手培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿 酒精燈酒精燈(2)(2)接種微生物的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布接種微生物的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)槠桨宸?。如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?234512345。下列操作方法正確的是。下列操作方法正確的是( )( )。A

57、.A.操作前不用做任何處理操作前不用做任何處理B.B.劃線操作須在火焰上進(jìn)行劃線操作須在火焰上進(jìn)行C.C.在在5 5區(qū)域中才可以得到所需菌落區(qū)域中才可以得到所需菌落D.D.在在1 1、2 2、3 3、4 4、5 5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌(3)(3)在篩選纖維素分解菌的過程中，人們發(fā)明了剛果紅染色法。在篩選纖維素分解菌的過程中，人們發(fā)明了剛果紅染色法。在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入纖維素分解菌后，過一段時(shí)間向在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入纖維素分解菌后，過一段時(shí)間向培養(yǎng)基中再加入剛果紅，判斷纖維素分解菌的存在部位的依據(jù)培養(yǎng)基中再加入剛果紅，判斷纖維素分解菌的存在部位

58、的依據(jù)是是_。【解析】【解析】(1)(1)滅菌和消毒的對(duì)象不同，消毒針對(duì)人體和生物材料，滅菌和消毒的對(duì)象不同，消毒針對(duì)人體和生物材料，培養(yǎng)基及其他用具等可以進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基及其他用具等可以進(jìn)行滅菌。(2)(2)劃線后灼燒接種環(huán)，能劃線后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。(3)(3)剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但能分解纖維素的細(xì)剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但能分解纖維素的細(xì)菌周圍因不存在纖維素，所以會(huì)出現(xiàn)透明圈。菌周圍因不存在纖維素，所以會(huì)出現(xiàn)透明圈。答案：答案：(1)(1) (2)D (2)D(3)(3)是否產(chǎn)生透明圈是否產(chǎn)生透明圈( (在纖維素分解菌的周圍產(chǎn)生透明圈在纖維素分解菌的周圍產(chǎn)生透明圈) )