藥物分析 第十四章 維生素類藥物的分析ppt課件.ppt

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1、第十四章 維生素類藥物的分析 1 概 述 維生素維持正常生理功能所必需的、 微量營養(yǎng) 物質(zhì)，人體不能合成維生素。 必須從外界食物中攝 取。 2 維生素的發(fā)現(xiàn)是 20世紀的偉 大發(fā)現(xiàn)之一。 1897年 ,C.艾克曼在 爪哇發(fā)現(xiàn)只吃精磨的白米即可患腳 氣病，未經(jīng)碾磨的糙米能治療這種 病。并發(fā)現(xiàn)可治腳氣病的物質(zhì)能用 水或酒精提取 ,當時稱這種物質(zhì)為 “ 水溶性 B”。 Christiaan Eijkman 1929 諾貝爾生物醫(yī)學獎 The Discovery of Vitamin 3 發(fā)現(xiàn)簡史 4 必需維生素 13種 維生素 A，維生素 B，維生素 C，維生素

2、D， 維生素 E，維生素 K，維生素 H（生物素）， 維生素 P，維生素 PP，維生素 M，維生素 T，維生素 U，水溶性維生素。 5 分類 6 A B1 C D E Vitamins Contents 維生素 A的簡介 是魚類肝臟中提取的一種不飽和脂 肪醇，又稱魚肝油。目前主要采用 人工合成。 在體內(nèi)以視黃醇的形式儲存，缺乏會 影響視色素的合成，導致夜盲癥，視 力減退。 第一節(jié) 維生素 A的分析 8 9 全反式 第一節(jié) 維生素 A的分析 結(jié)構(gòu) 共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)己烯 黃色棱形， 62-64 淡黃色棱形， 57-58 無定型， 28-29 10 去氫維生素

3、 VitA2 去水維生素 VitA3 易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應 C H 3 C H 2 O H C H 3H 3 C C H 3 C H 3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 2 3 4 5 6 7 8 9 C H 3H 3 C C H 3 C H 3 C H 3 C H 2 第一節(jié) 維生素 A的分析 溶解性 :與三氯甲烷、乙醚、環(huán)已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水 中不溶。 不穩(wěn)定性： 含有多個不飽和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，易被空氣中氧或氧化劑氧化，易被 紫外光裂解，特別是在加熱和金屬離子存在時更易氧化變質(zhì)從而失活。 酸 醛 環(huán)氧化物 、氧化劑紫外線、 V i t

4、A V i t A V i t A O O 2 第一節(jié) 維生素 A的分析 性質(zhì) 紫外吸收： 共軛多烯醇側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，在 325-328nm之間有最大吸 收，可用于鑒別。 C H 3 C H 2 O R C H 3H 3 C C H 3 C H 3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 第一節(jié) 維生素 A的分析 max 相對生物效價 順反異構(gòu) 維生素 A 325.5 100% 全反式 新維生素 Aa 328 75% 2順 新維生素 Ab 320.5 24% 4順 新維生素 Ac 310.5 15% 2， 4順 異維生素 Aa 323 21% 6順 異維生

5、素 Ab 324 24% 2， 6順 第一節(jié) 維生素 A的分析 天然維生素 A主要是反式 14 紫紅藍色 3S b C lV i tACHCl 3 可用于鑒別和含量測定 與三氯化銻呈色 :三氯甲烷 +三氯化銻 =不穩(wěn)定的藍色 與三氯化銻呈色反應 第一節(jié) 維生素 A的分析 鑒別實驗 Vit A SbCl3 CHCl3(無水無醇 ) 藍色 紫紅色 （一） Carr-Price反應 16 -R C O OS b C l 5 + C H 2 藍色 紫紅 + C H 2- R C O OS b C l 5 第一節(jié) 維生素 A的分析 17 條件： 無水

6、、無醇 SbCl3 水 SbOCl 乙醇可使碳正離子的正電荷消失 第一節(jié) 維生素 A的分析 要求儀器和試劑必須干燥無水， 三氯甲烷必須無醇 18 第一節(jié) 維生素 A的分析 V i tAV i tA H C l 去水 無水乙醇 max為 326nm 一個吸收峰 max為 350 390nm 三個吸收峰 C H 3 C H 2 O R C H 3H 3 C C H 3 C H 3 1 2 3 456 7 8 9 C H 2 五個共軛雙鍵 六個共軛雙鍵 最大吸收峰紅移 （二） UV法 第一節(jié) 維生素 A的分析 20 第一節(jié) 維生素 A的分析 維生素

7、A在無水乙醇溶 液中溶解 ,立即進行 UV 掃描 ,在 360nm處有一 最大吸收峰 . 當鹽酸水浴加熱 30s,迅 速冷卻 ,此過程發(fā)生脫 水反應 ,掃描時出現(xiàn)三 個吸收峰 USP 顯色劑 磷鉬酸 規(guī)定斑點顏色和 Rf值 BP 對照品法 顯色劑 三氯化銻 （三） TLC法 第一節(jié) 維生素 A的分析 展開劑： 環(huán)己烷 -乙醚（ 80： 20） 均顯藍色斑點，維生素醇（ Rf= 0.1） 維生素醋酸酯（ Rf= 0.45） 維生素棕櫚酸酯（ Rf= 0.7）

8、 22 酸值 取乙醇與乙醚各 15ml，置錐形瓶中，加酚酞指示劑 5滴，滴加氫氧化鈉滴定 液（ 0.1mol/L）至顯粉紅色，再加本 品 2.0g，振搖使溶解，用氫氧化鈉滴 定液（ 0.1mol/L）滴定，酸值應不大 于 2.0（附錄 VIIH） 雜質(zhì)檢查 23 過氧化值 取本品 1.0g，加冰醋酸 -三氯甲烷（ 6:4） 30ml，振 搖使溶解，加碘化鉀的飽和溶液 1ml，振搖 1分鐘， 加水 100ml與淀粉指示液 1ml，用硫代硫酸鈉滴定液 （ 0.01mol/L）滴定至紫藍色消失，并將滴定的結(jié)果 用空白試驗校正。消耗硫代硫酸鈉滴定液 （ 0.01mol/

9、L）不得過 1.5ml。 雜質(zhì)檢查 第一節(jié) 維生素 A的分析 含量測定 25 （一） UV法（三點校正法） 第一節(jié) 維生素 A的分析 維生素 A在 325328nm的波長范圍內(nèi)有最大吸收，可用紫外 法進行含量測定但維生素 A原料常混有雜質(zhì)如： 26 第一節(jié) 維生素 A的分析 維生素 A的氧化產(chǎn)物 第一節(jié) 維生素 A的分析 維生素 A在光照下產(chǎn)生的無活性的聚合物 第一節(jié) 維生素 A的分析 第一節(jié) 維生素 A的分析 第一節(jié) 維生素 A的分析 32 測定對象： VitA醋酸酯時， ChP2015規(guī)定 nm nmnmnm 12

10、340,316,328 321 第一法 等波長差法 2113 第一節(jié) 維生素 A的分析 第二法 等吸收比法 132 7 6 AAA 測定對象： VitA醇時， ChP2015規(guī)定 nmnmnm 334,310,325 321 第一節(jié) 維生素 A的分析 合成的或天然的維生素 A 均為酯式維生素 A， 根據(jù)供試品中干擾雜質(zhì)的多少，可采用： （ 1）直接測定法 （ 2）皂化法 第一節(jié) 維生素 A的分析 求 求效價 )(%cm1 樣 lC A cm (% ) % )(1 樣 （ 1）基本步驟 換算因數(shù)）效價（ 樣樣 % )(cm1)(

11、 Eg/IU 4. 測定方法 A選擇， A328測定或 A328校正 求標示百分含量 （ 1）第一法（直接測定法，適用于純度高的 維生素 A醋酸酯的測定 ） 1）方法 取樣品適量，精密稱定，加環(huán)己烷溶解 在 300、 316、 328、 340、 360nm測吸收度，以確定最 大吸收波長（ A328或 A328校正 ）。 第一節(jié) 維生素 A的分析 b.判斷法 最大吸收波長在 326-329nm之間，且 5個波長下的絕對值 差值均不超過 0.02時，可直接用 328nm波長處的測得的吸 收度值求得吸收系數(shù)。 a.計算吸收度比值（ Ai/A328）：與中國藥典的吸收度

12、比值相 比較，判斷每個差值的絕對值是否超過 0.02。 第一節(jié) 維生素 A的分析 最大吸收波長在 326-329nm之間，計算 5個波 長下的絕對差值，如果有一個或幾個超過 0.02，應 按以下的方法進行判斷： A328校正 =3.52（ 2 A328 A316-A340） 第一節(jié) 維生素 A的分析 （ 1）第一法（直接測定法，適用于純度高的 維生素 A醋酸酯的測定 ） 1）方法 取樣品適量，精密稱定，加環(huán)己烷溶解 在 300、 316、 328、 340、 360nm測吸收度， 確定 A 2）計算 a.吸光系數(shù) E1%1cm 第一節(jié) 維生素 A

13、的分析 b.求效價（ IU/g）：效價指每 g供試品所含維生素 的 A的國際單位數(shù)。 第一節(jié) 維生素 A的分析 1IU=0.344g全反式維生素 A醋酸酯 換算因子1%1 c mE IU/g= % ),(1 m a x / 純 ）效價（換算因子 cmE gIU 第一節(jié) 維生素 A的分析 每克純品相當多少個單位（ IU） ? 1IU=0.344g全反式維生素 A醋酸酯 2 9 0 7 0 0 0 g3 4 4.0 g101 g/IU 6 ）效價（ 1530 2 9 0 7 0 0 0/ % )(1

14、純 ）效價（換算因子 cmE gIU 1 9 0 0 第一節(jié) 維生素 A的分析 醇維生素 Ag300.0IU1 3 3 3 0 0 0 0 g3 0 0.0 g101 g/IU 6 ）效價（ 1820 3 3 3 0 0 0 0/ % )(1 純 ）效價（換算因子 cmE gIU 1 8 3 0 第一節(jié) 維生素 A的分析 c.求維生素 A占標示量的百分含量 100%L100W WDA% 標示量換算因子）標示量（ AA328或 A328校正 D供試品的稀釋倍數(shù) 換算因子 維生素 A醋酸酯在環(huán)己烷中 1900； 維生素 A醇在異丙醇中 1830

15、W為平均內(nèi)容物重量； W為稱取內(nèi)容物重量（供試品取用量） L 比色池厚度 標示量為處方中規(guī)定的每粒中所含的國際單位數(shù) 第一節(jié) 維生素 A的分析 VitAD膠丸中 VitA的含量測定 精密稱取本品 (規(guī)格 10000VitAIU/丸 )裝量差異 項下（平均裝量 0.08262g/丸）的內(nèi)容物 0.2399g 至 250ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密 量取 2.0ml，置另一 20 ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至 刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測定最大吸收波 長為 328nm，并在下列波長處測得吸收度為 第一節(jié) 維生素 A的分析 A300 ： 0.35

16、4 A316 ： 0.561 A328 ： 0.628 A340 ： 0.523 A360 ： 0.216 A300 /A328 ： 0.555 A316/A328 ： 0.907 A328/A328 ： 1.000 A340/A328 ： 0.811 A360/A328 ： 0.299 求本品中維生素 A的含量？ 第一節(jié) 維生素 A的分析 A300 /A328 ： 0.564 A316/A328 ： 0.893 A328/A328 ： 1.000 A340/A328 ： 0.833 A360/A328 ： 0.344 0.555 0.907 1.000

17、 0.811 0.299 + 0.01 0.01 0 + 0.02 + 0.04 6 0 5.0 5 2 3.05 6 1.06 2 8.0252.3 252.3 340316328 328 AAAA 校正 = = = = = 第一節(jié) 維生素 A的分析 %)3%15(%7.3 %100 328 328)(328 A AA f 校正 %0.99 %1 0 0 1 0 0 0 0 0 8 2 6 2.0 1 0 0 20 1 2 5 0 2 2 3 9 9.0 1 9 0 06 0 5.0 %1 0 0 )ml1 0 0/g

18、(C 1 9 0 0A % 3 2 8 標示量 平均丸重 標示量 校正 第一節(jié) 維生素 A的分析 適用于維生素 A醇 （等吸收比法） 第一法無法消除雜質(zhì)干擾時用此法 皂化法、 6/7A法 （ 2）第二法 第一節(jié) 維生素 A的分析 i K O H Anm mlIU V i t AV i t A S 處測 、、、于稀釋至溶解 異丙醇除去植物油的干擾 甘油和脂肪酸鹽植物油 醇醋酸酯 皂化液 揮干乙醚乙醚提取 乙醇 334 325310300/159 / 水溶性 脂溶性 第一節(jié) 維生素 A的分析 判斷 ma

19、x是否在 323 327nm之間 取未皂化樣品采用 色譜法純化后再測 定 計算 325 300 A A 是 否 第一節(jié) 維生素 A的分析 判斷 A300 /A325 是否大于 0.73 是 否 取未皂化樣品采用色譜 法純化后再測定 計算 A325(校正 ) 3 3 43 1 03 2 53 2 5 2 6 045 5 528 1 56 A.A.A.A 校正 %100 A AA f 3 2 5 3 2 5)(3 2 5 校正 0 3% 3% 校正3 2 5A 325A 校正3 2 5A f 第一節(jié) 維生素 A的分析 高效液相色譜法 流動相：正己烷異丙

20、醇（ 997 3） 檢測波長： 325nm 系統(tǒng)適用性實驗考察分離度 是否能將維生素 A醋酸酯順式和反式分開 第一節(jié) 維生素 A的分析 三氯化銻比色法 藍色 3S b C lV i t A max 618nm 620nm 標準曲線法 第一節(jié) 維生素 A的分析 S b O C lS b C l OH3 2 缺點： 呈色不穩(wěn)定 （ 5 10s內(nèi)） 水分干擾 與標準曲線溫差 1 專屬性差 三氯化銻有腐蝕性 優(yōu)點： 簡便 快速 第一節(jié) 維生素 A的分析 小結(jié) 維生素 A共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)乙烯 性質(zhì)：脂溶性；不穩(wěn)定，可與三氯化銻呈色 鑒別：三氯

21、化銻反應； UV； TLC 含量測定： 紫外 -分光光度法（三點校正） 三氯化銻比色法 A B1 C D E Vitamins Contents 維生素 B1廣泛分布于米糠、麥麩和酵 母中，具有維持糖代謝及神經(jīng)傳導與消 化的正常功能。主要用于治療維生素 B1 缺乏癥、多發(fā)性神經(jīng)炎及胃腸疾病。 第一節(jié) 維生素 B1的分析 N N N H 2 C H 2 N S C H 3 O HH 3 C 12 3 4 5 1 2 3 4 5 6 C l , H C l 氨基嘧啶環(huán) 噻唑環(huán) 亞甲基 氯化 4-甲基 -3(2-甲基 -4-氨基 -5-嘧啶基 )甲基 -5-（ 2- 羥基

22、乙基）噻唑鎓鹽酸鹽 結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 維生素 B1（鹽酸硫胺） 第二節(jié) 維生素 B1的分析 結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 維生素 B1為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末 易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚 水溶液呈酸性 1. 溶解性 性質(zhì) 噻唑環(huán)、嘧啶環(huán)共軛雙鍵 12.5g/ml鹽酸溶液（ 9 1000 ） max = 246nm 藍色熒光硫色素 環(huán)合開環(huán)并與嘧啶環(huán)上氨基噻唑環(huán) 正丁醇鐵氰化鉀氧化 OH 1%1cmE 406 436 2.硫色素熒光反應 3.UV 雜原子的反應，能與某些生物堿沉淀試劑反應， 生成組成恒定的沉淀，可用于鑒別和含量測定。 4.與生物堿沉淀試劑反應 5.氯

23、化物的特性 與 NaOH共熱，形成硫化鈉，硝酸鉛生成黑 色沉淀； 6.硫元素反應 7.紅外光譜特征 二、鑒別試驗 （一）硫色素熒光反應 為維生素 B1所特有 N N N H 2C H 3 C H 2 N S C H 2C H 2O H C H 3C l- H C l NaOH N N N H 2C H 3 C H 2 S C H 2C H 2O H C H 3 N C O H N a H2O N NC H 3 N N S C H 2 C H 2 O H C H 3 N a N NC H 3 N N S C H 2 C H 2 O H C H 3 H 環(huán)合 N NC H 3

24、N N S C H 2 C H 2 O H C H 3 N a N NC H 3 N N S C H 2C H 2O H C H 3 O 2H 硫色素 Thiochtome 溶于丁醇，顯藍色熒光 維生素 B1 VitB1 4242 H g IHBH g IK 淡黃H+ 白色 硅鎢酸 H+ OH4WO12 OHS i OB 23 222 白色扇形 苦酮酸 H+ 沉淀反應 2KII IHIB2 紅色H+ P b SN a SV i t B AcPbN a O H OHNHAgNO AgCl 白3HNO 3HNO 藍 淀粉試紙

25、 KIMnO ClS元素反應 Cl-反應 硫元素反應和氯化物反應 H+ 三、含量測定 H C l OC l OB H C l OH C lClB AcHg ）（ 高氯酸滴定液（ 0.1mol/L）的滴定度 (T)為 16.86mg/ml。 喹那啶紅亞甲藍 (紫紅 天藍 ) 非水溶液滴定法 N N N H 2C H 3 C H 2 N S C H 2C H 2O H C H 3C l- H C l 紫外分光光度法 維生素 B1分子中具有共軛雙鍵，在紫外區(qū)有吸收 1 0.1M HCl 2 H20 3 H3PO4 buffer 4 alcohol 246

26、 232 255 注意 維生素 B1片的測定 片劑、注射劑 = 421 % cmE 11 （每片）相當于標示量的 %= A = ECL ChP 1 1 標示量 % W E A % cm 100 D 100 平均片重 （每 ml）相當于標示量的 標示量 % V E A % cm 100 D 100 熒光 硫色素 異丁醇 鐵氰化鉀 V i t B NaOH 硫色素熒光法：維生素 B1的專屬性反應 原理 1、 2. 方法 VitB1 鐵氰化鉀 NaOH 硫色素 異丁醇 熒光 ex-365nm em-435nm + NaOH + 鐵氰化鉀 +

27、異丁醇 + NaOH + 異丁醇 對照液 + NaOH + 鐵氰化鉀 + 異丁醇 + NaOH + 異丁醇 供試液 S d A b 52.0 dS bAml5 數(shù)的供試品溶液中維生素 gB 1 特點 3、 小結(jié) 維生素 B1（鹽酸硫胺） 氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過 亞甲基連接而成季銨鹽。 性質(zhì)：水溶性；硫色素反應；可與生物堿沉淀劑反應 鑒別：硫色素反應；沉淀反應； Cl、 S反應 含量測定：非水滴定；紫外分光光度法； 硫色素熒光法 A B1 C D E Vitamins Contents 第三節(jié) 維生素 C的分析 維生素 C是膠原蛋白形成所必需的

28、， 有助于保持間質(zhì)的完整，維生素 C 缺乏可 導致齒齦腫脹，出血，皮下瘀點，關節(jié)及 肌肉疼痛，毛囊角化，嚴重缺乏可引起壞 血病。所以維生素 C又稱為抗壞血酸。 L-抗壞血酸 (有生物活性 ) L-二酮古羅 糖酸 L-去氫抗壞血酸 無生物活性 第三節(jié) 維生素 C的分析 結(jié)構(gòu)與性質(zhì) O O HH O O C O HH C H 2 O H 1 23 4 5 6 C3 OH的 pKa = 4.17 C2 OH的 pKa = 11.57 2.酸性 一元酸 性質(zhì) 1. 溶解性 易溶于水，水中呈酸性；略溶于乙醇，不溶 于三氯甲烷或乙醚 O O HH O O C O HH C

29、 H 2 O H 1 23 4 5 6 L(+)抗壞血酸 活性最強 比旋度 +20.5 +21.5 手性 C（ C4、 C5） 3. 旋光性 * * 含有四個光學異構(gòu)體 C H 2 O H OO O O C O HH C H 2 O H C HH O C H O H C O C O C O O N a H H + O H -有活性 有活性 無活性 O H O O C O HH C H 2 O H H O O 4.還原性 二烯醇結(jié)構(gòu) 與堿反應 單鈉鹽 32 CONa 酮酸鹽水解 N a O H 5. 水解反應 弱堿中生成單鈉鹽， 強堿中水解 O H O

30、O C O HH C H 2 O H H O O H O O C O HH C H 2 O H N a O C O O N a OC OC C H O H H O C H C H 2 O H N a 2 C O 3 N a O H 顯色 糠醛衍生物 糠醛 吡咯脫水 H 糖類的顯色反應 藍色糠醛 吡咯脫水 HV i t C 50 結(jié)構(gòu)與糖類相似 6. 具糖的性質(zhì) 五碳糖 維生素 C 7. UV特征 維生素 C具有共軛雙鍵 6 5 4 3 2 1 O O HH O O C O HH C H 2 O H 560 265 243 %1 1 m a x m a

31、x cm OH H E nm nm 去氫抗壞血酸 OV i t C 利用還原性：與氧化劑的反應 鑒別試驗 O H O O C O HH C H 2 O H H O C H 2 O H OO O O C O HH O （一）與 AgNO3反應 去氫抗壞血酸 黑色 （二）與 2， 6 - 二氯靛酚反應 無色二氯靛酚， V itC62 氧化型 玫瑰紅色 （酸性） 還原型 藍色 (堿性 ) N C l H O C l O N C l H O C l O H H 無色 紅堿性酒石酸銅 OCuV i t C 與堿性酒石酸銅反應 與 KMnO4反應

32、 MnKM n OV i t C （三）與其他氧化劑反應 磚紅色沉淀 試劑褪色 磷鉬酸 鉬藍 與磷鉬酸反應 VitC （四）薄層色譜法 （五）糖類反應 O H O O H O C C H 2 O H H O H O H O H O O C C H 2 O H O HH C H 2 O H C H O H (C H O H ) 2 C C O H O OH2O C H 2 O H C H ( C H O H ) 2 C H OO H -CO2 戊糖 O C H O -3H2O 糠醛 N O CH H 2O + 50 藍色 NH N 維生素 C可在三氯醋酸或鹽酸存

33、在下水解、脫羧、生成戊糖， 再失水，轉(zhuǎn)化為糠醛，加入吡咯，加熱至 50 產(chǎn)生藍色 0.01mol/L HCl nmm ax 243 5 8 55 4 511 E %cm （五）紫外光譜法 BP2010 雜質(zhì)檢查 （一）溶液的澄清度與顏色檢查 內(nèi)酯環(huán)水解 糠醛縮合呈色 高于或低于 pH.0-6.0 空氣、光線、溫度 維生素 C 脫羧 控制有色雜質(zhì) 維生素 C （二）鐵、銅離子 （三）草酸的檢查 草酸與金屬離子作用形成沉淀；所以對 Vc的原 料，尤其是注射液，要進行草酸檢查； 加入 CaCl2，比濁法； 原子吸收分光光度法 （二）鐵、銅離子 原子吸收分光光度法

34、 四、含量測定 維生素 C 維生素 C制劑 碘量法 二氯靛酚法 紫外分光光度法 高效液相色譜法 指示劑 淀粉指示液 （一）碘量法 原理：利用 Vc強的還原性 O H O O C O HH C H 2 O H H O I HAc O O C O HH O O C H 2 O H H I2+ 取本品約 0.2g，精密稱定，加新沸過的冷 水 100ml與稀醋酸 10ml使溶解，加淀粉指示液 1ml，立即用碘滴定液（ 0.05mol/L）滴定，至 溶液顯藍色，在 30秒內(nèi)不褪。每 1ml碘滴定液 (0.05mol/L)相當于 8.806mg的 C6H8O6。 2、

35、方法 原料藥 （ 2）酸性環(huán)境 稀醋酸 （ 1） 新沸冷 H2O 減慢 VitC被 O2氧化速度 （ 3）立即滴定 趕走水中 O2， 減少 O2的干擾 3、注意事項 （ 4）附加劑干擾的排除 片劑 過濾 注射劑 抗氧劑 丙酮 甲醛 Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 （二） 2， 6 - 二氯靛酚滴定法 O H C l C l NH O H 無 色 還 原 型 酚 亞 胺 Vit C H + 去 氫 Vit C 快速滴定，專屬性強，用于含 Vit C的制劑與食品分析 O N O H C l C l玫 瑰

36、紅 有 氧 化 性 自身指示終點 1. 原理 空 樣二氯靛酚液 空白 樣品 V VH AcH P O 3 2. 方法 （ 2）快速滴定 2min內(nèi) （ 1）酸性環(huán)境 HPO3-HAc 穩(wěn)定 VitC 防止其他還原性物質(zhì)干擾 （ 3）亦可剩余比色測定 AV it C測二氯靛酚 （定量過量） （測剩余染料） 3.注意事項 （ 4）二氯靛酚不穩(wěn)定，須臨用前配制并標定 專屬性強，多用于含 Vc的制劑和食品的分析 配制方法： NaHCO3 42mg+水 50 ml，加二氯靛 酚鈉二水合物 0.5g +水

37、 200 ml,過濾，即得。 標定方法：用干燥的維生素 C對照品進行標定 （三）高效液相色譜法 人血漿中 VitC濃度的 HPLC法測定 小結(jié) 維生素 C（ L抗壞血酸） 烯二醇結(jié)構(gòu) 性質(zhì)：水溶性；酸性；旋光性；還原性；水解性 糖類性質(zhì)；紫外吸收特性 鑒別：硝酸銀反應；二氯靛酚鈉反應； 氧化反應； TLC；糖類反應；紫外 雜質(zhì)檢查：澄清度與顏色檢查 鐵、銅離子檢查 草酸檢查 含量測定：碘量法；二氯靛酚滴定法； 高效液相色譜 A B1 C

38、D E Vitamins Contents Sources Sunlight Foods Fortified Milk Fish Oils Deficiency 佝僂病 牙齒松動 雞胸 骨質(zhì)疏松 腳成弓形 Function 促進鈣、磷的吸收； 促進骨骼和牙齒的正常生長； 調(diào)節(jié)檸檬酸的代謝 第四節(jié) 維生素 D的分析 H O - 2 H H O B U V H O H O B U V H O 膽甾醇 7-脫氫膽甾醇 維生素 D3 (膽骨化醇 ) 維生素 D2(麥角骨化醇 ) 麥角甾醇 維生素 D是一類抗佝僂病維生素的總稱，目前有 10 多種，都是甾醇衍生物。

39、 H O H C H 2 H H H H C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 H O H C H 2 H H H C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 維生素 D2 維生素 D3 第四節(jié) 維生素 D的分析 維生素 D2、 D3無色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末； 無臭，無味；遇光或空氣均易變質(zhì)。 溶解性 :維生素 D2在三氯甲烷中極易溶解 ,在丙酮乙醇乙醚 中易溶；維生素 D3在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚極易溶 解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。 不穩(wěn)定性 :毒性增強 .含有多個烯鍵，所以極不穩(wěn)定，宜氧 化變質(zhì)

40、，效價降低，毒性增強。 第四節(jié) 維生素 D的分析 旋光性 :有五到六個手性碳原子 ,均具有旋光性 . 維生素 D2 6個手性碳原子 維生素 D3 5個手性碳原子 第四節(jié) 維生素 D的分析 H O H C H 2 H H H H C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 H O H C H 2 H H H C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 顯色反應 甾類化合物 氯仿溶液 黃色 紅色 紫色 綠色 紫外吸收特性 無水乙醇 265nm 維生素 D2 為 460 490

41、 維生素 D3 為 465 495 醋酐 硫酸 E 1cm 1% E 1% 1cm 二、鑒別試驗 （一）顯色反應 1與醋酐 -濃硫酸反應 氯仿溶液 黃色 紅色 紫色 綠色 醋酐 硫酸 2與三氯化銻反應 本品 1,2-二氯乙烷 三氯化銻試液 橙紅色 粉紅色 3其它顯色反應 維生素 D 三氯化鐵 橙黃色 二氯丙醇 乙酰氯 綠色 （二）比旋度鑒別 無水乙醇溶液 維生素 D2 比旋度為 102.5 至 107.5 維生素 D3 比旋度為 105 至 112 （ 三）其它鑒別方法 薄層色譜法、 HPLC法 制備衍生物測熔點 紫外、紅

42、外吸收光譜 （四）維生素 D2、 D3的區(qū)別反應 維生素 D2 維生素 D3 96%乙醇 10ml 取 0.1ml 乙醇 1ml 和 85%硫酸 5ml 紅色 max570nm 黃色 max495nm 三、雜質(zhì)檢查 （一）麥角甾醇的檢查 維生素 D290%乙醇溶液 洋地黃皂苷溶液 不得發(fā)生渾濁或沉淀 （二）前維生素 D的光照產(chǎn)物 （三）有關物質(zhì)檢查 Ch.P 2010 NP-HPLC 含量測定 USP34-NF29 化學法 色譜法 微生物法 BP2010 化學法 色譜法 光譜法 四、含量測定 正相高效液相色譜法 （一）維生素 D測定法 含量以單位

43、表示 每單位相當于維生素 D 0.025 g 注意：計算的是維生素 D及前維生素 D經(jīng)折 算成維生素 D的總量 固定相： 硅膠 流動相： 正己烷正戊醇（ 997： 3） 檢測波長： 254nm 第一法： 用于無維生素 A醇及其他干擾的供試品 第二法： (1)皂化提取 ;(2)凈化用色譜柱系統(tǒng)分離收集維生素 D，得供試品溶液 B;(3)按第一法進行測定。 第三法： 當樣品經(jīng)皂化提取及凈化用色譜系統(tǒng)分離收集后，前維生素 D峰仍受 干擾時，采用此法。 小結(jié) 維生素 D 抗佝僂病維生素的總稱 性質(zhì)：脂溶性；不穩(wěn)定；旋光性； 顯色反應；紫外 鑒別：顯色反應

44、；比旋度； VD2、 VD3區(qū)別 雜質(zhì)檢查：麥角甾醇； 前維生素 D光照產(chǎn)物；有關物質(zhì) 含量測定： 三法 A B1 C D E Vitamins Contents 主要講解 第五節(jié) 維生素 E的分析 維生素 E早在 20世紀 20年代就被人們 發(fā)現(xiàn)， Evans和他的同事在研究生殖 過程中發(fā)現(xiàn)，酸敗的豬油可以引起大 鼠的不孕癥。 是與生育有關的維生素的總稱 1936 年分離出結(jié)晶體 1938 年被瑞士化學家人工合成 維生素 E的顯微照片 維 生 素 E 膠 囊 138 維生素 E類結(jié)構(gòu)與相對活性 名稱 R1 R2 烴鏈 相對活性 -生

45、育酚 CH3 CH3 C16H33 1.0 -生育酚 CH3 H C16H33 0.5 -生育酚 H CH3 C16H33 0.2 -生育酚 H H C16H33 0.1 -生育酚 CH3 H C16H27 0.5 139 維生素 E的結(jié)構(gòu) 2R*(4R*,8R*)-3,4-二氫 -2,5,7,8-四甲基 -2- (4,8,12-三甲基十三烷基 )-2H-苯并吡喃 -6-醇 醋酸酯 -生育酚醋酸酯 140 生物效價 右旋體 ： 消旋體 = 1.4 ： 10 （天然品） （合成品） 141 維生素 E的性質(zhì) 性狀 :黃色或金黃色 粘稠狀 透明 液體 脂溶性 :溶于

46、 丙酮、乙醇、乙醚或植物油 等 有機溶劑 中 水溶性 :不 溶于水 穩(wěn)定性 :無氧時對熱、酸穩(wěn)定，對堿不穩(wěn)定， 對氧敏感，遇光可被氧化， 色漸變深， O o r O HHV i tE 醌型化合物 生育酚 UV：乙醇溶液中 max284nm 142 （一） 硝酸反應 二、鑒別試驗 C H 3 H O O C H 3 C 1 6 H 3 3 C H 3 H 3 C 生育酚 HNO3 O O C H 3 C 1 6 H 3 3 H 3 C C H 3 O （橙紅色） 生育紅 維生素 E在硝酸酸性條件下，水解生成生育酚 OC H 3 C H 3 C H 3 C H

47、3 C H 3 - C O O C 1 6 H 3 3 H O OC H 3 C H 3 C H 3 C H 3 C 1 6 H 3 3 水解 143 三氯化鐵聯(lián)吡啶反應 紅色 生育醌對 生育酚 聯(lián)吡啶 2 FeK O H Fe V i tE 3 O （二） 144 O O H 3 C C H 3 O H C H 3 C 1 6 H 3 3 C H 3 C H 3 H O O C H 3 C 1 6 H 3 3 C H 3 H 3 C 生育酚 對 -生育醌 +2 3 F e3+ +2 F e N N N N 紅色 Fe3+ O 145 max = 284nm mi

48、n = 254nm 0.01%無水乙醇中 UV法 （三） 146 薄層板 硅膠 G 展開劑 環(huán)己烷 -乙醚（ 4 ： 1） 顯色劑 硫酸（ 105 5） TLC法 （四） VitE Rf = 0.7 -生育酚 Rf = 0.5 -生育醌 Rf = 0.9 維生素 E合成過程 2,3,5-三甲基對二苯酚 植醇 + -生育酚 -生育酚醋酸酯 三、雜質(zhì)檢查 148 三、雜質(zhì)檢查 （一）酸度 游離醋酸 149 （二）生育酚 硫酸鈰滴定液（ 0.01mol/L） 二苯胺（亮黃 灰紫） 生育醌對生育酚

49、 34 22 CeCe 利用游離生育酚的還原性， 將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰 三、雜質(zhì)檢查 1.原理 2.試劑 150 151 問藥典中規(guī)定的維生素 E中所含的游離生 育酚的限量是多少？ 計算 每 ml硫酸鈰滴定液（ 0.01mol/L）相當于 0.002154g的游離生育酚 152 %1 0 0 W TV % 限量 2.15 %15.2 %100 1.0 0 0 2 1 5 4.00.1 % 限量 限量 153 (三 )有關物質(zhì)的檢查 154 (四 )殘留溶劑：環(huán)己烷的檢查 155 四、含量測定 GC法 （一） GC特點 1、 選

50、擇性好 靈敏度高 速度快 分離效能好 揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、 極性強 衍生化。 易受樣品蒸氣壓限 制 載氣 N2 固定液 硅酮（ OV-17） 擔體 硅藻土或高分子多孔小球 柱溫 265 檢測器 氫火焰離子化檢測器 (FID) 內(nèi)標 正三十二烷 n 500 R2 內(nèi)標法加校正因子定量 2、 VitE測定的色譜條件 內(nèi)標法 供試液（樣品 +內(nèi)標） 內(nèi)標物 對照液（對照 +內(nèi)標） 是樣品中不存在的物質(zhì) 與被測組分峰靠近 能與各組分完全分離 與被測組分的量接近 樣品 dl 生育酚 固定相 十八烷基硅烷鍵合硅膠 流動相 甲醇 -水（ 49

51、 ： 1） 檢測波長 292nm R 2.6 RSD0.8% （二） HPLC法（外標法） （三）熒光分光光度法 對照品 dl 生育酚 在 220400nm波長范圍內(nèi)，以發(fā)射、激發(fā) 波長間隔 為 40nm掃描同步熒光光譜， 測定同步熒光峰的熒光強度信號值。 VE= F樣品 - F空白 F標準 - F空白 4.0（ mg/L) 161 第六節(jié) 復方制劑中多種維生素的分析 一、離子對 HPLC法測定多種維生素 以樟腦磺酸作為離子對試劑，以二巰基丙烷磺 酸鈉作為抗氧劑 二、反相 HPLC法同時測定 9種水溶性維生素 三、非水反相 HPLC法同時測定 4種脂溶

52、性維生素 162 練習與思考 A型題 1. 維生素 B1的鑒別方法是 A.三氯化鐵反應 B. 硫色素反應 C. 柯柏反應 D.與堿性酒石酸銅試液反應 E. 雙縮脲反應 163 2. 維生素 E 中國藥典 規(guī)定的含量 測定方法為 A.非水溶液滴定法 B.旋光法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E.GC法 164 B型題 A。亞硝基鐵氰化鈉反應 B. 硫色素反應 C.硝酸反應 D. 三氯化銻反應 E. 硝酸銀試液的反應 1. 維生素 C 2. 維生素 E 3. 維生

53、素 B1 4. 維生素 A E C B D 165 X型題 1. 用碘量法測定的藥物有 A. 醋酸地塞米松 B. 丙酸睪酮 C. 維生素 C D. 硫酸阿托品 E. 維生素 C注射液 返 回 2. 可用紫外分光光度法測定含量的 藥物有 A. 維生素 A丸劑 B. 丙酸睪酮 C. 維生素 A D. 硫酸阿托品 E. 維生素 B1片 167 簡答題 簡述碘量法測維生素 C含量的原理及實 驗注意事項。 169 練習與思考 A型題 1. 維生素 B1的鑒別方法是 A.三氯化鐵反應

54、 B. 硫色素反應 C. 柯柏反應 D.與堿性酒石酸銅試液反應 E. 雙縮脲反應 170 2. 維生素 E 中國藥典 規(guī)定的含量 測定方法為 A.非水溶液滴定法 B.旋光法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E.GC法 171 B型題 A。亞硝基鐵氰化鈉反應 B. 硫色素反應 C.硝酸反應 D. 三氯化銻反應 E. 硝酸銀試液的反應 1. 維生素 C 2. 維生素 E 3. 維生素 B1 4. 維生素 A E C B D 172 X型題 1. 用碘量法測定的藥物有 A. 醋酸地塞米松 B. 丙酸睪酮 C. 維生素 C D. 硫酸阿托品 E. 維生素 C注射液 返 回 2. 可用紫外分光光度法測定含量的 藥物有 A. 維生素 A丸劑 B. 丙酸睪酮 C. 維生素 A D. 硫酸阿托品 E. 維生素 B1片 174 簡答題 簡述碘量法測維生素 C含量的原理及實 驗注意事項。 此課件下載可自行編輯修改，供參考！ 感謝您的支持，我們努力做得更好！ 176