《藥物分析》第6章：藥物的含量測定方法.ppt

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1、第6章藥物的含量測定方法,化學分析法,,重量分析,容量分析,,含量測定,儀器分析法,效價測定（生物學法）,紫外,高效液相色譜法,氣相色譜法,,第1節(jié)容量分析法（滴定法）,1.滴定分析：是將一種已知準確濃度的標準溶液滴加到被溶液中，直到化學反應(yīng)完全為止，根據(jù)標準溶液的濃度和體積求得被測組份含量的一種方法。 在進行滴定分析時： 一方面要會配制滴定劑溶液并能準確 測定其濃度 另一方面要準確測量滴定過程中所 消耗滴定劑的體積,滴定：將滴定液從滴定管滴加到被測物質(zhì)溶液中的過程 化學計量點 ：滴加的標準溶液與待測物質(zhì)按照一定的化學反應(yīng)式定量反應(yīng)完全之點 滴定終點 ：在滴定過程中，指示劑正好發(fā)生顏色變化的轉(zhuǎn)

2、變點。 指示劑：能夠指示終點變化的試劑。 滴定誤差：滴定終點與化學計量點不一定恰好符合，它們之間存在著很小的差別，由此引起測定結(jié)果的誤差稱為滴定誤差。 （6）標準溶液 已知準確濃度的溶液（mol/L）,2.滴定液的配制和標定,基準物質(zhì)：能用來直接配制標準溶液的化學試劑 滴定度：每毫升標準溶液相當于被測物質(zhì)的質(zhì)量（g或mg），以符號T表示 直接法（不需標定） 間接法（標定）：先將其配制成近似于所需濃度的溶液，然后利用基準物質(zhì)或另一種標準溶液來確定其準確濃度。,標定：用基準物質(zhì)或標準溶液準確測定滴定液濃度的過程。 校正因子（F）：表示滴定液準確濃度與標示濃度的比值。其范圍應(yīng)在1.050.95之間，

3、超出該范圍應(yīng)加入適當?shù)娜苜|(zhì)或溶劑予以調(diào)整，并重新標定。,標定注意事項 ： a.操作中所用的天平、滴定管、容量瓶和移液管均應(yīng)校正合格的。 b.標定工作應(yīng)在室溫（1030）下進行，并記錄標定時的溫度。 c.根據(jù)滴定液的消耗量選用適宜的滴定管，盛裝滴定液前，先用少量滴定液淋洗三次，盛裝滴定液后，應(yīng)用小燒杯蓋住管口。 d.標定中的空白試驗，是指在不加供試品或以等量溶劑代替供試液的情況下，按同法滴定所得的結(jié)果。 e.標定工作應(yīng)由初標者和復標者在相同條件下各做3份平行試驗，3份平行試驗結(jié)果的相對標準偏差（RSD）不得大于0.1%；初標者的平均值和復標者的平均值的相對標準偏差（RSD）也不得大于0.1%；最

4、后結(jié)果按初、復標二者的平均值計算，取4位有效數(shù)字。 f.配制后的滴定液按藥典規(guī)定的貯藏條件儲存，并在瓶外貼上標簽，注明滴定液名稱、標示濃度、真實濃度或F值、配制和標定日期、標定時的溫度、配制者、標定者、復標者等。 g.當?shù)味ㄒ簶硕〞r間過長（一般不超過3個月）、或標定與使用時的溫度超過10時，應(yīng)加溫度補償值或重新進行標定，。 h.當?shù)味ㄒ撼霈F(xiàn)渾濁或其他異常情況時，不得使用。倒出剩余的滴定液不得再倒回原瓶，避免污染。,3.滴定的分類,按反應(yīng)方式分類： 直接滴定法：滴定液與被測物質(zhì)直接反應(yīng) 間接滴定法：包括剩余滴定和置換滴定,,,含量%=,含量%=,按反應(yīng)類型分： 酸堿滴定：在水溶液中以酸堿中和反應(yīng)

5、來測定物質(zhì)含量的方法 配位（絡(luò)合）滴定法：以形成穩(wěn)定配合物的配位反應(yīng)為基礎(chǔ)的滴定分析法。 用于金屬離子的測定 采用金屬指示劑（如鉻黑T），如EDTA（乙二胺四醋酸二鈉） 氧化還原滴定法： 碘量法：如碘滴定液、硫代硫酸鈉滴定液、淀粉指示劑 鈰量法：以硫酸鈰Ce（S04）2作為滴定液 、鄰二氮菲作指示劑 亞硝酸鈉滴定法： 溴量法 ：Na2S2O3滴定液 、Br2滴定液,沉淀滴定法：以沉淀反應(yīng)為基礎(chǔ)，多以硝酸銀為滴定液，也稱銀量法。按所用指示劑的不同分為 鉻酸鉀指示劑法 鐵銨礬指示劑法 吸附指示劑法 非水滴定法：在非水溶劑（有機溶劑與不含水的無機溶劑）中進行滴定分析的方法。 非水堿量法：是以冰醋酸為

6、溶劑，高氯酸為滴定液，甲紫微指示劑，測定弱堿性藥物及其鹽類 非水酸量法：是在堿性溶液中，以甲醇鈉為滴定液，麝香草酚藍為指示劑，二甲基甲酰胺等為溶劑，滴定弱酸性藥物,第2節(jié) 分光光度法,分光光度法: 是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強度，對該物質(zhì)進行定性和定量分析的方法。 光是電磁波,常用的波長范圍為： (1)200400nm----紫外光區(qū)； (2)400760nm----可見光區(qū)； (3)7602500nm（12800cm-14000cm-1）----近紅外光區(qū) （4）2.525m（按波數(shù)計為4000cm-1400cm-1）----紅外光區(qū)。,紫外-可見分光光度法

7、,物質(zhì)吸收紫外和可見光區(qū)的電磁波產(chǎn)生的吸收光譜 進行定性和定量分析的方法 1.基本原理：朗伯比耳定律 A為吸收度； T為透光率； L為液層厚度，單位為cm ； E為吸收系數(shù)，常用的是百分吸收系數(shù)()，其物理意義為當溶液濃度為1(g/ml)，液層厚度為1cm時的吸收度值； C為100ml溶液中所含被測物質(zhì)的量g（按干燥品或無水物計算）,,2.儀器的基本結(jié)構(gòu) 光源：200400nm為紫外光區(qū)（氘燈）、400850nm為可見光區(qū) （鎢燈） 3.儀器的校正和檢定 （1）波長的準確度 （2）吸收度的準確度 （3）雜散光的檢查,4.吸光度的測定 中國藥典20

8、10版對吸光度的測定做了以下要求： （1）溶劑： （2）空白試驗校正： （3）測定波長的檢查 （4）供試品溶液的濃度： 應(yīng)考慮使吸光度在0.30.7范圍內(nèi) （5）狹縫寬度的選擇,5.應(yīng)用 （1）鑒別和檢查：比較吸收光譜的特征參數(shù)、吸光度比值、吸收光譜的一致性 （2）含量測定： a.對照品比較法： b.吸收系數(shù)法 ： c.標準曲線法： 借助電腦的Excel電子表格計算,含量%=,6.注意事項 （1）空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應(yīng)預(yù)先過濾，并棄去初濾液。 （2）測定時，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池。 （3）在測定時或改測其它

9、檢品時，應(yīng)用待測溶液沖洗吸收池34次，用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨損），放入樣品室每次方向應(yīng)一致。 （4）取吸收池時，應(yīng)拿毛玻璃兩面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完后及時用測定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用干凈綢布或擦鏡紙擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防塵保存。若吸收池內(nèi)外壁沾污，用脫脂棉纏在細玻璃棒上蘸上乙醇，輕輕擦試，再用純化水沖凈。 （5）務(wù)必注意經(jīng)常保持硅膠的干燥，目的是保護光學元件和光電放大器系統(tǒng)不致受潮損壞而影響儀器的正常工作。 （6）儀器經(jīng)過搬動請及時檢查并糾正波長精度，并應(yīng)經(jīng)常校準波長精度。,第3節(jié) 色譜分析法,色譜法的分離過程：是被分

10、離組分在互不相溶的兩相間分配平衡的過程，由于混合物中各組分的分配系數(shù)不同，或被吸附劑吸附能力的不同，則被流動相攜帶移動的速度也不同，達到分離的目的。 液相色譜法：以液體為流動相 氣相色譜法：以氣體為流動相,一、高效液相色譜法,高效液相色譜法：采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱將待測組分進行分離測定的色譜方法。 化學鍵合相色譜：最廣泛的 將固定相的官能團鍵合在載體上，形成的固定相 ，一般屬于分配色譜法，不易流失,（一）基本概念： 1.色譜圖：信號---時間曲線 2.基線：無樣品時，用流動相沖洗檢測出的流出曲線，一般平行于時間軸 3.噪聲：基線信號的波動 4.漂移：基線隨時間的變化

11、 5.色譜峰： 6.拖尾因子：衡量色譜峰的對稱性， 應(yīng)為0.95-1.05 7.峰寬： 8.半峰寬 9.標準偏差 10.峰面積 11.保留時間 12.理論塔板數(shù)（柱效）：表示色譜柱的分離效率,（二）基本原理 待分離物質(zhì)在兩相間進行分配時，在固定相中溶解度較小的組分，在色譜柱中向前遷移速度較快；在固定相中溶解度較大的組分，在色譜柱中向前遷移速度較慢，從而達到分離的目的。 依固定相與流動相極性的不同，分為正相色譜和反相色譜 1.正相色譜法 流動相極性小于固定相 一般用極性物質(zhì)作固定相，非極性溶劑(如苯、正己烷等)作流動相，主要用于分離極性化合物，極性小的組分先流出，極性大的組分后流出。 2.反相

12、色譜法 流動相極性大于固定相 一般用非極性物質(zhì)作固定相，極性溶劑(如水、甲醇、己腈等)作流動相，主要用于分離非極性或弱極性化合物，極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。,（三）固定相和流動相,1.固定相 常用化學鍵合相，分極性和非極性鍵合相，如十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18或ODS）和辛基硅烷鍵合硅膠（C8）為最常用的非極性鍵合相，用于反相色譜法； 氨基和氰基硅烷鍵合相為常用的極性鍵合相，用于正相色譜法。 2.流動相 有機溶劑+水混合 一般為色譜純試劑，經(jīng)0.45um的微孔濾膜過濾，需脫氣處理,（四）儀器的基本結(jié)構(gòu),日本島津液相色譜儀,1.色譜柱,柱管-不銹鋼，填充硅膠和化學鍵合固定相 內(nèi)

13、徑4.6mm 長15cm、20cm和25cm的三種， 如安捷倫色譜柱、迪馬色譜柱、迪馬鉆石柱等。,色譜柱的維護,1.最好使用預(yù)柱保護分析柱； 2.大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是27.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍； 3.避免流動相組成及極性的劇烈變化； 4.樣品要采用0.22或0.45m濾膜過濾，流動相采用0.45m濾膜過濾并脫氣； 5.每次做完分析，要進行沖洗：分析用流動相中若無酸、堿、鹽類物質(zhì)，建議用90甲醇沖洗3060min；如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，要先用10甲醇沖洗1小時左右，再梯度走到90甲醇沖洗3060min（若用多元泵）。 若長時間不用該色譜柱，要沖洗好后，用

14、純甲醇或乙腈封存； 6.若流動相中用到離子對試劑，更應(yīng)該好好沖洗，且該色譜柱最好作為專用，不能再做其它物質(zhì)分析用； 7.普通C18柱盡量避免在40以上的溫度下分析； 8.壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號。,2.檢測器,常用紫外檢測器 其次有二極管陣列檢測器(DAD) 熒光檢測器 示差折光檢測器 蒸發(fā)光散射檢側(cè)器 電化學檢測器和質(zhì)譜檢測器等,（五） 系統(tǒng)適用性試驗,定義：指用規(guī)定的對照品對色譜系統(tǒng)進行試驗， 應(yīng)符合要求。 包括理論板數(shù) 分離度 重復性 拖尾因子等,1.理論板數(shù)(N) ： 說明分離過程，色譜柱的塔板數(shù)越多，柱效越高 2.分離度(R)：應(yīng)大于1.5 3.重復性：相對標準偏差應(yīng)不大于2.0

15、% 4.拖尾因子(T) ：符合規(guī)定,（六）在雜質(zhì)檢查和含量測定中的應(yīng)用,1.內(nèi)標法,2.外標法,進樣操作,3.加校正因子的主成分自身對照法（測定雜質(zhì)含量） 4.不加校正因子的主成分自身對照法（無雜質(zhì)對照品） 5.面積歸一化法（只能用于粗略考察供試品中的雜質(zhì)含量 ）,二、氣相色譜法,1.分離原理 注入進樣口的樣品經(jīng)加熱氣化后，被載氣帶入色譜柱，由于其分配系數(shù)的不同進行分離，各組分先后進入檢測器，信號記錄儀、積分儀和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號。分配系數(shù)小的組分先流出，分配系數(shù)大的組分后流出。,2.色譜儀的基本結(jié)構(gòu) 由載氣源、進樣器、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成,1.載氣（流動相）：,如氦

16、、氮和氫等 2.進樣器 ：直接進樣或頂空進樣 微量注射器,3. 固定相和載體 色譜柱為填充柱或毛細管柱 常用的固定液有甲基聚硅氧烷、不同比例組成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。 *新填充柱和毛細管柱在使用前需老化以除去殘留溶劑及低分子量的聚合物，色譜柱如長期未用，使用前應(yīng)老化處理，使基線穩(wěn)定。,毛細管柱和填充柱,4. 檢測器 火焰離子化檢測器（FID)、 熱導檢測器(TCD)、 氮磷檢測器（NPD)、 火焰光度檢測器(FPD)、 電子捕獲檢測器(ECD)、 質(zhì)譜檢測器(MS),有機溶劑的氣相分離圖譜,3.色譜系統(tǒng)適用性試驗 同高效液相色譜法 4.在雜質(zhì)檢查和含量測定中的應(yīng)用 （1）內(nèi)標法加校正因子測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量 （2）外標法測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量 （3）面積歸一化法 上述13法的具體內(nèi)容均同高效液相色譜法 （4）標準溶液加入法,